CN102190615A - 一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，包括以下步骤：原料前处理：将桑叶原料粉碎；酶解；碱醇提取，冷却，过滤，得提取液；浓缩、酸溶、超滤，得超滤液；阳离子树脂除杂：将所得超滤液通过阳离子树脂后，氨醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；然后通过大孔吸附树脂，用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；将所得洗脱液进行浓缩后甲醇-饱和氨水混合溶剂，调节温度，冷却析晶，得结晶体，干燥，即成。本发明可从桑叶原料中提取分离出纯度达95%以上的产品，实现了1-脱氧可靠霉素的有效分离；对设备要求较低，操作安全；工艺简约，使用溶剂均可回收利用，降低了生产成本；使用溶剂低毒，环保安全。

Description

一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法
技术领域
本发明涉及中药有效成分分离技术领域，特指一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法。
背景技术
桑叶是桑科植物桑的干燥叶，味甘，性寒，在我国多有种植，可入药，具有清热、名目的功效。随着科学技术的发展，人们对桑叶的研究也越来越多，近年来学者们发现桑叶中有一种特殊的降血糖的物质，即1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin,DNJ），而我国以及世界的糖尿病患者日趋增多，所以桑叶中的1-脱氧野尻霉素越来越受到研究者们的青睐。
一般认为，1-脱氧野尻霉素降血糖的机理为：DNJ为a-糖苷酶的抑制剂，可阻碍其与二糖的结合，使得摄取的多糖、寡糖和双糖酶解成单糖的过程受阻，因而有着明显的降血糖的功效。
我国对桑叶中降血糖的研究方面起步较晚，而且真正应用于生产的工艺较少。CN101020655A公开的方法是以干燥桑叶为原料，通过醇液提取，加入酸酸化后，过阳离子交换树脂，再使用碱性醇液进行洗脱，经干燥制成桑叶提取物初品，过程简单，但提取物中1-脱氧野尻霉素的含量仅为10%左右。CN10134586A公开的方法是以桑叶初提物为原料（含DNJ40%以上），水溶后，直接过阳离子树脂，再使用洗脱液进行洗脱并分步收集，最后经多次重结晶得到纯度较高的产品，由于重结晶使用的混合溶剂不易分离回收利用，所以生产成本较高。CN101671294A公开的方法不仅分离得到了DNJ产品，同时还从桑叶中得到了另一产品桑叶黄酮，具体是为以干燥桑叶为原料，使用乙醇进行提取，离心过滤，加入絮凝剂絮凝沉淀；滤液依次通过大孔吸附树脂与阳离子树脂后进行喷雾，即得DNJ产品，此方法由于工艺较长，加上使用絮凝沉淀方式，损失较大，其最终的得率也较低，这是此方法最大的不足之处。
发明内容
本方面的目的提供一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其可以直接以干燥桑叶原料分离制备纯度95%以上的1-脱氧野尻霉素产品，且生产效率较高，成本较低。
本发明从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法包括以下步骤：
（1）原料前处理：将桑叶原料粉碎至10-30目；
（2）酶解：向粉碎后的桑叶原料中加入相当于其重量8-12倍量的水，升温至40-60℃后，加入相当于桑叶原料重量0.1%-0.6%的组合酶，保温酶解6-8h 后，过滤，得酶解原料；
（3）碱醇提取：向酶解原料中加入相当于桑叶原料重量5-8倍量50%-80%的亲水溶剂后，再向其中加入相当于桑叶原料重量0.05%-0.2%的碱性固体物质，搅拌15-45min后，加温至60-80℃回流提取1-3次，每次110-130min，冷却至0-15℃，过滤，得提取液；
（4）酸溶、超滤：将提取液在60-70℃下进行低压浓缩，浓缩至原提取液体积的1/20至1/30，冷却至0-15℃，静置8-12小时，收集沉淀，加入相当于原提取液体积1/30-1/40的体积百分比浓度为0.5-1.5%的酸溶液，搅拌，使其充分溶解后，过滤，将滤液通过超滤膜，得超滤液；
（5）阳离子树脂除杂：将所得超滤液通过阳离子树脂后，使用4-8倍量树脂体积的1%-5%（w/v）氨醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；
（6）大孔吸附树脂分离：将步骤（5）得到的洗脱液浓缩至原来体积的1/5-1/10，然后通过大孔吸附树脂，用5-8倍量树脂体积的40%-70%（体积）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
（7）结晶与重结晶：将步骤（6）所得洗脱液进行浓缩，浓缩至原来体积的1/6-1/8，加入相当于步骤（6）所得洗脱液体积1/6-1/4的甲醇-饱和氨水混合溶剂，调节温度，冷却析晶，得结晶体，干燥，即成。
步骤（2）中加入的组合酶可由纤维素酶与果胶酶组成，其纤维素酶与果胶酶的重量比宜为3-5：1。
步骤（3），所述亲水溶剂可为C1-C4的醇液；加入的碱性固体物质可为氢氧化钠、碳酸钠或者氢氧化钙。
步骤（4），加入的酸性溶液可为体积百分比浓度为1%的盐酸、硫酸或者磷酸溶液。
步骤（5），所述阳离子树脂可为D151、D110或D113树脂。
步骤（6），所述大孔吸附树脂可为AB-8、XAD-7、XAD-9或者LSD201。
步骤（7），所述甲醇-饱和氨水混合溶剂中，甲醇与氨水体积比宜为5-15：1；析晶温度宜为-5℃-10℃，重结晶次数优选2-3次。
本发明方法得到的桑叶提取物产品，经高效液相色谱法检测，产品中DNJ含量达95%以上，得率0.04%左右。
本发明方法具有如下优点：可从桑叶原料中提取分离出纯度达95%以上的DNJ产品，实现了1-脱氧可靠霉素的有效分离；使用酶解方法，提高了溶剂溶出效率，进而提高了产品的得率；对的设备要求较低，操作安全；工艺简约，使用溶剂均可回收利用，降低了生产成本；使用溶剂低毒，环保安全。
具体实施方式
实施例1
（1）原料前处理：将100 kg 干燥桑叶粉碎，80%以上过24目；
（2）酶解：向粉碎后的桑叶原料中加入1000 kg 水，加温至55℃，再加入150g的组合酶（纤维素：果胶酶为5：1，w/w），酶解12 h后，过滤，得酶解原料；
（3）碱醇提取：向酶解原料中加入600 kg 60%的乙醇溶液（含10 g氢氧化钙），搅拌30 min 后，加温至80℃回流提取2次，每次提取2 h，冷却至5℃左右，过滤，得提取液；
（4）酸溶、超滤：将提取液在60℃下低压浓缩，料液放出时，浓缩液重为52 kg，冷却至7℃，静置12小时，收集沉淀，然后加入36.5 kg 1%的硫酸溶液（v/v），搅拌，使其充分溶解，过滤，再通过超滤膜，得超滤液；
（5）阳离子树脂除杂：将所得超滤液通过阳离子树脂，流速为112L/h，然后使用161kg的水洗脱，水洗液弃除后，再使用540kg的含1%氨的60%乙醇（w/v）进行洗脱并收集洗脱液（柱的径高比为1：15）；
（6）大孔吸附树脂分离：将所得洗脱液浓缩至一定重量放出，称重为71 kg，然后通过LSD201大孔吸附树脂柱，控制上样流速为110 L/h，使用550kg 60%（体积）乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；
（7）结晶与重结晶：将步骤（6）所得洗脱液进行浓缩至一定重量后放出，称重为72.5 kg，再加入92 kg的混合溶剂（甲醇-饱和氨水为6：1,v/v），冷却至-2℃，自然静置8 h，析晶，重复析晶3次。得桑叶提取物41.2 g，得率为0.041%，1-脱氧野尻霉素含量为96.1%。
实施例2
本实施例与实施例1不同的是，加入组合酶的重量为150 g（纤维素：果胶酶为1：1），加入酸的量为28 kg，最终所得桑叶提取物为38.7 g，得率为0.038%,1-脱氧野尻霉素含量为95.7%。
实施例3
本实施例与实施2不同的是，树脂柱的径高比为20：1，混合溶液比例甲醇=饱和氨水为5：1（v/v），最终所得桑叶提取物为38.1 g，得率为0.038%，1-脱氧野尻霉素含量为96.5%。
实施例4
本实施例与实施3不同的是，加入的组合酶纤维素：果胶酶比例为3：1，析晶温度为-5℃，反复析晶3次，最终所得桑叶提取物为41.2 g，得率为0.041%，1-脱氧野尻霉素含量为96.2%。

Claims (7)

1.一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是，包括以下步骤：
（1）原料前处理：将桑叶原料粉碎至10-30目；
（2）酶解：向粉碎后的桑叶原料中加入相当于其重量8-12倍量的水，升温至40-60℃后，加入相当于桑叶原料重量0.1%-0.6%的组合酶，保温酶解6-8h 后，过滤，得酶解原料；
（3）碱醇提取：向酶解原料中加入相当于桑叶原料重量5-8倍量50%-80%的亲水溶剂后，再向其中加入相当于桑叶原料重量0.05%-0.2%的碱性固体物质，搅拌15-45min后，加温至60-80℃回流提取1-3次，每次110-130min，冷却至0-15℃，过滤，得提取液；
（4）酸溶、超滤：将提取液在60-70℃下进行低压浓缩，浓缩至原提取液体积的1/20至1/30，冷却至0-15℃，静置8-12小时，收集沉淀，加入相当于原提取液体积1/30-1/40的体积百分比浓度为0.5-1.5%的酸溶液，搅拌，使其充分溶解后，过滤，将滤液通过超滤膜，得超滤液；
（5）阳离子树脂除杂：将所得超滤液通过阳离子树脂后，使用4-8倍量树脂体积的1%-5%（W/V）氨醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；
（6）大孔吸附树脂分离：将步骤（5）得到的洗脱液浓缩至原来体积的1/5-1/10，然后通过大孔吸附树脂，用5-8倍量树脂体积的40%-70%（体积）醇液洗脱，收集洗脱液；
（7）结晶与重结晶：将步骤（6）所得洗脱液进行浓缩，浓缩至原来体积的1/6-1/8，加入相当于步骤（6）所得洗脱液体积1/6-1/4的甲醇-饱和氨水混合溶剂，调节温度，冷却析晶，得结晶体，干燥，即成。
2.根据权利要求1所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（2）中加入的组合酶由纤维素酶与果胶酶组成，其纤维素酶与果胶酶的重量比为3-5：1。
3.根据权利要求1或2所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（3）中提取的亲水溶剂为C1-C4的醇液；加入的碱性固体物质为氢氧化钠、碳酸钠或者氢氧化钙。
4.根据权利要求1或2所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（4）中加入的酸性溶液为体积百分比浓度为1%的盐酸、硫酸或者磷酸溶液。
5.根据权利要求1或2所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（5），所述阳离子树脂为D151、D110或D113树脂。
6.根据权利要求1或2所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（6），所述大孔吸附树脂为AB-8、XAD-7、XAD-9或者LSD201。  
7.根据权利要求1或2所述的从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其特征是：步骤（7），加入析晶的混合溶剂甲醇-饱和氨水中，甲醇与氨水体积比为5-15：1，析晶温度为-5℃-10℃，重结晶次数为2-3次。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102424667A (zh) * 2011-11-01 2012-04-25 扬州大学 一种从桑叶中提取1-脱氧野尻霉素的方法
CN103204800A (zh) * 2013-05-14 2013-07-17 成都科源生物技术有限公司 一种高纯度1-脱氧野尻霉素的提取方法
CN103965096A (zh) * 2014-05-09 2014-08-06 湖南华诚生物资源有限公司 一种适用于工业生产的1-脱氧野尻霉素的制备方法
CN104402801A (zh) * 2014-10-31 2015-03-11 西南大学 分离dnj及制备dnj纳米混悬剂的方法
CN105012393A (zh) * 2015-06-08 2015-11-04 广西壮族自治区蚕业技术推广总站 一种二元蔗糖酶抑制剂的制备方法
CN105294542A (zh) * 2015-10-22 2016-02-03 白心亮 一种含1-脱氧野尻霉素的桑叶提取物的制备方法
CN109456254A (zh) * 2018-12-06 2019-03-12 江西农业大学 1-脱氧野尻霉素-羟基查尔酮杂合体衍生物及其制备方法和应用
CN111670956A (zh) * 2020-07-07 2020-09-18 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 一种桑叶米豆腐及其制作方法
CN113292482A (zh) * 2021-05-27 2021-08-24 湖南德诺贝莱健康产业有限公司 一种从桑白皮中提取高含量脱氧野尻霉素的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101007017A (zh) * 2007-01-15 2007-08-01 暨南大学 具有α－糖苷酶抑制剂活性的中药提取物及其应用
CN101020655A (zh) * 2007-03-15 2007-08-22 浙江大学 一种从桑叶中提取1－脱氧野尻霉素的方法
CN101209284A (zh) * 2007-12-24 2008-07-02 天津大学 从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101007017A (zh) * 2007-01-15 2007-08-01 暨南大学 具有α－糖苷酶抑制剂活性的中药提取物及其应用
CN101020655A (zh) * 2007-03-15 2007-08-22 浙江大学 一种从桑叶中提取1－脱氧野尻霉素的方法
CN101209284A (zh) * 2007-12-24 2008-07-02 天津大学 从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102424667A (zh) * 2011-11-01 2012-04-25 扬州大学 一种从桑叶中提取1-脱氧野尻霉素的方法
CN103204800A (zh) * 2013-05-14 2013-07-17 成都科源生物技术有限公司 一种高纯度1-脱氧野尻霉素的提取方法
CN103204800B (zh) * 2013-05-14 2017-07-04 成都科源生物技术有限公司 一种1‑脱氧野尻霉素的提取方法
CN103965096B (zh) * 2014-05-09 2016-08-24 江西海富生物工程有限公司 一种适用于工业生产的1-脱氧野尻霉素的制备方法
CN103965096A (zh) * 2014-05-09 2014-08-06 湖南华诚生物资源有限公司 一种适用于工业生产的1-脱氧野尻霉素的制备方法
CN104402801A (zh) * 2014-10-31 2015-03-11 西南大学 分离dnj及制备dnj纳米混悬剂的方法
CN104402801B (zh) * 2014-10-31 2016-06-15 西南大学 分离dnj及制备dnj纳米混悬剂的方法
CN105012393A (zh) * 2015-06-08 2015-11-04 广西壮族自治区蚕业技术推广总站 一种二元蔗糖酶抑制剂的制备方法
CN105012393B (zh) * 2015-06-08 2018-01-19 广西壮族自治区蚕业技术推广总站 一种二元蔗糖酶抑制剂的制备方法
CN105294542A (zh) * 2015-10-22 2016-02-03 白心亮 一种含1-脱氧野尻霉素的桑叶提取物的制备方法
CN109456254A (zh) * 2018-12-06 2019-03-12 江西农业大学 1-脱氧野尻霉素-羟基查尔酮杂合体衍生物及其制备方法和应用
CN109456254B (zh) * 2018-12-06 2020-06-30 江西农业大学 1-脱氧野尻霉素-羟基查尔酮杂合体衍生物及其制备方法和应用
CN111670956A (zh) * 2020-07-07 2020-09-18 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 一种桑叶米豆腐及其制作方法
CN111670956B (zh) * 2020-07-07 2023-05-09 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 一种桑叶米豆腐及其制作方法
CN113292482A (zh) * 2021-05-27 2021-08-24 湖南德诺贝莱健康产业有限公司 一种从桑白皮中提取高含量脱氧野尻霉素的方法
CN113292482B (zh) * 2021-05-27 2022-11-01 湖南德诺贝莱健康产业有限公司 一种从桑白皮中提取高含量脱氧野尻霉素的方法

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Pledgee: Bank of Beijing Limited by Share Ltd. Changsha branch

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Registration number: 2015430000002

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Denomination of invention: Method for extracting and separating 1-deoxynojirimycin from mulberry leaves

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Pledgee: Bank of Beijing Limited by Share Ltd. Changsha branch

Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, INC.

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Granted publication date: 20121219

Pledgee: Bank of Beijing Limited by Share Ltd. Changsha branch

Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, INC.

Registration number: 2016430000003

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Denomination of invention: Method for extracting and separating 1-deoxynojirimycin from mulberry leaves

Effective date of registration: 20190828

Granted publication date: 20121219

Pledgee: Bank of Communications Co.,Ltd. Hunan Branch

Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, INC.

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Pledgee: Bank of Communications Co.,Ltd. Hunan Branch

Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, Inc.

Registration number: Y2019430000006

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Denomination of invention: A method of extracting and separating 1-deoxynojirimycin from mulberry leaves

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Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, Inc.

Registration number: Y2021980002898

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Pledgee: CITIC Bank Changsha branch

Pledgor: HUNAN HUACHENG BIOTECH, Inc.

Registration number: Y2021980002898