CN102204964A - 用于防治代谢综合症的复方天然药物及其制备方法与药物用途 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种由中药车前草(P.asiaticaL.)的有效提取物和红豆杉(Taxusspp.)的水溶活性部位组成的天然药物复方。该复方具抗代谢综合症作用,同时具有极明显的降脂和降血糖活性,高效低毒,可用于防治2型糖尿病。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有显著抗代谢综合征作用的车前草复方药物-该天然药物复方的组方、制备方法以及药物用途。
背景技术
研究表明,糖尿病与代谢综合征(metabolic syndrome,MS)密切相关。代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是由于胰岛素抵抗(IR)引发的多种物质代谢异常的综合征,常包括高血糖、胰岛素抵抗、肥胖、血脂异常、高血压等多种组成因素。2005年4月,国际糖尿病联盟(InternationalDiabetes Federation,IDF)颁布了代谢综合征的定义(马中书,邱明才,代谢综合征发病机制研究进展医学与哲学(临床决策论坛版)2008,29(12):11-14.)。
随着社会经济的发展和生活方式的改变,代谢综合征已成为当前影响人类健康的最主要的非传染性疾病之一。目前,我国代谢综合征发病率>15%,患者超过2亿;而在美国,每4个成年人中至少有1人患MS(肖扬,周智广,代谢综合征的药物干预,中国实用内科杂志,2008,28(11):919-.)。
糖尿病对人类健康危害极大,其中绝大多数为2型糖尿病。如今,全世界糖尿病患者达1.9亿(2003年)以上,其中中国糖尿病患者总量已达近3500万人(2002年)[许樟荣,总装备部医学学报2007,9(1):46-49];糖尿病及其并发症已经对人类健康和国民经济造成很大的威胁。目前,糖尿病的主要治疗药物为口服降血糖化学合成药和胰岛素,但它们本身分别存在低血糖反应、乳酸中毒等严重副作用[王中孝,山西医科大学学报 2000,3(6):555-556]。新型高效、低毒的抗糖尿病新药创制仍然是紧迫的研发课题。
糖尿病与代谢综合征有着非常密切的关系,80%以上的2型糖尿病都伴有不同程度的肥胖或超重,是代谢综合征的中晚期表现。而代谢综合征中也有许多患者伴有糖尿病或糖调节异常(马中书,邱明才,代谢综合征发病机制研究进展医学与哲学(临床决策论坛版)2008,29(12):11-14.)。
研究发现,急性的游离脂肪酸(free fattyacid,FFA)水平升高可导致胰岛素的过度分泌,而长期的高FFA将导致胰岛β细胞分泌功能障碍及细胞凋亡增加和胰岛素抵抗,最终可引起血糖升高,导致糖尿病。
脂代谢紊乱与高血糖互为因果、互相影响,在糖尿病的发生、发展中起着重要的作用,2型糖尿病合并血脂紊乱的主要并发症是动脉粥样硬化,导致心脑血管并发症,使糖尿病病死率明显增加。因此,深入认识糖尿病与脂代谢紊乱的关系,有效地纠正血脂代谢紊乱为2型糖尿病的首要治疗之一(刘晓丽,荣海钦,血脂紊乱与2型糖尿病,医学综述,2008,14(16):2496-2498.)。
目前还没有公认的MS治疗方案,现行的推荐方案基本上是从预防和治疗各危险因素入手的。目前对血脂紊乱的认知和干预程度差距较大,存在调脂药物使用偏少,用药时间不足,血脂达标率低等情况(李茜祝之明倪银星等,代谢综合征多重危险因素干预的随访研究,中华医学杂志2005,85(21):1499-1450.)。
代谢综合征系多种危险因素聚集,需综合干预,代谢综合征综合干预应主要包括两部分:生活方式改变和药物治疗。目前对代谢综合征的处理主要参照糖尿病、血脂紊乱等单病治疗指南(祝之明,代谢综合征的临床特征与发病机制,第三军医大学学报2009,31(1):17-20.)。
因此,预防和治疗糖尿病,应从代谢综合征的思路出发,把调脂和降血 糖放在同等重要的位置,才能取得更好的效果。
本发明是一种由中药车前草(P.asiatica L.)的有效提取物和红豆杉(Taxus spp.)的水溶活性部位组成的天然药物复方。该复方具抗代谢综合征特色,同时具有极明显的降脂和降血糖活性,高效低毒,可用于防治2型糖尿病。
发明内容
本发明所述天然药物复方由车前草有效提取物与红豆杉的水溶活性部位组方而成,对其进行对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响和对蛋黄乳所致的高血脂模型的影响的药效实验,进行口服给药最大耐受试验。
本发明所述天然药物复方可同时极明显降低蛋黄乳所致的高血脂小鼠的血脂和四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖,毒性低,具抗代谢综合征(MS)作用,可用于防治2型糖尿病及其并发症。
本发明还提供上述天然药物复方与一种或多种辅助剂和/或赋型剂的药物组合物。所述药物组合物可以被制备成针剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖衣丸剂、溶液剂等药物剂型。
本发明进一步提供了上述天然药物复方用于制备具有抗代谢综合征的药物的用途。所述药物能明显降低蛋黄乳所致的高血脂小鼠的血脂和四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖,毒性低,可用于防治II型糖尿病及其并发症。
更具体地说,本发明所述车前草是车前科(Plantaginaceae)车前属(Plantago)植物,具有清热利尿、祛痰凉血、解毒之功效。将车前草用80%的乙醇提取,提取液减压浓缩到原体积的一半,放置后减压滤去不溶物,滤液减压浓缩、真空干燥得干燥浸膏,即为其有效提取物。
更具体地说,本发明所述红豆杉为人工栽培的红豆杉属植物。将红豆杉 全株粉碎成粗粉;用乙醇(或甲醇、丙酮)或它们的含水物等在室温至回流的温度下,优选在回流的温度下提取,所用溶剂的量优选为1∶8至12(重量/体积),优选1∶10(重量/体积),优选提取2-3次;提取液经减压浓缩得浸膏,将浸膏用乙酸乙酯(或氯仿、二氯甲烷等)/水两相萃取,所述萃取剂优选为1∶1至3(体积/体积)的有机溶剂/水;合并水层,减压浓缩至干,加去离子水(1∶10至20(重量/体积))溶解,滤过不溶物,滤液用柱层析分离,所述层析为纤维素柱层析、活性炭柱层析、大孔树脂柱层析(例如D101型等)、改性葡聚糖柱层析(例如Sephadex-LH-20等)等,经洗脱,收集含有红杉醇的流份,减压浓缩、静置、过滤得固形物,用乙醇(甲醇、丙酮等)的溶剂重结晶,干燥得其水溶活性部位(红杉醇含量达70%以上)。
更具体地说,本发明所述天然药物复方由车前草有效提取物与红豆杉的水溶活性部位组方而成,其比例为10∶1至5(重量/重量)。
本发明所述天然药物复方可与常规辅助剂和/或赋型剂混合,制备成各种剂型,用于预防或治疗。针剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖衣丸剂、溶液剂等都为可供选择的药物剂型。
胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖衣丸剂等剂型可以含有一种或多种常用赋型剂-填料和增容剂:如淀粉,微晶纤维等;粘合剂:如羧甲基纤维素,聚乙烯吡咯烷酮等;致湿剂:如甘油;崩解剂:如碳酸钙等;吸收剂:如高岭土等;润滑剂:如滑石粉等。
药用赋型剂可以是固体、半固体、液体等各种形态的,配方辅助剂可以是各种类型的。
溶液剂可以含有一般的溶剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂等,如水、乙醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸苄酯等。
胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖衣丸剂、溶液剂等剂型可以用已知的常规方法制备,可以将与一种或多种赋型剂混合,制备剂型。
附图说明
(其中:##P<0.01vs正常组;*P<0.05;**P<0.01vs模型组)
(其中:##P<0.01vs正常组;*P<0.05;**P<0.01vs模型组)
具体实施方式
以下将在实施例中对本发明进行更为详尽的说明。但应理解:这些实施例仅为说明之目的,而非用于限制本发明的范围。
实施例1:车前草有效提取物的制备:
将车前草5kg用80%的乙醇(1∶9(重量/体积)回流提取二次,合并提取液,减压浓缩到原体积的50%,静置过夜,滤去不溶物,滤液经减压浓缩和真空干燥得干浸膏,即有效提取物(收率7%)。
实施例2:红豆杉水溶活性部位的制备:
将50kg红豆杉粉碎成粗粉,加5倍体积90%乙醇回流提取三次,合并提取液,减压浓缩成稠状溶液;用1∶1(体积/体积)的乙酸乙酯/H2O两相萃取三次,合并水层,减压浓缩至干,加蒸馏水(1∶10(重量/体积))溶解,滤过不溶物,滤液上纤维素柱层析、以蒸馏水、含水丙酮(10%-80%)梯度洗脱,各洗脱液分别用PC法鉴别,收集合并含有红杉醇的洗脱液,用旋转蒸发仪减压浓缩至干,乙醇重结晶,抽滤得晶状粉末,于70℃下真空干燥,即水溶活性部位(红杉醇含量达70%以上),得率0.06%。
实施例3:胶囊剂的制备
处方:每粒0.2g,含66g实施例1中的车前草有效提取物和20g实施 例2中红豆杉水溶活性部位。
车前草有效提取物 66g
红豆杉水溶活性部位 20g
微晶纤维素 114g
1000粒
首先将辅料于研磨容器中,之后加入上述提取物和活性部位,研磨混合10-30分钟,至均匀止。将混匀的药粉,灌装于1号胶囊中,随机抽样每粒装量控制在0.2g。
实施例4:片剂的制备
实施例1中的车前草有效提取物66g和实施例2中红豆杉水溶活性部位20g,微晶纤维素112g,研磨混合10-30分钟,至均匀止;加入硬脂酸镁2g,充分混合;混合物用单冲压片机压成直径6mm,重300mg的片剂,每片含有效提取物和活性部位为129mg。
以下用实施例1和实施例2所制备的有效提取物和活性部位进行药
效学实验和最大耐受量实验:
药效学实验
一、复方对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
1.实验材料
1.1动物:清洁级雄性ICR小鼠,18-22g,由扬州大学比较医学中心提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0001。
2药物及试剂:
四氧嘧啶,美国sigma公司,Lot 37 H1381;葡萄糖测定试剂盒,上海荣盛生物技术有限公司,批号:20090612;盐酸二甲双胍片,上海医药集团有限责任公司信宜制药总厂,0.25g/片,批号:090529。
1.3仪器:
BS110S电子天平,北京赛多利斯天平有限公司;KUBOTA-5800离心机,KUBOTA Corporation;Multiskan Spectrum MSS 1500-320,Thermo ElectronCorporation。
2.实验方法
随机取出小鼠10只作为正常组,其余小鼠禁食14-16h后,尾静脉注射四氧嘧啶60mg/kg,注射后72h眼眶后静脉丛取血,分离血清,预测血糖,选空腹血糖>12mmol/L的小鼠50只,随机分为5组,其中4组分别按10ml/kg体重经口给予复方低剂量(JTP 30mg/kg+车前100mg/kg)、中剂量(JTP 60mg/kg+车前200mg/kg)、高剂量(JTP 120mg/kg+车前300mg/kg),二甲双胍200mg/kg,正常组和模型组经口给予等体积的0.2%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。每日灌胃给药一次,连续给药6天。各组给药前禁食3.5h,给药后再禁食1.5h,即所有小鼠禁食5h后,眼眶后静脉丛采血,分离血清,以葡萄糖氧化酶法测定血糖。
3.统计:实验数据以 表示,并用t检验统计表示组间差异。
4.结果
4.1复方对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
如图1所示,与正常组相比,四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖极明显升高(P<0.01)。与模型组相比,给药后6天,复方低剂量组、高剂量组和二甲双胍200mg/kg均极显著(P<0.01)降低糖尿病小鼠的空腹血糖;复方中剂量组显著(P<0.05)降低糖尿病小鼠的空腹血糖。
二、复方对蛋黄乳所致的高血脂模型的影响
1实验材料
1.1动物
雄性ICR小鼠,体重18-22g,由扬州大学比较医学中心提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0001。
1.2药物及试剂
辛伐他汀:北京双鹭药业股份有限公司,批号20090202;总胆固醇(TC)测定试剂盒:温州东瓯津玛生物科技有限公司,批号:2009120042;甘油三酯(TG)测定试剂盒:温州东瓯津玛生物科技有限公司,批号:2010010007。
1.3仪器
酶标仪Multiskan Spectrum MSS 1500-320,Thermo ElectronCorporation;KUBOTA 5800冷冻离心机,Kubota Corporation;BS110S电子天平,北京赛多利斯天平有限公司。
1.4实验方法
雄性小鼠60只,随机分为6组。其中3组分10ml/kg体重经口给予复方低剂量(JTP 30mg/kg+车前100mg/kg)、中剂量(JTP 60mg/kg+车前200mg/kg)、高剂量(JTP 120mg/kg+车前300mg/kg),另1组按10ml/kg体重别按经口给予辛伐他汀8mg/kg,连续给药9天,每天一次。正常组和模型组给予等体积的溶媒0.2%CMC-Na。末次给药后2h,模型组和药物组按20ml/kg体重腹腔注射65%的蛋黄乳,禁食过夜,自由饮水。给予蛋黄乳10h后各组再给相应药物一次。末次给药后2h,小鼠眼眶取血,分离血清,以试剂盒方法测定TC和TG。
1.5统计
实验数据以 表示,并用t检验统计表示组间差异。
结果
如图2所示,与正常组相比,小鼠蛋黄乳高脂血症模型组的血清TC和TG 极明显升高(P<0.01)。与模型组相比,复方低剂量组均极明显降低血清TC和TG(P<0.01),辛伐他汀8mg/kg和复方中剂量组均明显降低血清TC和TG(P<0.05)。可见,本发明天然药物复方对小鼠蛋黄乳高脂血症有明显的活性。
三、药效小结
本发明制备的天然药物复方,对降低小鼠蛋黄乳高脂血症模型组的血清TC和TG,低剂量组具极明显活性(P<0.01),中剂量组和阳性药辛伐他汀组均有明显活性(P<0.05)。可见,本发明天然药物复方对小鼠蛋黄乳高脂血症有明显的活性。
给药后6天,低剂量组、高剂量组和阳性药二甲双胍组均极显著(P<0.01)降低糖尿病小鼠的空腹血糖;中剂量组显著(P<0.05)降低糖尿病小鼠的空腹血糖。
口服给药最大耐受量实验
摘要:小鼠单次口服最大耐受量为18.6g/kg,部分小鼠出现自发反应减少,刺激反应减弱外,此后健康情况良好,无一死亡。
1.实验材料:
动物:雌雄ICR小鼠,体重18-22g,由扬州大学比较医学中心提供,合格证号:SCXK(苏)2007-0001。
2.实验方法
取小鼠20只空腹,雌雄各半,按复方浸膏18.6g/kg/40mL一次灌服,观察动物的反应,如有无活动下降,嗜睡、竖毛、拉稀、抽搐、死亡等现象,如无死亡,14天后处死,肉眼观察各脏器有无异样。
3.实验结果
小鼠20只中有4只出现自发反应轻度减少,4.5小时后恢复正常,此后动物健康情况良好、皮毛光泽、眼红明亮、活动度好、饮水饮食大便无明显异常。14天后处死小鼠,肉眼观察主要脏器无异常所见。
由此可见,小鼠单次口服复方的最大耐受量为18.6g/kg,按临床每日用量为780-1560mg/60kg换算,则相当临床用量71.5-143倍,故该药口服安全。
综上,本发明制备的天然药物复方具显著降血脂和降血糖活性,具抗代谢综合征的特色,高效低毒,优势明显,可用于防治2型糖尿病。
Claims (13)
1.一种由中药车前草(P.asiatica L.)的有效提取物和红豆杉(Taxusspp.)的水溶活性部位组成的天然药物复方。该复方具抗代谢综合征特色,同时具有极明显的降脂和降血糖活性,高效低毒,可用于防治2型糖尿病。
2.一种从车前草提取有效部位的方法,所述方法包括:用溶剂提取,减压浓缩到原来的50%体积,放置后减压滤去不溶物,滤液减压浓缩、真空干燥得干燥浸膏即为有效提取物。
3.一种从红豆杉(Taxus spp)中提取水溶活性部位的方法,所述方法包括:用溶剂提取,将浸膏经两相萃取,水层进行柱层析,收集、合并含有红杉醇的洗脱液,经减压浓缩、析晶、过滤、重结晶,得到水溶活性部位。
4.根据权利要求3的方法,其特征在于所述红豆杉是人工栽培的南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei(Lemee et Levl)Cheng et L.K.Fu)、等红豆杉属(Taxus spp.)植物。
5.根据权利要求2的方法,其特征在于提取所用的有机溶剂是乙醇、甲醇、和它们的含水物等。
6.根据权利要求3的方法,其特征在于两相萃取所用的有机溶剂是乙酸乙酯。
7.根据权利要求3的方法,其特征在于所述层析为纤维素柱层析,活性碳柱层析等;所用洗脱剂可以是含有水与丙酮、乙醇、甲醇的混合溶剂系统。
8.一种防治代谢综合征的天然药物复方,其特征在于含有权利要求1所述的提取物及活性部位,与一种或多种辅助剂和/或赋型剂混合。
9.根据权利要求8的天然药物复方,其特征在于其可以被制备成针剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、糖衣丸剂、溶液剂等药物剂型。
10.根据权利要求1的天然药物复方,具有抗代谢综合征的作用,用于制备治疗和预防糖尿病的药物的用途。
11.根据权利要求10的用途,其特征在于所述天然药物复方能同时极明显降低高血脂及糖尿病高血糖,而且毒性低。
12.根据权利要求10的用途,其特征在于所述天然药物复方可用于预防和治疗脂代谢紊乱、糖尿病及其相关心脑血管并发症等。
13.根据权利要求12的用途,其特征在于所述药物可用于预防和治疗2型糖尿病以及糖尿病性心脑血管并发症。
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