CN102216307A - 含氮杂环化合物及其制备和作为抗菌药剂的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式(I)的含氮杂环化合物：其中：R1为氢、-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基、-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2、-(CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH，m等于1或2；R2和R3一起形成具有5个顶点的且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在所述氮原子上被R4取代；R4为氢、(C1-C6)烷基或具有以下通式的链：-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”，A为C＝O、C＝NH或SO2；R’为氢或羧基；R”为氢、NH2、NH(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基2、CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2，或具有5或6个顶点的饱和杂环，所述饱和杂环含有1或2个氮原子，并且任选含有氧或硫原子，所述饱和杂环通过氮原子或通过碳原子连接在所述链上并且任选被(C1-C6)烷基取代；n、o和q为0或1并且p为0至4的整数；R5为OSO3H或OCHFCO2H或OCF2CO2H；当R4为氢、-(C1-C6)烷基、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH2、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH(C1-C6)烷基或-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-N(C1-C6)烷基2并且R5为OSO3H基团时，或者当R4具有除R”定义中的杂环以外的所有R”值时，R1不为氢、-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基或-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2；并且除了当R”为氢或CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2或杂环时，n、o、p和q不能都等于0；本发明涉及以其游离形式或两性离子形式或者药物可接受的无机或有机碱和无机或有机酸的盐形式的这些化合物，及其制备，以及其作为抗菌药物的用途。

Description

含氮杂环化合物及其制备和作为抗菌药剂的用途
本发明涉及含氮杂环化合物，及其制备和作为抗菌药剂的用途。
申请WO 02/010172、WO 02/100860、WO 04/022563和WO04/052891描述了在与病原菌斗争中有用的多环化合物。
本申请人已经发现了新型相关化合物，其具有显著并完全出乎意料的抗菌特性。这些化合物对在医院感染和患有黏液粘稠病的患者中经常会遇到的细菌株铜绿假单胞菌具有特别优异的活性。
这种有用和意想不到的活性没有存在于上述所引用申请的化合物中。其显示在下文的实验部分。
而且，本发明的化合物已经显示出对包括通常对普遍使用的抗生素有抗性的菌株的动物感染模型的活性。本发明的化合物能够对抗细菌的主要抗性机制，所述细菌的主要抗性机制为β-内酰胺酶、外排泵和孔蛋白基因突变。
本发明的化合物对应于通式(I)化合物，其可能的异构体形式或非对映异构体形式或混合物：
Figure BPA00001373052100011
其中：
R1表示氢原子或-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基、-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2、-(CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH基团，其中m等于1或2；
R2和R3一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在所述氮原子上被R4取代；
R4表示氢原子、(C1-C6)烷基或具有以下通式的链：
-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”
A表示C＝O、C＝NH或SO2基团；
R’表示氢原子或羧基；
R”表示氢原子或NH2、NH(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基2、CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2，或具有5或6个顶点的饱和杂环，所述饱和杂环含有1或2个氮原子，并且如果合适还含有选自氧或硫的另一杂原子，所述饱和杂环通过氮原子或通过碳原子连接在所述链上并且任选被(C1-C6)烷基取代；
n、o和q表示0或1，并且p表示0至4的整数；
R5表示OSO3H或OCHFCO2H或OCF2CO2H；
应理解的是：
-当R4为氢、-(C1-C6)烷基、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH2、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH(C1-C6)烷基或-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-N(C1-C6)烷基2，并且R5为OSO3H基团时，或者当R4具有除R”定义中的杂环以外的所有R”值时，R1不为氢、-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基或-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2，
-并且除了当R”为氢或CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2或杂环时，n、o、p和q不能都等于0；
所述通式(I)化合物为游离形式和两性离子形式以及具有药物可接受的无机或有机碱和无机或有机酸的盐形式。
(C1-C6)烷基特别是指甲基、乙基、丙基或异丙基，以及直链或支链的丁基、戊基或己基；
具有5个顶点的芳香性杂环(所述顶点含有1、2或3个氮原子)是指选自以下列举的那些，两个键表示由R2和R3形成的氮环连接处：
Figure BPA00001373052100031
具有5或6个顶点的饱和杂环(所述饱和杂环含有1或2个氮原子，并且如果合适，还含有氧或硫原子)特别是指吡咯烷、咪唑烷或吡唑烷型的具有5个顶点的环，或者哌啶、哌嗪、吗啉或硫代吗啉型的具有6个顶点的环，所述杂环通过氮原子或通过碳原子与链连接。
通式(I)产物的酸式盐中，可以提到的是其中用无机酸或有机酸形成的那些盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸或磷酸；所述有机酸例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、草酸、乙醛酸、天冬氨酸、诸如甲基磺酸和乙基磺酸等的烷基磺酸、诸如苯基磺酸和对甲苯磺酸等的芳基磺酸。
通式(I)产物的碱式盐中，可以提到的是其中用无机碱或有机碱形成的那些盐，所述无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化铵，所述有机碱例如甲胺、丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、N，N-二甲基乙醇胺、三(羟甲基)氨基甲烷、乙醇胺、吡啶、甲基吡啶、二环己基胺、吗啉、苄胺、普鲁卡因、赖氨酸、精氨酸、组氨酸和N-甲基葡糖胺，或者还有膦的盐，所述膦例如烷基膦、芳基膦、烷基芳基膦、烯基芳基膦，或者诸如四正丁基铵盐等的季铵盐。
通式(I)化合物中含有的不对称碳原子能够相互独立地具有R构型、S构型或RS构型，并且因此，通式(I)化合物以纯对映异构体或纯非对映异构体的形式存在，或者以对映异构体特别是外消旋体的混合物或非对映异构体的混合物的形式存在。
而且，一端的R1取代基和另一端的-C(O)-NR5-链相对于它们被固定的环能够为顺式和/或反式的位置，通式(I)化合物以顺式异构体或反式异构体或者混合物的形式存在。
特别地，在如上文定义的通式(I)化合物中，本发明的主题是其中R2和R3一起形成吡唑基杂环的化合物。
特别地，在如上文定义的通式(I)化合物中，本发明的主题是其中R1表示-(CH2)m-NH2基团的那些，以及其中R1表示-(CH2)m-NH-C(NH)NH2基团的那些，在任一情况下，m等于1。
特别地，在如上文定义的通式(I)化合物中，本发明的主题还是其中R4表示如上文定义的通式-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”链的那些，并且特别是其中R4表示通式-C(O)-NH-(CH2)p-(CHR’)qR”链的那些，其中R’、R”、p和q如上文所定义。
特别地，在如上文定义的通式(I)化合物中，本发明的主题也是其中R4表示氢原子或(C1-C6)烷基，并且R1表示-CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH基团的那些，其中m等于1。
特别地，在如上文定义的通式(I)化合物中，本发明的主题是下文在实验部分中描述的那些，特别是以下名称的化合物，其可能的异构体形式或非对映异构体形式或混合物：
-反式8-(氨基甲基)-2-(2-氨基-乙基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(4-哌嗪-1-羰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(2-二甲基氨基-乙基-氨基甲酰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(3-氨基-丙基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(氨基甲酰基-甲基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-1-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-2-(哌啶-4-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(3-氨基-3-羧基-丙基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-2-氨基甲酰基-4，8-二氢-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(氨基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
所述化合物为游离形式，两性离子形式和药物可接受的碱和无机或有机酸的盐形式。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，在碱的存在下，将通式(II)化合物用双光气处理，然后用通式(III)的胺处理，从而获得通式(IV)化合物，然后将羟基脱保护，将获得的化合物通过络合的SO3的作用进行硫酸化反应，或者在碱的存在下，将获得的化合物与通式Hal-CHF-CO2烷基或通式Hal-CF2-CO2烷基(其中Hal表示不同于氟的卤原子以及烷基表示含有1至6个碳原子的烷基)的试剂反应，然后对所获得的烷基酯进行水解，
然后，如果合适，将获得的化合物按照适当的顺序进行一种或多种以下的反应：
-胺的脱保护，以及如果合适，存在的羧基官能团的脱保护，
-成盐作用，
-离子交换，
-非对映异构体的拆分或分离，
Figure BPA00001373052100061
其中R′1表示R1基团，其中如果合适，存在的氨基官能团是被保护的，R’2和R’3一起形成具有5个顶点的且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，并且P表示羟基的保护基；
H-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(III)
其中R’a和R”’分别表示R’和R”，其中如果合适，活性的羧基和氨基官能团是被保护的，并且p和q如上文所定义；
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2和R”3一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(O)-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，将如上文定义的通式(II)化合物用碱处理，然后用通式(V)的试剂处理，从而获得通式(IVa)化合物，之后将羟基脱保护，并继续进行如上文所述的合成：
Hal-SO2-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(V)
其中Hal表示卤原子，并且R’a、R”’、p和q如上文所定义；
Figure BPA00001373052100071
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2a和R”3a一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-SO2-NH-CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，将如上文定义的通式(II)化合物，如果合适在碱的存在下，用通式(VI)的试剂处理，从而获得通式(IVb)化合物，之后继续进行如上文所述的合成：
B-C(O)-(NH)o-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(VI)
其中B表示OH基团或卤原子，并且R’a、R”’、o、p和q如上所定义，
Figure BPA00001373052100081
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2b和R”3b一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(O)-(NH)o-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、o、p和q如上文所定义。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，在碱的存在下，将如上文定义的通式(II)化合物用通式(VII)的试剂处理，从而获得通式(IVc)化合物，之后继续进行如上文所述的合成：
S＝C(NHP’)2(VII)
其中P’表示氨基官能团的保护基，
Figure BPA00001373052100082
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2c和R”3c一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(＝NH)-NHP’的链取代，其中P’如上文所定义。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，将如上文定义的通式(II)化合物用通式(VIII)的试剂处理，从而获得通式(IVd)化合物，之后继续进行如上文所述的合成：
O＝C＝N-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(VIII)
其中R’a、R”’、p和q如上文所定义，
Figure BPA00001373052100091
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2d和R”3d一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-(CO)-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
其中R4表示CO-NH2或CO-NH(C1-C6)烷基的通式(I)化合物也能够通过以下步骤获得：将如上文定义的通式(II)化合物与三甲基甲硅烷基异氰酸酯作用或与通式(C1-C6)烷基-N＝C＝O的异氰酸酯作用，从而获得相应的通式(IV)化合物，之后继续进行如上文所述的合成。
本发明的另一主题是制备通式(I)化合物的方法，其特征在于，将如上文定义的通式(II’)化合物用通式(IX)的试剂处理，从而获得通式(X)化合物，之后继续进行如上文所述的合成：
Figure BPA00001373052100101
其中R”2e和R”3e一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环任选被(C1-C6)烷基取代，并且P如上文所定义，
CH3-S-C(＝NP’)NHP’(IX)
其中P’如上所定义，
Figure BPA00001373052100102
其中R”2e、R”3e、m、P和P’如上所定义。
特别以苄基化或三苯甲基化衍生物的形式，以氨基甲酸酯，特别是烯丙基氨基甲酸酯、苄基氨基甲酸酯、苯基氨基甲酸酯或叔丁基氨基甲酸酯的形式，或以甲硅烷基化衍生物，例如叔丁基-甲硅烷基、二甲基-甲硅烷基、三甲基-甲硅烷基、苯基-甲硅烷基或二苯基叔丁基-甲硅烷基衍生物，或者苯基磺酰基烷基或氰烷基衍生物的形式进行在R’1的胺官能团和在通式III、V、VI、VII、VIII和IX的试剂中的先前保护。
取决于保护性基团的性质，能够通过本领域技术人员已知的不同方法进行脱保护。特别能够通过诸如三氟乙酸等的酸的作用进行，然后以酸式盐的形式获得脱保护的化合物。还能够通过氢解，或使用可溶性钯O络合物(Palladium O complex)，或通过四丁氟化铵的作用，或通过还原反应进行。在下文的实验部分中提供实例。
特别以酯衍生物，特别是烷基酯、烯丙基酯、苄基酯、二苯甲基酯或对硝基苄基酯形式进行在通式III、V、VI和VIII的试剂中的R’a处羧基的先前保护。
能够通过本领域技术人员已知的不同方法进行脱保护，所述方法例如使用可溶性钯O络合物的皂化、酸水解、氢解或裂解。
以醚、酯或碳酸酯的形式以标准方法进行通式(II)化合物的羟基的先前保护。所述醚能够为烷基醚或烷氧基烷基醚，优选甲基醚或甲氧基乙氧基甲基醚，芳基醚或芳烷基醚最好，例如苄基醚或甲硅烷基化的醚，例如前面所提及的甲硅烷基化的衍生物。所述酯能够为本领域技术人员已知的可分裂的酯，并且优选乙酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯或对硝基苯甲酸酯。例如，所述碳酸酯能够为甲基碳酸酯、叔丁基碳酸酯、烯丙基碳酸酯、苄基碳酸酯或对硝基碳酸酯。
采用本领域技术人员已知的方法进行脱保护，所述方法特别是使用皂化、氢解或可溶性钯O络合物的裂解，在酸性介质中的水解，或者还有对于甲硅烷基化衍生物，采用四丁基氟化铵的处理。
下文在实验部分中提供上述保护和脱保护的实例。
通式(II)化合物与双光气反应所存在的碱能够是胺，例如三乙胺，但是对于这种类型的反应，也能够使用本领域技术人员已知的其它碱。可能在诸如二氯甲烷的溶剂中进行。
通过以下步骤进行硫酸化反应：通过诸如SO3-吡啶或SO3-二甲基甲酰胺等的SO3络合物的作用，通过在吡啶或二甲基甲酰胺中进行操作形成诸如吡啶盐等的盐，然后能够与诸如另一种胺盐、季铵盐或碱金属盐交换。在实验部分提供实例。
如果合适，通过将在可溶性相中的酸加入至所述化合物来进行酸的成盐化。通过碱能够从胺，特别是在SO3-胺络合物作用过程中获得的吡啶的盐进行磺酰氧基官能团的成盐化，其它盐由该胺盐获得。特别地，能够通过离子交换树脂进行操作。
能够根据本领域技术人员已知的技术来进行对映异构体和非对映异构体的分离，所述技术特别是手性或非手性相色谱。
在申请WO 04/052891或申请WO 02/100860中也描述了能够使用的条件的实例。
例如，在通式(V)的试剂起作用之前，将通式(II)化合物反应所存在的碱能够为碱性氢化物，例如氢化钠，但是对于这种类型的反应，也能够使用本领域技术人员已知的其它碱。能够在四氢呋喃中进行该反应。
例如，通式(II)化合物与其中B表示卤素的通式(VI)的试剂反应所存在的碱能够为胺，例如二异丙基乙胺或三乙胺。能够在二甲基甲酰胺或二氯甲烷中进行该操作。
通式(II)化合物与其中B表示卤素的通式(VI)的试剂反应的条件是本领域技术人员已知的用于多肽偶联的标准条件。下文在实验部分中举例说明这样的条件。
例如，通式(II)化合物与通式(VII)的试剂反应所存在的碱能够为胺，例如三乙胺，但是对于这种类型的反应，也能够使用本领域技术人员已知的其它碱。在氯化汞的存在下并在诸如二氯甲烷的溶剂中进行该操作。
能够在乙腈或其与四氢呋喃的混合物中进行通式(II)化合物与通式(VIII)的试剂的反应。
在三乙基膦的存在下进行通式(II’)化合物与通式(IX)的试剂的反应，并且例如在四氢呋喃获四氢呋喃/甲苯混合物中进行该操作。
本发明的主题还是如上文定义的通式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd)和(X)的中间化合物。
通过申请WO 02/100860或WO 04/052891描述的方法能够获得通式(II)和(II’)化合物。
如上所述，通式(I)化合物对铜绿假单胞菌和对通常使用的抗菌剂具有抗性的菌株的动物感染模型具有优异的抗菌活性。对于在申请WO04/052891中所描述的化合物以及特别是对于结构相似的化合物来说，没有观察到这一显著并且意想不到的抗菌活性。其在下文进行描述。
这些性质使得以游离形式和两性离子或药物可接受的酸或碱的盐形式的所述化合物用作在严重的假单胞菌感染的治疗中的药物，所述假单胞菌感染特别是医院感染，并且通常为处于危险中的严重感染。特别是，它们可以是呼吸道感染，例如急性肺炎或下呼吸道的慢性感染；血液感染，例如败血病；急性或慢性尿路感染；听觉系统的感染，例如恶性外耳炎，慢性化脓性中耳炎；皮肤和软组织的感染，例如皮炎、伤口感染、毛囊炎、脓性皮炎、痤疮；眼部感染，例如角膜溃疡；神经系统的感染，特别是脑膜炎和脑脓肿；心脏感染，例如心内膜炎；骨和关节感染，例如关节积脓、脊椎骨髓炎、耻骨联合；胃肠道感染，例如坏死性小肠结肠炎和直肠周围感染。
因此，本发明的主题还是游离形式和两性离子形式以及药物可接受的碱和无机或有机酸的盐形式的以上定义的通式(I)化合物作为药剂，特别是抗菌药剂。
在通式(I)化合物中，特别地，本发明的主题是其中R2和R3一起形成取代的吡唑基杂环的化合物作为药剂。
在通式(I)化合物中，本发明的更特别的主题是其中R1表示-(CH2)m-NH2基团的那些，以及其中R1表示-(CH2)m-NH-C(NH)NH2基团的那些作为药剂，在两种情况下m都等于1。
在通式(I)化合物中，特别地，本发明的主题还是其中R4表示之前定义的通式-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”的链的那些，并且更特别是其中R4表示通式-C(O)-NH-(CH2)p-(CHR’)qR”的链的那些作为药剂，其中R’、R”、p和q如上文所定义。
在通式(I)化合物中，特别地，本发明的主题还是其中R4表示氢原子或(C1-C6)烷基并且R1表示-(CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH基团的那些作为药剂，其中m等于1。
在通式(I)化合物中，更特别地，本发明的主题是下文在实验部分中描述的化合物，并且特别是以下名称的那些化合物，其可能的异构体形式或非对映异构体形式或混合物作为药剂：
-反式8-(氨基甲基)-2-(2-氨基-乙基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(4-哌嗪-1-羰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(2-二甲基氨基-乙基-氨基甲酰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(3-氨基-丙基-氨基甲酰基)-4，8-氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(氨基甲酰基-甲基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-1-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-2-(哌啶-4-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(3-氨基-3-羧基-丙基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-2-氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(氨基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
所述化合物为游离形式，两性离子形式和药物可接受的碱和无机或有机酸的盐形式。
本发明的主题还为药物组合物，其含有作为活性成分的至少一种如上文定义的本发明的化合物。能够通过口腔、直肠、胃肠途径、特别是肌肉注射，或者通过作为皮肤和粘膜上的局部应用的局部途径来给予这些组合物。
本发明的组合物能够为固体或液体，并且能够以通常在人用药剂中使用的药物剂型存在，所述剂型例如扁平的或糖衣的片剂、胶囊、颗粒剂、栓剂、注射制剂、软膏、霜剂和凝胶剂；它们通过普通方法制备。活性成分能够与通常在这些药物组合物中使用的赋形剂结合，所述赋形剂例如滑石粉、阿拉伯树胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、可可脂、水性或非水性媒介物，动物或植物来源的脂肪物质、石蜡衍生物、乙二醇、各种润湿剂、分散剂或乳化剂、防腐剂。
这些组合物还能够以冻干粉的形式存在，所述冻干粉预期临时溶解在诸如无热原无菌水等的合适的媒介物中。
给药剂量根据治疗的条件，处于问题中的患者，考虑的给药途径和产物而变化。例如，使用实施例1、4或5中所述的产物，通过成人的口服途径，能够包含每天0.250g至10g的给药剂量，或者通过肌肉内或静脉途径，能够包含每天0.25g至5g的给药剂量。
通式(I)的产物还能够用作外科手术器具的杀菌剂。
下述实施例描述本发明。
实施例1：反式8-(氨基甲基)-2-(2-氨基-乙基氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
阶段A
反式4，8-二氢-8-(羟基甲基)-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
在氮气下，将在申请WO 2004/052891中描述的反式-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-羧酸甲酯(5g，15.2mmol)放在无水甲醇/四氢呋喃混合物1/1(100mL)中形成溶液。然后，逐份加入NaBH4(2.3g，60.9mmol)。在环境温度下搅拌过夜后，将反应混合物用10％NaH2PO4水溶液(100mL)处理。蒸发至干燥以后，将反应混合物放入水中。将形成的沉淀在冰中搅拌过夜，然后过滤并在P2O5的存在下真空干燥至少24小时，从而制备期望的白色粉末状的化合物(3.30g，11.0mmol，72％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝301
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.18-3.50(ABX，2H，N-CH 2-CH-N)，3.65-3.76(ABX，2H，N-CH-CH 2-OH)，4.34(t，1H，N-CH-CH2-OH)，4.46(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.88(s，2H，CH 2-Ph)，7,29-7.43(m，5H，Ph)，7.66(s，1H，H吡唑)，12.72(宽峰，1H，OH)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在氮气下，在0℃将在前阶段中获得的醇(1.73g，5.76mmol)在无水吡啶(35mL)中形成溶液。然后，逐滴加入甲基磺酰氯(1.78mL，23mmol)。在环境温度下搅拌2小时30分钟后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(100mL)处理，然后用乙酸乙酯萃取。之后将组合的有机相用氯化铵的饱和水溶液洗涤5次，用硫酸钠干燥，过滤然后真空浓缩，从而制备期望的黄色油状的二甲磺酰化的衍生物。
在叠氮钠(1.12g，17.3mmol)的存在下，将二甲磺酰化的中间体在无水二甲基甲酰胺(45mL)中形成溶液。将反应混合物在70℃加热24小时。如果必要，加入1eq.的叠氮化物以完成转化。当反应完成时，将混合物用10％NaH2PO4水溶液(100mL)，然后用二氯甲烷萃取。将组合的有机相用硫酸钠干燥，过滤然后真空浓缩，从而制备期望的黄色油状的叠氮化物。
在氮气下，将中间体在纯乙醇(17.5mL)中反应。然后，接连加入二叔丁基二碳酸酯(1.38g，6.34mmol)、三乙基硅烷(1.38mL，8.64mmol)和10％氢氧化钯碳(Degussa)(52mg)。在环境温度下保留过夜，将反应混合物过滤然后浓缩，从而制备粗制的黄色的油。将该粗制的油在硅胶柱上通过色谱法纯化(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以1％从100/0至95/5)，从而制备期望的白色固体状的化合物(1.36g，3.40mmol，34％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝401
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.51(s，9H，C(CH 3)3)，3.21-3.59(m，4H，N-CH 2-CH-N和N-CH-CH 2-NHBoc)，4.36(m，1H，N-CH-CH2-OH)，4.46(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.99(AB，2H，CH 2-Ph)，7,41-7.52(m，5H，Ph)，7.63(s，1H，H吡唑)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在氮气下，将在前阶段获得的衍生物(170mg，0.426mmol)在二氯甲烷(22mL)中形成溶液。在0℃加入三乙基胺(119μL，0.851mmol)，随后迅速逐滴加入双光气(77μL，0.638mmol)。在0℃搅拌2小时30分钟，迅速加入N-boc-乙二胺(236μL，1.49mmol)，并在环境温度将该介质强力搅拌1小时。
将该介质倒入分离漏斗中，用二氯甲烷(5mL)漂洗，然后用10％磷酸钠水溶液(15mL)洗涤。将水相用二氯甲烷(15mL)萃取。将有机相收集，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，真空浓缩，从而在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/乙酸乙酯90/10至80/20)后，制备期望的衍生物(86mg，0.147mmol，35％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝586
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，1.47(s，9H，C(CH 3 )3)，3.09(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.29-3.40，3.49-3.59(m，6H，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，3.79(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.98(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.59(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.92(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.10(宽峰，1H，NH)，6.95(宽峰，1H，NH)，7,40-7.43(m，5H，Ph)，8.04(s，1H，H吡唑)。
阶段D
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
在氮气下，将在前阶段获得的衍生物(134mg，0.229mmol)在二甲基甲酰胺(0.33mL)和二氯甲烷(0.98mL)中形成溶液。加入50％水润湿的10％钯碳(73mg，0.034mmol)。经过三次真空/氮气吹扫，在氢气下，将反应混合物放置直至根据HPLC起始产物消失。然后，将混合物真空浓缩，之后用无水二氯甲烷共蒸发三次，最后在真空钟罩下，在P2O5存在下干燥2小时，从而制备期望的脱苄基化的中间体。
在吡啶/三氧化硫复合物(73mg，0.458mmol)的存在下，将脱苄基化的衍生物放入无水吡啶(0.9mL)中。将反应混合物在环境温度下搅拌直至根据HPLC完全转化，然后在通过添加水进行处理后，浓缩至干燥。将粗反应产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至85/15)，从而制备期望的盐(79mg，0.121mmol，53％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝574
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.25(s，9H，C(CH 3 )3)，1.32(s，9H，C(CH 3 )3)，3.05-3.16，3.22-3.32，3.39-3.54(m，8H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，4.40(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.78(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.39(宽峰，1H，NH)，7.84(m，2H，Py)，8.07(s，1H，H吡唑)，8.20(宽峰，1H，NH)，8.48(m，1H，Py)，8.66(m，2H，Py)，9.02(宽峰，1H，NH)。
阶段E
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
将在2N纯碱溶液(50mL)中的10g的DOWEX 50WX8树脂悬浮液搅拌1小时，然后倒在色谱柱上。将柱子用软化水调节直至达到中性pH值，然后用水/THF混合物90/10进行调节。将在前阶段获得的盐(79mg，0.121mmol)溶解在少量甲醇中，沉积在柱上，然后用水/THF混合物90/10洗脱。将含有底物(substrate)的馏分组合并冷冻。将冷冻的溶液冻干，从而制备期望的米色固体状的钠盐(65mg，0.109mmol，90％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝574
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.36(s，9H，C(CH 3 )3)，1.41(s，9H，C(CH 3 )3)，3.05-3.13，3.16-3.46(m，8H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，4.38(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.76(d，1H，N-CH2-CH-N)，6.93(宽峰，1H，NH)，7.13(宽峰，1H，NH)，8.17(s，1H，H吡唑)，8.42(宽峰，1H，NH)。
阶段F
反式8-(氨基甲基)-2-(2-氨基-乙基氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
在氮气下，将三氟乙酸(2.4mL)的二氯甲烷(2.4mL)溶液逐滴加入至在前阶段获得的钠盐(42mg，0.092mmol)的二氯甲烷(1.2mL)溶液，并冷却至0℃。在环境温度下，保持搅拌1小时。将混合物蒸发至干燥。将残留物放入水(3mL)中并将溶液用二乙基醚(3mL)洗涤。将水溶液冷冻然后冻干，从而制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(62mg，0.099mmol，94％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝374
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝2,98-3.70(m，8H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NH3 +，N-CH2-CH 2 -N，N-CH2-CH 2 -N)，4.72(m，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.88(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.76(宽峰，3H，NH 3 +)，8.16(宽峰，3H，NH 3 +)，8.32(s，1H，H吡唑)，8.59(宽峰，1H，NH)。
实施例2：反式8-(氨基甲基)-2-(4-哌嗪-1-羰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(150mg，0.376mmol)、二氯甲烷(20mL)、三乙基胺(105μL，0.751mmol)、双光气(68μL，0.563mmol)和N-boc-哌嗪(210mg，1.13mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/乙酸乙酯80/20至70/30)后，制备期望的米色固体状的衍生物(145mg，0.237mmol，63％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝612
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.45(s，9H，C(CH 3 )3)，1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，3.07(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.33(m，2H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.51(m，4H，N-CH 2 -CH2-N)，3.77(m，5H，N-CH2-CH 2 -N，N-CH 2 -CH-N)，4.00(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.60(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.92(AB，1H，CH 2 -Ph)，5.13(宽峰，1H，NH)，7.38-7.43(m，5H，Ph)，7.98(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[2-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(145mg，0.237mmol)、二甲基甲酰胺(0.34mL)、二氯甲烷(1.0mL)和50％水润湿的10％钯碳(76mg，0.036mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(1.0mL)和吡啶/三氧化硫复合物(112mg，0.702mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至80/20)后，制备期望的米色固体状的衍生物(40mg，0.059mmol，21％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝600
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.42(s，9H，C(CH 3 )3)，1.47(s，9H，C(CH 3 )3)，3.02-3.28，3.40-3.90(m，12H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，4.58(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.97(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.28(s，1H，H吡唑)，8.12(宽峰，1H，NH)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(40mg，0.059mmol)、DOWEX 50WX8树脂(5g)和2N纯碱(25mL)制备期望的米色固体状的钠盐(32mg，0.051mmol，87％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝600
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.40(s，9H，C(CH 3 )3)，1.41(s，9H，C(CH 3 )3)，3.26-3.65(m，12H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，4.42(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.78(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.06(宽峰，1H，NH)，8.13(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式8-(氨基甲基)-2-(哌嗪-1-羰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(126mg，0.203mmol)、二氯甲烷(3.6mL)、三氟乙酸(7.2mL)的二氯甲烷(7.2mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(124mg，0.191mmol，95％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.18-3.27，3.37-3.43，3.84-3.93(m，12H，N-CH 2 -CH-NH3 +，CH-CH 2 -N，N-CH 2 -CH2-N，N-CH2-CH 2 -N)，4.69(m，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.88(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.13(宽峰，3H，NH 3 +)，8.24(s，1H，H吡唑)，9.00(宽峰，2H，NH 2 +)。
实施例3：反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(2-二甲基氨基乙基氨基甲酰 基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的 钠和三氟乙酸盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B获得的衍生物(228mg，0.571mmol)、二氯甲烷(30mL)、三乙基胺(159μL，1.14mmol)、双光气(103μL，0.856mmol)和N，N-二甲基-乙二胺(317μL，2.85mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以1％从100/0至95/5)后，制备期望的黄色固体状的衍生物(193mg，0.375mmol，66％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝514
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.46(s，9H，C(CH 3 )3)，2.30(s，3H，CH 3 )，2.31(s，3H，CH 3 )，2.53(m，2H，N-CH2-CH 2 -NMe2)，3.08(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.38(m，2H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.48(m，2H，N-CH 2 -CH2-NMe2)，3.80(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.98(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.60(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.92(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.16(宽峰，1H，NH)，7,39-7.43(m，5H，Ph)，8.04(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(173mg，0.337mmol)、二甲基甲酰胺(0.48mL)、二氯甲烷(1.44mL)和50％水润湿的10％钯碳(108mg，0.051mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(1.1mL)和吡啶/三氧化硫复合物(107mg，0.673mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至85/15)后，制备期望的米色固体状的衍生物(107mg，0.184mmol，55％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝574
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.52(s，9H，C(CH 3 )3)，3.04(s，6H，2xCH 3 )，3.48(m，4H，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH2-CH 2 -NMe2)，3.61(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.72(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，4.82(m，2H，N-CH 2 -CH2-NMe2)，4.65(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.95(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.28(s，1H，H吡唑)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(107mg，0.184mmol)、DOWEX 50WX8树脂(13g)和2N纯碱(65mL)制备期望的米色固体状的钠盐(87mg，0.166mmol，91％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝504
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.41(s，9H，C(CH 3 )3)，3.24-3.43(m，14H，2x CH 3 ，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH2-CH 2 -NMe2，N-CH 2 -CH-N，N-CH 2 -CH2-NMe2)，4.40(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.78(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.15(宽峰，1H，NH)，8.20(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(87mg，0.166mmol)、二氯甲烷(2.5mL)、三氟乙酸(5.0mL)的二氯甲烷(5.0mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(76mg，0.141mmol，85％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝402
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝2.17(s，6H，2xCH3)，3.12-3.72(m，8H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NH3 +，N-CH 2 -CH2-NMe2，N-CH2-CH 2 -NMe2)，4.73(dd，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.88(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.17(宽峰，3H，NH 3 +)，8.32(s，1H，H吡唑)，8.63(宽峰，1H，NH)。
实施例4：反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(吡咯烷-1-羰基)-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-2-(吡咯烷-1-羰基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B获得的衍生物(150mg，0.376mmol)、二氯甲烷(20mL)、三乙基胺(105μL，0.751mmol)、双光气(68μL，0.563mmol)和吡咯烷(157μL，1.88mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱CH2Cl2/乙酸乙酯85/15)后，制备期望的米色固体状的衍生物(143mg，0.288mmol，76％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝497
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.47(s，9H，C(CH 3 )3)，1.89(m，4H，N-CH2-CH 2 吡咯烷)，3.08(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.36(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.45(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.65(m，2H，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷)，3.79(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.92(m，2H，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷)，3.99(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.63(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.94(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.16(宽峰，1H，NH)，7.39-7.43(m，5H，Ph)，8.11(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[4，5，6，8-四氢-6-氧代-2-(吡咯烷-1-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(143mg，0.288mmol)、二甲基甲酰胺(0.41mL)、二氯甲烷(1.23mL)和50％水润湿的10％钯碳(92mg，0.043mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.93mL)和吡啶/三氧化硫复合物(88mg，0.553mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至85/15)后，制备期望的米色固体状的衍生物(76mg，0.134mmol，49％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝485
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.51(s，9H，C(CH 3 )3)，2.00(m，4H，N-CH2-CH 2 吡咯烷)，3.49(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.57(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.65(m，4H，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷)，3.96(m，2H，CH-CH 2 -NHBoc)，4.67(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.98(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.30(s，1H，H吡唑)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[4，5，6，8-四氢-6-氧代-2-(吡咯烷-1-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(76mg，0.134mmol)、DOWEX 50WX8树脂(9g)和2N纯碱(45mL)制备期望的米色固体状的钠盐(64mg，0.126mmol，93％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝486
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.39(s，9H，C(CH 3 )3)，1.84(m，4H，N-CH2-CH 2 吡咯烷)，3.25-3.40(m，4H，N-CH 2 -CH-N，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷)，3.54(m，2H，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷)，3.79(m，2H，CH-CH 2 -NHBoc)，4.41(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.78(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.05(宽峰，1H，NH)，8.16(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式-8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(吡咯烷-1-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(64mg，0.126mmol)、二氯甲烷(1.8mL)、三氟乙酸(3.7mL)的二氯甲烷(3.7mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(57mg，0.109mmol，86％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝385
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.85(m，4H，N-CH2-CH 2 吡咯烷)，3.42-3.74(m，8H，N-CH 2 -CH-N，N-CH 2 -CH2-N吡咯烷，CH-CH 2 -NH3 +)，4.68(m，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.86(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.09(宽峰，3H，NH 3 +)，8.26(s，1H，H吡唑)。
实施例5：反式8-(氨基甲基)-2-[(3-氨基-丙基)氨基甲酰基]-4，8-二氢-5-(磺 酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟 乙酸盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式2-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)氨基甲酰基]-4，5，6，8-四氢-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B获得的衍生物(250mg，0.626mmol)、二氯甲烷(32.8mL)、三乙基胺(174μL)、双光气(113μL)和N-Boc-1，3-丙二胺(382μL)，在反应3小时30分钟并在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/AcOEt 100/0至70/30)后，制备期望的衍生物(132mg，0.22mmol，35％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝600
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.48(s，9H，tBu)，1.61(s，9H，tBu)，179(m，2h，NHCH2-CH 2 -CH2-NHBOC)，3.05-3.75(m+2 ABX，8H，N-CH 2-CH-N，N-CH-CH 2-NHBOC，NHCH 2 -CH2-CH2-NHBOC，NHCH2-CH2-CH 2 -NHBOC)，4.00(d，1H，N-CH-CH2-NHBOC)，4.62(dd，1H，N-CH2-CH-N)，4.97(AB，2H，CH 2-Ph)，7.42-7.45(m，5H，Ph)，8.05(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式2-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)氨基甲酰基]-4，5，6，8-四氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(132mg，0.22mmol)、二甲基甲酰胺/二氯甲烷1/3混合物(2.5mL)和50％水润湿的10％钯碳(53mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.86mL)和吡啶/三氧化硫复合物(70mg，0.44mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 100/0至80/20)后，制备期望的白色固体状的衍生物(90mg，0.134mmol，61％)。
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(90mg，0.134mmol)、DOWEX 50WX8树脂(11g)和2N纯碱(55mL)，在仅用水洗脱并冻干后，制备期望的白色粉末状的钠盐(48mg，0.078mmol，58％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝588
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.49(s，9H，C(CH 3 )3)，1.52(s，9H，C(CH 3 )3)，1.81(m，2H，NCH2-CH 2 -CH2-NHBoc)，3.18(m，2H，NCH2-CH2-CH 2 -NHBoc)，3.36-3.45(m，6H，NCH 2 -CH2-CH2-NHBoc，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NHBoc)，4.65(dd，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.99(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.29(s，1H，H吡唑)。
阶段C
反式8-(氨基甲基)-2[(3-氨基-丙基)氨基甲酰基]-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(48mg，0.078mmol)、二氯甲烷(1.34mL)、三氟乙酸/二氯甲烷混合物(5.36mL)制备期望的米色粉末状的钠和三氟乙酸盐(45mg，0.070mmol，90％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝390
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.86(m，2H，NCH2-CH 2 -CH2-NH2)，2.91(m，2H，NCH2-CH2-CH 2 -NH2)，3.29-3.80(m，6H，NCH 2 -CH2-CH2-NH2，N-C H 2-CH-N和CH-CH 2 -NH2)，4.65(dd，1H，CH-CH2-NH2)，4.86(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.18(s，1H，H吡唑)。
实施例6：反式8-(氨基甲基)-2-[(3-氨基-丁基)氨基甲酰基]-4，8-二氢-5-(磺 酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟 乙酸盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式2-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丁基)氨基甲酰基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B获得的衍生物(250mg，0.626mmol)、二氯甲烷(32.8mL)、三乙基胺(174μL)，双光气(113μL)和N-Boc-1，3-丁二胺(419μL)，在经过3小时30分钟反应时间(～50％转化)并在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/AcOEt 100/0至70/30)后，制备期望的衍生物(91mg，0.148mmol，24％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝614
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.47(s，9H，tBu)，1.48(s，9H，tBu)，1.58-1.68(m，4H，NHCH2-CH2-CH 2 -CH2-NHBoc和NHCH2-CH 2 -CH2-CH2-NHBoc)，3.05-3.55(m+2 ABX，8H，N-CH 2-CH-N，N-CH-CH 2-NHBoc，NHCH 2 -CH2-CH2-CH2-NHBoc，NHCH2-CH2-CH2-CH 2 -NHBoc)，4.00(d，1H，N-CH-CH2-NHBoc)，4.60(dd，2H，N-CH2-CH-N)，4.97(AB，2H，CH 2-Ph)，5.05(bs，1H，NH)，7.05(bs，1H，NH)，7.42-7.45(m，5H，Ph)，8.05(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式2-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丁基)氨基甲酰基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(91mg，0.15mmol)、二甲基甲酰胺/二氯甲烷混合物1/3(1.7mL)和50％水润湿的10％钯碳(36mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.86mL)和吡啶/三氧化硫复合物(47mg)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 95/5至90/10)后，制备期望的衍生物(38mg，0.056mmol，37％)。
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(38mg，0.056mmol)、DOWEX 50WX8树脂(4.6g)和2N纯碱(23mL)，在仅用水洗脱并冻干后制备期望的白色粉末状的钠盐(43mg，0.068mmol，100％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝602
1H NMR(400MHz，MeOD-d4)：δ(ppm)＝1.50(s，9H，tBu)，1.53(s，9H，tBu)，1.59(m，2H，NHCH2-CH2-CH 2 -CH2-NHBoc)，1.68(m，2H，NHCH2-CH 2 -CH2-CH2-NHBoc)，3.11-3.82(m+2 ABX，8H，N-CH 2-CH-N，N-CH-CH 2-NHBoc，NHCH 2 -CH2-CH2-CH2-NHBoc，NHCH2-CH2-CH2-CH 2 -NHBoc)，4.45(bs，1H，NH)，4.62(dd，1H，N-CH-CH2-NHBoc)，5.00(dd，2H，N-CH2-CH-N)，5.45(bs，1H，NH)，8.05(s，1H，H吡唑)，8.38(bs，1H，NH)。
阶段C
反式8-(氨基甲基)-2[(3-氨基-丁基)氨基甲酰基]-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(43mg，0.068mmol)、二氯甲烷(1.17mL)、三氟乙酸/二氯甲烷混合物(4.68mL)制备期望的米色粉末状的钠和三氟乙酸盐(40mg，0.064mmol，93％)。
MS(ES+)m/z[M+H]-＝404
1H NMR(400MHz，MeOD-d4)：δ(PPm)＝1.20(m，2H，NHCH2-CH2-CH 2 -CH2-NH2)，1.60(m，2H，NHCH2-CH 2 -CH2-CH2-NH2)，2.70-3.72(m+2 ABX，8H，N-CH 2-CH-N，N-CH-CH 2NH2，NHCH 2 -CH2-CH2-CH2-NH2，NHCH2-CH2-CH2-CH 2 -NH2)，4.80(dd，2H，N-CH2-CH-N)，8.20(s，1H，H吡唑)。
实施例7：反式8-(氨基甲基)-2-(氨基甲酰基甲基-氨基甲酰基)-4，8-二氢 -5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠 和三氟乙酸盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-(氨基甲酰基甲基-氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B获得的衍生物(200mg，0.501mmol)、二氯甲烷(26mL)、三乙基胺(0.489mL，3.507mmol)、双光气(0.091mL，0.751mmol)和甘氨酰胺盐酸盐(0.277mg，2.50mmol)，在反应2小时并将与由50mg的起始底物(0.125mmol)获得的另一产物组合的粗产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/AcOEt 100/0至00/100)后，制备期望的衍生物(115mg，0.23mmol，36.8％)。
MS(ES(+)：m/z[M+H]+＝500
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.48(s，9H，C(CH3)3)，3.10-3.20(AB，1H，N-CH2-CH-N)，3.36-3.39(m，2H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，3.8(宽峰，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.03(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.90(m，2H，N-CH2-CO-N)，4.60-4.70(宽峰，1H，N-CH-CH2-NHBoc)，4.88-5.05(AB，2H，N-O-CH2-Ph)，5.20(宽峰，1H，NH)，5.65(宽峰，1H，CO-NH2)，6.15(宽峰，1H，CO-NH2)，7.42-7.45(m，5H，Ph)，7.65(宽峰，1H，NH)，8.07(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[2-(氨基甲酰基甲基-氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(110mg，0.22mmol)、二甲基甲酰胺(0.32mL)、二氯甲烷(0.96mL)和50％水润湿的10％钯碳(70.3mg，0.033mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。(MS(ES(+)：m/z[M+H]+＝409)
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.69mL)和吡啶/三氧化硫复合物(70mg，0.440mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(4g，洗脱液CH2Cl2/MeOH 100/0至80/20)后，制备期望的产物，但仍具有不充分的纯度。将后者送回至水溶液中。将水溶液用二氯甲烷(2mL，3次)萃取，然后将水相冷冻并冻干，从而制备期望的白色固体状的化合物(65mg，0.114mmol，52％)。
MS((ES(-))：m/z[M-H]-＝488
1H NMR(400MHz，DMSO-d6+1滴D2O)：δ(ppm)＝1.38(s，9H，C(CH3)3)，3.30-3.44(m，4H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，3.67-4.00(m，2H，N-CH2-CO-N)，4.40(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.79(宽峰，1H，N-CH-CH2-NHBoc)，7.83-7.84(m，2H，吡啶)，8.20(s，1H，H吡唑)；8.32-8.34(m，1H，吡啶)；8.70-8.78(m，2H，吡啶)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(氨基甲酰基甲基-氨基甲酰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(55mg，0.097mmol)、DOWEX 50WX8树脂(8g)和2N纯碱(30mL)，产物在水溶液中沉积并冻干后，制备期望的白色冻干粉状的钠盐(38mg，0.074mmol，77％)。
MS((ES(-))：m/z[M-H]-＝488)
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.40(s，9H，C(CH3)3)；3.32-3.40(m，4H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，3.78(m，2H，N-CH2-CO-N)，4.40-4.50(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.75(m，1H，N-CH-CH2-NHBoc)，7.10-7.20(m，2H，NH和NH)，8.19(s，1H，H吡唑)，8.45(m，1H，NH)。
阶段D
反式-8-(氨基甲基)-2-(氨基甲酰基甲基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(35mg，0.068mmol)、二氯甲烷(3mL)、三氟乙酸(1mL)制备期望的白色冻干粉状的钠和三氟乙酸盐(34mg，0.054mmol，80％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝390
实施例8：反式8-(氨基甲基)-2-(二甲基氨基磺酰胺基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-(二甲基氨基磺酰胺基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在氮气下，将在实施例1的阶段B获得的衍生物(200mg，0.500mmol)在无水四氢呋喃(7mL)中形成溶液。在-5℃，一次性加入60％氢化钠油溶液(30mg，0.751mmol)。15分钟后，逐滴加入二甲基磺酰胺基氯(160μL，1.502mmol)。将混合物的温度逐步回复到环境温度。搅拌3小时后，将介质水解并用二氯甲烷(10mL)萃取。水相用二氯甲烷(10mL)萃取。组合的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，并减压浓缩，从而在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 100/0至98/2)后，制备期望的白色粉末状的衍生物(98mg，0.193mmol，39％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝507
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，2.91(s，6H，N(CH 3 )2)，3.09(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.32-3.44，3.49-3.59(m，2H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.75(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.96(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.63(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.95(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.12(宽峰，1H，NH)，7.36-7.55(m，5H，Ph)，7.78(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[2-(二甲基氨基磺酰胺基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(90mg，0.178mmol)、二甲基甲酰胺(0.26mL)、二氯甲烷(0.79mL)和50％水润湿的10％钯碳(57mg，0.027mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.59mL)和吡啶/三氧化硫复合物(57mg，0.356mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 100/0至80/20)后，制备期望的衍生物(39mg，0.067mmol，38％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝495
1H NMR(300MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.46(s，9H，C(CH 3 )3)，2.91(s，6H，N(CH 3 )2)，3.30-3.59(m，5H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH-N)，4.60(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.92(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.04(m，2H，Py)，8.14(s，1H，H吡唑)，8.57(m，1H，Py)，8.84(m，2H，Py)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(二甲基氨基磺酰胺基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的沉积在少量甲醇中的盐(35mg，0.061mmol)、DOWEX 50WX8树脂(9g)和2N纯碱(19mL)，在用水洗脱并冻干后，制备期望的粉色粉末状的钠盐(31mg，0.060mmol，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝495
1H NMR(300MHz，MeOH-d6)：δ(ppm)＝1.46(s，9H，C(CH 3 )3)，2.90(s，6H，C(CH 3 )2)，3.30-3.53(m，5H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH-N)，4.59(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.92(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.14(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式[[8-(氨基甲基)-2-(二甲基氨基磺酰胺基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(30mg，0.058mmol)、二氯甲烷(0.8mL)、三氟乙酸(1.6mL)的二氯甲烷(1.6mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(27mg，0.051mmol，88％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝396
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝2.86(s，6H，C(CH 3 )2)，3.33-3.45(m，5H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH-N)，4.71(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.85(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.10(宽峰，3H，NH 3 +)8.34(s，1H，H吡唑)。
实施例9：反式[[8-(氨基甲基)-1-(甲脒基)-4，8-二氢-6-氧代-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[1-[叔丁氧基羰基氨基-(叔丁氧基羰基亚氨基)-甲基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
和
1，1-二甲基乙基反式[[2-[叔丁氧基羰基氨基-(叔丁氧基羰基亚氨基)-甲基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在氮气下，将在实施例1的阶段B获得的衍生物(300mg，0.751mmol)放在二氯甲烷(1.25mL)中形成溶液。加入三乙基胺(523μL，3.76mmol)和N，N′-二(叔丁氧基羰基)硫脲(415mg，1.50mmol)，随后加入氯化汞(408mg，1.50mmol)。在环境温度下搅拌20小时后，加入三乙基胺(261μL，1.88mmol)和N，N′-二(叔丁氧基羰基)硫脲(208mg，0.751mmol)，随后加入氯化汞(204mg，0.751mmol)。在环境温度下总计搅拌44小时后，将介质在0.45μm膜上过滤，用二氯甲烷(10mL)漂洗，并将滤液真空浓缩。将残留物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/乙酸乙酯以5％从100/0至85/15)，从而制备期望的米色固体状的N1-取代的衍生物(110mg，0.171mmol，23％)和期望的米色固体状的N2-取代的衍生物(137mg，0.213mmol，28％)。
N1-取代的衍生物：
MS(ES+)m/z[M+H]+＝642
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.44(s，9H，C(CH 3 )3)，1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，1.55(s，9H，C(CH 3 )3)，3.35(m，2H，N-CH 2 -CH-N)，3.68(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.83(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.93(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.92(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.02(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，5.38(宽峰，1H，NH)，7.41-7.44(多重峰，5H，Ph)，7.48(s，1H，H吡唑)，8.93(宽峰，1H，NH)。
N2-取代的衍生物：
MS(ES+)m/z[M+H]+＝642
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，1.56(s，18H，2xC(CH 3 )3)，3.07(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.28(m，1H，CH-CH 2-NHBoc)，3.32(dd，1H，N-CH 2-CH-N)，3.86(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.90(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.62(m，1H，CH-CH2-NBoc)，4.92(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.19(宽峰，1H，NH)，7.41-7.44(多重峰，5H，Ph)，8.18(s，1H，H吡唑)，8.70(宽峰，1H，NH)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[1-[叔丁氧基羰基氨基-(叔丁氧基羰基亚氨基)-甲基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的N1-取代的衍生物(110mg，0.171mmol)、二甲基甲酰胺(0.49mL)、二氯甲烷(1.47mL)和50％水润湿的10％钯碳(55mg，0.026mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.8mL)和吡啶/三氧化硫复合物(55mg，0.343mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至85/15)后，制备期望的米色固体状的衍生物(19mg，0.026mmol，16％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝632
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.50，1.59(s，27H，3xC(CH 3 )3)，3.51-3.57(m，3H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc)，3.96(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，4.92(信号H2O+N-CH2-CH-N)，(dd，1H，CH-CH2-NHBoc)，7.83(s，1H，H吡唑)。
阶段C
反式-8-(氨基甲基)-1-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(19mg，0.027mmol)、DOWEX 50WX8树脂(2.3g)和2N纯碱(12mL)制备期望的钠盐(17mg，0.027mmol，100％)。
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用该钠盐(17mg，0.027mmol)、二氯甲烷(0.5mL)、三氟乙酸(1mL)的二氯甲烷(1mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(10mg，0.014mmol，53％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝335
1H NMR(400MHz，D2O)以2个构象异构体形式：δ(ppm)＝3.40-3.50，3.54-3.63(m，4H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NH3 +)，4.82(m，1H，CH(B)-CH2-NH3 +)，4.93(d，1H，N-CH2-CH(B)-N)，4.99(d，1H，N-CH2-CH(A)-N)，5.26(m，1H，CH(A)-CH2-NH3 +)，7.74(s，1H，H(B)吡唑)，8.00(s，1H，H(A)吡唑)。
实施例10：反式8-(氨基甲基)-2-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲 基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-[叔丁氧基羰基氨基-(叔丁氧基羰基亚氨基)-甲基]-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在实施例9的阶段A中获得的N2-取代的衍生物(137mg，0.213mmol)、二甲基甲酰胺(0.61mL)，二氯甲烷(1.83mL)和50％水润湿的10％钯碳(55mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.9mL)和吡啶/三氧化硫复合物(68mg，0.429mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH以5％从100/0至85/15)后，制备期望的米色固体状的衍生物(33mg，0.046mmol，22％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝630
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.50，1.58(s，27H，C(CH 3 )3)，3,40-3.83(m，4H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NHBoc)，4.68(dd，1H，CH-CH2-NHBoc)，5.00(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.50(m，2H，Py)，7.92(m，1H，Py)，8.37(s，1H，H吡唑)，8.59(m，2H，Py)。
阶段B
反式8-(氨基甲基)-2-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(33mg，0.046mmol)、DOWEX 50WX8树脂(4g)和2N纯碱(20mL)制备期望的钠盐(30mg，0.046mmol，100％)。
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用钠盐(30mg，0.046mmol)、二氯甲烷(0.9mL)、三氟乙酸(1.7mL)的二氯甲烷(1.7mL)溶液制备期望的米色固体状的钠和三氟乙酸盐(24mg，0.046mmol，75％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝335
1H NMR(400MHz，D2O)：δ(ppm)＝3.42-3.53，3.69-3.76(m，4H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NH3 +)，4.90(m，1H，CH-CH2-NH3 +)，5.04(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.39(s，1H，H吡唑)。
实施例11.反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-2-(哌啶-4-羰基)-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
将N-boc-异六氢烟碱酸(0.137g，0.6mmol)在二异丙基乙基胺(0.297mL，1.8mmol)的存在下放入二甲基甲酰胺(3mL)中形成溶液，然后加入O-(1H-苯并三氮唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(0.211g，0.6mmol)，随后加入在实施例1的阶段B中获得的吡唑(239mg，0.6mmol)在二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液。在环境温度下保持搅拌1小时，然后将反应混合物用水(15mL)水解并用乙酸乙酯(30mL)萃取。有机相用水(15mL)洗涤5次，并用硫酸镁干燥，然后真空浓缩。将粗反应产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液环己烷/乙酸乙酯80/20然后70/30)，从而制备期望的油状的衍生物(0.219g，0.36mmol，60％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝611
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.47(s，9H，C(CH 3 )3)，1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，1.56-1.97(m，4H，C(O)CH-CH 2 -CH2-N)，2.81-2.97(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH 2 )，3.09(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.25-3.40(m，2H，N-CH 2 -CH-N，C(O)CH(CH2)-CH2)，3.63(m，1H，CH 2 -NHBoc)，3.89(m，1H，CH 2 -NHBoc)，4.01(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.09-4.23(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH 2 )，4.63-4.72(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.95(AB，2H，CH 2 -Ph)，5.11(宽峰，1H，NH)，7.32-7.50(m，5H，芳香性Hs)，7.44(s，1H，H吡唑)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段A获得的衍生物(0.214g，0.35mmol)、无水二甲基甲酰胺/CH2Cl2混合物1/3(2mL)和50％水润湿的10％钯碳(111mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(1mL)和吡啶/三氧化硫复合物(0.111mg，0.70mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 100/0至85/15)后，制备期望的无定形的衍生物(0.061g，0.090mmol，34％)。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.29(s，9H，C(CH 3 )3)，1.32(s，9H，C(CH 3 )3)，1.50(m，2H，C(O)CH-CH 2 -CH2)，1.80(m，2H，C(O)CH-CH 2 -CH2)，2.79(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH2)，3.20-3.46(m，4H，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH-N)，3.62(m，1H，C(O)CH-CH2)，3.95(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH2)，4.46(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.78(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.17(s，1H，H吡唑)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-羰基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(61mg，0.09mmol)、DOWEX 50WX8树脂(9.4g)和2N纯碱(50mL)制备期望的无定形的衍生物(55mg，0.088mmol，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝599
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.45(s，9H，C(CH 3 )3)，1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，1.53(m，2H，C(O)CH-CH 2 -CH2)，1.87(m，2H，C(O)CH-CH 2 -CH2)，2.91(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH2)，3.25-3.44(m，4H，CH-CH 2 -NHBoc，N-CH 2 -CH-N)，3.63(m，1H，C(O)CH-CH2)，3.92(m，2H，CH 2 -N(Boc)-CH2)，4.44(m，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.81(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.09(宽峰，1H，NH)，8.17(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式-8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-2-(哌啶-4-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用该钠盐(55mg，0.088mmol)、二氯甲烷(2.28mL)、三氟乙酸(1.14mL)的二氯甲烷(1.14mL)溶液制备期望的黄色无定形的钠和三氟乙酸盐(53mg，0.082mmol，93％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝398
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.66(m，2H，CH 2 -NH-CH2)，1.95(m，2H，CH 2 -NH-CH2)，2.44-2.62，2.85-3.00和3.17-3.42(m，9H，CH-CH 2 -NH3 +，N-CH 2 -CH-N，C(O)CH(CH2)-CH2和CH 2 -NH-CH 2 )，4.65(dd，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.77(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.78(s，1H，H吡唑)，8.00(宽峰，5H，NH3 +，NH2 +)。
实施例12：反式8-(氨基-甲基)-2-(3-氨基-3-羧基-丙基)-4，8-二氢-5-(磺酰 氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙 酸盐
阶段A
1，1-二甲基反式[[2-(3-叔丁氧基羰基-3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
将在实施例1的阶段B中获得的化合物(200mg，0.50mmol)在Boc-L-谷氨酸1-叔丁基酯(159mg，0.525mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(85mg，0.63mmol)的存在下放入无水二甲基甲酰胺(3mL)中形成溶液，然后，冷却至0℃后，加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(101mg，0.525mmol)。反应混合物在环境温度下搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释后，将混合物连续用10％酒石酸水溶液、饱和NaHCO3水溶液、H2O和饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤然后真空浓缩。通过在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液CH2Cl2/AcOEt 90/10)将由此获得的粗产物纯化，从而制备期望的产物(92mg，0.134，27％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝685
阶段B
1，1-二甲基反式[[2-(3-叔丁氧基羰基-3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(92mg，0.13mmol)、无水二甲基甲酰胺/CH2Cl2混合物1/3(0.8mL)和50％水润湿的10％钯碳(43mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(380μL)和吡啶/三氧化硫复合物(43mg，0.27mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液CH2Cl2/MeOH 90/10)后，制备期望的盐(28mg，0.037mmol，19％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝675
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.52(m，27H，3xC(CH 3 )3)，2.05(m，2H，C(O)CH 2 -CH2-CH-(N)CO2t-Bu)，2.25(m，2H，C(O)CH2-CH 2 -CH-(N)CO2t-Bu)，3.50(m，4H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NHBoc)，4.11(m，1H，C(O)CH2-CH2-CH-(N)CO2t-Bu)，4.62(dd，1H，CH-CH2-NHBoc)，5.05(d，1H，N-CH2-CH-N)，8.42(s，1H，H吡唑)。
阶段C
反式8-(氨基-甲基)-2-(3-氨基-3-羧基-丙基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(28mg，0.04mmol)、DOWEX 50WX8树脂(3.5g)和2N纯碱(17.5mL)制备期望的钠盐。
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(17mg，0.027mmol)、二氯甲烷(0.86mL)、三氟乙酸(0.86mL)的二氯甲烷溶液(0.86mL)制备期望的黄色树胶状的钠和三氟乙酸盐(27mg，0.049mmol，100％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝417
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝2.21-2.44(m，5H，C(O)CH 2 -CH2-CH-(N)CO2t-Bu，C(O)CH2-CH 2 -CH-(N)CO2t-Bu)，3.36-3.54(m，4H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NHBoc)，4.11(m，1H，C(O)CH2-CH2-CH-(N)CO2t-Bu)，4.82(dd，1H，CH-CH2-NHBoc)，4.98(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.79(s，1H，H吡唑)。
实施例13：反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡 唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
阶段A
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]氨基甲酸酯
在氮气下，将在实施例1的阶段B中获得的中间体氮化物(1.5g，4.6mmol)放入四氢呋喃(29mL)中形成溶液，然后将溶液冷却至0℃。加入三甲基膦(1M的四氢呋喃溶液，4.6mL，4.6mmol)。将溶液在环境温度下搅拌2小时，然后加入1，3-二-(Boc)-2-甲基-2-硫脲(1.34g，4.6mmol)。在环境温度下搅拌过夜后，加入水(0.83mL，46mmol)，然后将混合物在5℃保持16小时。将后者浓缩至干燥，然后通过在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液：环己烷/乙酸乙酯，梯度从80/20至0/100)来进行纯化，从而制备期望的产物(560mg，1.03mmol，22％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝542
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.48(s，9H，C(CH 3 )3)，1.54(s，9H，C(CH 3 )3)，3.10(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.36(dd，1H，N-CH 2 -CH-N，3.70-3.80(m，1H，CH-CH 2 -NH-C＝NBoc)，4.00(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.13-4.25(m，1H CH-CH 2 -NH-C＝NBoc)，4.68(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.93(AB，2H，CH 2 -Ph)，7.28-7.44(m，6H，H吡唑+Ph)，9.38(宽峰，1H，NH)，11.35(宽峰，1H，NH)。
阶段B
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[1-叔丁氧基氨基甲酸酯-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]氨基甲酸酯
在氮气下，将在前阶段获得的化合物(130mg，0.24mmol)放入二氯甲烷(12mL)中形成溶液。加入N，N-二甲基氨基吡啶(15mg，0.12mmol)，随后加入二叔丁基二碳酸酯(105mg，0.48mmol)。在环境温度下搅拌过夜，用10％酒石酸水溶液(10mL)将介质水解。搅拌10分钟后，分离相，将水相用二氯甲烷(10mL)萃取。将有机相收集，用水洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥并浓缩至干燥。将粗产物在硅胶柱(洗脱液：环己烷/乙酸乙酯，梯度80/20至0/100)上进行纯化，从而提供期望的产物(100mg，0.16mmol，65％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝642
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，1.46(s，9H，C(CH 3 )3)，1.54(s，9H，C(CH 3 )3)，3.14-3.36(m，2H，N-CH 2 -CH-N)，3.87-3.93(m，2H，CH-CH 2 -NH-C＝Nboc，N-CH2-CH-N)，4.16(m，1HCH-CH 2 -NH-C＝NBoc)，4.68(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.79(d，1H，CH 2 -Ph)，4.93(d，1H，CH 2 -Ph)，7.32-7.35(m，5H，Ph)，7.83(s，1H，H吡唑)，8.90(宽峰，1H，NH)，11.38(宽峰，1H，NH)。
阶段C
反式-8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(88mg 0.14mmol)、无水二甲基甲酰胺/CH2Cl2混合物1/3(0.8mL)和50％水润湿的10％钯碳(44mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.4mL)和吡啶/三氧化硫复合物(43mg，0.272mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液CH2Cl2/甲醇，梯度100/0至80/20)后，制备期望的化合物(55mg，0.077mmol，56％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝632
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的盐(50mg，0.07mmol)、DOWEX 50WX8树脂(3.5g)和2N纯碱(17.5mL)制备期望的白色冻干粉状的钠盐(42mg，0.064mmol，91％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝630
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用该钠盐(42mg，0.064mmol，91％)、二氯甲烷(3mL)、三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(2mL)溶液制备期望的米色粉末状的钠和三氟乙酸盐(40mg，0.058mmol，95％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝330
1H NMR(400MHz，D2O)：δ(ppm)＝3.43-370(m，5H，N-CH 2 -CH-N，CH-CH 2 -NH-C＝Nboc，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.92(d，1H，N-CH2-CH-N)，7.73(s，1H，H吡唑)。
19F NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝-74.17(s，CF3)。
实施例14：反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基 -7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
阶段A
6-(1，1-二甲基乙基)和7-甲基4，7-二氢-1-甲基-4-((苯基甲氧基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-6(5H)，7-二羧酸酯
在环境温度，在氮气并同时搅拌下，将在申请WO 02/100860(阶段C，实施例18)中描述的6-(1，1-二甲基乙基)和7-甲基(4，7-二氢-4-羟基-1-甲基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-6(5H)，7-二羧酸酯衍生物(10g，32.12mmol)悬浮在二氯甲烷(100mL)中。加入三乙基胺(14.30mL，10.28mmol)后，将悬浮液溶解。将甲基磺酰氯(11.4mL，96.36mmol)的二氯甲烷(12mL)溶液逐滴加入至冷却至-78℃的反应介质中。搅拌30分钟后，将醇完全转化成甲磺酸酯。
由O-苄基羟胺盐酸盐(25.4g，160.6mmol)新鲜制备O-苄基-羟胺的二氯甲烷溶液。将O-苄基羟胺盐酸盐溶解在二氯甲烷(100mL)和水(50mL)的混合物中。在0℃加入2N纯碱溶液(85mL，176.66mmol)。接触10分钟并沉淀后，将有机相用硫酸镁干燥45分钟，然后浓缩至一半的体积。在-78℃向以上制备的甲磺酸酯中逐滴加入该溶液历经1小时。将反应混合物搅拌同时使温度逐步回到环境温度。将介质通过加入水(200mL)来进行处理，并用二氯甲烷(100mL)稀释。搅拌并沉淀后，将水相用二氯甲烷萃取。将有机相用饱和NaCl溶液(200mL)洗涤，干燥，然后浓缩至干燥，从而在色谱法后制备白色无定形粉末的期望的衍生物(8.25g，21.2mmol，66％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝417
1H NMR(400MHz，CDCl3)：两种非对映异构体其一的描述(2个旋转异构体的形式)δ(ppm)＝1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，3.15(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.68/3.70(s，3H，CH3)，3.84(s，3H，CH3)，3.98(m，2H，N-CH 2 -CH-N)，4.6-4.8(多重峰，3H，NH-O-CH 2 -Ph和N-CH2-CH-N)，5.40/5.8(s，1H，CH-CO2Me)，7.22-7.31(多重峰，5H，Ph)，7.40(s，1H，H吡唑)。
阶段B
反式1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，5，6，8-四氢-4，7-亚甲基-1H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8(7H)羧酸甲酯
在环境温度下，将4N的HCl/二噁烷溶液(400mL)倒入至在前阶段获得的衍生物(21g，50.42mmol)的二噁烷(50mL)溶液中。将反应混合物搅拌30分钟。在搅拌下，将残余物倒入在水(100mL)与乙酸乙酯(500mL)的混合物中。在0℃加入20％浓缩的氨溶液(42mL)。连续搅拌30分钟。沉淀后，将水相用乙酸乙酯(2×300mL)反萃取，将水相用NaCl进行饱和后进行最后萃取。将有机相干燥然后浓缩。将获得的黄色油状的脱保护的哌啶中间体(15.7g，49.4mmol，98％)倒入乙腈(400mL)中。向冷却至0℃的该混合物中加入三乙基胺(21mL，151.2mmol)，然后历经30分钟逐滴倒入双光气(3.04mL，25.2mmol)。在环境温度下搅拌过夜后，将介质浓缩并放入在乙酸乙酯(500mL)中，并用10％酒石酸溶液(200mL)处理。将混合物搅拌并倾析。将有机相用10％酒石酸溶液(2×200mL)洗涤，用饱和NaCl溶液洗涤，然后干燥并减压浓缩。将获得的白色产物(15.3g，44.0mmol，89％)放入二氯甲烷(150mL)中。逐滴加入1，8-二偶氮杂双螺环[5.4.0]十一-7-烯(7.53mL，50.04mmol)。将混合物搅拌2小时，用水(200mL)处理，搅拌并倾析。将有机相用水(2×200mL)洗涤，然后饱和NaCl溶液(1×200mL)洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩至干燥，从而制备期望的白色固体状的衍生物(14.72g，37.4mmol，85％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝343
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝325(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.45(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.80(s，3H，CH3)，3.88(s，3H，CH3)，3.9(s，1H，N-CH2-CH-N)，4.7(d，1H，N-O-CH 2 -Ph)，5.02(d，1H，N-O-CH 2 -Ph)，5.22(s，1H，CH-CO2Me)，7.39-7.43(多重峰，6H，H吡唑+Ph)。
阶段C
反式4，8-二氢-8-(羟基甲基)-1-甲基-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
在氮气下并在搅拌下，将在前阶段获得的脲(5g，14.60mmol)的无水四氢呋喃(150mL)/甲醇(50mL)混合物的溶液冷却至-10℃。向反应介质中加入硼氢化锂(668mg，30.67mmol)。在-10℃搅拌2小时后，加入另外的1.2eq.的LiBH4。当冷却2小时后，将反应用10％NaH2PO4溶液处理。减压蒸发掉(200mbar，40℃)四氢呋喃和甲醇。将剩余的混合物放入乙酸乙酯(200mL)中，搅拌并倾析。将水相用乙酸乙酯(100mL)反萃取。将有机相用硫酸镁干燥，然后浓缩至干燥。将获得的淡黄色粉末在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液-乙酸乙酯)，从而制备期望的衍生物(3.2g，10.18mmol，64％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝315
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.16(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.48(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.71(s，3H，CH3)，3，81-3.91(多重峰，2H，CH 2 OH)，4.44(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.48(m，1H，CH-CH2OH)，4.88(m，2H，N-O-CH 2 -Ph)，5.20(m，1H，OH)，7.35-7.40(多重峰，6H，H吡唑+Ph)。
阶段D
反式4，8-二氢-1-甲基-8-[(甲基磺酰基)氧甲基)]-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
在环境温度，在氮气下并在搅拌下，将在前阶段获得的醇(2.76g，8.78mmol)放入二氯甲烷(100mL)中形成溶液。在冷却至0℃后，加入三乙基胺(1.83mL，13.17mmol)，然后逐滴加入甲基磺酰氯(1.61g，14.05mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液。在加入结束时，除去冰浴。在环境温度搅拌1小时后，在搅拌下，将反应介质用10％NaH2PO4溶液(80mL)处理。水相用二氯甲烷(50mL)反萃取。将有机相收集，干燥，然后减压浓缩，从而制备期望的衍生物(3.44g，8.78mmol，定量收率)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝393
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.23(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.26(s，3H，CH3)，3.45(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.76(s，3H，CH3)，4.52(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.58(dd，1H，CH-CH 2 -OMs)，4.66(dd，1H，CH-CH 2 -OMs)，4.88(m，3H，CH-CH2-Oms和N-O-CH 2 -Ph)，7.35-7.45(多重峰，6H，H吡唑+Ph)。
阶段E
反式8-(叠氮甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
在环境温度，在氮气下并在搅拌下，将叠氮钠(1.71g，26.3mmol)一次性加入至在实施例9的阶段D中获得的甲磺酰化衍生物(3.44g，8.78mmol)的二甲基甲酰胺(70mL)溶液中。将反应介质在65℃加热过夜，然后用10％NaH2PO4水溶液(50mL)处理。将水相用二氯甲烷(2×50mL)萃取。将有机相干燥，然后减压浓缩，从而制备3.96g期望的衍生物(3g，8.78mmol，100％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝340
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.20(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.48(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.66(dd，1H，CH-CH 2 -N3)，3.72(s，3H，CH3)，3.92(dd，1H，CH-CH 2 -N3)，4.50(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.76(dd，1H，CH-CH2-N3)，4.89(m，2H，N-O-CH 2 -Ph)，7.35-7.45(多重峰，6H，H吡唑+Ph)
阶段F
双-二(1，1-二甲基)反式[[[4，5，6，8-四氢-1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]氨基甲酸酯
在0℃，在氮气下，将三甲基膦(1M的四氢呋喃溶液，0.46mL，0.46mmol)逐滴加入至在前阶段获得的衍生物(150mg，0.44mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液。在环境温度搅拌3小时后，将1，3-二(叔丁氧基羰基)-2-甲基-2-硫脲(141mg，0.48mmol)加入至反应介质中。在环境温度搅拌过夜后，加入水(0.5mL)，并将介质减压浓缩，从而通过在硅胶柱上的色谱法(洗脱液环己烷/乙酸乙酯5/5)进行纯化后，制备浅黄色粉末的期望的产物(152mg，0.273mmol，61％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝556，[[M-(BOC)]+]＝456，[[M-(2BOC)]+]＝356
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.40(s，9H，C(CH 3 )3)，1.50(s，9H，C(CH 3 )3)，3.20(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.35(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.68(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.79(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.86(s，3H，CH 3 )，4.50(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.70(m，1H，CH-CH2-NH)，4.90(m，2H，CH 2 -Ph)，7.35-7.41(m，6H，Ph+H吡唑)，8.68(宽峰，1H，NH)。
阶段G
双-二(1，1-二甲基)反式[[[4，5，6，8-四氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
在氮气下，将10％钯碳(100mg)加入至在前阶段获得的化合物(142mg，0.255mmol)的甲醇(5mL)溶液。经过三次真空/氮气吹扫后，将反应介质在常压下氢化3小时。将甲醇真空浓缩，从而制备脱苄基化的中间体。
在吡啶/三氧化硫复合物(82mg，0.511mmol)的存在下，将脱苄基化的中间体放入吡啶(1mL)中。在环境温度搅拌过夜后，将介质真空浓缩。将粗反应产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/甲醇100/0至80/20)，从而制备期望的衍生物(62mg，0.11mmol，45％)。
MS(ES(+))：m/z[M+H]+＝546
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.42(s，9H，C(CH 3 )3)，1.51(s，9H，C(CH 3 )3)，3.28(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.36(d，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.70(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.80(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.87(s，3H，CH 3 )，4.68(m，2H，N-CH2-CH-N，CH-CH2-NH)，7.38(s，1H，H吡唑)，8.90(宽峰，1H，NH)。
阶段H
双-二(1，1-二甲基)反式[[[4，5，6，8-四氢-1-甲基-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(62mg，0.11mmol)、DOWEX 50WX8树脂(62g)和2N纯碱(300mL)制备期望的无定形粉末状的衍生物(57mg，0.11mmol，100％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝546
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.42(s，9H，C(CH 3 )3)，1.51(s，9H，C(CH 3 )3)，3.27-3.34(m，2H，N-CH 2 -CH-N)，3.70(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.80(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.87(s，3H，CH 3 )，4.68(m，2H，N-CH2-CH-N，CH-CH2-NH)，7.36(s，1H，H吡唑)，8.78(宽峰，1H，NH)，11.42(宽峰，1H，NH)。
阶段I
反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(57mg，0.11mmol)、二氯甲烷(7mL)、三氟乙酸(3mL)的二氯甲烷(3mL)溶液制备期望的钠和三氟乙酸盐(56mg，0.11mmol，100％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝344
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.28(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.42(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.55(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.69(m，1H，CH-CH 2 -NH)，3.78(s，3H，CH 3 )，4，69-4.72(m，2H，N-CH2-CH-N，CH-CH2-NH)，7，0-7.35(m，3H，NH3 +)，7.40(s，1H，H吡唑)，7.45(宽峰，1H，NH)。
实施例15：反式8-(胍基-甲基)-1-乙基氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[1-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯
和
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[2-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯
在氮气下，将在实施例13的阶段A中获得的衍生物(0.3g，0.55mmol)放入无水乙腈/四氢呋喃混合物8/2(10mL)的溶液中。将溶液用冰水浴冷却。然后逐滴加入乙基异氰酸酯(0.050mL，0.609mmol)。搅拌几分钟后，除去冰水浴。将反应混合物在环境温度搅拌过夜。加入水(0.3mL，0.017mmol)，随后加入乙醇(0.3mL)。将混合物搅拌30分钟，然后真空浓缩。将获得的粘稠混合物放入水(5mL)中，然后加入二氯甲烷(10mL)。经过彻底的搅拌和沉淀后，将水相用二氯甲烷萃取。将有机相组合，用饱和NaCl溶液洗涤，用硫酸镁干燥，并蒸发至干燥，从而制备米色固体。通过在硅胶柱上进行色谱法(15g，洗脱液CH2Cl2/AcOEt 100/0然后97/3)来纯化粗制固体，从而制备白色固体状的N1-取代的化合物(189mg，0.308mmol，55.7％)和白色固体状的N2-取代的化合物(71mg，0.116mmol，20.9％，N2)。
N1-取代的衍生物
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.29(t，3H，N-CH2-CH3)，1.50(s，9H，C(CH3)3)，1.53(s，9H，C(CH3)3)，3.31-3.47(m，4H，N-CH2-CH-N和N-CH2-CH3)，3.80-3.90(m，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.00(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.30-4.40(m，1H CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.87(AB，2H，N-O-CH2-Ph)，5.10-5.17(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，7.10(宽峰，1H，NH)，7.41-7.46(m，6H，H吡唑+Ph)，8.8(宽峰s，1H，NH)，11.40(s，1H，NH)。
N2-取代的衍生物
MS(ES(+)：m/z[M+H]+＝613
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.27(t，3H，N-CH2-CH3)，1.54(s，9H，C(CH3)3)，1.55(s，9H，C(CH3)3)，3.06(AB，1H，N-CH2-CH-N)，3.40(AB，1H，N-CH2-CH-N)，3.43-3.50(m，2H，N-CH2-CH3)，3.85-3.95(m，2H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，3.98(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.73(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.87-5.05(AB，2H，N-O-CH2-Ph)，7.20(宽峰，1H，NH)，7.42-7.45(m，5H O-CH2-Ph)，8.07(s，1H，H吡唑)，8.9(宽峰s，1H，NH)，11.50(s，1H，NH)。
阶段B
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[1-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的N1衍生物(150mg，0.245mmol)、二甲基甲酰胺(0.36mL)、二氯甲烷(1.1mL)和50％水润湿的10％钯碳(78.2mg，0.037mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.74mL)和吡啶/三氧化硫复合物(78mg，0.245mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(2g，洗脱梯度100/0、95/5、然后90/10)后，制备期望的白色固体状的衍生物(78mg，0.114mmol，46.7％)。
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝129(t，3H，N-CH2-CH 3 )，1.54(s，9H，C(CH 3 )3)；1.61(s，9H，C(CH 3 )3)；3.41-3.47(m，3H；，N-CH 2 -CH-N和N-CH 2 -CH3)；3.60(AB，1H，N-CH 2 -CH-N)；3.71(d，1H，N-CH2-CH-N)，3.82-3.83(dd，1H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)，4.40-4.44(dd，1HCH-CH2-NH-C＝NBoc)，5.01-5.04(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，7.75(s，1H，H吡唑)。
阶段C
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[1-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的沉积在水溶液中的盐(108mg，0.158mmol)、DOWEX 50WX8树脂(23g)和2N纯碱(120mL)制备期望的白色冻干粉状的钠盐(35mg，0.056mmol，35％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝601
1H NMR(400MHz，D2O)：δ(ppm)＝1.12(t，3H，N-CH2-CH 3 )，1.37(s，9H，C(CH 3 )3)，1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，3.30(m，2H，N-CH 2 -CH3)，3.52(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.70-3.76(m，2H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.27-4.33(dd，1H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)，4.89(s，1H，N-CH2-CH-N))，4.96-5.10(m，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，7.70(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式8-(胍基-甲基)-1-乙基氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(35mg，0.055mmol)、二氯甲烷(4mL)、三氟乙酸(2mL)制备期望的棕色固体状的产物(22mg，33mmol，61％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝401
1H NMR(400MHz，DMSO-d6+1滴D2O)：δ(ppm)＝1.1-1.2(m，3H，N-CH2-CH 3 )，3.2-3.4(m，2H，N-CH 2 -CH3)，3.5-4.00(m，4H，CH-CH2-NH-C＝N和N-CH 2 -CH-N)，4.63-4.70(m，1H，N-CH2-CH-N)，4.8(s，1H，CH-CH2-NH-C＝N)，7.75/8.05(s，H吡唑)。
实施例16：反式8-(胍基-甲基)-2-乙基氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[2-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在实施例15的阶段A获得的N2衍生物(80mg，0.130mmol)、二甲基甲酰胺(0.19mL)、二氯甲烷(0.76mL)和50％水润湿的10％钯碳(42mg，0.019mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝523)
用脱苄基化的中间体、吡啶(0.39mL)和吡啶/三氧化硫复合物(41.4mg，0.260mmol)，在硅胶柱上进行色谱法(2g，洗脱液CH2Cl2/MeOH100/0、95/5、90/10然后85/15)后，制备期望的米色固体状的产物(51mg，0.074mmol，57％)。
MS(ES(+)：m/z[M+H]+＝603，m/z[M+H-(Boc)]+＝503
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.26(t，3H，N-CH2-CH3)，1.54(s，9H，C(CH3)3)，1.61(s，9H，C(CH3)3)，3.43-3.47(m，2H，N-CH2-CH3)，3.52(AB，1H，N-CH2-CH-N)，3.66(AB，1H，N-CH2-CH-N)，3.82(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.09(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.77(dd，1H，N-CH2-CH-N)，5.00(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，8.31(s，1H，H吡唑)。
阶段B
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[2-乙基氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的沉积在水溶液中的盐(49mg，0.072mmol)、DOWEX 50WX8树脂(8g)和2N纯碱(50mL)制备期望的白色冻干粉状的钠盐(18mg，0.029mmol，40％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝601，)m/z[M-H-(Boc)]-＝501
1H NMR(400MHz，D2O)：δ(ppm)＝1.14(t，3H，N-CH2-CH 3 )，1.34(s，9H，C(CH 3 )3)，1.44(s，9H，C(CH3)3)，3.29-3.34(m，2H，N-CH 2 -CH3)，3.52-3.62(m，2H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，3.72-3.77(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.87-3.92(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，4.75(s，1H，N-CH2-CH-N)，5.00(m，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，8.22(s，1H，H吡唑)。
阶段C
反式8-(胍基-甲基)-2-乙基氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(18mg，0.028mmol)、二氯甲烷(3mL)、三氟乙酸(1.5mL)制备期望的产物。过滤通过将产物放入水中而获得的悬浮液以除去不溶部分。将滤液冷冻并冻干，从而制备期望的浅棕色固体的产物(12mg，0.018mmol，64.5％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝401
1H NMR(400MHz，DMSO-d6+1滴D2O)：δ(ppm)＝1.08-1.12(m，3H，N-CH2-CH 3 )，3.24-3.29(m，2H，N-CH 2 -CH3)；3.40(宽峰，2H，CH-CH2-NH-C＝N)；3.63(s，大的，DMSO-d6的H2O峰和N-CH 2 -CH-N的2H峰)；3.51-3.55(t，1H，N-CH2-CH-N)，)，4.84(s，1H，CH-CH2-NH-C＝N)，8.23(s，1H，H吡唑)。
实施例17：反式8-(胍基-甲基)-2-氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7- 亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
阶段A
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[2-氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯
在氮气下，将在实施例13的阶段A中获得的产物(0.114g，0.21mmol)放入无水乙腈/四氢呋喃混合物40/60(3.5mL)中形成溶液。将溶液用冰水浴冷却。然后逐滴加入三甲基硅烷异氰酸酯(0.030mL，0.21mmol)。搅拌50分钟后，除去冰水浴。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜，之后的HPLC分析表明仍存在82％的起始产物。然后将反应混合物再次冷却至0C，并加入三甲基硅烷异氰酸酯(0.030mL，0.21mmol)。30小时后，再加入三甲基硅烷异氰酸酯(0.030mL，0.21mmol)。将反应混合物用加入的水(1mL)和甲醇(1mL)处理。将混合物搅拌1小时，然后蒸发至干燥。将获得的固体放入5mL的水中，随后搅拌30分钟，观察到白色沉淀。将后者过滤并进行真空干燥，从而获得125mg的粗产物。
使用0.279mL(1.94mmol)的三甲基硅烷异氰酸酯(六天分4批加入)在150mg(0.277mmol)的底物上进行第二次反应，从而制备160mg的粗产物。
将两个粗批次组合，并通过在硅胶柱上进行色谱法(10g，洗脱液CH2Cl2/AcOEt 100/0、95/05、91/09然后85/15)来进行纯化，这可能分离出期望的白色固体状的N2-取代的化合物(72mg，0.123mmol，25％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.50(s，9H，C(CH 3 )3)，1.53(s，9H，C(CH 3 )3)，3.00(AB，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.40(AB，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.78-3.85(m，1H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)，3.99(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.00-408(m，1H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)，4.74(dd，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.87-5.05(AB，2H，N-O-CH 2-Ph)，5.25(宽峰，1H，NH)，7.30(s，1H，NH)，7.42-7.45(m，5H O-CH2-Ph)，8.07(s，1H，H吡唑)，9.00(宽峰s，1H，NH)，11.60(s，1H，NH)。
阶段B
双-二(1，1-二甲基乙基)反式-[[[2-氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的吡啶鎓盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(86mg，0.147mmol)、二甲基甲酰胺(0.21mL)、二氯甲烷(0.64mL)和50％水润湿的10％钯碳(47mg，0.022mmol)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、无水吡啶(0.4mL)和吡啶/三氧化硫复合物(47mg，0.294mmol，静置过夜后恢复的)，在硅胶柱上进行色谱法(2g，洗脱液CH2Cl2/MeOH 100/0、95/5然后90/10)后，制备期望的白色固体的产物(57mg，0.087mmol，59％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝573，)m/z[M-H-(Boc)]-＝473
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝150(s，9H，C(CH 3 )3)；162(s，9H，C(CH 3 )3)；3.49(AB，1H，N-CH 2 -CH-N)；3.69(AB，1H，N-CH 2 -CH-N)；3.98-4.02(m，2H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)；4.79(dd，1H，N-CH2-CH-N)，5.02(d，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)：8.34(s，1H，H吡唑)。
阶段C
双-二(1，1-二甲基乙基)反式[[[2-氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-甲脒基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段E中所述的进行，用在前阶段获得的沉积在少量水的溶液中的盐(57mg，0.087mmol)、DOWEX 50WX8树脂(10g)和2N纯碱(50mL)制备期望的白色冻干粉状的钠盐(24mg，0.04mmol，46％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝573
1H NMR(400MHz，D2O)：δ(ppm)＝1.36(s，9H，C(CH 3 )3)，1.43(s，9H，C(CH 3 )3)，3.56(AB，2H，N-CH 2 -CH-N)，3.85(d，2H，CH-CH 2-NH-C＝NBoc)，4.75(宽峰，1H，CH-CH2-NH-C＝NBoc)，4.95(s，1H，N-CH2-CH-N)，8.25(s，1H，H吡唑)。
阶段D
反式[[8-(胍基-甲基)-2-氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮
按照如实施例1的阶段F中所述的进行，用在前阶段获得的钠盐(24mg，0.04mmol)、二氯甲烷(3mL)、三氟乙酸(3mL)制备期望的产物。真空蒸发后，将产物放入水中。将获得的悬浮液过滤。将固体回收并真空干燥过夜，从而制备期望的米色固体状的化合物(4.9mg，0.013mmol，32.5％)。
MS(ES(-))：m/z[M-H]-＝473
1H NMR(400MHz，DMSO-d6+1滴D2O)：δ(ppm)＝3.40(m，2H，N-CH 2 -CH-N)，3.60(m，2H，CH-CH 2-NH-C＝N)，4.52(宽峰，1H，CH-CH2-NH-C＝N)，4.84(s，1H，N-CH2-CH-N)，8.23(s，1H，H吡唑)。
实施例18：反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(羧基-二氟-甲氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在环境温度，在氮气并同时搅拌下，将三甲基膦(3.4mL，3.4mmol)的摩尔溶液逐滴加入至在实施例14的阶段E中获得的叠氮化物(1.15g，3.39mmol)的甲苯(5mL)和四氢呋喃(5mL)混合物的溶液中。搅拌3小时后，将BOC-ON(0.92g，3.6mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液逐滴加入至冷却至0℃的反应介质中。在环境温度下，连续搅拌3小时。将反应介质用10％NaHCO3水溶液(50mL)处理。将水相用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机相干燥，然后减压浓缩，从而制备油(2.2g)。将粗产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱液环己烷/乙酸乙酯5/5)，从而制备期望的产物(0.62g，1.49mmol，70％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝414
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.39(s，9H，C(CH 3 )3)，3.05(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.19(dd，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.27(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.72(s，3H，CH3)，3.78(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.88(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.48(dd，1H，CHCH2NHBoc)，4.79(d，1H，N-O-CH 2 -Ph)，4.92(d，1H，N-O-CH 2 -Ph)，5.18(m，1H，NH)，7.35(s，1H，H吡唑)，7.37-7.48(多重峰，5H，Ph)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(乙氧基羰基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
将10％钯碳(70mg)加入至在实施例10的阶段A中获得的胺(300mg，0.72mmol)的甲醇(5mL)溶液。将反应介质氢化3小时。然后减压蒸发掉甲醇从而制备脱苄基化的中间体。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝324
在氮气下，在碳酸钾(0.25g，1.81mmol)和二氟溴乙酸乙酯(0.373mL，2.89mmol)的存在下，将脱苄基化的中间体(234mg，0.72mmol)放入无水二甲基甲酰胺(1.6mL)中。将反应在环境温度下搅拌过夜。然后将反应混合物过滤并用乙酸乙酯漂洗。将滤液用水洗涤三次，将有机相用硫酸镁干燥，然后减压浓缩。将粗反应产物在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/甲醇100/0至95/5)，从而制备期望的油状的衍生物(185mg，0.42mmol，57％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝446
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ(ppm)＝1.37(t，3H，CH2-CH 3 )，1.60(s，9H，C(CH 3 )3)，3.24(m，1H，CH-CH 2 -NHBoc)，3.33(m，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.53(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.80-3.95(m，4H，CH3和CH-CH 2 -NHBoc)，4.37(m，2H，CH 2 -CH3)，4.60-4.72(m，2H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，5.16(宽峰，1H，NH)，7.48(s，1H，H吡唑)。
阶段C
1，1-二甲基乙基反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
在0℃，将氢氧化锂(0.017g，0.41mmol)分两批加入至在实施例10的阶段B中获得的酯(0.181g，0.41mmol)的四氢呋喃/水混合物(7.38/2.48mL)溶液中。在0℃连续搅拌1小时30分钟。将反应介质用10％酒石酸水溶液处理，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥，然后真空浓缩，从而制备期望的无定形状的酸(110mg，0.32mmol，79％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝418
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.53(s，9H，C(CH 3 )3)，3.42-3.58(m，3H，CH-CH 2 -NHBoc和N-CH 2 -CH-N)，3.76(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.90(s，3H，CH 3 )，4.70-4.80(m，2H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，7.54(s，1H，H吡唑)。
阶段D
1，1-二甲基乙基反式[[4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
在0℃将三乙基胺(0.037mL，0.26mmol)加入至在实施例10的阶段C中获得的酸(0.110mg，0.26mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液。连续搅拌1个小时，然后将反应混合物真空浓缩，从而制备相应的三乙基胺盐(0.135g，0.26mmol)。将16g的DOWEX 50WX8树脂在2N纯碱溶液(80mL)中的悬浮液搅拌1小时，然后倒在色谱柱上。将柱子用软化水洗脱直至达到中性pH值，然后用水/THF混合物90/10进行调节。将之前获得的三乙基胺盐(0.135g，0.26mmol)溶解在少量水中，沉积在柱上，然后用水/THF混合物90/10洗脱。将含有底物的馏分组合、冷冻然后冻干，从而制备期望的无定形状的钠盐(0.088g，0.20mmol，64％)。
MS(ES(-))：m/z[M-]＝415
1H NMR(400MHz，MeOH-d4)：δ(ppm)＝1.53(s，9H，C(CH 3 )3)，3.44-3.58(m，3H，CH-CH 2 -NHBoc和N-CH 2 -CH-N)，3.74(dd，1H，N-CH 2 -CH-N)，3.90(s，3H，CH 3 )，4.69-4.83(m，2H，N-CH2-CH-N和CH-CH2-NHBoc)，7.54(s，1H，H吡唑)。
阶段E
反式[[8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-6-氧代-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
在氮气下，将三氟乙酸(4.18mL)的二氯甲烷(4.18mL)溶液逐滴倒入至在实施例10的阶段D中获得的钠盐(66mg，0.15mmol)的二氯甲烷(2.11mL)溶液中，并冷却至0℃。在0℃，将反应在搅拌下保持3小时。将混合物蒸发至干燥，倒入丙酮中，研制并放在冰箱中过夜。将形成的沉淀过滤，用丙酮漂洗，并进行真空干燥，从而制备浅米色粉末状的钠和三氟乙酸盐(40mg，0.088mmol，59％)。
MS(ES(+))：m/z[M+]＝318
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.27-3.60(m，4H，CH-CH 2 -NH3 +和N-CH 2 -CH-N)，3.75(s，3H，CH 3 )，4.71(d，1H，N-CH2-CH-N)，4.82(t，1H，CH-CH2-NH3 +)，7.44(s，1H，H吡唑)，8.17(宽峰，3H，NH3 +)。
实施例19：反式8-(氨基甲基)-2-氨基-氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧 基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸 盐
阶段A
1，1-二甲基乙基反式[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(苯基甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯
按照如实施例1的阶段C中所述的进行，用在实施例1的阶段B中获得的衍生物(1g，2.5mmol))、二氯甲烷(131mL)、三乙基胺(698μL)、双光气(453μL)和N-Boc-肼(1.158g)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 100/0至95/5)后，制备期望的衍生物(654mg，1.17mmol，47％)。
MS(ES+)m/z[M+H]+＝558
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.40(s，9H，(C(CH3)3))，1.42(s，9H，(C(CH3)3))，3.23-3.41(m，4H，N-CH 2 -CH-N和NCH-CH 2 -NHBOC)，4.39(m，N-CH-CH2-NHBOC)，4.62(s，1H，N-CH2-CH-N)，4.91(m，2H，CH 2 Ph)，7.13(m，1H，NH)，7.35-7.43(m，5H，Ph)，8.30(s，1H，吡唑)，9.10(s，1H，NH)，10.22(s，1H，NH)。
阶段B
1，1-二甲基乙基反式[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-氨基甲酰基-4，5，6，8-四氢-6-氧代-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-8-基]甲基]-氨基甲酸酯的钠盐
按照如实施例1的阶段D中所述的进行，用在前阶段获得的衍生物(654mg，1.17mmol)、二甲基甲酰胺(3.3mL)、二氯甲烷(10mL)和50％水润湿的10％钯碳(262mg)制备期望的脱苄基化的中间体。
用脱苄基化的中间体、吡啶(4.5mL)和吡啶/三氧化硫复合物(373mg)，在硅胶柱上进行色谱法(洗脱梯度CH2Cl2/MeOH 80/20)后，制备期望的白色固体状的衍生物(43mg)。
将75g的DOWEX 50WX8树脂在2N纯碱溶液(375mL)中的悬浮液搅拌1小时，然后倒在色谱柱上。将柱子用软化水调节直至达到中性pH值。将获得的衍生物(431mg)溶解在H2O中，沉积在柱上，然后用水洗脱。将含有底物的馏分组合，冷冻并冻干，从而制备期望的白色粉末状的钠盐(362mg，0.63mmol，54％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝546
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝1.42(s，18H，(C(CH3)3)，3.16-3.60(m，4H，N-CH 2 -CH-N和N-CH-CH 2 -NHBOC)，4.38(t，1H，N-CH-CH2-NHBOC)，4.79(s，1H，N-CH2-CH-N)，7.14(m，1H，NH)，8.23(s，1H，吡唑)，9.17(s，1H，NH)，10.18(s，1H，NH)。
阶段C
反式8-(氨基甲基)-2-氨基-氨基甲酰基-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮的钠和三氟乙酸盐
在氮气下，将在阶段B中获得的化合物(362mg，0.635mmol)放在无水二氯甲烷(0.75mL)中形成悬浮液。然后逐滴加入三氟乙酸/二氯甲烷混合物1/1(0.944mL)，之后在环境温度持续进行反应3小时。蒸发至干燥后，将产物放入水中，冷冻然后冻干，从而制备期望的白色粉末状的产物(363mg，0.607mmol，96％)。
MS(ES+)m/z[M-H]-＝346
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)＝3.07-4.19(m，4H，N-CH 2 -CH-N和CH-CH 2 -NH2)，4.68(dd，1H，CH-CH2-NH3 +)，4.70(m，1H，N-CH2-CH-N)，8.15(宽峰s，3H，NH)，8.30(s，1H，H吡唑)。
药物组合物
制备用于注射的组合物，其含有：
-实施例1的化合物     500mg
-无菌水性赋形剂：    q.s.f.5cm3
本发明的化合物的药理学研究
体外活性，在液体培养基中的稀释方法：
将一系列试管制成其中分布相同量的无菌营养培养基，将待研究的增加量的产物分布在每个试管中，然后将每个试管用细菌株接种。在37℃的培养箱中培养24小时后，通过透射法进行评价生长抑制，这能够确定以μg/ml表示的最小抑制浓度(M.I.C.)。
因此，与申请WO 04/052891的实施例11和申请WO 02/100860的实施例18的产物相比较，用实施例1至19的产物进行试验。本申请的产物证明对铜绿假单胞菌具有非常好的活性，而对于对比产物，情况迥然不同。
本发明的产物和现有技术最接近的产物之间的对铜绿假单胞菌的活性的差异，根据产物的不同，其处于能够高达1000倍以上的活性水平。
对铜绿假单胞菌(1771野生型菌株)的活性
  分子 MIC(μg/mL)24h(P，aerug，1771)
  实施例1   0.12
  实施例2   0.5
  实施例3   1
  实施例4   8
  实施例5   0.5
  实施例6   4
  实施例7   1
  实施例9   0.5
  实施例10   0.5
  实施例11   0.25
  实施例12   0.5
  实施例13   1
  实施例14   1
  实施例15   ＞32
  实施例16   16
  实施例17   1
  实施例18   0.5
  实施例19   0.5
  实施例11专利申请WO 04/052891   ＞160
  实施例18专利申请WO 02/100860   ＞160

Claims (19)

1.通式(I)化合物，其可能的异构体形式或非对映异构体形式或混合物：
Figure FPA00001373052000011
其中：
R1表示氢原子或-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基、-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2、-(CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH基团，其中m等于1或2；
R2和R3一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在所述氮原子上被R4取代；
R4表示氢原子、(C1-C6)烷基或具有以下通式的链：
-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”
A表示C＝O、C＝NH或SO2基团；
R’表示氢原子或羧基；
R”表示氢原子或NH2、NH(C1-C6)烷基、N(C1-C6)烷基2、CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2，或具有5或6个顶点的饱和杂环，所述饱和杂环含有1或2个氮原子，并且如果合适还含有选自氧或硫的另一杂原子，所述饱和杂环通过氮原子或通过碳原子连接在所述链上并且任选被(C1-C6)烷基取代；
n、o和q表示0或1，并且p表示0至4的整数；
R5表示OSO3H或OCHFCO2H或OCF2CO2H；
应理解：
-当R4为氢、-(C1-C6)烷基、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH2、-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-NH(C1-C6)烷基或-(C＝O)n-(CH2)(0-5)-N(C1-C6)烷基2并且R5为OSO3H基团时，
或者当R4具有除R”定义中的杂环以外的所有R”值时，
R1不为氢、-(CH2)m-NH2、-(CH2)m-NH(C1-C6)烷基或-(CH2)m-N(C1-C6)烷基2；
-并且除了当R”为氢或CONH2、CONH(C1-C6)烷基、CON(C1-C6)烷基2或杂环时，n、o、p和q不能都等于0；
所述通式(I)化合物为游离形式、两性离子形式以及药物可接受的无机或有机碱和无机或有机酸的盐形式。
2.如权利要求1所述的通式(I)化合物，其中R2和R3一起形成吡唑基杂环。
3.如权利要求1或2所述的通式(I)化合物，其特征在于，R1表示-(CH2)m-NH2基团，m等于1。
4.如权利要求1或2所述的通式(I)化合物，其特征在于，R1表示-(CH2)m-NH-C(NH)NH2基团，m等于1。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的通式(I)化合物，其特征在于，R4表示权利要求1中所定义的具有通式-(A)n-(NH)o-(CH2)p-(CHR’)qR”的链。
6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的通式(I)化合物，其特征在于，R4表示具有通式-C(O)-NH-(CH2)p-(CHR’)qR”的链，其中R’、R”、p和q如在权利要求1中所定义。
7.如权利要求1至4中任一权利要求所述的通式(I)化合物，其特征在于，R4表示氢原子或(C1-C6)烷基并且R1表示-(CH2)m-NH-C(NH)NH2或-(CH2)m-NH-CH＝NH基团，其中m等于1。
8.如权利要求1所述的通式(I)化合物中的任一化合物，特别是以下名称的化合物，其可能的异构体形式或非对映异构体形式或混合物：
-反式8-(氨基甲基)-2-(2-氨基-乙基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(4-哌嗪-1-羰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-4，8-二氢-2-(2-二甲基氨基-乙基-氨基甲酰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(3-氨基-丙基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(氨基甲酰基-甲基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-1-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基甲基)-2-(甲脒基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-2-(哌啶-4-羰基)-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(3-氨基-3-羧基-丙基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(胍基-甲基)-2-氨基甲酰基-4，8-二氢--(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-4，8-二氢-1-甲基-5-(羧基-二氟-甲氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
-反式8-(氨基-甲基)-2-(氨基-氨基甲酰基)-4，8-二氢-5-(磺酰氧基)-4，7-亚甲基-7H-吡唑并[3，4-e][1，3]二氮杂卓-6(5H)-酮，
所述化合物为游离形式，两性离子形式和药物可接受的无机或有机碱和无机或有机酸的盐形式。
9.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，在碱的存在下，将通式(II)化合物用双光气进行处理，然后用通式(III)的胺进行处理，从而获得通式(IV)化合物，然后将羟基脱保护，并将获得的化合物通过络合的SO3的作用进行硫酸化反应，或者在碱的存在下将获得的化合物与通式Hal-CHF-CO2烷基或通式Hal-CF2-CO2烷基的试剂反应，然后对由此获得的烷基酯进行水解，其中Hal表示不为氟的卤原子以及烷基表示含有1至6个碳原子的烷基，
然后，如果合适，将获得的化合物按照适当的顺序进行一种或多种以下的反应：
-胺的脱保护，以及如果合适，存在的羧基官能团的脱保护，
-成盐作用，
-离子交换，
-非对映异构体的拆分或分离，
Figure FPA00001373052000041
其中R’1表示R1基团，其中如果合适，存在的氨基官能团是被保护的，R’2和R’3一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，并且P表示羟基的保护基；
H-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(III)
其中R’a和R”’分别表示R’和R”，其中如果合适，活性的羧基和氨基官能团是被保护的，并且p和q如权利要求1中所定义；
Figure FPA00001373052000051
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2和R”3一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(O)-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
10.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将权利要求9中所定义的通式(II)化合物用碱处理，然后用通式(V)的试剂处理，从而获得通式(IVa)化合物，然后将羟基脱保护，并继续进行权利要求9中所述的合成，
Hal-SO2-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(V)
其中Hal表示卤原子，并且R’a、R”’、p和q如权利要求9中所定义；
Figure FPA00001373052000061
其中R’1和P如权利要求8中所定义，并且R”2a和R”3a一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-SO2-NH-CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
11.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将权利要求9中所定义的通式(II)化合物，如果合适在碱的存在下，用通式(VI)的试剂处理，从而获得通式(IVb)化合物，然后继续进行权利要求9中所述的合成，
B-C(O)-(NH)o-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(VI)
其中B表示OH基团或卤原子，并且R’a、R”’、o、p和q如权利要求9中所定义，
Figure FPA00001373052000071
其中R’1和P如上文所定义，并且R”2b和R”3b一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(O)-(NH)o-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、o、p和q如上文所定义。
12.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将权利要求9中所定义的通式(II)化合物在碱的存在下用通式(VII)的试剂进行处理，从而获得通式(IVc)化合物，然后继续进行权利要求9中所述的合成，
S＝C(NHP’)2(VII)
其中P’表示氨基官能团的保护基，
Figure FPA00001373052000072
其中R’1和P如权利要求9中所定义，并且R”2c和R”3c一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-C(＝NH)-NHP’的链取代，其中P’如上文所定义。
13.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将权利要求9中所定义的通式(II)化合物用通式(VIII)的试剂处理，从而获得通式(IVd)化合物，然后继续进行权利要求9中所述的合成，
O＝C＝N-(CH2)p-(CHR’a)qR”’(VIII)
其中R’a、R”’、p和q如权利要求9中所定义，
Figure FPA00001373052000081
其中R’1和P如权利要求9中所定义，并且R”2d和R”3d一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环在氮原子上被通式-(CO)-NH-(CH2)p-(CHR’a)qR”’的链取代，其中R’a、R”’、p和q如上文所定义。
14.制备权利要求1中所定义的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将通式(II’)化合物用通式(IX)的试剂进行处理，从而获得通式(X)化合物，然后继续进行权利要求9中所述的合成，
Figure FPA00001373052000091
其中R”2e和R”3e一起形成具有5个顶点且含有1、2或3个氮原子的芳香性含氮杂环，所述含氮杂环任选被(C1-C6)烷基取代，m如权利要求1中所定义，并且P如权利要求9中所定义，
CH3-S-C(＝NP’)NHP’(IX)
其中P’如权利要求9中所定义，
其中R”2e、R”3e、m、P和P’如上文所定义。
15.制备权利要求1中所定义的R4表示CO-NH2或CO-NH(C1-C6)烷基的通式(I)化合物的方法，其特征在于，将权利要求9中所定义的通式(II)化合物用三甲基甲硅烷基异氰酸酯处理或用通式(C1-C6)烷基-N＝C＝O的异氰酸酯处理，从而获得相应的通式(IV)化合物，然后继续进行权利要求9中所述的合成。
16.权利要求9、10、11、12、13和14中所定义的通式(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc)、(IVd)和(X)化合物。
17.药剂，其为权利要求1至7中任一权利要求所定义的化合物，以及它们的药物可接受的酸和碱的盐。
18.药剂，其为权利要求8所定义的化合物。
19.药物组合物，其含有作为活性成分的至少一种权利要求17和18中任一权利要求所述的药剂。
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