CN102225877B - 海藻酸复合微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于农业生产的海藻酸制剂及其制造方法；本发明的海藻酸复合微生物菌剂，能起到促进作物生长，改良土壤和修复植物受损细胞，起到防治农作物病害的作用；由每公斤海藻酸配(0.3～5)*102单位活菌数的菌体制成；所述的菌体包括荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌，两种菌体的活菌数比为1∶0.5～2；这样海藻酸与两种菌体的复合制剂在农业生产上有着广泛的用途，对保护环境，减少化学农药的使用量，促进农业生产可持续发展有着重要的技术价值和社会价值；尤其是其意料不到的技术效果就是：能够修复植物受损细胞，也就是：能够在农作物发生病害后快速地控制作物病害并且修复植物受损细胞，使得农作物遇到病害的情况下也不会减产。
Description
技术领域
本发明涉及应用于农业生产的海藻酸制剂及其制造方法。
背景技术
海藻酸是一种海洋藻类中提取的物质，用于农业用生产过程中可有效起到促进作物生长，改善作物品质；同时可达到改良土壤作用。目前国内都是单一利用海藻酸生产农业用叶面肥、有机肥等或将海藻酸加入氮、磷、钾及一些微量元素制成农业用肥，起到促进作物生长的作用。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种海藻酸复合微生物菌剂，其能起到促进作物生长，改良土壤和修复植物受损细胞，起到防治农作物病害的作用。
为了实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种海藻酸复合微生物菌剂，由每公斤海藻酸配(0.3～5)*102单位活菌数的菌体制成；所述的菌体包括荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌，两种菌体的活菌数比为1∶0.5～2。
在农作物生产上，许多植物的不良症状是因缺素而引起的，海藻酸富含大量氨基酸、细胞分装素及微量元素，能有效补充植株因缺素而引起的不良症状，内含的细胞分裂素等可促进扎根、促进生长、促进开花、促进结果；并且海藻酸也能从一定程度上改良土壤。荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌具有生物抗菌作用，能防治作物病害。
并且，复配制剂具有意料不到的技术效果就是：能够修复植物受损细胞。换句话说就是：利用本发明的复配制剂，能够在农作物发生病害后快速地控制作物病害并且修复植物受损细胞，使得农作物遇到病害的情况下也不会减产。海藻酸与两种菌的复合制剂在农业生产上有着广泛的用途，对保护环境，减少化学农药的使用量，促进农业生产可持续发 展有着重要的技术价值和社会价值。
本发明的另一个目的是提供一种海藻酸复合微生物菌剂的制备方法。
技术方案为：包括取荧光假单胞菌与枯草芽孢杆菌，菌株在琼脂培养基平板上培养，再经发酵后分离出菌体，菌体与脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精混合后乳化，冻干磨粉后与海藻酸混合均匀。
上述技术方案中的制备方法工艺简单，都是常规操作工艺，使用的原材料也常见易得，因此制备工艺简单，成本低廉，所制备的海藻酸复合微生物菌剂稳定性和均匀大大提高，性能优异；也便于运输和储存，更适宜产业化推广。
具体实施方式
一种海藻酸复合微生物菌剂，由每公斤海藻酸配(0.3～5)*102单位活菌数的菌体制成；所述的菌体包括荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌，其中两种菌的活菌数比为1∶0.5～2。
最好是每公斤海藻酸配(0.8～1.5)*102单位活菌数的菌体，所述的荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数比为1∶0.9～1.2。
进一步的，所述的每公斤海藻酸配1*102单位活菌数的菌体，所述的荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数比为1∶1。
上述海藻酸复合微生物菌剂的制备方法是将海藻酸与两种菌体按比例混合即可，即配即用就能起到很好的作用和效果。
更好的是：包括取荧光假单胞菌与枯草芽孢杆菌，菌株在琼脂培养基平板上培养，再经发酵后分离出菌体，菌体与脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精混合后乳化、冻干磨粉后与海藻酸混合均匀。
利用琼脂培养基平板培养和发酵等工艺处理主要是为了将菌体与海藻酸更好地分散、融合，提高两者混合后复配物的稳定性和均匀性，便于运输和储存，便于在农业生产中推广和实用。
更好的：荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌在琼脂培养基平板上，在室 温下生长，用悬浮培养基收集菌体，再加营养发酵液配置成菌悬液后移入琼脂平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养；
将蛋白营养液装入摇瓶中，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养；
按8～15％的接种量从摇瓶中接种菌体到种子罐，发酵后收集菌体；
菌体与分散载体混合乳化，然后冻干、粉碎成粉末，与海藻酸混合均匀。分散载体例如：脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精等，主要是起到分散菌体的作用，因其并不是有效成份，所以其量并没有什么要求，根据经验和成本控制情况选择。
本发明还摸索发明了一种优选的琼脂平板培养基配方，具体就是：大豆分离蛋白8.0g、氯化钠0.6g、琼脂粉1.5g、脱脂乳粉6.0g、葡萄糖3.0g，加入3％的溴甲酚氯乙醇溶液0.5ml、PH值7.5、110℃灭菌30分钟获得。
实施例一
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1∶0.5的比例取两种菌体，菌株在琼脂培养基平板上，在设定的25℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每个安瓿瓶中加入0.5ml菌液，用酒精灯烧灼口塞棉花塞，真空干燥，火灼封口，在-50℃冰箱中保存。
每安瓿瓶打开后，加入0.2ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂平板培养基中，用无菌三角刮棒涂抹均匀，在培养箱中培养。
称取20g豆粕粉，加水200ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，110℃灭菌30分钟，冷却至30℃，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养。
按照8％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持25℃生产温度，培养使之发酵48小时。
发酵后用压力压送发酵液从发酵罐转到转筒式离心机收集菌体。
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化。
乳化后放入冻干机，在-40℃下速冻，后干燥。
干燥后取出，置于粉碎机打成粉末。
利用系列稀释法涂布平板，计算活菌数。
按每公斤海藻酸配0.3*102活菌数菌粉混合均匀制得品。
保存六个月后活菌数、菌体分布均匀性无变化。
实施例二
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1∶0.9的比例取两种菌体，菌株在琼脂培养基平板上，在设定的32℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每0.5ml加入0.25ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养。
称取20g豆粕粉，加水300ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，110℃灭菌25分钟，冷却至室温，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养。
按照10％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持30℃生产温度，培养使之发酵48小时。
发酵后用离心过滤收集菌体。
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化，冻干、粉碎成粉末，计算活菌数后，按每公斤海藻酸配0.8*102活菌数菌粉混合均匀得的成品。
保存六个月后活菌数、菌体分布均匀程度无变化。
实施例三
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1∶1的比例取两种菌体，菌株在琼脂培养基平板上，在设定的30℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每0.5ml加入0.3ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养。
称取20g豆粕粉，加水150ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，105℃灭菌30分钟，冷却至32℃，从平板中接种单菌落， 在摇床中震荡培养。
按照10％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持28℃生产温度，培养使之发酵45小时。
发酵后用离心收集菌体。
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化，冻干、粉碎成粉末，计算活菌数后，按每公斤海藻酸配1*102活菌数菌粉混合均匀得的成品。
保存六个月后活菌数、菌体分布均匀程度无变化。
实施例四
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1∶1.2的比例取两种菌体，菌株在琼脂培养基平板上，在设定的30℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每0.5ml加入0.25ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养。
称取20g豆粕粉，加水300ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，110℃灭菌25分钟，冷却至室温，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养。
按照12％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持30℃生产温度，培养使之发酵48小时。
发酵后用离心过滤收集菌体。
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化，冻干、粉碎成粉末，计算活菌数后，按每公斤海藻酸配1.5*102活菌数菌粉混合均匀得的成品。
保存六个月后活菌数、菌体分布均匀程度无变化。
实施例五
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1∶2的比例取两种菌体，菌株在琼脂培养基平板上，在设定的28℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每0.5ml加入0.35ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂 平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养。
称取20g豆粕粉，加水250ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，115℃灭菌20分钟，冷却至室温，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养。
按照15％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持28℃生产温度，培养使之发酵50小时。
发酵后用离心过滤收集菌体。
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化，冻干、粉碎成粉末，计算活菌数后，按每公斤海藻酸配5*102活菌数菌粉混合均匀得的成品。
保存六个月后活菌数、菌体分布均匀程度无变化。
产品的大田试验效果
2008年江苏兴化河道内一装载重金属油的船发生事故，致使河道污染，当地农民误将河道中的水打入水稻地浇灌，致使大面积水稻发黄、中毒，分别使用本发明的实施例一到五所述的制剂后使中毒发黄的水稻恢复生长，后期又二次使用该制剂喷施，效果明显；最终该地受害水稻测产，产量分别下降19％、13％、2％、7％、16％，对照地、也就是未采取措施处理的地块减产30％，单纯使用海藻酸的减产27％，单纯使用荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌复配剂的减产30％，该地新闻及农技推广部门都做了大量报道。这就充分证明了本发明的制剂对作物受损细胞的修复能力。
以下三组实验则是仅采用实施例三的制剂的情况。
2008年，江苏省淮阴市，由于连续载作甜椒，各种土传病害引起的根腐病及茎基腐病发病严重，一般田块为20-30％，严重田块达到40％以上，2008年的秋季，对苏椒5号的根腐病及茎基腐病进行了大棚试验，对照地发病达70％以上，单纯使用海藻酸的发病率为67％，单纯使用荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌复配剂的发病率68％，而用本发明制剂处理 的2500株甜椒的发病率仅为10％左右，防治效果极为明显。
2008年广西著名的芋头之乡荔浦，几户农民在芋头种植过程中发生芋头根茎腐烂，且地上部分叶片发黄萎蔫，极有可能造成减产甚至绝收，用该制剂溶于水后浇灌根部，一周后再浇灌一次，症状得到控制并没有蔓延情况发生，芋头没有造成减产，而最初没有发病的田块用了本制剂浇灌后产量增加10％-15％左右，增产效果明显。发病田块单纯使用海藻酸的减产13％，单纯使用荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌复配剂的减产12％。
2009年江苏阜宁水稻大面积发生“黑条矮缩病”用本品进行对照试验，喷施本品田块该病发病率仅为5％左右，对照田块和单纯使用海藻酸、单纯使用荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌复配剂的发病率都在20％以上。
Claims (1)
1.一种海藻酸复合微生物菌剂，其特征在于：
按荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的活菌数1：1的比例取两种菌体；
菌体在琼脂培养基平板上，在设定的30℃环境下生长，用悬浮培养基收集菌体，按每0.5ml加入0.3ml营养发酵液配置菌悬液，再移入琼脂平板培养基中，涂抹均匀后，在培养箱中培养；
称取20g豆粕粉，加水150ml装入500ml摇瓶中，使之彻底溶解，PH值自然，105℃灭菌30分钟，冷却至32℃，从平板中接种单菌落，在摇床中震荡培养；
按照10％接种量，从摇瓶接种到20L种子罐，保持28℃生产温度，培养使之发酵45小时；
发酵后离心收集菌体；
利用脱脂奶粉、磷酸二氢钾、蔗糖、味精与菌体混合后乳化，冻干、粉碎成粉末，计算活菌数后，按每公斤海藻酸配1*102活菌数菌粉混合均匀得的成品；
所述琼脂平板培养基由：大豆分离蛋白8.0g、氯化钠0.6g、琼脂粉1.5g、脱脂乳粉6.0g、葡萄糖3.0g，加入3％的溴甲酚氯乙醇溶液0.5ml、PH值7.5、110℃灭菌30分钟获得。
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