CN102228649B - 疏风活络片的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉及疏风活络片的质量控制方法，是以片剂中马钱子和麻黄中代表性成分为标准。具体控制指标如下：士的宁的含量为0.30mg/片-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.30mg/片；盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9mg/片-4.0mg/片。该质量控制方法使可以保证疏风活络片的安全性和有效性。

Description

疏风活络片的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，具体涉及疏风活络片的质量控制方法。

背景技术

“痹病”是风湿性疾病之总称，包括类风湿性关节炎、风湿性关节炎、强直性脊柱炎、痛风、骨质增生及坐骨神经痛等疾病。其共同特征均以关节疼痛、肿胀、拘挛僵直为主证。风湿性疾病多数是慢性疾病，如类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等，一般需要常年用药。因此，这些疾病临床用药需求量极大。根据相关调查数据显示，从2000年至今，我国风湿病患者每年的用药金额基本都维持在200亿元以上。从患病人数上看，我国也是风湿病的发病大国，风湿性、类风湿性关节炎患者几乎占到人口总数的18％，重症患者更是达到八千万。该病晚期可出现关节畸形、僵直、关节功能丧失，是风湿病致残的主要原因。强直性脊柱炎在我国的发病率约为0.3％，病情发展可累及整个脊柱，最终发生脊柱强直，部分患者可累及股骨头，形成股骨头坏死。骨关节炎多见于老年人，随着年龄增长其发病率增高，＞55岁年龄组发病率约为80％。根据各病种的流行病学调查综合分析，推测我国病例数约一亿人。由此可见风湿类疾病是危害人类的常见病、多发病，且多缠绵难愈，危害极大。

本发明所述疏风活络片是湖南金沙药业有限公司(以下称金沙药业)独家生产的中药保护品种，经过金沙药业进一步对该片剂进行制备工艺的改进和加强质量控制，其安全性和有效性得到了更好的保证，经湖南省中医学院附属医院等大量的临床研究表明，金沙药业制备的该制剂具有良好的疏风活络、散寒祛湿作用，对用于风寒湿痹，四肢麻木，关节、腰背酸痛等症具有显著的治疗作用。

对疏风活络片多种有效成分同时控制的标准暂无相关报道，仅在文献《疏风活络片的质量标准研究》中对马钱子进行了分析，研究了马钱子的主要成分士的宁的含量测定方法，得出了最合适的分析条件，但是没有对士的宁控制水平进行研究。已有疏风活络片的现行质量标准较粗糙，未对主要药味进行指标控制，更未对药味中代表性成分水平进行上下限控制以更好的保证药品的有效性和安全性。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了疏风活络片的一种质量控制方法，通过控制制剂中关键药材主要成分的方法得出疏风活络片的质量控制方法，该质量控制方法使可以确保疏风活络片的安全性和有效性。

本发明的技术方案是：疏风活络片的质量控制方法，具体控制指标必须同时满足以下条件：

士的宁的含量为0.30mg/片-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.30mg/片；

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9mg/片-4.0mg/片；

其中每片相当于0.3g药材，相当于原生药0.76g。

所述各成分含量的检测方法和检测条件如下：

1)制剂中士的宁和马钱子碱的含量采用液相色谱检测，测定条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛∶混合溶液＝17∶83为流动相；检测波长为260nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于3000；所述混合溶液为0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液；

2)制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量采用液相色谱检测，检测条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.2％磷酸溶液＝2∶98为流动相；检测波长为207nm；理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。

所述混合溶液用10％磷酸溶液调节pH到2.8。

所述0.2％磷酸溶液中还可以添加0.3％三乙胺。

下面对本发明做进一步的解释和说明：

本发明首先通过缺单味药材的疏风活络片与全处方量制剂进行安全性和主要药效作用的比较，发现马钱子和麻黄对制剂的安全性和有效性影响较大。通过控制制剂中马钱子和麻黄主要药效成分，使得士的宁的含量为0.30mg/片-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.30mg/片；盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9mg/片-4.0mg/片，可以保证疏风活络片的安全性和有效性。

其中具体的分析方法如下：

1)制剂中士的宁和马钱子碱的含量测定条件如下：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10％磷酸溶液调节pH2.8)(17∶83)为流动相；检测波长为260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取马钱子碱对照品、士的宁对照品适量，精密称定，加0.5％磷酸溶液制成每1ml含马钱子碱17μg、士的宁33μg的混合溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.8g，精密称定，置250ml锥形瓶中，精密加入0.5％磷酸溶液75ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，用0.5％磷酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2)制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定条件

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2％磷酸溶液(含0.3％三乙胺)(2∶98)为流动相；检测波长为207nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加1.44％磷酸溶液制成每1ml盐酸麻黄碱25μg、盐酸伪麻黄碱10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置250ml锥形瓶中，精密加入1.44％磷酸溶液50ml，称定重量，加热回流20分钟，取出，放冷，用1.44％磷酸溶液补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

具体实施方式

实施例1

缺味疏风活络片对佐剂性多发性关节炎的抑制作用试验

1.实验材料：

1.1.受试药物：不同缺单味疏风活络片样品，共11种。

疏风活络片全方样品制备：

马钱子96g、秦艽48g、麻黄159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，共10味药材，马钱子、麻黄粉碎成细粉，其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，制粒，压制成1000片。

缺单味药材疏风活络片样品制备：按以上处方和数量分别缺少单味药材，然后同法粉碎和提取，干燥，混匀，与全方制剂比较不足重量加微晶纤维素补足，制粒，压制成1000片。

缺味样品组1(缺马钱子)

缺味样品组2(缺秦艽)

缺味样品组3(缺麻黄)

缺味样品组4(缺木瓜)

缺味样品组5(缺虎杖)

缺味样品组6(缺甘草)

缺味样品组7(缺菝葜)

缺味样品组8(缺防风)

缺味样品组9(缺桂枝)

缺味样品组10(缺桑寄生)

1.2.试验动物：健康SD大鼠(200-250g)。

2.实验方法：

2.1.骨折动物模型制作：每只大鼠称重，记录，编号，取大鼠右后足垫皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂致炎，一周后进行第二次注射，使之出现超敏反应性炎症，即继发性和免疫性关节炎，在佐剂注射后15～19天病变全部形成即可。

2.2.动物给药和判定：造模后随机分成模型组(灌胃给予生理盐水)和药物处理组(11组，分别疏风活络片不同缺味制剂，每日灌胃给予0.2g/kg)连续一周，观察佐剂注射对侧的足爪肿胀度、体重变化、前肢病变的发生率、结节数或严重度(用五级评分法表示：0：无红肿；1：小趾关节稍肿；2：趾关节和足跖肿胀；3：踝关节以下足肿胀；4：包括踝关节在内全部足爪肿胀)。

3.实验结果

表1不同缺味制剂对佐剂关节炎的抑制作用(n＝10)

注：评分值越高标明炎症肿胀越严重，评分越低说明药物疗效好。

试验结果表明，当方中缺少马钱子或麻黄时，疏风活络片对佐剂性关节炎的抑制作用明显减弱，而缺少其他单味药材，在给药4周后均肿胀程度明显的缓解，亦即表明，麻黄和马钱子是疏风活络片处方中对药效影响较大的药味。

实施例2

马钱子质量对疏风活络片毒性和抗炎作用的影响

马钱子中的生物碱是其主要药效成分，成熟种子含生物碱1.5％～5％，其中主要是士的宁，约占总碱的35％～50％，其次为马钱子碱，含量与士的宁大致相等。士的宁的致死量为30～100mg。马钱子碱的毒性约力士的宁的1/8～1/30。马钱子生物碱以士的宁为代表性成分，能兴奋脊髓的反射机能，兴奋呼吸中枢和血管运动中枢，提高大脑皮层感觉中枢的机能；同时士的宁的有效剂量和中毒剂量相差不大，治疗量的士的宁使神经冲动在脊髓中传导易化，并提高脊髓反射兴奋性，因此可缩短脊髓反应时间，增高反射强度，且不破坏脊髓中枢的交互抑制过程，但中毒剂量的士的宁能破坏此交互抑制过程，出现强直性惊厥。

因此，为同时确保疏风活络片的安全性和有效性，主要选择士的宁作为马钱子中控制制剂质量的指标，同时监控马钱子碱的含量，因马钱子碱毒性较低又是有效成分，其含量在马钱子中与士的宁相近，因此在选择控制不同上下限度士的宁的同时，仅对马钱子碱作下限规定。

检测加入马钱子细粉中士的宁和马钱子碱含量，通过勾兑不同含量的药材粉末将制剂中士的宁控制为五等：(1)士的宁含量小于0.3mg/片，马钱子碱含量亦小于0.3mg/片；(2)士的宁含量为0.3-0.8mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；(3)士的宁含量为0.8-1.2mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；；(4)士的宁含量为1.2-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；；(5)士的宁含量大于1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片。另外，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量控制为1.0mg/片-2.0mg/片。

1.实验材料：

1.1.受试药物：5组士的宁与马钱子碱含量不同的全方疏风活络片

样品制备步骤：秦艽48g、麻黄细粉159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，此九味药材采用市售统货混匀，按表2注明的不同士的宁和马钱子碱含量勾兑马钱子细粉96g，除马钱子、麻黄外其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，制粒，压制成1000片。

1.2.试验动物：健康雄性SD大鼠(200-220g)；健康小鼠(18-22g)。

2.实验方法：

2.1对佐剂性多发性关节炎的抑制作用试验

同实施例1。

2.2疏风活络片灌胃急性毒性试验

小鼠250只，随机分为5组，每组分别灌胃不同剂量该组别的疏风活络片样品混悬液(240mg/ml)，低剂量组按剂距1∶0.7的比例将药物稀释后供试验用。给药体积按40ml/kg。给药后观察动物的急性毒性反应和死亡情况，连续观察7天。并对死亡动物进行尸检，计算不同样品的致死LD₅₀值。

3、试验结果

3.1士的宁和马钱子碱含量对大鼠佐剂关节炎的抑制药效影响

表2不同士的宁和马钱子碱含量对制剂药效的影响(n＝10)

注：样品1中士的宁含量小于0.3mg/片，马钱子碱含量小于0.3mg/片；

样品2中士的宁含量为0.3-0.8mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；

样品3中士的宁含量为0.8-1.2mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；

样品4中士的宁含量为1.2-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片；

样品5中士的宁含量大于1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片。

上述样品1-5中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总量均为1.0mg/片-2.0mg/片。

实验结果说明，当药品中士的宁的含量低于0.3mg/片，马钱子碱含量小于0.3mg/片时，明显影响疏风活络片的药效，因此片剂中控制马钱子生物碱时应将士的宁和马钱子碱的含量均控制在0.3mg/片以上。

3.2士的宁含量对疏风活络片毒性的影响

小鼠灌胃疏风活络片后，可见动物与给药剂量呈相关性的抽搐、后肢伸展，于给药后5min高剂量组即有动物死亡。死亡动物经解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等脏器，未见明显病理改变，计算其半数致死量，结果表3。

表3不同士的宁含量疏风活络片急性毒性试验结果

结果说明，当选择士的宁含量为1.5mg/片以上的制剂，疏风活络片的毒性明显增大，1328mg即达到半数致死量，因此为保证药品的安全性，应将片剂中士的宁的含量限制在1.5％以下。

3.3综合分析

根据疏风活络片中不同士的宁和马钱子碱含量对制剂的毒性和有效性的影响实验结果表明，将士的宁含量控制在0.3-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.3mg/片，可同时确保药品的安全性和高效性。

实施例3

麻黄质量对疏风活络片安全性和抗炎作用的影响

麻黄中的主要成分为麻黄碱和伪麻黄碱，具有能使心肌收缩力增强，心输出量增加的作用，同时作用于血管平滑肌，引起收缩压和舒张压上升，脉压增大，对血小板聚集有抑制作用，并兴奋α1-肾上腺受体，提高中枢性痛觉阈值，产生镇痛作用。因疏风活络片使用人群一般为中老年患者，其中有相当一部分患有高血压，麻黄碱类因其对血压的影响作用会导致药品出现一定的副作用，因此麻黄质量差异会影响疏风活络片的安全性，选择麻黄碱和伪麻黄碱为指标并对其不同含量制剂的安全性和有效性进行优化和选择。

根据市售麻黄中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量范围，选择合适范围的麻黄，分别粉碎成细粉，检测其中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量，通过勾兑将制剂中含量控制为五个等级：(1)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量小于0.30mg/片；(2)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.3-0.9mg/片；。(3)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9-1.8mg/片；(4)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为1.8-4.0mg/片；(5)盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量大于4.0mg/片。另外，制剂中士的宁的含量均控制为0.30-1.0mg/片，马钱子碱控制大于0.3mg/片。

1.实验材料：

1.1.受试药物：5组盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量不同的全方疏风活络片

样品制备步骤：秦艽48g、马钱子细粉96g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，此八味药材采用市场统货混匀，按表4注明勾兑不同麻黄碱含量的麻黄细粉159g，除马钱子、麻黄外其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，制粒，压制成1000片。

1.2.试验动物：健康雄性SD大鼠(200-220g)。

2.实验方法：

2.1对佐剂性多发性关节炎的抑制作用试验

同实施例1。

2.2疏风活络片升压试验

试验分为四组，每组10只大鼠：正常对照组、五个疏风活络片样品组(0.41g/kg)，尾动脉套管法检测大鼠动脉血压(收缩压、舒张压)。

3、试验结果

3.1盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量对大鼠佐剂关节炎的抑制药效影响

表4不同盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量对制剂药效的影响(n＝10)

注：样品1中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量小于0.3mg/片；

样品2中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.3-0.9mg/片；

样品3中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9-1.8mg/片；

样品4中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为1.8-4.0mg/片；

样品5中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量大于4.0mg/片。

以上5个样品士的宁的含量均为0.30-1.0mg/片，马钱子碱大于0.30mg/片。

实验结果说明，当药品中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总量低于0.9mg/片时，明显影响疏风活络片的药效，因此片剂中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总量应控制在0.9mg/片以上。

3.2盐酸麻黄碱和伪麻黄碱含量对疏风活络片升压作用的影响

实验结果见表5、6。

表5麻黄碱类含量对疏风活络片升收缩压的影响(均数±标准差，n＝10)。

表6麻黄碱类含量对疏风活络片升舒张压的影响(均数±标准差，n＝10)。

结果说明，当盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总含量达4.0mg/片以上时，使得疏风活络片的明显具有升压作用，将可能导致服用本品的高血压患者产生危险，因此将片剂中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总量限制在4.0mg/片以下。

3.3综合分析

根据疏风活络片中不同盐酸麻黄碱和伪麻黄碱含量对制剂的升压作用和有效性的影响实验结果表明，将其总含量控制在0.9-4.0mg/片，能有效的保证药品的安全性和疗效。

实施例4

控制二味关键药材制成的不同质量的疏风活络片

样品A制备：

处方：马钱子96g、秦艽48g、麻黄159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，共10味药材，

制法：取方中马钱子、麻黄粉碎成细粉，其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，加入10％明胶糖浆制粒，干燥，加10g羧甲基淀粉钠、1g硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

制剂检测结果：士的宁含量为0.89mg/片，马钱子碱含量为0.68mg/片，盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总含量为2.12mg/片，符合本发明要求的质量控制标准。

样品B制备：

处方：马钱子96g、秦艽48g、麻黄159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，共10味药材，

制法：取方中马钱子、麻黄粉碎成细粉，其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，加入10％明胶糖浆制粒，干燥，加10g羧甲基淀粉钠、1g硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

制剂检测结果：士的宁含量为0.38mg/片，马钱子碱含量为0.34mg/片，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总含量为1.22mg/片，符合本发明要求的质量控制标准。

样品C制备：

处方：马钱子96g、秦艽48g、麻黄159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，共10味药材，

制法：取方中马钱子、麻黄粉碎成细粉，其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，加入10％明胶糖浆制粒，干燥，加10g羧甲基淀粉钠、1g硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

制剂检测结果：士的宁含量为1.74mg/片，马钱子碱含量为1.92mg/片，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总含量为4.83mg/片，超过本发明要求的质量控制标准限度。

样品D制备：

处方：马钱子96g、秦艽48g、麻黄159g、木瓜78g、虎杖78g、甘草48g、菝葜78g、防风48g、桂枝78g、桑寄生48g，共10味药材，

制法：取方中马钱子、麻黄粉碎成细粉，其余秦艽等八味加水煎煮3次，过滤，滤液浓缩，干燥，与马钱子和麻黄细粉混匀，加入10％明胶糖浆制粒，干燥，加10g羧甲基淀粉钠、1g硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

制剂检测结果：士的宁含量为0.21mg/片，马钱子碱含量为0.18mg/片，盐酸麻黄碱和伪麻黄碱总含量为0.67mg/片，低于本发明要求的质量控制标准限度。

不同质量疏风活络片对佐剂性多发性关节炎的抑制作用

试验方法：同实施例1。

试验结果：见表7。

表7不同质量疏风活络片的药效比较(n＝10)

注：评分值越高标明炎症肿胀越严重，评分越低说明药物疗效好。

试验结果说明，当对马钱子和麻黄代表性成分低于本发明要求的质量控制限度下限的样品D，其药效明显低于其他符合要求的样品。

不同质量疏风活络片的毒性比较

试验方法：采用灌胃急性毒性试验，具体方法同实施例2。

试验结果：见表8。

表8不同质量疏风活络片急性毒性试验结果

注：LD50值越高说明该药物越安全。

试验结果说明，当对马钱子和麻黄代表性成分高于本发明要求的质量控制限度上限的样品C，其毒性明显高于其它符合要求的样品。

Claims (1)

1.一种疏风活络片的检测方法，其特征在于：

士的宁的含量为0.30mg/片-1.5mg/片，马钱子碱含量大于0.30mg/片；

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱总量为0.9mg/片-4.0mg/片；

其中每片相当于0.3g药材，相当于原生药0.76g；并且

所述士的宁和马钱子碱的含量采用液相色谱检测，测定条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛∶混合溶液＝17∶83为流动相；检测波长为260nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于3000；所述混合溶液为0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液；其中该溶液的pH为2.8；

所述盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量采用液相色谱检测，检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.2％磷酸溶液＝2∶98为流动相；检测波长为207nm；理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。