CN102204867A

CN102204867A - 一种具有降脂补钙功能的脂质体制备方法

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Publication number: CN102204867A
Application number: CN2011101325007A
Authority: CN
Inventors: 尚诚德
Original assignee: Individual
Current assignee: ANHUI FUNLAND BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2011-05-20
Filing date: 2011-05-20
Publication date: 2011-10-05
Anticipated expiration: 2031-05-20
Also published as: CN102204867B

Abstract

本发明公开了一种具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是在明确民间验方醋蛋液治病保健机理的基础上，联合应用乙醇注入法、独创的套管双喷技术和具有抹合封闭功能的均质装置，以强化卵磷脂的脂质体形成和对醋酸钙的包封，并利用醋酸钙梯度法通过醋酸对质子转移将脂质体包封的醋酸钙转化为离子态氢氧化钙，最后再将富含离子态氢氧化钙的脂质体加工制成口服液或冻干粉。利用本发明技术开发出的生物产品，相对于传统验方配置的醋蛋液，不仅更利于规模化生产和长期保存，而且更易于被人体吸收，大大提高人体对钙离子的利用，降低人体酸性，益于在人体内部形成利于健康的弱碱性环境，强化人体降脂功能，使其软化血管的靶向特征更突出，医疗保健功效更显著。

Description

一种具有降脂补钙功能的脂质体制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂质体制取工艺。具体地说一种具有靶向功能的降脂补钙生物制品的制取工艺。

背景技术

据统计，目前约有30-40％的人患有不同程度的超过边缘性标准的血脂代谢异常即高血脂。高血脂是引起人类动脉粥样硬化性疾病的主要因素，易导致高血压、糖尿病、冠心病、脑梗塞以及周围血管栓塞性疾病。高血脂还会形成肥胖，造成大量脂质蛋白游离在血浆中，引起氧化酸败，导致机体酸化。人体需要一个相对稳定的弱碱性内环境。当人体体质为弱碱性时，可以自主分解血液组织中过多的脂类，防治动脉粥样硬化性疾病发生，所以身体会健康充满活力；相反，当酸性物质在体内越积越多时，不仅使免疫功能下降，易滋生疾病，而且易疲乏无力，造成骨质钙的溶解游离流失，导致缺钙和骨质疏松。

民间流行一种叫醋蛋液的验方针对高血脂有一定的效果：把鲜鸡蛋(含壳)放在3倍体积的醋酸含量≥9g/100ml的食醋中浸泡1-2天，蛋壳溶解后破膜搅拌均质静止24小时后，每天取10ml用十倍的冷开水冲服，可以预防治疗高血脂及其并发的冠心病、高血压、糖尿病，还能补钙养颜益寿，增强免疫功能，并且无副作用。但由于这种验方治疗保健的机理不够明确，中医对其认识停留在醋能软化血管、醋泡鸡蛋能补钙的浅层水平上，对醋为何能软化血管，尤其是对醋与鸡蛋复方更能提高医疗保健效果的深层机理未能透彻研究，西医对醋蛋液的显著疗效和保健功能更是怀疑，所以一直没能得到临床应用。

醋蛋液之所以具有降脂补钙功能，与生鲜鸡蛋中所含的卵磷脂与醋酸钙的耦合有关，目前已知卵磷脂具有两大突出功能：

功能一是它在增进人类健康和预防治疗疾病方面具有以下六个方面作用：

1、预防动脉硬化症(减少患高血压、心肌梗塞、脑溢血的机会)。卵磷脂是胆汁的主要成分，具有乳化、溶解、分解、剥离油脂的作用，被称为血管的“清道夫”，可促进血液循环，改善血清脂质，清除过氧化物，降低血液中胆固醇及中性脂肪含量，减少脂肪在血管内壁的滞留时间，促进粥样硬化斑的消散，防止由胆固醇引起的血管内膜损伤。经常食用卵磷脂能显著降低高血脂、高胆固醇，从而预防动脉硬化，防止高血压；

2、保护肝脏预防肝病(预防肝硬化、肝炎、脂肪肝)。卵磷脂的解酒作用和它强大的乳化功能，可以充分保护肝细胞，同时卵磷脂是细胞膜的重要组成成分，及时补充卵磷脂还可以促进肝细胞的活化和再生，增强肝功能；

3、增强记忆，预防痴呆。卵磷脂是神经细胞的重要组成物质，脑部的神经传导物质(乙酰胆硷)减少是引起老年痴呆的主要原因，而“胆硷”是卵磷脂的基本成分，卵磷脂的充分供应将保证机体有足够的胆硷与体内的乙酰辅酶A结合为“乙酰胆硷”，增强脑细胞活性，恢复脑细胞记忆功能，有效地防止老年痴呆症的发生；

4、有效地化解结石。体内过多的胆固醇会发生沉淀，形成结石。胆汁中的重要成分是卵磷脂，可分解、溶解消化多余的胆固醇，胆汁中的卵磷脂不足会导致结石发生。经常摄补卵磷脂可以防止结石形成，并对已形成的结石起到化解作用；

5、改善糖尿病症状。卵磷脂不足会使胰脏机能下降，无法分泌充分的胰岛素，及时补充卵磷脂，能改善糖尿病症状；

6、可养颜滋润皮肤。胆固醇在体内过多淤积，会诱发产生毒素和雀斑，卵磷脂能通过分解体内过多的胆固醇，减少毒素的分泌，消除雀斑。卵磷脂还具有良好的亲水性和载体功能，及时补充卵磷脂，能为皮肤提供充足的水分，使皮肤变得光滑柔润。

功能二是它能够成为一种既易降解又具靶向性的良好载体。因为卵磷脂具有典型的亲水亲油两性，在一定条件下可形成类似生物膜双分子层结构的脂质体，这种脂质体能将一些人体不能直接吸收的许多药物、营养物质包封起来，跨越人体屏障直接输送给人类机体需要的组织细胞，促进营养的摄取及利用，它又是生物膜的组成成分，很容易代谢，因而脂质体既具有靶向性又具有生物降解性和生物相容性。

研究发现醋蛋液之所以具有降脂补钙功能，除与蛋黄中富含卵磷脂有关外，还与醋酸钙同卵磷脂脂质体的耦合产物有直接关系。蛋黄中富含卵磷脂和甘油三酯，甘油三酯在酸性条件下能缓慢水解出脂肪酸，卵磷脂虽不溶于水，却能溶解于脂肪酸。鸡蛋在醋液中浸泡一定时间并搅拌均质，会发生五个方面变化：一是醋与蛋壳反应生成醋酸钙；二是蛋黄中的甘油三酯在酸性条件下能缓慢水解出脂肪酸；三是蛋黄中的卵磷脂溶于脂肪酸成为油相液体；四是卵磷脂的脂肪酸油相溶液在醋酸、醋酸钙的水性溶液中振动搅拌，可产生一些内部包含醋酸、醋酸钙的脂质体；五是包封醋酸、醋酸钙的脂质体由于醋酸的跨膜运动产生的醋酸钙浓度梯度(内部的浓度高于外部)，使得大量质子从脂质体内部转运到外部产生pH梯度，让离子态的氢氧化钙不断聚集并被包封在脂质体内部。这种内部富含醋酸钙和离子态氢氧化钙的脂质体被人食用后，非常容易被人体吸收，脂质体进入人体后作为高纯度的卵磷脂，它具有良好的降脂解毒保健功能，同时它包封载配的氢氧化钙以及醋酸钙引起的醋酸跨膜转移质子都能增加人体中钙离子的吸收，并与血管中的酸性物质以及酯类物质反应，减少酯类物质在血管等组织中的停留和存在，降低人体酸性，维护人体弱碱性健康环境。但卵磷脂及其脂质体也有其缺陷，就是它不耐高温，超过80℃，卵磷脂的有效成分就会被破坏，比较适宜的温度在30-65℃之间。温度过高卵磷脂不能形成脂质体，不能形成脂质体就难以发挥载体作用，所以卵磷脂不能高温加工。要发挥蛋黄中的卵磷脂治疗保健功能，鸡蛋宜生鲜食用，忌和热食、热水混合，这是熟鸡蛋降脂保健功能不佳的原因。

对于食醋的认识，许多人只知道它是一种弱酸，对人体是一种碱性物质，能够软化血管，却很少人知道它为何能软化血管，为何说它是碱性物质。众所周知人体内环境生物膜对物质的转运分主动和被动两种，主动转运是生物膜逆着浓度梯度上升方向将物质主动转运过膜的，它是需要能量的驱动。被动转运是生物膜沿着浓度梯度下降方向将物质转运过膜的，不需要能量的支持。例如正常时组织膜内K⁺浓度约为膜外的30倍，膜外Na⁺浓度约为膜内的12倍，就是通过主动转运，形成和保持了Na⁺和K⁺在膜两侧的特殊分布。研究发现当人通过进食摄取醋液时，人体内环境中醋酸根、H⁺浓度虽然大大低于胃液中醋酸根、H⁺浓度，但胃液中醋酸根、H⁺却不能直接被小肠吸收，其原因同Na⁺在细胞膜内外存在浓度差一样，人体为了保持组织内环境弱碱性生理需要，内环境生物膜具有把组织内的醋酸根以醋酸分子形式主动转运到组织外的特性，从而实现把质子的(H⁺)从内环境向外转运，使人体内环境中OH^-浓度略高呈弱碱性。人体内环境如果不及时补充醋酸根，这种通过醋酸根对质子的主动转运就无法实现，人体内弱碱性环境难以维持，这种弱碱性环境就会被打破，导致人体不断酸化，最终影响人体健康。但人体并不能直接通过吸收醋酸来补充醋酸根，研究发现人体不仅不能直接吸收醋液，而且诸如醋酸钙、醋酸钾一类的醋酸盐或碱等益于人类健康的物质，不借助特定的载体也难于被人体小肠吸收进入人体内环境。其原因是由于人体对药物、营养等物质的吸收是有选择性的，像K⁺、脂肪、蛋白、氨基酸、卵磷脂及卵磷脂形成的脂质体等被选择的物质可直接进入人体组织，而Ca⁺、OH^-、H⁺、醋酸根AC^-等未被选择吸收的物质，如果没有载体辅助，受人体屏障影响，都不能进入人体组织。科学研究及实践均已证明卵磷脂形成的脂质体是人体最好的物质转运载体，人体可以通过载体向内环境转运醋酸根、Ca⁺、OH^-等有益物质，这对促进人体健康发展起着非常巨大的作用。根据脂质体醋酸钙梯度法原理，醋酸的渗透参数(6.6×10-4cm·s^-1)比Ca²⁺(2.5×10-11cm·s^-1)大7个数量级，醋酸分子能穿越脂质体双分子膜参与质子转运，很少留在脂质体内部，醋酸根从脂质体内向外转运时，是与质子结合成醋酸分子，利用醋酸跨膜运动把质子不断地从脂质体中转移出来，让Ca²⁺和OH^-滞留在脂质体内部，使卵磷脂脂质体内部包封的醋酸钙更多的转化为弱碱性物质——离子态氢氧化钙，这种包封有醋酸钙和离子态氢氧化钙弱碱性的脂质体，易于躲避人体屏障被人体吸收，使人体内环境中醋酸根、Ca⁺、OH^-等有益物质得到及时补充，从而提高人体对钙离子吸收利用，降低人体酸性，在人体内部形成利于健康的弱碱性环境，使其软化血管的靶向特征更突出。

当人体食用摄入醋液时，由于缺乏卵磷脂脂质体和钙离子的辅助作用，不能产生醋酸钙梯度反应，无法直接被人体吸收利用，所以直接饮用食醋降脂的效果并不明显、也不能改变人体内环境酸碱度。

已有的民间验方“醋蛋液”工艺缺陷，存在着以下几方面突出问题：

1、口味不佳，尤其是无效成分蛋清混入释放的腥臭味让很多人不能接受；

2、产品形式单一，缺乏消毒灭菌措施，不能长期保存，易腐败变质影响效果；

3、无法有效地控制卵磷脂转化成脂质体，而且转化率较低；

4、脂质体对醋酸钙和离子态氢氧化钙的包封率更低，功能成分效果不能最大化；

5、酸度过大，易刺激胃肠，不宜于胃病人群服用。

发明内容

本发明是为避免上述现有技术所存在的不足之处，提供一种具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，以期更好地发挥醋蛋液验方特有的预防治疗动脉硬化症，包括高血压、心肌梗塞和脑溢血，保护肝脏预防肝病、增强记忆，预防老年痴呆症、有效化解结石、改善糖尿病症状、可美容养颜滋润皮肤等治疗保健功能，并保持产品无副作用的特性。

本发明为解决技术问题采用如下技术方案：

本发明具有降脂补钙功能的脂质体制备方法的特点是按如下步骤进行：

a、利用套管双喷装置将油相物质和水相物质按2～3∶1的质量比喷入盛有水相物质的容器中，在容器内的水相物质中形成射流；同时使用均质装置对射流进行均质搅拌，形成粒径小于2mm、外部是油相物质、内部包封水相物质的脂质体液粒；所述油相物质为卵磷脂乙醇溶液；所述水相物质为醋酸钙与醋酸的混合液；

所述套管双喷装置是由内管(1)和外套管(2)构成的内外套管结构，其中外套管(2)为油相物质喷入通道，内管(1)为水相物质喷入通道。

b、将所述脂质体液粒在55℃下按照均质20分钟、静止3小时的工序循环3-5次，使所述脂质体液粒裂化为粒径不大于0.1mm，脂质体液粒的外部油相物质膜厚度不大于0.04mm，再静止4-5小时，获得内部包封有醋酸钙和离子态氢氧化钙的脂质体乙醇溶液与醋酸、醋酸钙的混悬液；

c、将经步骤b制得的混悬液在不高于70℃温度下减压蒸馏脱除80％以上乙醇后作为备用料，以所述备用料制成口服液或冻干粉生物制品。

本发明具有降脂补钙功能的脂质体制备方法的特点也在于：

所述步骤c中口服液的制备方法是：向所述备用料中加入包括有蜂蜜、β-环状糊精和食用除腥添加剂的调味辅料，所述调味辅料的加入量按质量比不大于5％，以常温、400-700Mpa的压力灭菌不少于5分钟，灭菌后即制成脂质体口服液；

所述冻干粉生物制品的制备方法是：用截留相对分子量为10000的透析袋分离脱除游离小分子醋酸钙和醋酸，然后按质量比加入10％的蜂蜜作为脂质体保护剂，再经不低于800Mpa的压力均质使卵磷脂脂质体粒径不大于35nm，再以不高于-50℃的低温和10Pa的准真空状态下脱除水和残留乙醇后制成脂质体冻干粉，最后按5-10kGy剂量用钴60辐照脂质体冻干粉灭菌后分装即成。

所述油相物质是按1∶5的质量比将纯化卵磷脂溶于无水乙醇制得。

所述水相物质的制备方法是：用蛋壳或富含碳酸钙的原料浸泡在浓度不小于9g/100ml的食醋中，所述原料与食醋的质量比为1∶20；或按氢氧化钙、无水醋酸和水的质量比为1∶2∶16用醋酸与氢氧化钙充分反应制得。

所述均质装置的结构设置为：在转轴上沿径向设置支架，在支架上固定有搅拌叶翅，搅拌叶翅与支架之间的夹角大小介于60°-80°，搅拌叶翅的前端向内折回形成尖角状，尖角状的搅拌叶翅内外两侧的前部表面均为光滑的不粘涂层，后部表面均为磨砂的防滑涂层。

与已有技术相比，本发明有益效果体现在：

1、本发明根据醋蛋液验方的治病保健机理，用无水乙醇代替醋蛋液的中间产物一脂肪酸作溶剂，更有利于卵磷脂溶解加工成油相物质和卵磷脂脂质体的形成；

2、本发明根据醋蛋液验方的治病保健机理，利用乙醇注入法能强化醋蛋液功能成份卵磷脂的脂质体形成，套管双喷装置和具有抹合封闭功能的均质装置的使用大大提高了醋酸钙与脂质体的耦合率和包封率，促进了脂质体的微粒化；利用醋酸钙梯度法，通过醋酸跨膜运动把质子不断地从脂质体中转移出来，让Ca²⁺和OH^-滞留在脂质体内部，使卵磷脂脂质体内部包封的醋酸钙更多的转化为弱碱性物质——离子态氢氧化钙，强化了脂质体的载体和靶向功能，更好地发挥了醋蛋液验方特有的预防治疗动脉硬化症(高血压、心肌梗塞、脑溢血)、保护肝脏预防肝病、增强记忆，预防老年痴呆症、有效地化解结石、改善糖尿病症状、可美容养颜滋润皮肤等治疗保健功能，保持了产品无副作用特性；

3、本发明加强了灭菌消毒，可有效防止腐败变质，便于保存，提高安全性。组方还降低了酸度，改善了口感，扩大了适用人群；

4、本发明制品的形式大大延长了产品保质期；

附图说明

图1为套管双喷装置示意图；

图2为具有抹合封闭功能的均质装置的外观效果图；

图3为具有抹合封闭功能的均质装置的截面示意图；

图中标号：1内管；2外套管；3搅拌叶翅；4支架；5不粘涂层；6防滑涂层。

具体实施方式

本实施例具有降脂补钙功能的脂质体是按如下步骤进行：

1、在大豆浓缩磷脂或蛋黄中加入丙酮脱油，加热至45℃搅拌充分后用离心机离心，取不溶沉淀物，加入无水乙醇进行溶解提取，在55℃条件下纯化90分钟，再剔除乙醇不溶物，在乙醇可溶物中加入三氧化二铝吸附脱色然后过滤，减压蒸馏滤液，蒸出乙醇，真空干燥得纯化卵磷脂，按1∶5的质量比将纯化卵磷脂溶于无水乙醇制得油相物质。

2、用蛋壳或富含碳酸钙的原料浸泡在浓度不小于9g/100ml的食醋中，原料与食醋的质量比为1∶20；或按氢氧化钙、无水醋酸和水的质量比为1∶2∶16用醋酸与氢氧化钙充分反应制成水相物质，水相物质是醋酸钙与醋酸的混合液。

3、利用套管双喷装置将油相物质和水相物质按2～3∶1的质量比喷入盛有水相物质的容器中，在容器内的水相物质中形成射流；同时使用均质装置对射流进行均质搅拌，形成粒径小于2mm、外部是油相物质、内部包封水相物质的脂质体液粒；因油相物质不溶于水相物质，在被均质搅拌切成的小段时，水相物质被均质装置的搅拌叶翅抹合封闭在油相物质内减少外溢，迅速形成一个个内含醋酸钙与醋酸混合液的卵磷脂乙醇溶液液粒，液粒再被搅拌器分割成更小的液粒。这些小液粒静置时，位居外表的油相物质中所含的卵磷脂由于基团极性不同，亲水基团会规则地排列在一侧，亲油基团会排列在另一侧，最后形成具有类似生物膜的双分子层结构的卵磷脂脂质体。

如图1所示，套管双喷装置是由内管1和外套管2构成的内外套管结构，以外套管2为油相物质喷入通道，外套管2的内径为2mm；以内管1为水相物质喷入通道，内管1的内径为1mm；

如图2和图3所示，均质装置是在转轴上沿径向设置支架4，在支架4上固定有搅拌叶翅3，搅拌叶翅3与支架4之间的夹角为60°-80°，搅拌叶翅3的前端向内折回形成尖角状，尖角状的搅拌叶翅内外两侧的前部表面均为光滑的不粘涂层5，后部表面均为磨砂的防滑涂层6。

4、将脂质体液粒在55℃下按照均质20分钟、静止3小时的工序循环3-5次，使脂质体液粒裂化为粒径不大于0.1mm，脂质体液粒的外部油相物质膜厚度不大于0.04mm，再静止4-5小时，根据醋酸钙梯度法原理，通过醋酸的跨膜运动产生的醋酸钙浓度梯度变化(内部的浓度高于外部)，使得大量质子从脂质体内部转运到外部产生pH梯度，让Ca²⁺和OH^-不断聚集并被包封在脂质体内部，从而得到内部包封有醋酸钙和离子态氢氧化钙的脂质体乙醇溶液与醋酸、醋酸钙的混悬液。

5、将经步骤4制得的混悬液加热在不高于70℃温度下减压蒸馏脱除80％以上乙醇后作为备用料，以备用料制成口服液或冻干粉生物制品；

a、口服液的制备：向备用料中加入包括有蜂蜜、β-环状糊精和食用除腥添加剂的调味辅料，调味辅料的加入量按质量比不大于5％，以常温、400-700Mpa的压力灭菌不少于5分钟，灭菌后即制成脂质体口服液；

b、冻干粉生物制品的制备：用截留相对分子量为10000的透析袋对脱除乙醇后的混悬液透析6小时，实现游离小分子醋酸钙、醋酸与脂质体的分离获得脂质体，透析滤液浓缩后可循环利用，然后按质量比加入10％的蜂蜜作为脂质体保护剂，再经不低于800Mpa的压力均质使卵磷脂脂质体粒径不大于35nm，再以不高于-50℃的低温和10Pa的准真空状态下脱除水和残留乙醇后制成脂质体冻干粉，最后按5-10kGy剂量用钴60辐照脂质体冻干粉灭菌后分装入胶囊，即得靶向型降脂补钙弱碱性脂质体胶囊。

Claims

1.一种具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是按如下步骤进行：

所述套管双喷装置是由内管(1)和外套管(2)构成的内外套管结构，其中外套管(2)为油相物质喷入通道，内管(1)为水相物质喷入通道；

2.根据权利要求1所述的具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是：

所述步骤c中口服液的制备方法是：向所述备用料中加入包括有蜂蜜、β-环状糊精和食用除腥添加剂的调味辅料，所述调味辅料的加入量按质量比不大于5％，在常温下400-700Mpa的压力灭菌不少于5分钟，灭菌后即制成脂质体口服液；

3.根据权利要求1所述的具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是：所述油相物质是按1∶5的质量比将纯化卵磷脂溶于无水乙醇制得。

4.根据权利要求1所述的具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是：所述水相物质的制备方法是：用蛋壳或富含碳酸钙的原料浸泡在浓度不小于9g/100ml的食醋中，所述原料与食醋的质量比为1∶20；或按氢氧化钙、无水醋酸和水的质量比为1∶2∶16用醋酸与氢氧化钙充分反应制得。

5.根据权利要求1所述的具有降脂补钙功能的脂质体制备方法，其特征是：所述均质装置的结构设置为：在转轴上沿径向设置支架(4)，在支架(4)上固定有搅拌叶翅(3)，搅拌叶翅(3)与支架(4)之间的夹角为60°-80°，搅拌叶翅(3)的前端向内折回形成尖角状，所述尖角状的搅拌叶翅内外两侧的前部表面均为光滑的不粘涂层(5)，后部表面均为磨砂的防滑涂层(6)。