CN102178649A

CN102178649A - 雷帕霉素脂质体滴眼液及其制备方法

Info

Publication number: CN102178649A
Application number: CN2011101154751A
Authority: CN
Inventors: 张振华; 耿燕; 赵桂秋; 刘超; 孙清秀; 顾艳枝; 于文娟; 许军
Original assignee: 张振华
Priority date: 2011-05-05
Filing date: 2011-05-05
Publication date: 2011-09-14

Abstract

本发明涉及雷帕霉素脂质体滴眼液及其制备方法，目的在于提供一种高效、缓释、低毒、渗透性好的抗新生血管眼用制剂。本发明首次将雷帕霉素制成脂质体滴眼液，主要的技术内容是采用薄膜分散法制备雷帕霉素脂质体：将处方量的雷帕霉素、卵磷脂、溶于无水乙醇中，于40℃真空旋转成一层薄膜，旋转蒸发至无乙醇味，加入10ml的PBS（pH7.0），水化既得雷帕霉素脂质体混悬液。所得的雷帕霉素脂质体滴眼液，易渗透进入角膜细胞并释放药物，并具有缓释、低毒优点且药物浓度波动较小，滴入眼部无异物感，不影响眼睛的正常生理功能。

Description

雷帕霉素脂质体滴眼液及其制备方法

技术领域

本发明涉及雷帕霉素脂质体滴眼液及其制备方法。

背景技术

角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)常导致角膜失去正常透明性，是致盲的一个重要原因，亦是角膜移植术后发生排斥反应的高危因素，临床上CNV 治疗仍是最棘手的问题之一。因此有关抑制CNV形成形成机制的研究一直受到眼科研究者的重视，眼科临床急需良好的、高效的抗新生血管的眼用制剂。

雷帕霉素(rapamycin，RAPA，商品名Sirolimus)是从吸水性链霉菌(streptomyces hygroscopicus)发酵液中提取出来的一种大环内酯类抗生素，最初RAPA被研究作为低毒性的抗真菌药物，1977年发现RAPA具有免疫抑制作用，1989年开始把RAPA作为治疗器官移植的排斥反应的新药进行试用，目前RAPA的临床试验已经结束，RAPA作为免疫抑制剂已在临床开始使用，1999年9月经美国FDA批准上市。近年来又发现其具有新生血管抑制及抗肿瘤作用。近年来有许多实验已经在关注RAPA的新生血管抑制及抗肿瘤作用。但是目前RAPA仅有全身制剂，但是全身用药眼内药物浓度低，疗效差。由于RAPA属于脂溶性药物，溶解性差、治疗窗口窄，故尚不能在眼科广泛应用。这就限制了RAPA在眼科的研究和应用。

取实施例一所得RAPA脂质体混悬液适量，用Zetasizer3000激光散射力度测定仪测定其平均粒径及粒径分布，其平均粒径为145.2nm，其中76.4％的RAPA脂质体分布在110-200nm之间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、缓释、低毒、渗透性好的抗新生血管眼用制剂雷帕霉素脂质体滴眼液及其制备方法。

由于全身用药到达眼部的浓度很小，所以眼睛局部用药仍然是眼病主要的治疗方法。滴眼液给药，由于眼球运动和鼻泪系统的作用，使大量的药物损失，需每日多次给药，剂量不准确，眼内药物浓度波动大。混悬液或软膏给药又影响视力和眼球运动。脂质体作为眼部给药系统，其组成材料为磷脂双分子层膜，类似于生物膜，易与生物融合，促进药物对生物膜的穿透性，故药物外用滴眼的跨角膜转运效率较高。通过选择不同的制备方法，制成脂质体粒径为 0.02～ 0.20μm 之间, 滴入眼部无异物感, 不影响眼睛的正常生理功能。

脂质体作为一种新型眼用药物载体，具有增加角膜通透性，缓释、低毒性反应的优点且其可减小药物浓度波动，达到长效。脂质体（1iposome）主要由脂（磷脂和胆固醇）水、药和一些电解质组成。角膜是药物吸收的主要屏障，由亲脂性的上皮层、内皮层和亲水性的基质层构成。脂溶性物质，容易透过亲脂的上皮层，但不易透过亲水的基质层，集聚在角膜中。而脂质体组成材料为磷脂双分子膜，具有亲水性与疏水性，易与生物膜融合，容易渗透进入角膜细胞并释放药物，从而促进所包裹药物的跨角膜转运。另外，脂质体与角膜有一定的吸附作用，可增加药物在角膜前的滞留时间促进药物的眼部吸收。脂质体药物的制备方法很多，方法不同，所制备脂质体药物的粒径、层次及药物的包封率不同。

雷帕霉素分子式C₅₁H₃₉NO₁₃，相对分子质量914.2，为白色的固体结晶,熔点为183℃～185℃，与另一种免疫抑制剂 FK-506结构很相似，具亲脂性，易溶于乙醇、氯仿、丙酮等有机溶剂，微溶于水，不溶于乙醚。由于RAPA属于脂溶性药物，溶解性差、治疗窗口窄，故尚不能在眼科广泛应用。我们采用一种良好的药物载体－脂质体，其组成材料为磷脂双分子层膜，类似于生物膜，将脂溶性药物－RAPA包裹在其亲脂部分或脂质双分子层中。所得的RAPA脂质体滴眼液，由于外膜为磷脂双分子膜，具有亲水性与疏水性，与生物膜融合，易渗透进入角膜细胞并释放RAPA，有利于RAPA的跨角膜转运。另外还具有缓释、低毒优点且药物浓度波动较小，滴入眼部无异物感，不影响眼睛的正常生理功能。

目前常用的制备方法可分为3大类，即机械分散法、两相分散法和表面活性剂法。而本发明采用的薄膜分散法属于机械分散法的一种。我们将RAPA制成脂质体，应用于后续的动物实验，研究RAPA对大鼠角膜新生血管的抑制作用，并找出RAPA的作用积机制和作用途径，为临床治疗角膜新生血管提供理论依据。

我们通过建立大鼠角膜碱烧伤动物模型，成功制备出CNV模型，将RAPA作用于实验组大鼠角膜，结果发现RAPA能显著抑制CNV的生长，CNV的生长长度及面积均显著小于对照组。

具体实施方式

本发明用下一步实例做进一步说明：

实例一：0.2%RAPA脂质体滴眼液制备工艺

本发明采用薄膜分散法制备RAPA脂质体，根据文献资料以及预实验结果，采用正交法以包封率测定结果为优化指标，以磷脂和胆固醇的质量比（A），药物和磷脂的质量比（B），水化时间（C），药物浓度（D）作为考察因素，设计四因素三水平正交实验对脂质体的制备工艺进行优化，因素和水平见表1。

表1 正交实验水平与因素

因素	A（w：w）	B（w：w）	C（h）	D（mg/ml）
					水平1	8：1	15：1	1.5	1
水平2	4：1	10：1	2	2
					水平3	1：0	5：1	2.5	5

最终得出影响脂质体包封率因素的顺序为B>A>D>C,优化的处方和工艺为A₃B₁C₁D₂,即磷脂与胆固醇的质量比为1：0，磷脂与药物质量比为15：1，水化时间为1.5h，药物浓度为2mg/ml。制备处方如下：

RAPA 20mg

卵磷脂 300mg

无水乙醇适量

PBS（PH值7.0） 10ml

将处方量的RAPA、卵磷脂、溶于无水乙醇中，于40℃真空旋转成一层薄膜，旋转蒸发至无乙醇味，加入10ml的PBS（pH7.0），水化既得RAPA脂质体混悬液。

实例二:0.2%RAPA脂质体滴眼液包封率的测定方法

将实施例一制得的得RAPA脂质体混悬液过200μm的滤膜，滤膜上残留的物质为未包裹入脂质体未溶解的药物，过滤后的溶液为纯的脂质体溶液，将此脂质体溶液用正戊烷溶解破坏，并定容，在260-298nm的范围内进行一阶导数扫描，测定零谷值A，代入已求得的线型回归方程A＝0.0099x＋0.0034（r=0.9997）中，求得药物浓度。然后按下式计算RAPA脂质体包封率：E％＝C₁/C×100％。

其中：E％为脂质体包封率

C₁包裹在脂质体中药物浓度

C总的药物浓度

计算出包封率为90.02％

实例三：质量评价

1. 脂质体粒子的行态观察

将实施例一所得得RAPA脂质体混悬液水化以后，用少量2％磷钨酸负染后，滴加到专用的铜网上自然挥干，以透射电子显微镜进行观察，脂质体颗粒形态规则，为圆形或椭圆形。

2. 粒径及粒度分布测定

Claims

1.雷帕霉素(rapamycin，RAPA)脂质体滴眼液，它包含有效成分RAPA及制作脂质体所用溶剂卵磷脂及胆固醇，其中RAPA的含量为0.2%。

2.权利要求1所述RAPA脂质体滴眼液，其特征是卵磷脂含量为3%，胆固醇含量为0；制备方法是：将适量的RAPA、卵磷脂、胆固醇溶于适量无水乙醇中，于40℃真空旋转成一层薄膜，旋转蒸发至无乙醇味，加入适量的PBS（pH7.0），水化既得RAPA脂质体混悬液。