CN102217588B - 一种组织标本保存液及聚六亚甲基胍水溶性衍生物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了聚六亚甲基胍水溶性衍生物在制备组织标本保存液中的应用。本发明还公开了一种组织标本保存液，其为含有聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液。本发明的组织标本保存液可用于新鲜组织和蛋白变性固定之后的组织标本的保存。组织标本长期保存软硬度和韧性保持良好，形状和颜色保持原状，不长霉、不腐臭，保存液长期使用不需更换，溶液清澈，沉淀少。是一种效果理想的无毒无刺激健康环保标本保存液，是福尔马林用于组织标本长期保存的优良替代品。

Description

一种组织标本保存液及聚六亚甲基胍水溶性衍生物的应用

技术领域

本发明涉及聚六亚甲基胍水溶性衍生物在医药领域中的新应用，以及一种组织标本保存液。

背景技术

甲醛具有优异的组织蛋白变性固定作用和防腐防霉作用，因此在组织标本制作和保存中有着广泛应用。制作用于解剖教学和科研的组织标本时，通常先用35％～40％的甲醛水溶液(福尔马林)经大血管灌注到组织中对蛋白质变性固定，固定好的组织标本再用5％的甲醛水溶液浸泡保存。

但是，甲醛是世界卫生组织确认的致畸、致癌物质，是一种破坏生物细胞蛋白质的原生质毒物，对眼睛、皮肤、呼吸道及内脏都有损害，甚至引起中枢神经麻痹、肺水肿、肝昏迷、肾衰竭等。并且，甲醛易挥发，使用甲醛溶液保存组织标本的实验室甚至整个楼层的空气中，甲醛含量远远超过国家安全标，严重威胁着广大解剖教师和学生们的健康。由于甲醛的上述缺点，数百年来，人们一直在探索和寻找不含甲醛和有毒有害成分，又能使组织标本长期保存不腐臭、不霉变，并能保持合适硬度和韧性的组织标本保存液。

由于组织标本的保存有诸多特殊要求，因此一种理想的组织标本保存液应具备以下特点：1、因组织标本的原材料珍贵，需要反复使用和长期保存，理想的标本保存液必须具备很好的防腐、防霉变的功能。2、组织标本需要保持组织中一定的水分含量才能保持合适的硬度和韧性以达到易于翻动又不易折断损坏，所以，理想的标本保存液不能有强烈的脱水作用。3、标本保存液需要常年非密闭状态使用，要求理想的保存液的活性成分不能有挥发性。4、理想的标本保存液应该无毒、无刺激性、无腐蚀性、可生物降解和无环境污染。5、理想的标本保存液的原料应该价格低廉易于获得。

但现有的减少甲醛的污染，或者不采用甲醛的保存方法都不能很好的满足上述诸多要求，例如：1、向甲醛溶液中加入适量氨水：甲醛和氨水经浓缩可生成环六亚甲基四胺和水，使用过程中环六亚甲基四胺在酸性条件下再分解出甲醛而保持防腐作用。这种方法虽然减小了甲醛的刺鼻气味，但甲醛的挥发和毒害仍然存在。2、采用70％酒精代替5％福尔马林：酒精易挥发，有效浓度维持时间短，需要反复补充，并且有气味，浸泡的标本也因脱水变硬和韧性减小，会改变标本原有的质感，使用时也易损坏。3、采用高浓度甘油代替福尔马林：高浓度甘油可以用于小块组织标本的临时保存，但甘油成本高、又因粘附在标本表面而结构暴露不清楚，不适合大标本保存。4、在标本的表面进行塑封：塑封的标本只适用于陈列，示教性的翻动极易损坏封膜，只使用于展示，不能用于实验室教学。5、冻干、风干标本及半干标本：因变硬不能翻动，影响观察组织结构，此法只适用于离体的小件器官。鉴于此，亟待寻求一种理想的组织保存液。

聚六亚甲基胍(重复单元如式1所示)是一种阳离子聚合物，不溶或难溶于水。常用的水溶性衍生物有盐酸聚六亚甲基胍、磷酸聚六亚甲基胍和丙酸聚六亚甲基胍等。

聚六亚甲基胍及其衍生物能强力杀灭各类细菌、病毒和真菌，杀菌谱广，作用持久。有报道的其可杀灭的微生物包括：白喉杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌、艾滋病毒、流感病毒、枯草杆菌黑色变种芽孢等。盐酸聚六亚甲基胍浓度为7.5mg/L时对腐生菌、硫酸盐还原菌、铁细菌的杀灭效率达到99.67％以上。

并且，聚六亚甲基胍为大分子聚合物，不能透过生物膜系统，口服不被吸收，属于口服无毒级，对人体皮肤粘膜没有刺激性。盐酸聚六亚甲基胍的毒理实验数据如下：1、2％盐酸聚六亚甲基胍小鼠灌胃LD₅₀为25000mg/kg，属实际无毒级；2、0.5％盐酸聚六亚甲基胍眼刺激试验积分为3.0分，属无刺激性；3、0.5％盐酸聚六亚甲基胍急性皮肤刺激试验积分为0分，属无刺激性；4、0.25％盐酸聚六亚甲基胍小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验为阴性，无致突变性；5、0.25％盐酸聚六亚甲基胍精子畸形试验结果为阴性；6、0.25％盐酸聚六亚甲基胍蓄积毒性试验为弱蓄积毒性；蓄积系数K＞5。

此外，聚六亚甲基胍性质稳定，没有挥发性，0.5％盐酸聚六亚甲基胍放置于37℃，相对湿度为75％～80％的环境中90天，其下降率为4.91％。25％盐酸聚六亚甲基胍溶液pH 7.5～8.0，粘度：25mPas，无色溶液，无特殊气味，可与水任意比例混合，无燃烧和爆炸性质，可生物降解，对金属、橡胶、木制品、塑料无腐蚀性。

尽管聚六亚甲基胍及其衍生物具有上述特点，应用广泛，但尚未发现将其用于组织标本保存的文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服甲醛用于组织标本保存空气污染大的缺陷，以及其他现有组织标本不能完全满足需要的缺陷，而提供一种不含有毒有害成分且保存效果好的理想组织标本保存液，以及聚六亚甲基胍水溶性衍生物的新应用。

本发明人根据上述理想组织标本保存液的诸多要求，经过对多种试剂的反复筛选和比较，终于发现以聚六亚甲基胍水溶性衍生物为有效成分配制组织保存液可以完全满足上述要求。因此，本发明通过下述技术方案以解决上述技术问题。

本发明涉及一种组织标本保存液，其为含有聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液。

本发明中，所述的聚六亚甲基胍水溶性衍生物为以六亚甲基胍的结构单元为活性结构的水溶性衍生物，如各种酸与聚六亚甲基胍形成的聚六亚甲基胍酸式盐，较佳的为盐酸聚六亚甲基胍、磷酸聚六亚甲基胍或丙酸聚六亚甲基胍等。其中，所述的聚六亚甲基胍为以式1的结构为重复单元的聚合物，分子量可为现有聚六亚甲基胍的分子量范围。

本发明的组织标本保存液中，所述的聚六亚甲基胍水溶性衍生物的浓度为所需达到的最小有效浓度以上，一般为0.1mg/L～250000mg/L。其中，标本的预处理方式不同以及标本在保存液中占的体积比不同，可相应的选择不同的聚六亚甲基胍水溶性衍生物的浓度。本发明经大量实验总结，对于组织标本经蛋白变性固定之后的标本浸泡保存，优选10mg/L～50000mg/L，对于未经蛋白变性处理的新鲜组织标本的浸泡保存，优选50000mg/L～250000mg/L。

本发明的组织标本保存液中，还可含有其他现有的杀菌成分，如新洁而灭、氯化十二烷基二甲基苄基铵、过氧乙酸、过氧化氢、乌洛托品、洗必泰、单胍类化合物和除聚六亚甲基胍水溶性衍生物外的其他多胍类化合物。

本发明进一步涉及聚六亚甲基胍水溶性衍生物在制备组织标本保存液中的应用。具体的应用条件，同前述。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种聚六亚甲基胍水溶性衍生物在制备组织标本保存液中的新应用。本发明的组织标本保存液可用于新鲜组织和蛋白变性固定之后的组织标本的浸泡保存。经过多个组织标本样品长期保存使用以及反复比较和论证，聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液是一种效果理想的无毒无刺激健康环保标本保存液，是福尔马林用于组织标本长期保存的优良替代品。聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液性质稳定，室温状态有效活性可保持5年以上，聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液作为组织标本保存液长期保存组织标本，标本的软硬度和韧性保持良好，标本保持原始形状和颜色，不长霉、不腐臭，保存液长期使用不需更换，溶液清澈，沉淀少。不但可以避免长期被动吸入甲醛的危害，还可避免甲醛保存液易挥发、聚合沉淀多需定期更新和补充的麻烦和费用。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

下述实施例中，配制溶液的水为去离子水。

实施例1

配制0.1mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的鸭心脏标本浸泡保存在小号带盖标本瓶中，室温放置12个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例2

配制10mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的鸭心脏标本浸泡保存在小号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例3

配制100mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的人体心脏和脑组织标本浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例4

配制50000mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的人体肝脏和肺组织标本浸泡保存在大号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例5

配制50000mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜猪肉直接浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置6个月，没有霉菌斑，标本保持新鲜时的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例6

配制250000mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜猪肉、鸭肝脏、鸭心脏、鸭头颈部直接浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑，标本保持新鲜时的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例7

配制10mg/L磷酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的鸭心脏标本浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例8

配制50000mg/L磷酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的鸭心脏标本浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例9

配制50000mg/L磷酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜猪肉、鸭肝脏、鸭头颈部直接浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑，标本保持新鲜时的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例10

配制250000mg/L磷酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜猪肉、鸭肝脏、鸭头颈部直接浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑，标本保持新鲜时的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例11

配制150000mg/L丙酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜鸭肝脏、鸭头颈部直接浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑，标本保持新鲜时的颜色、形状、硬度和韧度。

实施例12

配制含10mg/L磷酸聚六亚甲基胍、0.5wt％洗必泰的乙醇和水(乙醇和水的体积比为1∶9)的混合溶液为组织标本保存液，取用甲醛固定好的猪心脏标本浸泡保存在中号带盖标本瓶中，室温放置24个月，没有霉菌斑和腐臭，保存液清澈，标本保持最初的颜色、形状、硬度和韧度。

对比例1

配制10000mg/L盐酸聚六亚甲基胍水溶液为组织标本保存液，取新鲜猪肉直接浸泡保存在小号带盖标本瓶中，室温放置一周，肌肉组织中残留血夜渗出，组织颜色变白，腐臭变质。

对比例2

取适量纯净水代替组织标本保存液，取用甲醛固定好的肝脏标本浸泡保存在中号带盖标本瓶中，加水至保存瓶的2/3处，室温放置8个月，液面有霉菌斑，溶液和标本颜色变成黄色。

Claims (2)

1.聚六亚甲基胍水溶性衍生物在制备组织标本保存液中的应用，其特征在于：所述的聚六亚甲基胍水溶性衍生物为盐酸聚六亚甲基胍、磷酸聚六亚甲基胍或丙酸聚六亚甲基胍；所述的组织标本保存液为聚六亚甲基胍水溶性衍生物的水溶液，所述的聚六亚甲基胍水溶性衍生物的浓度为10mg/L～50000mg/L；所述的组织标本为经蛋白变性固定之后的标本。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的组织标本保存液中，还添加新洁而灭、氯化十二烷基二甲基芐基铵、过氧乙酸、过氧化氢、乌洛托品、洗必泰、单胍类化合物和除聚六亚甲基胍水溶性衍生物外的其他多胍类化合物中的一种或多种。