CN102258477B - 一种抗移植免疫排斥反应的新型j2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途。所述缓释制剂以其基质材料天然,微球植入方便。该制剂以海藻酸钠为药物载体,交联J2免疫活性成份,通过微球液滴发生装置,在钙离子的作用下,将免疫抑制剂包裹或吸附在微球里。所述制剂具有对特定组织器官的靶向性,能延长药物局部作用时间,提高药物的生物利用度,降低全身毒副作用,其可应用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、皮肤、角膜和移植的免疫抑制。
Description
技术领域
本发明涉及抗移植免疫的免疫抑制剂,特别是抗移植免疫排斥反应的化合物免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球缓释制剂,本发明还涉及该缓释制剂的制备方法和用途。
背景技术
免疫抑制的历史发展虽然不长,却在器官移植领域获得了显著成就。免疫移植剂在器官移植中用于防治排斥反应,即,干扰受体对外来抗原的识别和对非自身细胞的清除。免疫移植剂在器官移植中的应用大大提高了移植患者的存活率,目前,肝移植、肾移植、角膜移植、皮肤移植、心脏移植、肺脏移植等器官移植已达到相当成功的水平,其中肝、肾、皮肤移植和角膜移植临床应用最多。这些成绩的取得与外科手术日臻成熟密不可分,但更为重要的是免疫抑制剂在器官移植中的应用。20世纪60年代可以应用的免疫抑制剂十分有限,只有皮质激素及硫唑嘌呤;70年代有抗淋巴细胞球蛋白B多克隆抗体C;80年代初有环孢素,近年来多个用于控制器官移植排斥反应的新型免疫抑制剂进入临床,如:西罗莫司,咪唑立宾,FTY720,CD3单抗,CD25单抗,CTLA-4免疫球蛋白等。由于免疫抑制剂的作用是非特异的,选择性差,有明显的毒副作用。因此近年来免疫抑制剂的研究主要集中在提高免疫抑制剂的安全性使用,在降低肝、肾毒性,神经毒性和胃肠道毒性等方面有了很大改善,对于器官移植的患者来说,目前的免疫抑制剂虽然使抑制物的存活时间大大延长,但还未达到理想的境地,在实际应用中表现特异性较差,对正常免疫反应的抑制作用也较强,所以服用这些免疫抑制剂的患者冒着巨大的危险。因此,寻找和发现毒性小,选择性和特异性好的免疫抑制剂仍是免疫学家和药物学家的重要课题。
计算机辅助药物设计技术(Computer-as-sisted drug disgn CADD)在抗原的识别,淋巴细胞的活化增殖过程中,细胞表面与细胞识别相关的蛋白分子接触是受严格限制的。因此,人们想到如果能有一种药物可以和这些蛋白质分子的某些结构相结合,就可以阻断信号的传递,达到控制免疫过程的目的。Connolly首先提出了靶标分子几何空间构象的DOCK概念,DOCK是目标靶分子的三维结构中与其配体结合发挥其生物学效应的部位。基于此人们通过CADD设计出药物。它的基本过程是:通过实验得到目标靶分子的三维结构,运用计算机技术将已知空间构象的化合物进行筛选,得到与目标靶分子DOCK结构相匹配的药物,通过体内、外实验验证该药物的有效性。Song Li基于CD4分子的domainl的DOCK3.5结构,通过CADD技术从约150,000小分子非肽类有机化合物中筛选出J2,在体外实验中具有良好的抑制CD4分子与MHC Ⅱ分子结合形成复合体的作用,通过动物实验证明具有良好的抗排斥作用。小分子非肽类免疫抑制剂与传统免疫抑制剂相比具有特异性高,副作用少的特点。没有抗体类药物的抗原性问题,为抗角膜排斥反应提供了一个新的思路,其在角膜移植中有很好的应用价值。
J2的合成方法为:直接将1-氯-2,4-二硝基苯与甲胺乙醇溶液反应,得(2,4-二硝基苯基)甲胺(Ⅰ);再经氢化和三乙胺溶液反应得到关键中间体(Ⅱ),即:N-甲基-4-硝基苯-1,2-胺;再经乙腈溶解,将(E)-3-吲哚丙烯酸溶于无水四呋喃中,用DCC缩合法加入化合物(Ⅱ)反应得到黄色固体(Ⅲ),即:E-3-(吲哚-3-基)-N-(2-甲胺基-5-硝基-苯基)丙烯酰胺(J2),其为以吲哚丙烯酰胺为核心结构的CD4抑制剂。
器官功能衰竭已经成为一类严重威胁人类生命和生活质量的常见疾病。器官移植是脏器功能衰竭终末期的有效且必须的治疗手段。迄今为止,器官移植成功的关键依然是防止排斥反应,如何抑制身体对移植物的免疫排斥反应已经成为器官移植发展的瓶颈。免疫抑制剂在器官移植及自身性免疫疾病的治疗中占有非常重要的地位,其被广泛应用于移植初期诱导,维持治疗和逆转已经发生的排斥反应。发展新型免疫抑制剂和合理的免疫抑制方案是提高移植器官远期愈后的关键。
随着手术技术和角膜保存技术的日益成熟和完善,免疫排斥反应成为角膜移植手术成功的最大障碍,在我国角膜病是第二位致盲眼病,在某些地区角膜盲的病人甚至占盲人比例的90%。大约有超过二百万的角膜残疾患者,其中80%的角膜病患者需要角膜移植才能复明,但角膜移植术后免疫排斥反应是失败的最主要原因。特别是高危状态的患者,其排斥率高达60%以上,愈后情况甚至不及心脏、肾脏移植。有研究表明,尽管全身及局部常规应用免疫抑制剂,仍有49%的排斥反应不可逆转。
角膜移植排斥反应是以细胞免疫为主,多种因素共同参与的复杂过程,在抗原信号,共刺激信号及促生长因子等因素的作用下,抗原特异性T淋巴细胞活化,增殖,从而启动排斥反应的效益环节。角膜的上皮、基质和内皮均能诱发排斥反应。在宿主体内的两大类T淋巴细胞按表型不同可分为CD4+,CD8+细胞,与移植术后的排斥反应直接相关。有学者发现在免疫排斥早期角膜移植片内已有CD4+,CD8+细胞浸润。
免疫抑制治疗是器官移植成功与否的关键环节之一,如何合理应用免疫抑制剂是目前广泛关注的焦点问题,理想的免疫抑制应当具有高效、低毒、安全、方便和经济的特点。目前,临床上所采用的免疫抑制剂存在如下缺陷:药物不能相对均匀的持续释放;当局部灌注药物浓度过高时,其药物的冲击波疗效可能产生局部组织坏死或损伤;全身应用时药物的吸收程度个体差异很大,当剂量不足时,免疫排斥得不到有效的抑制,可能导致治疗的失败;剂量过大时又会引起很多并发症,如严重的感染,神经毒性,微血管血栓导致重要脏器衰竭等。微球缓释植入剂能增加特定部位的药物调节,使药物更接近于靶细胞,降低药物对全身的毒副作用而且能达到恒释长效的目的。
随着医药科技的发展,高质量的药物需要一种良好的制剂载体,这种新制剂可使用药的剂量和次数明显减少,并且提高药物的生物利用度降低毒性。药物微球植入后,受到血流冲击,在微球内外药物梯度的作用下,药物通过微球表面细小的裂隙缓慢释放而维持稳定的血药浓度,这样不但使靶区的药物长时间维持较高的浓度,并且降低了循环中的药物浓度,从而提高药物的治疗指数,减轻全身毒副作用。眼球有其独特的解剖学结构--血眼屏障。由于其屏障的存在,故全身用药后难以达到有效的药物浓度。而局部用药又因眼角膜表层为亲脂性,内层亲水性的特性,致眼科的局部用药后难以达到有效的眼内浓度,而有效的眼内药物浓度是治疗眼球疾病的关键,因此改变用药的给药途径和剂型是提高眼内药物浓度的重要措施。
一种良好的免疫抑制剂载体能有效增强J2在眼角膜移植术后治疗和预防免疫排斥反应的疗效,并且避免了J2全身应用的毒副作用,减少了局部用药的刺激,用药的剂量和次数,使用J2微球有利于药物缓慢释放,并长期维持有效的药物浓度。
研究结果表明海藻酸钠交联的J2抗角膜排斥反应是一种安全、有效的治疗和预防方法,这为眼科局部用药开辟了一条新的更为有效的给药途径。
目前国内外尚无有关将海藻酸钠作为药物载体包裹J2或(他克莫司、西罗莫司、霉酚酸脂、咪唑立宾、强的松、甲泼尼龙、环孢素A、赛尼哌、FTY720)免疫抑制剂形成微球缓释植入剂,并应用于肝、肾、肺、心脏、皮肤和角膜移植等病人的介入(植入)治疗和预防免疫排斥反应的报道。
发明内容
药物微球被誉为理想的靶向植入剂型。微球除可实现药物的靶向传输外,还可用来提高生物利用度,调节释药速度等。移植后免疫稳态的建立是一个动态过程,移植受者的个体差异性和免疫系统的水平调整更为复杂。如何诱导稳定而持久的免疫耐受,如何减少药物相关性并发症和治疗费用的研究改进,提高移植患者的生活质量和生存率,将对器官移植起到重要的推动作用。通过免疫调节来维持移植器官的长期存活将具有光明的前景。
微球(微粒体)是一种将药物分散在基质中而形成的微粒分散系统,将药物包封入能被生物降解的高分子聚合物中,植入组织后发生蚀解型水解而被组织吸收,逐渐释放出所含药物,可通过延长药物的清除而起到缓释作用。
器官移植后的免疫排斥反应是自身免疫疾病的重要方面。由于J2是不溶于水的免疫抑制剂,只有口服应用,因此,本发明是将小分子免疫抑制剂制作成缓释微球,用新颖的作用机制,克服现有免疫抑制剂存在的憋端,以其能获得新型的、高效低毒的、药物制剂,这不仅能大大促进器官移植技术的发展,同时也能应用于其他类型的自身免疫疾病,有利于提升我们对此类疾病的治疗水平,提高人民的生活质量。
J2免疫抑制剂是脂溶性物质,临床上口服治疗时移植部位不能获得有效的药物浓度,也不能相对均匀的持续释放。特异性差,还会引发不良反应等。本发明的目的是克服现有免疫抑制剂的缺陷与不足,提供一种天然物质为原料,可缓释降解的海藻酸钠交联J2的新型微球免疫抑制剂。本发明采用海藻酸钠为药物载体,交联J2免疫活性成份制成微球。微球以其基质材料天然,对特定组织器官的靶向性,可延长药物局部作用时间,降低全身毒副作用。药物缓慢释放,可起到药物泵的作用,以达到控制释放的效果,从而延长作用时间,避免频繁重复给药,能够有效地提高生物利用度,是一种安全、有效、便捷、先进的免疫抑制剂给药方式,对移植体有较好的保护作用。
本发明提供一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂,其中包括含J2的海藻酸钠微球。优选所述微球是以海藻酸钠为载体,交联免疫抑制剂J2并将其吸附和包裹在其中形成的。
所述的微球缓释制剂还可以含有一种或多种选自他克莫司、西罗莫司、霉酚酸脂、咪唑立宾、强的松、甲泼尼龙、环孢素A、赛尼哌、FTY720的药物活性成分。
海藻酸钠是水溶性大分子物质,其作为载体与脂溶性的免疫抑制剂J2连接,解决了免疫抑制剂J2的水溶性问题,制成理想可控粒径的含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球,解决了免疫抑制剂J2传统用药的毒副反应大,吸收差及种种不便,改变了免疫抑制剂J2的剂型和投药途径,能高效、低毒,应用于临床且安全有效。
本发明另一方面提供了一种制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法,其包括下列步骤:
(1)将J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜溶解,得到0.1~8.8%重量的J2溶液;
(2)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,得到1~6%重量的海藻酸钠溶液;
(3)将二价金属阳离子钙盐称重,所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成1~15%重量固化液;【需要指明溶剂】在所得固化液中加入无水乙醇,固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1,得到工作固化液;
(4)将J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠。
上述步骤(5)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。
在一个优选的实施方案中,所制得的微球或微胶珠储存在固化溶液中,所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格优选为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。优选微球或微胶珠与固化液的重量比为:0.15~3.5∶1~80。优选将所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。
在另一个优选的实施方案中,所制得的微球或微胶珠经干燥,制成粉末状颗粒。优选在上述方法的步骤(5)之后,将上层溶液倾析,将微球用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
本发明的方法具有以下优点:
1、选择安全的溶解完全的乙醇或二甲基亚砜做增溶剂,消除了传统方法增溶所带来的过敏反应及种种不便;
2、利用羧基链与药物表面的疏水基团相互作用,将免疫抑制剂J2药物包埋入核心制成微粒或球型制剂;
3、采用水溶性海藻酸钠溶液与不溶于水的免疫抑制剂J2混合液体,通过高压静电装置,在钙离子的作用下使其凝胶化-即凝胶层在药物周围附着形成包膜;
4、免疫抑制剂J2的释放实验证明,微球的药物释放速率受载药量的影响,随着载药量的提高,微球中药物颗粒增多,这些颗粒彼此连接形成贯穿聚合物基材的药物网络,有利于水向内部的渗透和免疫抑制剂J2的溶解和扩散,进而提高了免疫抑制剂J2的扩散速率。
本发明将海藻酸钠、免疫抑制剂J2溶解,按比例混合后,通过微球液滴发生仪在乳酸钙或氯化钙等钙离子的作用下,将免疫抑制剂J2包裹在微球里,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球的植入剂。所制得的免疫抑制剂J2药物微球具有良好的特异性,能将药物分散包埋在多聚物中,形成粒径为微米级的球状载体给药系统,解决了免疫抑制剂J2传统用药不良反应多、吸收差和种种不便,改变了免疫抑制剂J2的剂型和投药途径。
本发明的更进一步目的是提供所述的抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂在制备药物中的用途。
本发明的J2-海藻酸钠微球用新型生物降解的药物缓释系统作为载体,在高危角膜移植术后植入前房或泪囊或结膜下,使房水和角膜均可达到较理想的药物浓度。研究表明:J2-海藻酸钠药物缓释系统前房或泪囊或结膜下植入可有效的抑制角膜移植术后排斥反应的发生,房水中一定的J2药物浓度是防止排斥的重要因素,J2-海藻酸钠药物缓释系统具有良好的生物相容性和缓释性能,为J2-海藻酸钠微球提供了一种良好的药物剂型与用药途径,对于将来临床应用J2-海藻酸钠药物缓释系统进行防治角膜移植排斥反应有重要意义。
角膜移植术的适应证:角膜移植术是许多角膜盲的最佳治疗手段,临床适应症包括:角膜变性或营养不良;感染(病毒、细菌、真菌、阿米巴)所致药物不能控制的角膜炎或溃疡;后弹力层膨出,角膜瘘;白内障术后的角膜内皮功能失代偿;圆锥角膜;先天性角膜疾病,各种感染引起的角膜瘢痕、眼外伤或化学烧伤。而且还包括角膜移植术后的排斥反应及其它原因引起的移植失败。
本发明药物J2-海藻酸钠微球还可应用于心、肝、肾、肺、皮肤等器官移植后排斥反应的预防和治疗。
例如,可以将本发明的抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂用于以下治疗中:
手术方法:
动物术前准备:大鼠或新西兰白兔:美多丽散瞳3次,用庆大霉素生理盐水冲洗右眼结膜囊。术前用氯胺酮(5mg/kg体重)、速眠新(2.5mg/kg体重)腹腔注射麻醉,散瞳,于受体右眼行穿透性角膜移植手术,植片,植床直径均2mm,用11-0尼龙线间断缝合8或9针,线结暴露不埋藏,前房或泪囊或结膜下注入无菌J2-海藻酸钠微球0.3ml/5g.L-1,庆大霉素冲洗结膜囊,10-0尼龙线缝合眼睑,外涂金霉素眼膏,术后24小时后剪开眼睑观察,有无前房出血,感染,角膜混浊等情况,术后每天滴0.3%氧氟沙星眼液1次/d持续1周。术后7天拆除角膜缝线。
病人穿透性角膜移植术:按常规麻醉方法和穿透性角膜移植手术进行,环钻制备植床,供体角膜切取直径为7.0-8.5mm,术中前房或泪囊或结膜下注入无菌J2-海藻酸钠微球0.3ml/5g.L-1,庆大霉素冲洗结膜囊,10-0尼龙线缝合眼睑,外涂金霉素眼膏,术后均全身及眼部应用皮质激素,术后24小时后剪开眼睑观察,有无前房出血,感染,角膜混浊等情况,术后每天滴0.3%氧氟沙星眼液1次/d持续1周。术后7天拆除角膜缝线。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明,但这些实施例不意味着对本发明保护范围的限制。
实施例1
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例0.1~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成1~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成1~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液(0.15~3.5∶15~80);
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂中微球和固化液的重量比为:0.15~3.5∶1~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案为,储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案为所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
角膜移植术的适应证:角膜移植术是许多角膜盲的最佳治疗手段,临床适应症包括:角膜变性或营养不良;感染(病毒、细菌、真菌、阿米巴)所致药物不能控制的角膜炎或溃疡;后弹力层彭出,角膜瘘;白内障术后的角膜内皮功能失代偿;圆锥角膜;先天性角膜疾病,各种感染引起的角膜瘢痕、眼外伤或化学烧伤。而且还包括角膜移植术后的排斥反应及其它原因引起的移植失败。
在角膜移植中的应用
动物术前准备:大鼠或新西兰白兔:用美多丽散瞳3次,庆大霉素生理盐水冲洗右眼结膜囊。术前用氯胺酮(5mg/kg体重)、速眠新(2.5mg/kg体重)腹腔注射麻醉,散瞳,于受体右眼行穿透性角膜移植手术,植片,植床直径均2mm,用11-0尼龙线间断缝合8或9针,线结暴露不埋藏,术中在无菌条件下,将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球)用生理盐水冲洗微球三遍,再缓慢注入病灶部位;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法缓慢注射到前房或泪囊或结膜下,按每只眼睛0.3ml,5g/L-1注射,庆大霉素冲洗结膜囊,10-0尼龙线缝合眼睑,外涂金霉素眼膏,术后24小时后剪开眼睑观察,有无前房出血,感染,角膜混浊等情况,术后每天滴0.3%氧氟沙星眼液1次/d持续1周。术后7天拆除角膜缝线。
病人穿透性角膜移植术:按常规麻醉方法和穿透性角膜移植手术进行,环钻制备植床,供体角膜切取直径为7.0-8.5mm,术中在无菌条件下,将实施例1制备的免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球)用生理盐水冲洗微球三遍,再缓慢注入病灶部位;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法缓慢注射到前房或泪囊或结膜下,按每只眼睛0.3ml,5g/L-1注射,庆大霉素冲洗结膜囊,10-0尼龙线缝合眼睑,外涂金霉素眼膏,术后均全身及眼部应用皮质激素,术后24小时后剪开眼睑观察,有无前房出血,感染,角膜混浊等情况,术后每天滴0.3%氧氟沙星眼液1次/d持续1周。术后7天拆除角膜缝线。
实施例2
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例0.3~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成1.5~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成1.5~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂的重量比为:0.15~3.5∶15~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案,其特征在于:所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案,其特征在于:所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
皮肤位于人体的表面,是人体的第一道防线,具有多种重要功能,如从重量与面积来看,皮肤是人体的最大器官,重量约占体重的16%。皮肤移植作为一种修残补缺的手段广泛应用于临床,对移植体的保护离不开先进的免疫抑制剂,根据皮肤移植的不同部位将含免疫抑制剂J2-海藻酸钠药物微球注射到移植部位周围可达到明显的效果。
烧伤病人手术方法:(1)创面处理:烧伤面要求彻底清除坏死组织,Ⅲ度烧伤创面切痂至正常脂肪层或深筋膜层,深Ⅱ度烧伤创面削痂后创面有密集的小出血点,切削痂创面严格止血后用3%双氧水,生理盐水清洗。瘢痕切除后要求充分松解粘连,创面达正常组织并严格止血,生理盐水清洗。(2)脱细胞异体真皮处理:用生理盐水漂洗脱细胞异体真皮3次,将脱细胞异体真皮乳头层面上,在无张力下呈网状覆盖创面,周边用4-0线缝合固定。(3)自体皮移植,自供皮区取大张自体刃厚皮,覆盖于脱细胞异体真皮表面,缝合固定,四肢部位用绷带加压包扎,颈部植皮区行加压打包,包扎后行石膏固定。(4)根据皮肤移植的部位大小选择用量和药物微球的规格,在无菌条件下,将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球)用生理盐水冲洗微球三遍,再缓慢注入病灶部位;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法缓慢多点注射到移植部位周围肌肉层,按2mg/Kg体重注射。(5)术后处理:烧伤部位7d首次更换敷料,后继续加压包扎至14d拆线,颈部整形部位10d更换敷料并拆线。
实施例3:
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例0.5~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成1.7~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成2~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂的重量比为:0.15~3.5∶10~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案,其特征在于:所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案,其特征在于:所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
肝脏移植是治疗晚期肝脏衰竭的一种有效方法,但肝移植后急性排斥反应是术后严重并发症之一,成为影响移植存活的决定因素,因此选择有效的抗急性排斥反应药物是保证肝移植成功的关键。抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的应用对器官移植患者的长期存活以及移植物保持良好功能都起着重要作用。
成人活体肝移植的手术方式:施行右半肝切除,不含肝中静脉。供肝取下前行原位UW液灌注,取下后进行修整。受者先行全肝切除,保留肝后下腔静脉。先做供肝右肝静脉与受体右肝静脉的吻合,供肝右后下静脉与受体下腔静脉吻合,供肝右前叶肝中静脉一粗大分枝与受体下腔静脉通过一段大隐静脉架桥连接。继之行供受体门静脉对端吻合,开放血循环,吻合肝动脉,最后行胆总管对端吻合。未放置T管。关腹前选用上述含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球的适当粒径范围;将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球),用生理盐水冲洗微球三遍,按2mg/Kg体重缓慢注入腹腔;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法和剂量缓慢注入腹腔。
实施例4:
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例0.8~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成1.8~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成3~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂的重量比为:0.15~3.5∶10~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案,其特征在于:所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案,其特征在于:所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
同种异体肾脏移植是终末期肾病患者恢复健康和有活力生命的最佳选择。
亲属活体供肾组:(1)取肾:所有供者均取仰卧位,在吸入全麻下经前肋缘下切口取肾作为供肾,取肾完毕后,立即将供肾用冰高渗枸缘酸腺嘌呤液(HCA)肾保存液灌洗,在工作台上进行修剪,并置于专用无菌冰罐中保存备用。(2)植肾:受者在全麻+硬膜外麻醉下完成肾脏移植手术。所有供肾全部置于受体的右髂窝,将供肾静脉和受体右髂外静脉行端侧吻合,供肾动脉与受体右髂内动脉行端端吻合,供肾输尿管与受体膀胱行抗返流吻合并留置双“J”管。关腹前把新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂,按2mg/Kg体重注入腹腔。
尸体供肾移植组:除取肾方式不同外,肾脏移植手术方法与亲属活体供肾移植基本相同,但有供肾置于受体的左髂窝,有供肾者动静脉分别与受者的髂外动、静脉行端侧吻合。关腹前选用上述含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球的适当粒径范围;将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球),用生理盐水冲洗微球三遍,按2mg/Kg体重缓慢注入腹腔;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法和剂量缓慢注入腹腔。
实施例5:
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例1~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成2~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成3~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂的重量比为:0.15~3.5∶15~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案,其特征在于:所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案,其特征在于:所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
心脏移植作为治疗各种终末期心脏病的有效方法之一,选择合适的供体是心脏移植成功的关键之一。所有患者移植前心功能分级(NYHA)均为IV级,经过规范内科治疗未见明显效果。
供体:脑死亡供体:脑死亡后有稳定的血流动力学和供心在不乏氧条件下获取,受体ABO血型相同或相符。
供心的获取:生前同意自愿捐献遗体的供体在确认脑死亡之后,仰卧位,常规皮肤消毒,胸骨正中开胸,倒T型剪开心包,全身肝素化。(1)第Ⅰ类供体获取方法:于升主动脉前壁荷包缝合固定线,荷包中央插入灌注针管,用固定缝线固定灌注针管,然后分别用动脉导管钳在尽量贴近膈面阻断下腔静脉和心包返折处阻断上腔静脉,待心脏继续搏动至心腔内血液排空后,在升主动脉远端阻断升主动脉,经灌注针管灌注冷康斯特保护液(HTK)心肌保护液,灌注压力维持在60-80mmHg,同时将心脏向头部和右侧抬出,快速剪断心包返折处的左下肺静脉和贴近动脉导管钳上面剪断下腔静脉,以便灌注中充分进行左右心腔引流减压,用高功率吸引器吸尽心包内积血,放置冰及冰盐水,用右手触摸心脏,若心脏较胀,可间断按摩心脏以保证心腔空虚。灌注完毕后,分别剪断左上和右上,下肺静脉,左手伸入横窦,握住心底部大血管,横断升主动脉,肺动脉分叉部剪断肺动脉,钝性剥离左心房后壁及上、下腔静脉入口周围的组织,至此供心已可完全取出,取出后放入盛有4℃保护液和生理盐水的三层无菌塑料袋内,密封好后送至手术室。(2)第Ⅱ类供体获取方法:首先用阻断钳部分阻断升主动脉,于升主动脉前壁荷包缝合固定线和插入灌注针管,然后用阻断钳完全阻断升主动脉,经灌注管灌注心肌保护液,同时用动脉导管钳分别钳夹上、下腔静脉,快速剪断左下肺静脉和下腔静脉,其余步骤同上。(3)第Ⅲ类供体获取方法:升主动脉前壁上缝合固定线,插入灌注针管。用动脉导管钳分别钳夹上、下腔静脉,快速剪断左下肺静脉和下腔静脉使心腔积血排空后再阻断升主动脉和灌注心肌保护液,其余步骤同上。
移植手术:均在全身麻醉及体外循环下施行手术,采用双腔静脉吻合法原位心脏移植手术。左心房吻合采用3-0 Prolene线连续外翻缝合,右心房吻合或上、下腔静脉吻合采用4-0 Prolene线连续缝合,主动脉和肺动脉吻合采用4-0和5-0 Prolene线连续缝合法。受体体外循环时间79-168min,主动脉阻断时间53-131min。
免疫抑制剂的使用:术前24h受体静脉滴注单次剂量赛尼哌1mg/Kg,升主动脉开放前静脉注射甲基泼尼松龙500mg,手术完成后选用上述含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球的适当粒径范围;在无菌条件下,将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球),用生理盐水冲洗微球三遍,再缓慢注入胸腔或腹腔;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法缓慢注入胸腔或腹腔。
实施例6:
制备抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂的方法:
(1)玻璃器皿的处理:
将清洗干净的玻璃器皿凉干,放在高温烤箱内在280摄氏度下烘烤3小时(除菌去热源);
(2)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜按药物比例0.8~8.8%(质量体积百分比)浓度溶解,得药物溶液;
(3)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,配成1.7~6%(质量体积百分比)的浓度,得海藻酸钠溶液;
(4)将二价金属阳离子钙称重,所述阳离子钙选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡,配制成2.5~15%(质量体积百分比)浓度的溶液,得固化液;然后在所得固化液中加入无水乙醇,得工作固化液;所述工作固化液的比例为:固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1;
(5)将所得的免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(6)将上述步骤(5)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于(4)的工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠;
(7)将制得的带药微球或微胶珠保存在(4)的固化液中,制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂,湿热灭菌,保存,待用。
上述步骤(6)的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置,推进泵,喷射头,无菌容器,正负电极,各种型号的无菌注射器,升降装置。所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
所述高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
本发明采用高压静电成球(囊)技术避免使用有机溶剂,有利于提高药物的稳定性,并可通过调节电压调控微球(囊)粒径,操作简便,条件温和,能避免现有技术中使用的有毒的有机溶剂。本发明药物微球制成不同大小的规格,所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂的重量比为:0.15~3.5∶15~80。所制得药物微球湿热灭菌,达到符合临床应用需要,在灭菌过程中和保存期内免疫抑制剂药物不渗漏,保存期长。所制得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球或微胶珠植入剂储存在固化剂溶液中。
一种优选技术方案,其特征在于:所述储存在固化剂溶液中的微球或微胶珠的粒径规格为:20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
一种优选技术方案,其特征在于:所得含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球经干燥,得粉末状颗粒;将上述所得微球的上层溶液倾析,用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
心肺移植是风险最高的器官移植之一,患者术后需要长期服用多种免疫抑制药物,以避免急性或慢性的排斥反应。同种异体心肺移植是终末期心脏和肺脏患者恢复健康和有活力生命的最佳选择。
同种异体心肺联合移植术供体:淋巴细胞毒试验阴性,ABO血型相同,未发现心肺系统疾病。脑死亡后紧急气管插管,纯氧通气。术前静脉给予甲基强的松龙30mg/kg,肝素3mg/kg。胸骨正中切口,心包广泛切除至两侧肺静脉,升主动脉和主动脉弓广泛分离并置束带,上腔静脉分离至无名静脉分叉,奇静脉、无名动脉、无名静脉分别结扎切断。于肺动脉远端灌注前列腺素液每分钟10-20μg/kg,压力20-30mmHg,使血压下降约30mmHg,窦房结远心端结扎上腔静脉,切断下腔静脉,切开左心耳,迅速阻断主动脉及肺动脉,主动脉根部灌改良冷晶体停跳液(30ml/kg),肺动脉灌注Euro-Collins(60ml/kg),心表面及肺表面4℃盐水浸浴。高位切断主动脉;退出气管插管,膨胀肺,高位钳闭气管,切断气管;在食管与降主动脉前分离纵隔组织,切断下肺韧带,摘取心肺。将心肺置于4℃盐水灭菌袋内,送手术室,受体手术开始。
受体:胸骨正中切口,肝素化,主动脉远端及上、下腔静脉远端插管建立CPB。于主动脉瓣上切断主动脉,肺总动脉中点切断肺动脉,沿房间隔切开右房壁至上、下腔静脉,将心脏向右、前抬起,切除左房外侧壁、左房顶、房间隔、取出心脏。然后分离左肺静脉,距膈神经前、后1cm切开心包,上起左肺动脉,下至膈肌,切断左肺韧带,向前、右方牵拉左肺,游离左肺门,显露左支气管,结扎支气管动脉,横断左肺动脉,结扎或用闭合器切断左支气管取出左肺;分离右肺静脉,按上述方法保护膈神经,去除右肺。向左牵拉主动脉远端,分离气管周围组织,在隆凸上1个环状软骨处切断气管。
心肺植入:供体心脏置入心包内,于两侧膈神经前将左、右肺置入胸腔。于供体隆凸上1-2软骨环处切断气管,4-0 Prolene连续缝合气管膜部,4-0 ethobide“8字”间断缝合软骨部,证实无漏气后,机械通气(<30 cmH2O,2.94Kpa)。再依次吻合主动脉以及上、下腔静脉,开放阻断钳,恢复心脏血供。心脏自动复跳。分别在右心房和右心室缝置双腔起博导线,供体心肺缺血170min,体外循环768min。手术完成后选用上述含免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球的适当粒径范围;在无菌条件下,将免疫抑制剂J2-海藻酸钠微球(湿球),用生理盐水冲洗微球三遍,按2mg/Kg体重注入胸腔或腹腔;如果是干球,使用前用生理盐水浸泡数分钟还原成湿球,按同样方法缓慢注入胸腔或腹腔。
本领域普通技术人员可以理解:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (18)
1.一种抗移植免疫排斥反应的J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂,其特征在于,所述缓释免疫抑制剂包括含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球,所述微球是以海藻酸钠为载体,交联免疫抑制剂J2并将其吸附和包裹在其中形成的,所述微球的制备包括下述步骤的方法:
(1)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜溶解,得到0.1~8.8%质量体积百分比的免疫抑制剂J2溶液;
(2)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,得到1~6%质量体积百分比的海藻酸钠溶液;
(3)将二价金属阳离子钙盐称重,所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙,配制成1~15%质量体积百分比固化液;
在所得固化液中加入无水乙醇,固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1,得到工作固化液;
(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得到含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
2.根据权利要求1所述的缓释免疫抑制剂,其特征在于其制备过程的步骤(5)使用的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置,所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
3.根据权利要求2所述的缓释免疫抑制剂,其特征在于其制备过程的步骤(5)使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
4.根据权利要求1所述的缓释免疫抑制剂,其特征在于所述缓释制剂还包括固化液,所述固化液为乳酸钙、氯化钙的1~15%重量溶液,储存在固化剂溶液中的微球的粒径20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
5.根据权利要求4所述的缓释免疫抑制剂,其特征在于微球储存在固化溶液中,微球与固化液的重量比为:0.15~3.5∶1~80。
6.根据权利要求1所述的缓释制剂,其特征在于所述缓释制剂中的微球是粉末状颗粒,其粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、750~950μm。
7.根据权利要求1所述的缓释制剂,其特征在于其制备过程的步骤(5)完成之后,将上层溶液倾析,将微球用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球。
8.根据权利要求1所述的缓释免疫抑制剂,其特征在于其中还包括选自他克莫司、西罗莫司、霉酚酸脂、咪唑立宾、强的松、甲泼尼龙、环孢素A、赛尼哌或FTY720的活性成分。
9.一种制备权利要求1所述的缓释免疫抑制剂的方法,其特征在于包括下列步骤:
(1)将免疫抑制剂J2称重,用无水乙醇或二甲基亚砜溶解,得到0.1~8.8%重量的免疫抑制剂J2溶液;
(2)将海藻酸钠称重,用注射用水或生理盐水溶解,得到1~6%重量的海藻酸钠溶液;
(3)将二价金属阳离子钙盐称重,所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙,配制成1~15%重量固化液;
在所得固化液中加入无水乙醇,固化液和无水乙醇的体积比是3∶2~10∶1,得到工作固化液;
(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合,得混合液;
(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置,喷雾微滴,分散于工作固化液中,待沉淀完全后去除上清液,得含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
10.根据权利要求9所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于在步骤(5)使用的高压静电微球液滴发生装置包括:高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置,所述高压静电发生装置上有正负两极,所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连,所述正极与喷射头相连,所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接,所述不锈钢钢丝与无菌容器相连,所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
11.根据权利要求10所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于其制备过程的步骤(5)使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220~260伏,频率为10~100HZ,脉宽为10~199PS,所述推进泵的泵速为10~350毫升/小时,喷射头为4~20号。
12.根据权利要求9所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于步骤(5)得到的微球储存在固化剂溶液中,微球的粒径20~100μm、50~150μm、150~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm、550~750μm、750~950μm或950~1250μm。
13.根据权利要求9或12所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于步骤(5)得到微球储存在固化溶液中,微球与固化液的重量比为:0.15~3.5∶1~80。
14.根据权利要求9所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于步骤(5)完成之后,将微球干燥,得到粉末颗粒。
15.根据权利要求14所述的缓释免疫抑制剂制备方法,其特征在于步骤(5)完成之后,微球用冷冻干燥或烘箱干燥法干燥,得到粉末颗粒,即,干球。
16.根据权利要求14或15所述的制备方法,其特征在于粉末状颗粒形式的微球粒径范围为10~50μm、50~100μm、50~150μm、100~200μm、200~450μm、300~500μm、500~700μm或750~950μm。
17.一种根据权利要求1-8任一项所述的抗移植免疫排斥反应的J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂在制备药物中的用途,所述药物用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、角膜、皮肤移植后排斥反应的预防和治疗。
18.根据权利要求17所述的制备药物的用途,其特征在于所述药物用于角膜移植后排斥反应的预防和治疗。
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