CN102178651B - 一种维a酸脂肪乳注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种维A酸脂肪乳注射液，其包括以下组分：维A酸，注射用油，乳化剂，稳定剂，等渗调节剂和注射用水，其中，各组分的浓度为：维A酸0.02～10mg/ml，注射用油5～30g/ml，乳化剂0.8～3.0g/mL，稳定剂0.1～2.0g/ml，等渗调节剂2～3g/ml。本发明的脂肪乳注射液，经检测其质量外观均一，平均粒径在500nm以下，pH5.0～9.0，可供注射使用。本发明制备的维A酸脂肪乳注射液及其长循环制剂载药量大、稳定性好、制备工艺简单可行，可用于治疗急性早幼粒细胞白血病及肝癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、中枢神经系统肿瘤等癌症的治疗。有望成为新的维A酸临床给药制剂。

Description

一种维A酸脂肪乳注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种维A酸脂肪乳注射液及其制备方法。

背景技术

急性早幼粒性白血病(APL)被认为是最凶险的一种白血病，病人骨髓里积累大量的不成熟的早幼粒细胞，且具有严重的出血症状。该病的病因已经研究得比较清楚，主要是两条染色体t(15；17)易位，该易位导致分别定位于染色体15q22和17q21的早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia，PML)基因和维A酸受体α(retinoic acid receptorα，RARα)基因融合，在结合点就出现一个新的融合基因PML-RARα，它编码一个融合蛋白，最终导致细胞癌变。

我国是最早开始进行维A酸(ATRA)研究的国家，早期维A酸主要用于急性早幼粒白血病M3型(APL)的治疗，起诱导分化作用。1985年，上海血液研究所王振义教授在国际上率先应用维A酸治疗APL患者取得成功，80％以上患者可以完全缓解；在临床上极大地提高了急性早幼粒细胞白血病病人的完全缓解率和长期生存率，使APL成为第一种基本可以被治愈的急性髓细胞性白血病。王振义教授也因此于2011年1月14日获得2010年度国家最高科学技术奖。维A酸是通过靶向结合到癌蛋白PML-RAR的维A酸受体(RAR)结构域，重新启动髓系细胞的分化基因调控网络，从而诱导白血病细胞分化成熟继而凋亡的，近期该药也用于肝癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、中枢神经系统肿瘤等癌症的治疗。

一直以来，维A酸主要以口服给药方式来治疗APL。临床应用的维A酸制剂主要是维A酸片剂和维A酸胶囊。然而，维A酸的口服制剂在临床实践中存在一些缺陷：1)在体内降解快，血药浓度波动大，生物利用度约为50％，可产生较大不良反应和耐药性。2)由于维A酸的在水中的溶解度极低，在不同的病人中，维A酸的生物利用度差异很大。3)对于吞咽或吸收困难的病人，及儿童患者来说，也不适合维A酸的口服给药。

从药物制剂角度解决上述问题的最有效办法是研制可以经静脉直接用药的静脉滴注给药剂型。到目前为止，国内还没有上市的维A酸注射液用于临床。维A酸在水中溶解度约为60ng/mL，在正辛醇中溶解度约为300μg/mL，属于水溶性和脂溶性都很差的药物，这成为将维A酸制成注射剂的一个主要障碍。国内外进行了大量药剂学方法研究，主要集中在将维A酸制成β-环糊精包合物和脂质体的研究，均因载药量低，重现性和稳定性差，或因成本高、工业化规模生产的问题难以解决，而无法予以工业化应用。

Muller等研制开发了一种借助高压均质技术、无需有机溶剂就能大幅增溶药物的技术(solubilisation by emulsification，简称SolEmuls技术)，即将难溶性药物以微粉或是纳米晶体表面活性剂溶液的形式加入空白乳剂中，经高压乳匀，得到含药脂肪乳。SolEmuls技术的主要特点在于：(1)均质次数较多，一般高达15～20个循环，远远高于普通载药脂肪乳的2～8次；(2)为了加速药物溶解，将药物加至乳剂中之前应先粉碎成纳米分散体系；(3)所采用的均质压力更高。通过这种技术，足够量的难溶性药物可以结合到脂肪乳的亲脂核内或插入油水界面的乳化膜。Muller等用该法将油水均难溶的药物卡马西平、两性霉素B及伊曲康唑等制成静脉注射乳剂。

脂肪乳作为药物载体能增加难溶或不溶性药物的溶解度，提高药物稳定性和生物利用度，减小药物刺激性，使药物产生靶向性，并且具有很好的耐受性和安全性，是一种成熟且安全的剂型。目前已有多种载药脂肪乳上市：如地西泮(Diazemuls)、丙泊酚(Diprivan)、全氟碳(Fluosol)、依托咪酯(Etomidat Lipuro)、前列腺素E1(Liple)复合脂溶性维生素(Vitalipid)、棕榈酸地塞米松(Limethason)、丁酸氯维地平(Cleviprex)等静脉注射脂肪乳剂，以及环孢菌素A(Restasis)和二氟泼尼酯(Durezol)眼用脂肪乳剂。

若将维A酸制成载药脂肪乳注射液，将使维A酸通过脉管内给药成为可能，但脂肪乳粒子在体循环中容易被网状内皮吞噬系统(reticuloendothelial-system，RES)识别和吞噬，使得药物在血中的循环时间较短，不能够维持有效的血药浓度。

聚乙二醇是水溶性、无生物活性、无毒、柔软的线性高分子，价廉易得、可以大规模生产、分子量易于控制、具有良好的物理化学性质。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种维A酸脂肪乳注射液，并提供了其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种维A酸脂肪乳注射液，其包括以下组分：维A酸，注射用油，乳化剂，稳定剂，等渗调节剂和注射用水，其中，各组分的浓度为：维A酸0.02～10mg/ml，注射用油5～30g/ml，乳化剂0.8～3.0g/mL，稳定剂0.1～2.0g/ml，等渗调节剂2～3g/ml。

所述维A酸脂肪乳注射液90％以上乳滴粒径低于1μm，无大于5μm的乳滴。

所述维A酸脂肪乳注射液的平均粒径均小于500nm，粒度分布均匀，pH在5.0～9.0，可供注射使用，用于治疗白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、中枢神经系统肿瘤等疾病。

所用注射用油为长链甘油三酯或中链甘油三酯或两者任意比例的混合物。

所述长链甘油三酯为大豆油、花生油、橄榄油、芝麻油、红花油、棉籽油、玉米油、藏红花油、蓖麻油、葵花子油、海狸油、茶油或椰子油中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

所述乳化剂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂、泊洛沙姆188、吐温80、普郎尼克F-127、甘油单油酸酯、聚氧乙烯蓖麻油或聚乙二醇类脂衍生物中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

优选的，乳化剂为聚乙二醇类脂衍生物，或进一步地再包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、合成磷脂、泊洛沙姆188、吐温80、普郎尼克F-127、甘油单油酸酯或聚氧乙烯蓖麻油中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

所述稳定剂为油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、肝胆酸钠、胆固醇或聚乙二醇类脂衍生物中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

优选的，稳定剂为聚乙二醇类脂衍生物，或进一步地再包括油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、肝胆酸钠或胆固醇中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

所述聚乙二醇类脂衍生物是聚乙二醇-脑磷脂衍生物、聚乙二醇-胆固醇衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯衍生物、聚乙二醇-脂肪胺衍生物或聚乙二醇-脂肪醇衍生物中的一种。

所述聚乙二醇类脂衍生物中，聚乙二醇高分子的链长在1000～5000之间。

所述等渗调节剂为甘油、丙二醇、聚乙二醇、山梨醇、甘露醇、木糖醇、葡萄糖或氯化钠中的一种或任意两种或两种以上任意比例的混合物。

一种维A酸脂肪乳注射液的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将注射用油和稳定剂混合，搅拌均匀，制成油相；

(2)将乳化剂、等渗调节剂和维A酸混合，加水适量(因为步骤5中还有定容的过程，所以此步加水量适量即可，无特殊要求)，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，匀化制成水相；

(3)将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

(4)将载药初乳移入高压乳匀机，匀化；

(5)将步骤(4)所得脂肪乳用注射用水定容，保证维A酸浓度在0.02～10mg/ml，调pH值在5.0～9.0，即得维A酸脂肪乳注射液。储存时，过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌。

所述步骤(2)、(3)和(4)中，高速剪切速度为20000rpm，剪切时间为5min，用高压匀质机进行高压乳匀的次数为5～40次。

所述步骤(5)中，调pH值所用的调节剂为盐酸、柠檬酸、氢氧化钠溶液、磷酸盐或碳酸盐中的任一种。

所述步骤(5)中，高压灭菌为蒸汽消毒，温度为100～121℃，时间为10～30min。

针对背景技术中描述的“若将维A酸制成载药脂肪乳注射液，将使维A酸通过脉管内给药成为可能，但脂肪乳粒子在体循环中容易被网状内皮吞噬系统(reticuloendothelial-system，RES)识别和吞噬，使得药物在血中的循环时间较短，不能够维持有效的血药浓度”，本发明在制备过程中加入聚乙二醇(PEG)类脂衍生物作为稳定剂和乳化剂，利用类脂衍生物可使PEG锚定在脂肪乳滴粒子表面，在脂肪乳表面形成亲水性的PEG表层，避免被体内RES的识别和消除，增加脂肪乳粒子在血液中的循环时间，增加被动靶向至病变部位药物的浓度，从而实现延长维A酸脂肪乳体内半衰期的目的。长循环维A酸脂肪乳能够在血液循环中缓慢释放药物，长时间保持血药浓度在药物治疗浓度范围，特别有利于APL的治疗。另外，长循环维A酸脂肪乳可减少给药次数，增加药物治疗效果，改善病人的顺应性。

本发明具有以下优点：

(1)解决了维A酸在水中溶解度低的缺陷，其溶解度可达2～10mg/mL，提高了上万倍。

(2)本发明的维A酸脂肪乳注射液中，维A酸载药量大，具有良好的稳定性和水溶性，且在一定程度上可以保护维A酸对光照的敏感性，无需苛刻的贮存条件，使用方便。

(3)制备时借助高压匀质技术，无需有机溶剂就能大幅增溶药物，制备得到的维A酸脂肪乳注射液不含有机溶剂，对血管刺激较小；生物相容性好，外水相中药物较少，从而减轻了刺激性反应，可以大大增强患者的顺应性。

(4)制备工艺简单可行，已具备扩大生产的条件和技术，更易实现产品化。

(5)当维A酸脂肪乳注射液中含有聚乙二醇类脂衍生物时，注射后在体循环具有一定长循环性质和靶向性，可减少药物对组织的刺激性，延长药效，并具有缓释作用，延长血药浓度，能明显增加药物治疗APL的效果，减少给药次数，增加改善病人的顺应性；同时，还提高了肝脏摄取率，使得维A酸可以靶向肝部位，治疗肝转移性肿瘤。

(6)本发明创造性地将治疗性药物维A酸和营养药脂肪乳合并制成一种药物制剂，患者在治疗疾病的同时，还能补充所需营养。

总之，本发明的维A酸脂肪乳注射液具有载药量大、水溶性好、缓释效果明显等优点，可用于治疗急性早幼粒细胞白血病及肝癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、中枢神经系统肿瘤等癌症的治疗，有望成为新的维A酸临床给药制剂。本发明的制备方法具有步骤简单、不含有机溶剂、易于工业化生产等优点。

附图说明

图1为维A酸脂肪乳注射液的透射电镜照片，其中，A为实施例1制备的维A酸脂肪乳注射液的透射电镜照片，B为实施例9制备的长循环维A酸脂肪乳注射液的透射电镜照片。

图2为维A酸脂肪乳注射液的粒径测定结构，其中，A为实施例1制备的维A酸脂肪乳注射液的粒径测量结果，B为实施例9制备的长循环维A酸脂肪乳注射液的粒径测定结果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：一种维A酸脂肪乳剂，其组成为：

维A酸200mg

注射用大豆油10g

中链甘油三酯10g

油酸1.0g

大豆磷脂1.2g

甘油2.2g

注射用水加至100ml

上述脂肪乳剂的制备方法如下：

1)将处方量的注射用大豆油、中链甘油三酯和稳定剂油酸混合，搅拌均匀，制成油相；

2)将处方量的注射用大豆磷脂、甘油和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3)将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4)将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5)将步骤4)所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH＜5.0或pH＞9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0～9.0。

6)以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌(121℃条件下灭菌15min)，即得维A酸脂肪乳注射液，脂肪乳平均粒径为128.0nm，如图1、图2所示。

实施例2：一种维A酸脂肪乳剂，其组成为：

维A酸200mg

注射用大豆油10g

中链油10g

油酸1.0g

泊洛沙姆188 1.2g

甘油2.2g

注射用水加至100ml

制备方法同实施例1，但乳化剂为泊洛沙姆188，得到的脂肪乳平均粒径为164.1nm。

实施例3：一种维A酸脂肪乳剂，其组成同实施例1，制备方法同实施例1，但pH调节剂为碳酸氢钠，且高压乳匀次数为10次，得到的脂肪乳平均粒径为201.0nm。

实施例4：一种维A酸脂肪乳剂，其组成同实施例4，制备方法同实施例1，但高压乳匀次数为5次，得到的脂肪乳平均粒径为289.4nm。

实施例5：一种维A酸脂肪乳剂，由以下组分组成：维A酸，玉米油，泊洛沙姆188，胆固醇，聚乙二醇和水，其中，各组分的浓度为：维A酸3.0mg/mL，玉米油20g/ml，泊洛沙姆1883.0g/ml，胆固醇1.5g/ml，聚乙二醇3g/ml。

制备方法同实施例1，制得的脂肪乳平均粒径为248.7nm。

实施例6：一种维A酸脂肪乳剂，由以下组分组成：维甲酸，棉籽油，普郎尼克F127，胆酸钠，木糖醇和水，其中，各组分的浓度为：维A酸5.0mg/ml，棉籽油20g/ml，普郎尼克F1272.0g/ml，胆酸钠0.5g/ml，木糖醇2.3g/ml。

制备方法同实施例1，制得的脂肪乳平均粒径为214.4nm。

实施例7：一种维A酸脂肪乳剂，由以下组分组成：维A酸，玉米油，聚氧乙烯蓖麻油，甘胆酸钠，葡萄糖和水，其中，各组分的浓度为：维A酸8.0mg/ml，玉米油25g/ml，聚氧乙烯蓖麻油1.5g/ml，甘胆酸钠2.0g/ml，葡萄糖2.8g/ml。

制备方法同实施例1，制得的脂肪乳平均粒径为265.6nm。

实施例8：一种维A酸脂肪乳剂，由以下组分组成：维A酸，蓖麻油，甘油酸单油酯，油酸钠，山梨醇和水，其中，各组分的浓度为：维甲酸10.0mg/ml，蓖麻油25g/ml，甘油单油酸酯1.8g/ml，油酸钠1.0g/ml，山梨醇2.5g/ml。

制备方法同实施例1，制得的脂肪乳平均粒径为275.4nm。

实施例9：一种长循环维A酸脂肪乳剂，其组成为：

维A酸200mg

注射用大豆油10g

中链甘油三酯10g

油酸1.0g

大豆磷脂1.0g

聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)0.2g

甘油2.2g

注射用水加至100ml

上述脂肪乳剂的制备方法如下：

1)将处方量的注射用大豆油、中链甘油三酯、稳定剂油酸和PEG2000-DSPE混合，搅拌均匀，制成油相；

2)将处方量的注射用大豆磷脂、甘油和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3)将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4)将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5)将步骤4)所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH＜5.0或pH＞9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0～9.0。

6)以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌(121℃条件下灭菌15min)，即得维A酸脂肪乳注射液，脂肪乳平均粒径为152.1nm。

实施例10：一种长循环维A酸脂肪乳剂，由以下组分组成：维A酸，橄榄油，蛋黄卵磷脂，油酸钠，氯化钠和水，其中，各组分的浓度为：维A酸0.5mg/ml，橄榄油15g/ml，蛋黄卵磷脂0.8g/ml，PEG2000-DSPE 0.2g/ml，油酸钠1.0g/ml，氯化钠2.2g/ml。

制备方法同实施例9，制得的脂肪乳平均粒径为145.4nm，如图1、图2所示。

将制备的脂肪乳剂灌封于安瓿中于121℃高压灭菌前后，置具塞离心管中，4000rpm离心15min后，未见分层，也未见药物结晶析出，药物成分未见降解。结论：本发明的维A酸脂肪乳剂较稳定。

Claims (4)

1.一种维A酸脂肪乳注射液，其特征在于，由以下组分组成：维A酸，玉米油，泊洛沙姆188，胆固醇，聚乙二醇和水，其中，各组分的浓度为：维A酸3.0mg/mL，玉米油20g/ml，泊洛沙姆188 3.0g/ml，胆固醇1.5g/ml，聚乙二醇3g/ml；

制备方法为：

1）将玉米油和胆固醇混合，搅拌均匀，制成油相；

2）将泊洛沙姆188、聚乙二醇和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3）将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4）将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5）将步骤4）所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH<5.0或pH>9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0~9.0；

6）以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌：121℃条件下灭菌15min，即得维A酸脂肪乳注射液。

2.一种维A酸脂肪乳注射液，其特征在于，由以下组分组成：维A酸，棉籽油，普郎尼克F127，胆酸钠，木糖醇和水，其中，各组分的浓度为：维A酸5.0mg/ml，棉籽油20g/ml，普郎尼克F127 2.0g/ml，胆酸钠0.5g/ml，木糖醇2.3g/ml；

制备方法为：

1）将棉籽油和胆酸钠混合，搅拌均匀，制成油相；

2）将普郎尼克F127、木糖醇和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3）将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4）将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5）将步骤4）所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH<5.0或pH>9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0~9.0；

6）以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌：121℃条件下灭菌15min，即得维A酸脂肪乳注射液。

3.一种维A酸脂肪乳注射液，其特征在于，由以下组分组成：维A酸，玉米油，聚氧乙烯蓖麻油，甘胆酸钠，葡萄糖和水，其中，各组分的浓度为：维A酸8.0mg/ml，玉米油25g/ml，聚氧乙烯蓖麻油1.5g/ml，甘胆酸钠2.0g/ml，葡萄糖2.8g/ml；

制备方法为： 

1）将玉米油和甘胆酸钠混合，搅拌均匀，制成油相；

2）将聚氧乙烯蓖麻油、葡萄糖和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3）将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4）将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5）将步骤4）所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH<5.0或pH>9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0~9.0；

6）以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌：121℃条件下灭菌15min，即得维A酸脂肪乳注射液。

4.一种维A酸脂肪乳注射液，其特征在于，由以下组分组成：维A酸，蓖麻油，甘油酸单油酯，油酸钠，山梨醇和水，其中，各组分的浓度为：维A酸10.0mg/ml，蓖麻油25g/ml，甘油单油酸酯1.8g/ml，油酸钠1.0g/ml，山梨醇2.5g/ml；

制备方法为：

1）将蓖麻油和油酸钠混合，搅拌均匀，制成油相；

2）将甘油酸单油酯、山梨醇和维A酸混合，加水，搅拌均匀，高速剪切后移入高压乳匀机，1000bar匀化20次，制成水相；

3）将油相在搅拌下倒入水相中，高速剪切制成载药初乳；

4）将上述载药初乳移入高压乳匀机，1000bar匀化20次；

5）将步骤4）所得脂肪乳用注射用水定容至100ml后，若pH<5.0或pH>9.0，则用pH调节剂NaOH调pH至5.0~9.0；

6）以0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于安瓿中，通氮气，熔封，高压灭菌：121℃条件下灭菌15min，即得维A酸脂肪乳注射液。 

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