CN104077948B - 基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法 - Google Patents

Abstract

一种基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法，其特征在于，包括以下步骤：操作环境及操作条件的准备；对艾滋病患者尸体标本进行定型，并经股动脉插管灌注福尔马林溶液防腐；将所述尸体标本灌注福尔马林溶液后,放置10～12小时，然后将尸体完全浸泡在5%重量比的福尔马林溶液中固定6个月；将所述尸体标本，采用甲紫弹线法在所述尸体表面进行定位和划线；将尸体标本置于?30℃环境下进行冷冻7～10天；在所述尸体标本上，使用细木工带锯机锯制横断、冠状和矢状断层标本；对所述断层标本进行病理取材；对标本进行处理和保存。利用本发明的方法制作出的艾滋病三维断层标本，实现了大体断层标本、CT影像与病理互相印证的完美结合。

Description

基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法

技术领域

本发明涉及科研与教学标本的制备方法，具体涉及基于艾滋病的科研与教学标本制备方法。

背景技术

艾滋病，即人类获得性免疫缺陷综合征(acquiredimmunodeficiencysyndrome，AIDS)在全球广泛流行，已成为严重威胁人类健康的重大问题。在人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus，HIV）感染初期，主要是病毒的复制及对淋巴细胞亚群T淋巴细胞，如CD4、CD8等具备免疫功能细胞的破坏而使细胞免疫功能下降。随着病程进展至AIDS期，免疫系统功能抑制或丧失，患者容易受到各种条件致病病原体侵袭而发生致命性机会感染或肿瘤。如单纯疱疹病毒性脑炎、巨细胞病毒感染(CMV)所致脑炎、结核(TB)、弓形虫脓肿、淋巴瘤、真菌肺炎、细菌肺炎、病毒肺炎、原虫(卡氏囊虫、弓形虫)性肺炎、卡氏肉瘤、胃肠霉菌性炎症、溃疡、相关性淋巴瘤等。这些并发症是威胁病人生命的直接因素，约85%的患者死于并发症。对HIV相关并发症的早期诊断及预防是提高患者治疗效果和生存质量的关键，影像学检查在并发症的早期诊断上具有不可替代的作用。

病理是影像学的基础，影像是病理的表现，免疫缺陷下的机会性感染或肿瘤与非免疫缺陷下的感染或肿瘤的疾病谱、影像学表现存在很大差异，艾滋病影像学表现具有以下特点：①在艾滋病患者的整个发病过程中，多为一个系统或器官发生并发症为主，很少侵犯多个系统。②随着免疫水平逐渐减低及存活时间延长，发生多种病原体感染机会增多，表现为多病原体，多元化影像表现。③艾滋病患者感染HIV病毒前所患疾病与感染后新增病变的复杂关系。④HIV病毒本身所致病变与发病后相关并发症之间的关系较难确定。⑤艾滋病并发症患者高效抗逆转录病毒治疗(HARRT)前与治疗后的影像学表现具有多样性。⑥艾滋病神经功能影像学的表现与下列因素相关：ＨＩＶ脑损害，机会性感染，肿瘤，吸毒，种族，ＨＩＶ感染途径、年龄、性别，退行性疾病和ＨＡＡＲＴ治疗后等。艾滋病影像学表现的复杂性给影像诊断带来巨大的挑战，因此有必要对HIV相关疾病进行临床影像与解剖病理对照研究，建立HIV相关疾病数据库、制作出集临床解剖、病理、影像为一体的临床科研与教学标本。

断层解剖学是利用断层切锯法研究人体形态结构的科学，它具有保持机体结构于原位状态，准确显示断面形态变化及位置毗邻关系；能通过追踪连续断层或借助计算机进行三维重建；与影像诊断学和介入放射学结合密切的特点。此外，将艾滋病尸体进行三维断层大体标本与影像诊断及病理诊断相结合，为教学、科研及影像诊断提供了形态学标本及数据支撑。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法，利用该方法制作出为临床影像诊断和教学科研所需的艾滋病三维断层标本，各个断层标本与影像资料和病理资料相互对应，并且大体标本光亮清洁，可长期保存，用于教学、科研和临床影像诊断可达到直观理解的效果。

为达到上述目的，本发明的基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法，包括以下步骤：

（1）操作环境及操作条件的准备；

（2）对艾滋病患者尸体标本进行定型，并经股动脉插管灌注福尔马林溶液防腐；

（3）将所述尸体标本灌注福尔马林溶液后,放置10～12小时，然后将尸体完全浸泡在5%重量比的福尔马林溶液中固定6个月；

（4）将所述尸体标本，采用甲紫弹线法在所述尸体表面进行定位和划线；

（5）将尸体标本连同薄木板置于-30℃环境下进行冷冻7～10天；

（6）在所述尸体标本上，使用细木工带锯机锯制横断、冠状和矢状断层标本；

（7）对所述断层标本进行病理取材；

（8）对标本进行处理和保存。

其中，所述步骤（1）操作环境及操作条件的准备包括：操作室、专用操作台；所述操作室内具备淋浴和卫生设施、空调或冷暖气设备、专用隔离服装及器械、器皿、清洁消毒液和固定液，以及专用污水处理系统。

其中，步骤（2）所述经股动脉插管灌注福尔马林溶液的重量比为15%、灌注量为10000～20000ml。

其中，所述步骤（4）进一步包括以下步骤：

a）以体表解剖标志确定基准线，并用CT扫描验证，保证断层标本标志线与CT扫描体表定位线的一致，其中，横断切面标本以胸骨角平面为基准线，冠状切面标本以两侧腋中线为基准线，矢状切面标本以前后正中线为基准线；

b）采用手术刀分别划出横断锯切线、冠状锯切线和矢状锯切线，其中，头部的横断锯切线以眶下缘至外耳门中心的连线为基准线，颈部的横断锯切线则以舌骨体平面为基准线；头部的冠状锯切线以两外耳门上缘间连线的垂直线为基准线，头部的矢状锯切线以头颈正中矢状线为基准线；四肢的横断锯切线从近端水平线切至远端，关节的冠状锯切线和矢状锯切线分别以其冠状轴和矢状轴为基准线。

其中，所述步骤（6）进一步包括以下步骤：

a）对细木工带锯机进行调试，保证锯耗小于2mm，并根据切锯部位不同调整锯条张力；

b）调整并固定挡板，使其与锯条的间距等于要锯制的标本厚度加上锯耗的一半；

c）将冷冻的尸体标本按划线进行切割，制成横断、冠状和矢状断层标本，所述断层标本的厚度与CT扫描厚度一致，为0.8mm。

d）逐一测量每片标本的长和宽并作记录，将所述断层标本置于塑料袋内，按顺序放入冰柜中暂存。

其中，所述步骤（7）进一步包括以下步骤：从冰柜中取出标本置于室温下，分别在每片标本的病变部位多点取病理组织→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→透明→封固。

其中，所述步骤（8）进一步包括以下步骤：

a）对取完病理的断层标本进行清洗，并对其中的器官的游离结构进行原位缝合；

b）再次进行清洗，并晾干；

c）涂刷20%～30%的明胶液两次，晾干或吹干，晾干的标本仔细按序号逐一核对，并逐片将每一断层标本的两个断面拍照作永久科研资料；

d）将刷胶和晾干后的断层标本置于装有5％的福尔马林溶液的透明有机玻璃板制作的标本盒中封存。

利用本发明的方法制作出为临床影像诊断和教学科研所需的艾滋病三维断层标本，每个断层标本与影像资料和病理资料相互对应，并且大体标本光亮清洁，可长期保存，实现大体断层标本、CT影像与病理互相印证的完美结合，用于教学、科研和临床影像诊断可达到直观理解的效果。

本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步解释或说明本发明内容。但所提供的实施例不应被理解为对本发明保护范围构成限制。

1）灌注：将尸体剃去毛发，去除皮肤上的污垢和油渍、消毒后，用绷带或塑料薄膜将尸体按照解剖学姿势进行定型，经股动脉插管，进行固定液的灌注，固定液采用15%（重量比，以下同）的福尔马林溶液，同时起到防腐作用。尸体经股动脉灌注固定液的量要足够，一般按照身高和体重来计算，灌注15%（重量比，以下同）福尔马林溶液的量一般在10000～20000ml，这样可以使组织能够更好的固定。

在该步骤进行时，会直接接触死者的血液、体液、分泌物等，因其中均含有HIV病毒，要注意加强防护。操作室应有专用房间或专用操作台，操作台及一切有关物品都要有醒目标志。操作室需配备淋浴和卫生设施、空调或冷暖气设备及专用污水处理系统，同时还要配备专用隔离服装及器械、器皿，备足清洁消毒液和固定液。

2）浸泡：尸体成功灌注后，放置10～12小时，此时组织已经固定，不再发生形态改变，可撤掉定型用的所有物品，将尸体移入5%福尔马林溶液浸泡6个月左右，以保证标本的良好色泽。注意保持尸体的解剖学位置，防止受挤压变形。在尸体固定期间，注意一定要将尸体浸泡在固定液的液面下面，保证固定效果。

3）定位和划线：先用毛刷蘸清洗液(肥皂水内含少量碱粉)刷洗尸体，冲洗干净。拔去牙齿，将尸体标本按照解剖学姿势固定于薄木板上，根据临床和教学的需要，用甲紫采用弹线法在尸体表面进行基准线的定位，并采用手术刀进行划线，深度为1～2cm。

首先用甲紫采用弹线法在尸体表面定出基准线，并用CT扫描进行验证，保证断层标本标志线与CT扫描体表定位线的一致；然后用手术刀划出锯切线。横断切面标本以胸骨角平面为基准线，冠状切面标本以两侧腋中线为基准线，矢状切面标本以前后正中线为基准线，分别在尸体表面画好基准线，并按横断、冠状、矢状三种不同方位用手术刀划出锯切线。头部的横断锯切线以眶下缘至外耳门中心的连线为基准线，颈部的横断锯切线则以舌骨体平面为基线，头部的冠状锯切线以两外耳门上缘间连线的垂直线为基准线，头部的矢状锯切线以头颈正中矢状线为基准线；四肢的横断层从近端水平线切至远端，关节的冠状断层和矢状断层以其冠状轴和矢状轴为基准线。

锯切线的确定，定出基准线，并用CT扫描进行验证，作为临床影像学基础的断层解剖，其断层面应尽量与临床所需保持一致，锯切线部位正确与否，直接关系到锯切面的准确性。

4）冷冻：划线完毕后，将尸体标本连同薄木板一同置于-30℃的卧式冰柜中，使尸体处于解剖学位置，冷冻7～10天。

5）锯切：使用细木工带锯机锯制横断、冠状、矢状断层标本，锯切位置与CT扫描部位一定要保持一致。

开锯前先调试机器，并用软木块试锯，测量锯耗，保证锯耗小于2mm。调整固定好档板，使其与锯条的间距等于要锯制的标本厚度（8mm）加上锯耗的一半；将已冷冻好的标本按预先制定的方位及厚度沿锯路划线仔细切锯。尸体上锯后，在向前推时，双手用力要均匀。推动力应尽量与锯条平面相平行，勿使锯条侧向受力，并保持标本匀速前进，以保证锯制的断层标本厚薄一致。随时观测标本各部厚度和对称性，出现误差及时调整，逐一测量每片标本的长和宽并作记录。将标本逐片编号后置于塑料袋内，再按顺序放入冰柜中暂时保存。进行下一步处理时，分批次取出，不可在高温环境下放置时间过长，以防标本受损。

断层标本的厚度要和CT扫描厚度保持一致。切割断层标本时，注意控制断层标本的厚度，要和CT扫描厚度保持一致为8mm。选用细木工带锯机及合适的锯条并进行精准调试。锯齿过大、锯路过宽，则标本断面会出现切锯纹路，造成标本切锯面不平整，而且损耗也较大，可能造成某些重要部位的细小结构松动。为了保持标本锯面平整，层片厚薄均匀，应选用锯齿小、锯路窄的薄锯条，从而减少锯路损耗，降低局部结构的失真度。锯条要经常锉，以保持锯齿锐利，最好要有备用锯条。切锯前仔细调整锯条的张力，如张力过高，易致锯条毁损，张力过低，锯条摆动度较大，易致切面不平或层内厚薄不均。

锯切是断层标本制作的中心环节，是决定标本质量高低的关键。因此锯切前调试机器，用已冰冻好的废肢体或软木块试锯，观察锯条的松紧程度、锯齿锐利与否以及锯耗的大小，调整好挡板与锯条的间距并固定。尸体上锯后要调整好尸体与锯条的位置，确保尸体与锯条垂直并对准锯切线，依照划出的锯切线切锯标本，切锯中的推进力应相对均衡易保持尸体匀速前进，可保证锯出的断层标本厚薄一致。随时观察标本各部厚度和对称性，一出现误差就及时调整。特别要注意的是，在室温较高的情况下切锯时，应密切注视尸体解冻软化的情况。一旦软化，立刻复冻，切勿勉强切锯。切锯时根据切锯部位不同要适时微调锯条张力，如切锯头颅、骨盆等骨组织较多部位，要适当调高张力，保证切锯质量。

6）病理取材：从冰柜中分次取出标本置于室温下，分别在每片标本的病变部位多点取病理组织，切取组织块大小，以1.0×1.0×0.3厘米为宜，放入装有固定液的广口瓶中，并做好标记。采用石蜡切片方法做病理切片，基本制作过程是：组织取材→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→透明→封固。观察病理结果，并与相应的影像片子结果做一一对照，实现大体断层标本、CT影像与病理互相印证的完美结合。

7）清洗与固定：将取完病理的标本于室温下用细小流水逐片清洗其皮肤及切面的锯末，力求标本的结构仍保持原位。然后采用精细外科手术方法对器官的游离结构进行原位缝合（此过程一定要在标本彻底冲洗前进行，以免标本结构的丢失或错位）。缝好后的标本用流水冲洗，用毛刷洗净断面上的附着物、血管内的凝血块和消化管的内容物。标本用流水彻底冲洗，然后取出、晾干。在晾干的标本上涂刷20%～30%的明胶液两次、晾干，也可用吹风机吹干。

切锯好的断层标本，因冻冰的融化，一些细小的结构如肠袢等极易移位，甚至脱离遗失，导致断面结构失真，降低标本的质量，严重者甚至完全失去原有结构特征。因此，在较高室温条件下切锯时，将切下的断层用塑料袋包装后立刻复冻，待切锯完毕后，有计划地逐层解冻，解冻到一定程度（以能顺利进针为宜）进行原位缝合固定，以防脱落。缝合点不宜过多、过紧，以免组织器官移位、变形，导致失真。固定后以流水清洗表面的锯末以及胃肠内污物、血凝块等，用有机玻璃封装备用。

8）标本的处理与保存：将涂刷明胶后晾干的标本仔细按序号逐一核对，并逐片将每一断层标本的两个断面拍照，作永久科研资料，利于进一步观测处理或永久保存。为了便于与影像资料对照观察，依据影像图像习惯摆放标本，并做好标记。

9）封装与保存：根据标本大小、形状和厚度，选用不同厚度的透明有机玻璃板制作相应标本盒。用三氯甲烷（氯仿）连接结合面，在标本盒侧面用电钻钻一小孔，以备注药防腐。将刷胶和晾干后的断层标本放入相应的标本盒内，加封上盖，经侧面注水孔最后注入5％的福尔马林溶液，然后封堵注液孔，保存。注意结合面和注液孔的连接一定要紧密，以免日后损坏和漏水。

本领域普通技术人员可以理解：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种基于艾滋病的三维断层科研与教学标本制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）操作环境及操作条件的准备；

（2）对艾滋病患者尸体标本进行定型，并经股动脉插管灌注福尔马林溶液防腐；

（3）将所述尸体标本灌注福尔马林溶液后，放置10～12小时，然后将所述尸体标本完全浸泡在5%重量比的福尔马林溶液中固定6个月；

（4）将所述尸体标本，采用甲紫弹线法在所述尸体标本表面进行定位和划线；

（5）将所述尸体标本置于-30℃环境下进行冷冻7～10天；

（6）在所述尸体标本上，使用细木工带锯机锯制横断、冠状和矢状断层标本；

（7）对所述断层标本进行病理取材；

（8）对所述断层标本进行处理和保存；

所述步骤（4）进一步包括以下步骤：

a）以体表解剖标志确定基准线，并用CT扫描验证，保证断层标本标志线与CT扫描体表定位线的一致，其中，横断切面标本以胸骨角平面为基准线，冠状切面标本以两侧腋中线为基准线，矢状切面标本以前后正中线为基准线；

b）采用手术刀分别划出横断锯切线、冠状锯切线和矢状锯切线，其中，头部的横断锯切线以眶下缘至外耳门中心的连线为基准线，颈部的横断锯切线则以舌骨体平面为基准线；头部的冠状锯切线以两外耳门上缘间连线的垂直线为基准线，头部的矢状锯切线以头颈正中矢状线为基准线；四肢的横断锯切线从近端水平线切至远端，关节的冠状锯切线和矢状锯切线分别以其冠状轴和矢状轴为基准线。

2.根据权利要求1所述的标本制备方法，其特征在于,所述步骤（1）操作环境及操作条件的准备包括：操作室、专用操作台；所述操作室内具备卫生设施、冷暖气设备、专用隔离服装、器械、器皿、清洁消毒液、固定液，以及专用污水处理系统。

3.根据权利要求1所述的标本制备方法，其特征在于,步骤（2）所述经股动脉插管灌注福尔马林溶液的重量比为15%、灌注量为10000～20000ml。

4.根据权利要求1所述的标本制备方法，其特征在于,所述步骤（6）进一步包括以下步骤：

a）对细木工带锯机进行调试，保证锯耗小于2mm，并根据切锯部位不同调整锯条张力；

b）调整并固定挡板，使其与锯条的间距等于要锯制的标本厚度加上一半的锯耗；

c）将冷冻的尸体标本按划线进行切割，制成横断、冠状和矢状断层标本，所述断层标本的厚度与CT扫描厚度一致，为0.8mm；

d）逐一测量每片断层标本的长和宽并作记录，将所述断层标本置于塑料袋内，按顺序放入冰柜中暂存。

5.根据权利要求1所述的标本制备方法，其特征在于,所述步骤（7）进一步包括以下步骤：从冰柜中取出断层标本置于室温下，分别在每片断层标本的病变部位多点取病理组织→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→透明→封固。

6.根据权利要求1所述的标本制备方法，其特征在于,所述步骤（8）进一步包括以下步骤：

a）对取完病理的断层标本进行清洗，并对其中的器官的游离结构进行原位缝合；

b）再次进行清洗，并晾干；

c）涂刷20%～30%的明胶液两次，晾干或吹干，晾干的断层标本仔细按序号逐一核对，并逐片将每一断层标本的两个断面拍照作永久科研资料；

d）将刷胶和晾干后的断层标本置于装有5％的福尔马林溶液的透明有机玻璃板制作的标本盒中封存。