CN102274286A - 一种油樟叶挥发油包合物及其制备方法 - Google Patents
一种油樟叶挥发油包合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种功能性生物饲料添加剂油樟叶挥发油β-环糊精包合物及其制备方法。其制备方法是将溶于有机溶媒中的油樟叶挥发油加入到含β-环糊精的水溶液中，以搅拌方式进行，具有包合条件温和、操作简单、易于控制，包合产率高的特点。所制备的包合物使油樟叶挥发油呈固体状态，便于给畜禽拌料使用，且可保护其药效，提高其适口性，从而避免了直接使用挥发油所导致的刺激性和挥发性等弊端。该包合物具有抗细菌（大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）、抗真菌（须毛癣菌、犬小孢子菌和石膏小孢子菌）、杀虫和镇痛抗炎作用，是一种较好的抗病、促生长和无残留的生物饲料添加剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种功能性生物饲料添加剂油樟叶挥发油β-环糊精包合物及其制备方法，具体涉及一种具有抗细菌（大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）、抗真菌（须毛癣菌、犬小孢子菌和石膏小孢子菌）、杀虫和镇痛抗炎作用的生物饲料添加剂β-环糊精包合物及其制备方法。
背景技术
药物饲料添加剂由于其具有促进畜禽生长和预防疾病等作用，提高了生产率和饲养经济效益，在我国畜禽养殖业中起着重要作用。然而，随着药物饲料添加剂的长期使用，尤其是抗生素、化学合成药物在饲料中的滥用，出现了耐药性、药物残留、环境污染等问题。这不仅降低了畜产品的质量，还会通过生物链影响到人类健康和生态平衡。随着我国加入WTO后国际市场化的步伐加快，以及人们对生活质量要求的提高，发展无公害畜牧业，生产绿色畜产品已成为我国政府畜牧主管部门的首要任务，寻找绿色、安全、高效的饲料添加剂替代抗生素、化学药物等的无公害绿色饲料添加剂成为加快我国畜禽业可持续发展的当务之急。
天然产物由于多种营养成分和生物活性物质，兼有营养和药物（抗微生物、抗寄生虫、抗炎和镇痛等）的双重作用，既可提高生产性能和防病作用，又有低残留、无污染、不易产生耐药性等特点，已成为国内外新型绿色饲料添加剂研究的热点。我国天然药物资源丰富，将天然植物提取物作为饲料添加剂使用具有抗生素饲料添加剂无可比拟的优势和发展前景。然而天然植物提取物一般均为难溶于水的液态物质，如果不经处理直接将天然植物提取物作为饲料添加剂添加到饲料中，不但不利于饲料的贮藏（极易霉变）、运输，也会极大地降低其生物利用度，限制药效的发挥，同时也限制了给药的途径，抑制了天然植物提取物的进一步利用。
发明内容
鉴于上述不足之处，本发明通过大量的研究和实践，提供一种具有抗微生物、抗寄生虫、抗炎和镇痛等功效的油樟叶挥发油包合物，同时该挥发油包合物可直接作为饲料添加剂添加到饲料中，使其在丰富给药途径以及不影响药效的同时，也能大大的提高其生物利用度。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：该包合物是通过将溶于有机溶媒的油樟叶挥发油加入到含β-环糊精的水溶液中，按每1mL油樟叶挥发油配合β-环糊精4-8g的比例采用包合技术包合而成；其中，按体积比计，油樟叶挥发油：有机溶媒=1：1；按重量比计，β-环糊精：水＝ 1：10-20。
上述油樟叶挥发油由以下方法制得：将新鲜油樟叶洗净后剪碎，放入烧瓶中，在挥发油提取装置中用水蒸汽蒸馏法提取，蒸馏时间4h，用乙醚为蒸馏液萃取，旋转浓缩后用无水硫酸钠干燥，得油樟叶挥发油。
最优的，上述有机溶媒为聚乙二醇400。
一种油樟叶挥发油包合物的制备方法，是以搅拌方式在β-环糊精水溶液中进行，具体步骤如下：按上述配方量比例称取β-环糊精和水，并在40-70 ℃下制成溶液，然后逐滴加入由油樟叶挥发油和有机溶媒制得的溶于有机溶媒中的油樟叶挥发油，搅拌进行包合；整个包合过程时间为 1-3 小时，然后置于 0 ℃环境中沉淀 5-24小时，收集沉淀物、洗涤、干燥，得到包合物。
在本发明制备包合物的工艺过程中，只要油樟叶挥发油与β-环糊精之间的比例达到每1mL油樟叶挥发油配合4g时，就有包合物出现，当两者重量比为1（mL）：8(g)时，油樟叶挥发油包合率最高，包合率可达80 ％。
本发明的制备工艺表明，β-环糊精（g）与油樟叶挥发油（mL）的比例（A）对包合效果有显著影响，搅拌温度（B）、包合时间（C）和β-环糊精（g）与水（mL）的比例（D）对包合效果有少许影响，各因素影响作用的大小为A>C>D>B。得出当油樟叶挥发油（mL）：β-环糊精（g）为1：8、包合温度40℃、包合时间3h、β-环糊精：水的重量比为1:15时，为最佳工艺。
按本发明得到的包合物其特征为含有油樟叶挥发油和β-环糊精两种化学成分，且易溶于水。
本发明中的包合物主要通过采用傅立叶红外光谱法(FI-I R)对包合物进行验证。分别取本发明即油樟叶挥发油β-环糊精包合物，β-环糊精，油樟叶挥发油、油樟叶挥发油和β-环糊精的物理混合物，经过KBr压片或者液膜制片，检测其红外光谱图，比较其特征吸收峰的差异而进行验证。检测结果标明，本发明即油樟叶挥发油β-环糊精包合物（图1）与β-环糊精（图2）的红外光谱图基本一致，油樟叶挥发油（图3）中的特征峰在β-环糊精包合物（图1）中已经消失或者减弱，而在油樟叶挥发油和β-环糊精的物理混合物（图4）中仍然存在，且出现油樟叶挥发油和β-环糊精两者光谱的叠加。此结果说明油樟叶挥发油包合物已经形成，其分子的红外振动受到限制，包合效果好。
本发明经药效学研究表明，对于因细菌性和寄生虫感染所致的疾病具有预防与治疗作用，且具有抗炎镇痛活性和促进畜禽的生长发育。
对本发明油樟叶挥发油包合物做过以下功效试验：
1.油樟叶挥发油包合物对三种常见致病细菌的体外抗细菌活性研究
研究了油樟叶挥发油包合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)和最低杀菌浓度(minimal bacteriocidal concentration，MBC)，并绘制其随油樟叶挥发油包合物浓度和作用时间变化的抑菌曲线，同时透射电镜观察油樟叶挥发油包合物在MIC值浓度下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌超微结构的影响。结果表明，油樟叶挥发油包合物对三株细菌的MIC值和MBC值分别为：大肠杆菌：0.38mg/ml和0.38mg/ml；沙门氏菌：0.75mg/ml和0.75mg/ml；金葡球菌：0.75mg /ml和0.75mg /ml。抑菌曲线结果显示，油樟叶挥发油包合物对三种细菌的作用均属于浓度依赖型。电镜下：对照组大肠杆菌和金黄色葡萄球菌形态正常；试验组，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在油樟叶挥发油包合物MIC值浓度作用4 h后，其细胞器破坏，部分细胞呈空泡状。上述结果表明：油樟叶挥发油包合物对三种细菌均具有一定的抗菌活性，其抑菌机理主要为引起细菌细胞膜及细胞器的损伤。
油樟叶挥发油包合物对三株常见皮肤癣菌的体外抗真菌活性研究
研究了油樟叶挥发油包合物对须毛癣菌、犬小孢子菌、石膏小孢子菌的最低抑菌浓度 (minimal inhibitory fungal concentration，MIC)和最低杀菌浓度MFC(minimal fungicidal concentration，MFC) ；并绘制体外杀菌曲线，观察MIC浓度下油樟叶挥发油包合物对三株真菌的动态杀菌过程；透射电镜下观察油樟叶挥发油包合物在MIC值浓度下对三株真菌超微结构的影响。结果显示，油樟叶挥发油包合物对三株真菌的MIC值和MFC值均为0.38mg /ml和0.38mg /ml。杀菌曲线结果表明，作用的前12小时内油樟叶挥发油包合物对三株真菌的杀菌作用最强，随后杀菌作用降低；电镜下：对照组的三株真菌形态正常，在MIC值浓度下，三株真菌原有的细胞器模糊不清、溶解或消失。上述结果表明：油樟叶挥发油包合物对三株真菌均具有一定的抗真菌活性，其抑菌机理为破坏真菌的细胞膜和细胞器。
油樟叶挥发油包合物的镇痛活性研究
分别采用热板法镇痛实验和醋酸扭体镇痛实验观察其镇痛活性。结果表明：油樟叶挥发油包合物对热致痛小鼠可延长其痛阈时间，高剂量组较为明显；对醋酸致痛小鼠，各剂量组均可减少其扭体次数，与溶剂对照组比较其作用有显著性差异。由此可见，油樟叶挥发油包合物具有一定的镇痛作用。
油樟叶挥发油包合物的抗炎活性研究
研究了油樟叶挥发油包合物对急性炎症模型的抗炎效果及其抗炎机理。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性亢进、角叉菜胶致大鼠足肿胀模型观察油樟叶挥发油包合物的抗炎作用并测定炎性渗出液中的PGE2（前列腺素E2）、组胺及5-HT含量，并做足趾肿胀的病理切片。结果表明，油樟叶挥发油包合物高、中、低剂量组对二甲苯致小鼠耳片肿胀、毛细血管通透性亢进和角叉菜胶有不同程度抑制作用，并能显著降低炎性渗出液中的PGE2、His及5-HT水平，具有改善组织水肿和减轻炎细胞浸润的活性，高剂量组与溶剂对照组相比有显著性差异(P<0.01)。上述结果表明：油樟叶挥发油包合物对急性炎症具有一定的抑制活性。其抗炎机理为降低炎性渗出液中的PGE2、His及5-HT水平，具有改善组织水肿和减轻炎细胞浸润的作用。
5、油樟叶挥发油包合物作为功能性生物饲料添加剂中的研究。
选择80头健康的杜长大三元杂交猪（体重约15kg），随机分为2组，每组4个重复，每重复10头，对照组为添加抗生素金霉素、抗敌素的常规饲料，实验组为添加0.5%（重量）的本发明配制的常规饲料。试验猪采用常规饲养管理，自由采食，充足饮水，4周试验后，每头猪分别称重，计算料肉比，统计腹泻率，观察皮毛状况，分析经济效益。结果见表1，从表1中可以看出，添加0.5%的本发明的常规饲料，试验组的净增总值和料重比与对照组相比显著增加，腹泻率显著降低。
表1：本发明预混料对仔猪生长性能和腹泻率的影响
试验过程结束后，试验组猪皮肤红润有光泽，毛发滑顺，全身皮肤通透，有血色，健康。而对照组每个重复均有2-3头皮肤苍白，毛皮凌乱，无光泽，且体表不同程度的有些斑点。从中可以看出添加本发明的饲料可以有效地改善皮肤的颜色和皮毛的光泽度。
本发明的有益效果在于：本发明具有抗细菌（大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）、抗真菌（须毛癣菌、犬小孢子菌和石膏小孢子菌）、杀虫和镇痛抗炎作用，利用环糊精包合作用，将油樟叶挥发油包合，一方面可提高其生物利用度，另一方面可拓展油樟叶挥发油的给药途径。即通过包合物的制备，使其呈固体状态，提高药物稳定性、增加药物溶解度、液体药物粉末化、便于添加到饲料中，且可保护其药效，提高其适口性，从而避免了直接使用挥发油所导致的刺激性和挥发性等弊端。本发明作为饲料添加剂可明显降低猪的腹泻率，有利于降低疾病发生率。
附图说明
图1为本发明的红外光谱图，图中，油樟叶挥发油的特征峰消失或者减弱，仅仅呈现β-环糊精的特征峰。
图2为呈现β-环糊精的特征峰的β-环糊精红外光谱图。
图3为呈现油樟叶挥发油的特征峰的油樟叶挥发油红外光谱图。
图4为油樟叶挥发油和β-环糊精的物理混合物红外光谱图，图中，出现油樟叶挥发油和β-环糊精两者光谱的叠加。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步说明本发明，但实施例仅用于说明并不能限制本发明的范围。
实施例1
制备油樟叶挥发油：将新鲜油樟叶洗净后剪碎，放入烧瓶中，在挥发油提取装置中用水蒸汽蒸馏法提取，蒸馏时间4h，用乙醚为蒸馏液萃取，旋转浓缩后用无水硫酸钠干燥，得油樟叶挥发油。
精密称取4g β-环糊精，按β-环糊精：水1:20的比例配置成溶液，在60℃水浴加热至溶解。另取油樟挥发油1ml用1ml聚乙二醇400溶解，在搅拌下缓缓滴加油樟挥发油聚乙二醇溶液于恒温（60℃）的β-环糊精的水溶液中，待全部滴完后，继续在保温条件下，搅拌3h。将形成的包合物混悬液冷藏（0℃）24h后，抽滤，弃去滤液，用蒸馏水洗涤包合物，抽干后低温干燥，最后得到包合物。此条件下制备的包合物得率为88.42%，包合率为44.44%。傅立叶红外光谱法(FI-I R)证实形成了包合物。
实施例2
精密称取6g β-环糊精，按β-环糊精：水1:10的比例配置成溶液，在50℃水浴加热至溶解。另取油樟挥发油1ml用1ml聚乙二醇400溶解，在搅拌下缓缓滴加油樟挥发油聚乙二醇溶液于恒温（50℃）的β-环糊精溶液中，待全部滴完后，继续在恒温条件下，搅拌3h。将形成的包合物混悬液冷藏（0℃）24h后，抽滤，弃去滤液，用蒸馏水洗涤包合物，抽干后低温干燥，最后得到包合物。此条件下制备的包合物得率为90.82%，包合率为72.22%。傅立叶红外光谱法(FI-I R)证实形成了包合物。
实施例3
精密称取8g β-环糊精，按β-环糊精：水1:15的比例配置成溶液，在40℃水浴加热至溶解。另取油樟挥发油1ml用1ml聚乙二醇400溶解，在搅拌下缓缓滴加油樟挥发油聚乙二醇溶液于恒温（40℃）的β-环糊精溶液中，待全部滴完后，继续在保温条件下，搅拌3h。将形成的包合物混悬液冷藏（0℃）24h后，抽滤，弃去滤液，用蒸馏水洗涤包合物，抽干后低温干燥，最后得到包合物。此条件下制备的包合物得率为78.59，包合率为80.00%。傅立叶红外光谱法(FI-I R)证实形成了包合物。
Claims (9)
1.一种油樟叶挥发油包合物，其特征在于：该包合物是通过将溶于有机溶媒的油樟叶挥发油加入到含β-环糊精的水溶液中，按每1mL油樟叶挥发油配合β-环糊精4-8g的比例采用包合技术包合而成；其中，按体积比计，油樟叶挥发油：有机溶媒=1：1；按重量比计，β-环糊精：水＝ 1：10-20。
2.根据权利要求1所述的油樟叶挥发油包合物，其特征在于：所述油樟叶挥发油由以下方法制得：将新鲜油樟叶洗净后剪碎，放入烧瓶中，在挥发油提取装置中用水蒸汽蒸馏法提取，蒸馏时间4h，用乙醚为蒸馏液萃取，旋转浓缩后用无水硫酸钠干燥，得油樟叶挥发油。
3.按权利要求 1 所述的油樟叶挥发油包合物，其特征在于：所述有机溶媒为聚乙二醇400。
4.一种油樟叶挥发油包合物的制备方法，其特征在于：该方法是以搅拌方式在β-环糊精水溶液中进行，具体步骤如下：按上述配方量比例称取β-环糊精和水，并在40-70 ℃下制成溶液，然后逐滴加入由油樟叶挥发油和有机溶媒制得的溶于有机溶媒中的油樟叶挥发油，搅拌进行包合；整个包合过程时间为 1-3 小时，然后置于 0 ℃环境中沉淀 5-24小时，收集沉淀物、洗涤、干燥，得到包合物。
5.一种油樟叶挥发油包合物的制备方法，其特征在于：该方法包含以下步骤：
（1）溶于有机溶媒的油樟叶挥发油的制备：按油樟叶挥发油：有机溶媒的体积比1：1配制出溶于有机溶媒的油樟叶挥发油；
（2）含β-环糊精的水溶液的制备：按β-环糊精：水的重量比为1：15称取β-环糊精和水，并在40-60℃下制成溶液；
（3）逐滴向含β-环糊精的水溶液中加入溶于有机溶媒中的油樟叶挥发油，搅拌进行包合，在整个包合体系中，满足每1mL油樟叶挥发油配合β-环糊精8g的比例进行包合，包和过程中，控制包合温度使其为40℃，包合时间3h，然后置于 0 ℃环境中沉淀 5-24小时，收集沉淀物、洗涤、干燥，得到包合物。
6.权利要求1所述的油樟叶挥发油包合物在体外抗细菌活性中的应用。
7.权利要求1所述的油樟叶挥发油包合物在体外抗真菌活性中的应用。
8.权利要求1所述的油樟叶挥发油包合物在镇痛或抗炎中的应用。
9.权利要求1所述的油樟叶挥发油包合物在制备功能性生物饲料添加剂中的应用。
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