CN102225154A - 一种治疗肺纤维化的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗肺纤维化的药物组合物，它包括以下重量配比的原料药：人参5-15份、丹参5-15份、当归1-11份、黄精5-15份、紫苏5-15份、白芥子1-11份、枳实1-11份、矮地茶5-15份。还提供了前述组合物的制备方法及其在制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途。本发明提供的化纤I号药物组合物有抑制人胚肺二倍体纤维母细胞2BS细胞株增殖的功效，可用于制备治疗肺纤维化疾病的药物，且临床疗效显著，副作用小，安全性好，为临床治疗肺纤维化疾病提供了一种新的选择。

Description

一种治疗肺纤维化的药物组合物

技术领域

本发明涉及药物领域，特别涉及一种治疗肺纤维化的药物组合物。

背景技术

长期研究组织器官纤维化的著名权威学者胡卓伟指出：“国际医学界最新研究表明，人体内所有器官组织都有纤维化的可能，许多慢性疾病直接导致脏器组织的纤维化，纤维化才是慢性病久治不愈的根本原因，其累及人体几乎所有器官和系统，是许多疾病致残、致死的主要原因，严重威胁着人类的健康和生命，只有根除引起慢性疾病的根源——纤维化，才能彻底瓦解慢性顽疾对人类的危害。”

肺纤维化(pulmonary fibrosis，PF)是器官纤维化中最具代表性、最典型也是最常发的一种纤维化疾病，其病因极为复杂，除了“非典”可引起此病以外，其他很多肺系疾病都可以导致肺纤维化，有学者认为至少有150种以上的病因与之相关。在治疗上，目前对肺纤维化的治疗仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等“笨方法”，其共同特点是缺少特异性治疗，而且大量使用抗生素和激素是导致组织器官纤维化的重要原因，最新的研究结果正在逐步揭示长期使用激素和抗生素治疗肺纤维化比原发性疾病本身引起的纤维化改变要严重得多，化学制剂的毒副作用大的问题未得到解决。随着本病发病率、死亡率的不断上升，近年来防治肺纤维化的研究已成为世界肺科学界关注的热点，故寻求包括中医药在内的其他疗法介入此病的治疗也已成为了医药学界特别是中医药研究人员的当务之急。

目前，已有中医中药防治肺纤维化的文献报道，中医历史文献历代也有许多治疗“肺痿”、“肺胀”的治验。先已报道的治疗肺纤维化的组方，各有特色，且均显示了一定疗效。周亚滨等应用肺纤康(人参、麦冬、桃仁、赤芍、牛膝、桔梗、当归、生地黄、半夏、甘草、枳壳、红花等)治平阳霉素所致的肺间质纤维化小鼠，并检测小鼠的免疫功能。结果显示，肺纤康可明显抑制模型动物B细胞功能亢进(中药治疗组空斑形成细胞和溶血素的含量较未治疗组明显降低)；对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能也有抑制作用，表明肺纤康对纤维化的发病及发展有明显的预防和治疗效果。马君等应用补气通肺汤(党参、黄芪、沙参、麦冬、丹参、当归、川芎、黄芩、桑白皮、赤芍、苏梗、白果、炙麻黄、甘草等)治疗博来霉素A5复制的大鼠肺间质纤维化模型。实验表明，在疾病早期，补气通肺汤能够降低肺组织和血清中丙二酮的含量，作用优于激素；在病变后期补气通肺汤能明显提高谷胱甘肽过氧化物酶活性和机体对脂质过氧化的应激能力，能极大促进机体抗氧化能力，从而减轻脂质过氧化自由基对生物膜的损伤，保护肺组织，减轻炎症反应，从而在肺损伤及纤维化过程中发挥防治作用。

发明内容

本发明提供了一种治疗肺纤维化的新中药配方，该配方治疗肺纤维化疗效较好，副作用小，安全性好。

本发明提供了一种治疗肺纤维化的药物组合物，它包括以下重量配比的原料药：人参5-15份、丹参5-15份、当归1-11份、黄精5-15份、紫苏子5-15份、白芥子1-11份、枳实1-11份、矮地茶5-15份。

优选地，所述的药物的重量配比为：人参7-13份、丹参7-13份、当归3-9份、黄精7-13份、紫苏子7-13份、白芥子3-9份、枳实3-9份、矮地茶7-13份。

进一步的，所述的药物的重量配比为：人参9-11份、丹参9-11份、当归5-7份、黄精9-11份、紫苏子9-11份、白芥子5-7份、枳实5-7份、矮地茶9-11份。

进一步的，所述的药物的重量配比为：人参10份、丹参10份、当归6份、黄精10份、紫苏子10份、白芥子6份、枳实6份、矮地茶10份。

优选地，所述药物的剂型为颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

本发明还提供了一种制备上述药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、称取原料药；

b、原料药直接打粉，或将原料药加水煎煮或有机溶剂提取，提取液浓缩，再加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

本发明最后提供了上述药物组合物在制备治疗肺纤维化疾病药物中的用途。

本发明所用的各种原料药材均为符合国家或地方标准规定的中药材。

本发明提供的化纤I号药物组合物有抑制人胚肺二倍体纤维母细胞2BS细胞株的增殖的功效，可用于制备治疗肺纤维化疾病的药物，且临床疗效显著，副作用小，安全性好，为临床治疗肺纤维化疾病提供了一种新的选择。

具体实施方式

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1本发明药物组合物的制备

取人参15克、丹参15克、当归11克、黄精15克、紫苏子15克、白芥子11克、枳实11克、矮地茶15克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例2本发明药物组合物的制备

取人参15克、丹参15克、当归11克、黄精15克、紫苏子15克、白芥子11克、枳实11克、矮地茶15克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例3本发明药物组合物的制备

取人参7克、丹参7克、当归3克、黄精7克、紫苏子7克、白芥子3克、枳实3克、矮地茶7克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例4本发明药物组合物的制备

取人参13克、丹参13克、当归9克、黄精13克、紫苏子13克、白芥子9克、枳实9克、矮地茶13克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例5本发明药物组合物的制备

取人参9克、丹参9克、当归5克、黄精9克、紫苏子9克、白芥子5克、枳实5克、矮地茶9克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例6本发明药物组合物的制备

取人参11克、丹参11克、当归7克、黄精11克、紫苏子11克、白芥子7克、枳实7克、矮地茶11克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

实施例7本发明药物组合物的制备

取人参10克、丹参10克、当归6克、黄精10克、紫苏子10克、白芥子6克、枳实6克、矮地茶10克经常规提取和纯化方法处理后，再制成所需剂型的药物，如：颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

以下通过具体药效学实验证明本发明的有益效果：

1、实验与方法

1.1材料

1.1.1细胞株

人胚肺二倍体纤维母细胞2BS细胞株，由四川大学华西医学中心提供，常规培养传代。

1.1.2动物

SD大鼠24只，雌雄各半，体重250～300g，成都中医药大学实验动物中心提供，常规饲养。制备实验血清用。

1.1.3药物

(1)化纤I号：配方如实施例7，用蒸馏水配成溶液，其中高剂量浓度相当于原生药0.6g/ml，中剂量浓度相当于原生药0.3g/ml，低剂量浓度相当于原生药0.15g/ml。

(2)强的松片：成都药业有限责任公司。用蒸馏水配成实验用药浓度，置4℃冰箱备用。

1.1.4主要试剂与仪器

RPMI-1640培养基干粉：Hyclone公司；胰蛋白酶：Gibcobrl公司；小牛血清(Fetal calf serum，FCS)：Hyclone公司；二氧化碳培养箱：日本三洋公司；六孔培养板：NUNC公司；超净工作台：苏州净化设备厂；碘化丙啶：Sigma公司。

1.2实验方法

1.2.1实验血清的制备

本实验需制备五组实验血清：不含药物血清(无药血清组)、阳性对照药物含药血清(阳性血清组)和化纤I号高、中、低剂量含药血清(高剂血清组、中剂血清组和低剂血清组)。

制备每种血清均选用正常成年大鼠6只，雌雄各半。无药血清组大鼠每日灌胃生理盐水5ml/只，化纤I号高、中、低剂血清组和阳性血清组大鼠每日灌胃已配好不同浓度的化纤I号和强的松片溶液5ml/只，以上各组均灌胃1次/天，连续3天。于最后1次灌胃后1h(灌胃前12h禁食不禁水)股动脉采血，离心，合并同组动物血清，用微孔滤膜过滤除菌，于56℃、30min水浴灭活，并用完全培养液配成10％的实验血清培养液，4℃保存，两周内使用。

1.2.2细胞培养条件

2BS细胞接种于含10％小牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640完全培养液中，在37℃、含5％CO2培养箱内培养，并用0.25％胰蛋白酶消化传代。

1.2.3实验血清添加方法

将传代的2BS细胞接种于6孔培养板，每孔5×10⁵个细胞，共分6组，每组均设6个平行孔；培养24h至细胞生长旺盛后，去培养液，随机分为空白对照组、无药血清组、阳性血清组、高剂血清组、中剂血清组和低剂血清组，分别添加入正常培养液、无药血清培养液、阳性对照药物含药血清培养液及化纤I号高、中、低剂量含药血清培养液，继续培养48h后结束。

1.2.4指标检测

1.2.4.1MTT法检测细胞增殖

(1)取对数生长期细胞，用RPMI-1640完全培养液调整至1×10⁵/ml，接种于96孔培养板(100μl/孔)；

(2)培养24h后，去培养液，分别加入正常培养液、无药血清培养液、阳性对照药物含药血清培养液及化纤I号高、中、低剂量含药血清培养液，每种条件下重复8孔；

(3)作用48h后，每孔加MTT 20μl(5mg/ml)，放培养箱育4h；

(4)吸去上清，加入15％十二烷基磺酸钠(SDS)150μl/孔，放培养箱育12h；

(5)用酶标仪测定每孔光密度值(OD值)，实验波长570nm、参考波长630nm，按以下公式计算细胞增殖抑制率。

细胞增殖抑制率(％)＝(1-实验组OD均值/对照组OD均值)×100％

1.2.4.2流式细胞仪对细胞凋亡率测定及细胞周期分析

(1)离心收集细胞10⁶个，用PBS洗1次后，75％乙醇固定并制成单细胞悬液，-20℃保存备用；

(2)上机前，细胞用PBS洗3次，50μg/ml碘化丙啶一步法4℃条件下避光染色30min；

(3)上流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定及细胞周期分析

1.3统计方法

将各组数据进行方差分析后，采用t检验，细胞周期分析和凋亡率的比较采用X2检验。

2、实验结果

2.1对2BS细胞增殖的影响，见表1：

表1不同实验血清对2BS细胞增殖的影响

组别	标本	MTT(OD值)	增殖抑制率
				空白对照组	8	0.193±0.012	-
无药血清组	8	0.192±0.011	-
				阳性血清组	8	0.112±0.006※※※△△△	42％
低剂血清组	8	0.125±0.006※※※△△△	35％
				中剂血清组	8	0.118±0.006※※※△△△	39％
高剂血清组	8	0.110±0.007※※※△△△	43％

注：与空白对照组相比：※※※示P＜0.001，与无药血清组相比：△△△示P＜0.001。

由表1可知，空白对照组与无药血清组OD值非常接近(P＞0.05)，而阳性血清组和化纤I号高、中、低剂量含药血清组的OD值均明显低于以上两组，有显著性差异(P＜0.001)。实验说明发现化纤I号高、中、低剂量组含药血清对2BS细胞的增殖都有明显的抑制作用。

2.2细胞凋亡率测定及周期分析，见表2：

表2不同实验血清对2BS细胞凋亡和细胞周期的影响

注：与空白对照组相比：※示P＜0.05、※※※示P＜0.001，与无药血清组相比：△示P＜0.05、△△△示P＜0.001。

由表2可知，阳性血清组和化纤I号低、中、高剂量含药血清组的2BS细胞凋亡率分别是40.5％、33.7％、37.2％和41.1％，与空白对照组及无药血清组相比有非常显著的差异(P＜0.001)。

空白对照组与无药血清组各期细胞所占百分比非常接近(P＞0.05)，化纤I号高、中、低剂量含药血清组的S期细胞百分比都较前述两组为高，而G2/M期细胞数则明显降低。其中，中、高剂血清组S期和G2/M期细胞百分比与空白对照组及无药血清组相比均有显著性差异(P＜0.05)。实验说明化纤I号高、中、低剂量含药血清组可引起细胞周期的S期阻滞，从而减少细胞分裂，还可诱导2BS细胞凋亡。

实验说明本发明提供的化纤I号药物组合物有抑制人胚肺二倍体纤维母细胞2BS细胞株的增殖的功效，药物对人胚肺二倍体纤维母细胞的影响能反映药物对人肺纤维化疾病的影响，因此，本发明提供的化纤I号药物组合物可用于制备治疗肺纤维化疾病的药物。

本发明药物临床试验

1、病例：36例确诊为肺纤维化的病人，其中诊断标准参照中华医学会呼吸病学会制定的特发性肺纤维化诊断标准确诊。

2、治疗方法：分别施用实施例1制备的本发明药物，治疗时间为两个月到一年，通常三至四个月。

3、诊断结果：

6例比较显著，23例有效，7例基本无效，总有效率大约达到78％左右。

实验证明本发明药物组合物疗效显著，可用于临床治疗肺纤维化疾病。

综上，实验证明本发明提供的化纤I号药物组合物有抑制人胚肺二倍体纤维母细胞2BS细胞株的增殖的功效，可用于制备治疗肺纤维化疾病的药物，且临床疗效显著，副作用小，安全性好，为临床治疗肺纤维化疾病提供了一种新的选择。

Claims (7)

1.一种治疗肺纤维化的药物组合物，其特征在于：它包括以下重量配比的原料药：人参5-15份、丹参5-15份、当归1-11份、黄精5-15份、紫苏子5-15份、白芥子1-11份、枳实1-11份、矮地茶5-15份。

2.根据权利要求1所述的治疗肺纤维化的药物组合物，其特征在于：所述的药物的重量配比为：人参7-13份、丹参7-13份、当归3-9份、黄精7-13份、紫苏子7-13份、白芥子3-9份、枳实3-9份、矮地茶7-13份。

3.根据权利要求2所述的治疗肺纤维化的药物组合物，其特征在于：所述的药物的重量配比为：人参9-11份、丹参9-11份、当归5-7份、黄精9-11份、紫苏子9-11份、白芥子5-7份、枳实5-7、矮地茶9-11份。

4.根据权利要求3所述的治疗肺纤维化的药物组合物，其特征在于：所述的药物的重量配比为：人参10份、丹参10份、当归6份、精10份、紫苏子10份、白芥子6份、枳实6份、矮地茶10份。

5.根据权利要求1所述的治疗肺纤维化的药物组合物，其特征在于：所述药物的剂型为颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。

6.一种制备权利要求1-5任意一项所述的药物组合物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a、称取原料药；

b、原料药直接打粉，或将原料药加水煎煮或有机溶剂提取，提取液浓缩，再加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

7.权利要求1-5任意一项所述的药物组合物在制备治疗肺纤维化疾病的药物中的用途。