CN102156177A - 一种黄酒中甲胺磷的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄酒中甲胺磷的测定方法，利用气相色谱法及液相色谱-串联质谱法测定黄酒中甲胺磷含量的检测方法，包括：(1)提取和净化：利用固相萃取小柱提取黄酒中的甲胺磷，使用乙酸乙酯洗脱吸附在固相萃取小柱上的甲胺磷；(2)基质匹配标准工作溶液的配制；(3)气相色谱定性筛选和定量；(4)阳性样品使用液相色谱-串联质谱定性确证；(5)空白试验；(6)计算结果和表述。本发明方法前处理操作简便易行，甲胺磷回收率高，基质匹配标准工作溶液的采用解决了甲胺磷在气相色谱上的“基质效应”问题和准确定量问题。

Description

一种黄酒中甲胺磷的测定方法

技术领域

本发明涉及一种黄酒中甲胺磷农药残留的定性和定量检测方法。

背景技术

甲胺磷是一种高效有机磷杀剂，杀虫范围广，在粮谷、蔬菜等农作物的种植过程中被广泛使用。由于毒性强，在中国、日本等部份国家已禁用。2008年1月中国国家发展改革委等六部委发布的《关于停止生产甲胺磷等五种高毒农药》的公告，禁止使用包括甲胺磷在内的5种有机磷农药。

近年来食品安全突发事件频发，国内外对食品中农药残留的限量要求也越来越严格。如2008年初的日本“毒饺子”事件：有日本的消费者买了中国大陆制造的手工饺子食用之后，全家出现中毒症状，该饺子被化验出含甲胺磷残留。2010年初国内发生了海南“毒豇豆”事件(水胺硫磷、氧化乐果、三唑磷、克百威残留)。此外，我国农产品出口到日本被通报农药残留超标的事件了经常发生。随着国际社会对农药残留标准的日趋严格，并日益成为发达国家或农产品进出国设置贸易技术壁垒的主要手段，据测算，我国出口农产品因农药残留问题屡遭国外拒收、扣留、退货、索赔，每年外贸损失达到70亿美元。

黄酒是中国的特色产品，主要销往日本、欧盟等发达国家，其中以日本的出口量最大。黄酒虽是我国的传统酒种，但在基础研究和食品安全控制方面起步较晚，特别是缺乏对黄酒中农药残留以及外来添加物等有害成分的检测方法和控制措施的研究。酿酒所用的原料大米在种植过程中不可避免地需要使用农药，致使原料米中可能残留国外重点关注的风险较高的农药，黄酒中也有可能存在这些农药残留的风险。目前，国内外没有形成黄酒中甲胺磷测定的方法标准，也没有相关的专利。现有的食品中甲胺磷检测方法中所涉及的样品均未包含黄酒样品。由于黄酒中含有大量的水和酒精，而甲胺磷的极性较大，采用其它产品中甲胺磷残留的分析方法会导致回收率很低，影响残留分析定量的准确性。因此，需要专门针对黄酒制定一种甲胺磷的残留测定方法。

发明内容

为解决现有食品中甲胺磷测定方法对黄酒样品检测存在的技术缺陷和不适合，本发明提供了一种专门针对黄酒的甲胺磷测定方法，提高了黄酒中甲胺磷的回收率，定量检测限为10μg/L。

一种黄酒中甲胺磷测定方法，包括以下步骤：

(1)提取和净化

依次用丙酮、超纯水活化固相萃取小柱，使小柱保持润湿状态，备用。取黄酒加入到已经活化好的小柱上，让酒样在重力作用下缓慢通过小柱。待酒样全部通过后，抽真空排干小柱中的水分。再用乙酸乙酯洗脱保留在小柱上的甲胺磷，收集洗脱液于40-50℃水浴中氮吹至与所加的黄酒相同体积，备用，供气相色谱-火焰光度检测器测定。

所述的固相萃取小柱优选采用性双官能团改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯吸附树脂为填料的固相萃取小柱，例如德国MN公司的商品名为Easy的小柱，优选规格：500mg/3mL。

所述的黄酒样品的用量以0.2～1mL为佳，更优选1mL。

所述的水浴温度优选45℃。

(2)基质匹配标准工作溶液的配制

取不含甲胺磷的阴性黄酒样品，按步骤(1)操作的提取和净化步骤，获取不含甲胺磷的空白样品基质。使用乙酸乙酯稀释甲胺磷标准溶液储备液至所需的浓度，配制标准工作溶液。取200μL空白样品基质，氮气吹干后加入同体积的标准工作溶液，涡旋混匀后得同样浓度的基质匹配标准工作溶液。

(3)气相色谱测定

采用基质匹配标准工作溶液外标法定量，将(2)所配制的基质匹配标准工作溶液按浓度从低到高依次注入气相色谱测定，以峰面积对浓度绘制标准曲线，基质匹配标准工作溶液中甲胺磷响应值应在仪器检测线性范围内。

将步骤(1)所获得的样液注入气相色谱测定，以标准曲线计算所含的甲胺磷含量。样液中甲胺磷响应值应在仪器检测线性范围内，若响应值超出上限，则需要将样液用乙酸乙酯稀释后再重新注入气相色谱测定；若响应值低于下限，则直接给出定性检测结果“＜10μg/L”。

(4)液相色谱-串联质谱定性确证

当进行气相色谱测定时，若检出试样中甲胺磷的含量大于方法定量检测限10μg/L时，取一定体积的步骤(3)中气相色谱测定后的样液，在40℃-50℃(优选45℃)水浴中氮吹干后，用初始比例的流动相(10％甲醇/90％水)200μL定容至相同体积，过0.22μm滤膜后供液相色谱-串联质谱定性确证。

在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准物质中对应的保留时间一致，且样品组分中各定性离子的相对丰度与浓度相近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过下述最大允许偏差的规定：

相对离子丰度/％      ＞50    ＞20～50    ＞10～20    ≤10

允许的相对偏差/％    ±20    ±25        ±30        ±50

则被确证的样品可判定为阳性检出，并去下一步骤获取定量结果。若偏差超过上述规定，则样品可判定为阴性检出。

(5)空白试验

使用纯水代替黄酒加到固相萃取小柱上，其余操作相同，按照上述步骤(1)～(4)进行。按式(1)计算空白值，记为X₀。

$X=\frac{A\×C\×V}{\mathrm{As}\×m}---\left(1\right)$

式中：

X------样品中甲胺磷的残留量，单位为微克每升(μg/L)；

A------样液中甲胺磷的峰面积；

C------基质匹配标准溶液中甲胺磷的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

V------样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

As-----基质匹配标准溶液中甲胺磷的峰面积；

m------试样溶液所代表的试样质量。

(6)结果计算和表述

按式(1)计算样品中甲胺磷的残留量，记为X₁。

样品中甲胺磷的最终残留量需扣除空白值，记为X，X＝X₁-X₀，所得X即样品中甲胺磷的残留量。

本发明采用采用极性双官能团改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯吸附树脂(polar，bifunctional modified polystyrene-divinylbenzene adsorbent resin)为填料制成的固相萃取小柱(优选德国MN公司商品名为Easy的小柱)，提取吸附黄酒中的甲胺磷。由于甲胺磷极性、水溶性较大，水中溶解度为650mg/L，而黄酒中含有大量的水和酒精，如何有效地提取黄酒中残留的痕量甲胺磷、保证较高的回收率对准确定量十分重要。本发明采用的固相萃取小柱填料含有亲水的极性基团，通过这个“特殊的极性捕获基团”来增加对极性物质的保留，并有很好的水浸润性。该小柱的采用能有效提取黄酒中残留的痕量甲胺磷，添加10μg/L时回收率达70％以上，这是本发明的关键一步。该前处理方法提取、净化同时一步完成，简便易行。

甲胺磷是极性较大的有机磷农药，结构式中含有的磷酸基(-P＝O)，具有形成强氢键作用的能力。由于气相色谱系统中从进样口到色谱柱不可避免地存在活性点，磷酸基极易与这些活性点形成作用力，在经过进样口和色谱柱向检测器传输的过程中有部分甲胺磷会被吸附，而当存在样品基质时，样品基质会与甲胺磷竞争与活性点形成作用力，样品基质的存在增加了甲胺磷向检测器的传输量，即存在“基质诱导色谱响应增强现象”，简称“基质效应”。在痕量检测时，基质效应的存在会严重影响准确定量。本发明从选择色谱柱、调节色谱柱流量、加入分析保护剂、加入样品基质等方面深入研究了对补偿基质效应的效果，发现选择极性较强的色谱柱、采用较大的柱流速能降低甲胺磷与色谱系统活性点的吸附作用，有助于减弱基质效应。加入分析保护剂和样品基质均能在一定程度上屏蔽活性点，但是仅加入样品基质已能起到作用。采用基质匹配标准溶液定量能消除基质效应带来的定量不准确问题。对基质效应进行补偿是准确定量的前提，开展基质效应补偿方法的探讨和最优化选择是本发明的又一关键步骤。

气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)和气质联用-电子轰击电离(GC-EI-MS)是两种常用的检测方式，前者选择性好、样品基质干扰很少、灵敏度高，仪器维护也方便，但无法完成阳性样品的确证；后者是通用型检测器，由于黄酒基体复杂，即使通过小柱净化后，样液中所残存的杂质在GC-EI-MS上还是产生很大的干扰，灵敏度差，检测限无法满足如日本肯定列表10μg/kg等低限量要求，故选择GC-FPD作定性筛选和定量。

针对GC-FPD无法完成阳性确证的缺点，LC-MS-MS比GC-EI-MS有更好的选择性和灵敏度，是定性确证的有力工具。本发明采用了Waters公司采用T3键合技术生产的高效液相色谱柱HSS T3，该柱子的填料基于反相作用+氢键/离子交换作用双重保留机理，实现了甲胺磷在该色谱柱上的良好保留，解决了甲胺磷因极性大而在普通反向液相柱上难以产生有效保留的问题。

本发明方法具有以下有益效果：

1)前处理操作简便易行，所选的以极性双官能团改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯吸附树脂为填料制成的固相萃取小柱能充分提取黄酒中残留的痕量甲胺磷，回收率高。

2)基质匹配标准工作溶液的采用解决了甲胺磷在气相色谱上的“基质效应”问题和准确定量问题。

3)液相色谱-串联质谱测定时采用反相作用+氢键/离子交换作用双重保留机理为填料的液相柱，实现了甲胺磷在该色谱柱上的良好保留，解决了甲胺磷因极性大而在普通反向液相柱上难以产生有效保留的问题。

附图说明

图1为本发明检测方法的流程框图。

图2为10μg/L的基质匹配标准溶液在HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱(新柱)上的谱图。

图3为10μg/L的基质匹配标准溶液在HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱(旧柱)上的谱图。

图4为5μg/L的基质匹配标准溶液在DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱(新柱)上的谱图。

图5为5μg/L的基质匹配标准溶液在DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱(旧柱)上的谱图。

图6为5μg/L的纯溶剂标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定压力20psi。

图7为5μg/L的纯溶剂标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定流量3.0mL/min。

图8为5μg/L的纯溶剂标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定流量1.5mL/min。

图9为5μg/L的基质匹配标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定压力20psi。

图10为5μg/L的基质匹配标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定流量3.0mL/min。

图11为5μg/L的基质匹配标准溶液谱图(旧柱)，色谱柱流量：恒定流量1.5mL/min。

图12为5μg/L的纯溶剂标准溶液谱图(旧柱)。

图13为5μg/L的基质匹配标准溶液谱图(旧柱)。

图14为5μg/L的含农残保护剂标准溶液谱图(旧柱)。

图15为5μg/L的含样品基质和农残保护剂的标准溶液谱图(旧柱)。

图16为10μg/L的纯溶剂标准溶液在C18反向液相色谱柱上的谱图。

图17为5μg/L的纯溶剂标准溶液在T3液相色谱柱上的谱图。

具体实施方式

试验例1提取、净化条件的选择

甲胺磷的极性和水溶性(水中溶解度650mg/L)较大，高含水样品中甲胺磷的提取难度较大，如采用常规的液液萃取很难将甲胺磷萃取到有机溶剂中，回收率不理想，采用常用的固相萃取小柱如C18柱也无法获得满意的回收率。由于黄酒中含有大量的水和酒精，采用其它产品中甲胺磷残留的分析方法会导致回收率很低，影响残留分析定量的准确性。对于甲胺磷等极性、水溶性较大的农药，使用填料表面聚合物改性过小柱比普通的C18小柱提取效果更好些。本发明采用采用极性双官能团改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯吸附树脂(polar，bifunctional modified polystyrene-divinylbenzene adsorbent resin)为填料制成的固相萃取小柱(Easy小柱)，提取吸附黄酒中的甲胺磷，获得了满意的回收率，在最优化条件下，添加水平为10μg/L时回收率达70％以上。

本发明中在添加水平为10μg/L时做回收率试验，考察了小柱填料量、上样量、洗脱溶剂类型及体积、清洗小柱过程对回收率的影响。对比了200mg/3mL、500mg/3mL两种规格的柱子，上样量均为1mL，发现200mg/3mL的回收率较差，约50％，是小柱过载，柱填料表面被黄酒中的其他物质所占据，没有过多的点位去吸附目标物所致。上样量过多同样会导致小柱过载，故500mg/3mL规格的柱子上样量不应超过1mL。500mg/3mL规格的柱子使用乙酸乙酯2mL就能把吸附在柱子上的目标物完全洗脱下来了。若在洗脱之前增加水洗涤过程以除去水溶性杂质，则回收率降至40％以下，为保证回收率，不增加水洗过程。根据以上各项优化结果，使用500mg/3mL规格的柱子、2mL乙酸乙酯洗脱、不加清洗过程得到回收率在70％以上。

试验例2气相色谱柱的选择

附图2和附图3分别为10μg/L的基质匹配标准溶液在HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱新使用和使用一段时间性能下降后的谱图对比，附图4和附图5分别为5μg/L的基质匹配标准溶液在DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)色谱柱新使用和使用一段时间性能下降后的谱图对比。由以上4个谱图甲胺磷峰型及峰面积峰高、信噪比数据可见，甲胺磷在极性稍强的DB-1701柱上色谱峰更对称些，且色谱柱的耐久性也更好，在柱子使用较长时间后峰高和信噪比没有显著下降，而使用HP-5柱，柱子使用过一段时间后甲胺磷峰型拖尾严重，信噪比大大降低，严重影响准确定量，柱子耐用性差。故本发明采用中等极性的DB-1701色谱柱来测定甲胺磷。

试验例3气相色谱条件的优化

甲胺磷是极性较大的有机磷农药，结构式中含有的磷酸基(-P＝O)具有形成强氢键作用的能力。由于气相色谱系统中从进样口到色谱柱不可避免地存在活性点，磷酸基极易与这些活性点形成作用力，在经过进样口和色谱柱向检测器传输的过程中有部分甲胺磷会被吸附，而当存在样品基质时，样品基质会与甲胺磷竞争与活性点形成作用力，样品基质的存在增加了甲胺磷向检测器的传输量，及存在“基质诱导色谱响应增强现象”，简称“基质效应”。当随着色谱柱使用时间的增加，柱性能逐渐下降，柱子上活性点增多，基质效应更加突出。在痕量检测时，基质效应的存在会严重影响准确定量。附图6、附图7、附图8分别为色谱柱性能较差时，浓度为5μg/L的甲胺磷纯溶剂标准溶液(乙酸乙酯为溶剂)在恒压模式20psi、色谱柱载气恒定流量3.0mL/min、色谱柱载气恒定流量1.5mL/min时的谱图。附图9、附图10、附图11分别为色谱柱性能较差时，浓度为5μg/L的甲胺磷基质匹配标准溶液在恒压模式20psi、色谱柱载气恒定流量3.0mL/min、色谱柱载气恒定流量1.5mL/min时的谱图。从甲胺磷峰型、峰面积、峰高、信噪比数据可见，无论是纯溶剂标样还是基质匹配标样，灵敏度为恒压模式20psi(甲胺磷出峰时柱流量大于3.0mL/min)＞恒流3.0mL/min＞恒流1.5mL/min，说明在较大的色谱柱载气流量条件下能获得更好的峰型和信噪比。以上结果可总结为：采用较大的柱流速能降低减少甲胺磷与色谱系统活性点的吸附时间，减少吸附作用，有助于减弱基质效应。

试验例4基质匹配标准溶液的使用

为了减少基质效应的影响，可采取多种方法来补偿，本发明比较了加入样品基质和常用的农残分析保护剂3-乙氧基-1，2-丙二醇来对比效果。附图12、13、14、15分别为为色谱柱性能较差时，5μg/L的纯溶剂、含样品基质、含10mg/mL保护剂、含样品基质+10mg/mL保护剂的甲胺磷溶液色谱图及峰面积、峰高、信噪比数据，比较图12和13可见，当不存在样品基质时，加入保护剂能大大提高响应值；比较图14和15可见，当存在样品基质时，加入保护剂与否对改善灵敏度无显著影响，。综合以上结果发现，样品基质始终存在，要彻底解决基质效应带来的定量偏差问题，加入农残分析保护剂未能解决根本问题，在外标法定量时使用基质匹配标准溶液绘制标准曲线是最好的解决办法，能有效补偿基质效应。

试验例5T3液相色谱柱的使用

甲胺磷是小分子、强极性化合物，在普通反相色谱柱难以产生有效的保留，并且基线噪声较高，无法准确进行定性与定量分析，灵敏度较差。美国Waters公司采用T3键合技术生产的HSS T3液相色谱柱基于反相作用+氢键/离子交换作用双重保留机理，实现了甲胺磷在液相色谱柱上的良好保留，大大提高了灵敏度，并降低了基线噪声。附图16和附图17分别为甲胺磷在普通反相C18柱和T3柱上的谱图，可见甲胺磷在T3柱上响应值更高，基线噪声更低，信噪比大大提高，保留时间延长，峰型更好。

实施例1

下面对本发明的具体实施方式做一个详细的说明。

1.1方法提要

黄酒中的甲胺磷经Easy固相萃取小柱提取、乙酸乙酯洗脱后，供气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)测定，作阳性筛选和定量，采用液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)作阳性样品定性确证。

1.2试剂材料

1.2.1丙酮、乙酸乙酯为农残级试剂；水为超纯水(电阻率18.2MΩ)；

1.2.2Easy固相萃取小柱：500mg/3mL，德国MN公司；

1.2.3T3液相色谱柱：长度100mm，内径2.1mm，填料粒径3.0μm。

1.2.4甲胺磷标准储备溶液：100μg/mL(农业部环境保护科研监测所)，-4℃避光保存；

1.2.5标准工作溶液：移取0.5mL的甲胺磷标准储备液(1.2.3)于25mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，得2.0μg/mL甲胺磷标准工作溶液的。标准工作溶液避光-4℃保存，保存期限6个月。

1.2.6基质匹配标准工作溶液：取200μL空白黄酒基质液(即不含甲胺磷农药的黄酒样品过Easy小柱净化后，2mL乙酸乙酯洗脱后在氮吹至1mL所得的样液。)，氮气吹干后加入同体积的1.2.5中的标准工作溶液，涡旋混匀后供GC-FPD测定，作基质匹配标准曲线用。

1.3仪器和设备

1.3.1气相色谱仪：配火焰光度检测器(美国安捷伦公司)；

1.3.2液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源(美国赛默飞世尔公司)；

1.3.3固相萃取装置：12管(美国Supelco公司)；

1.3.410mL刻度离心管；

1.3.5移液器：20-200μL、100-1000μL(法国吉尔森公司)；

1.3.6氮吹仪：12管(美国Supelco公司)。

1.4测定步骤

1.4.1提取和净化

依次用2×2mL丙酮、2×2mL超纯水活化Easy小柱，使小柱保持润湿状态，备用。取1mL黄酒加入到已经活化好的小柱上，让酒样在重力作用下缓慢通过小柱。待酒样全部通过后，真空抽干5分钟。再用乙酸乙酯洗脱保留在小柱上的甲胺磷，收集2mL洗脱液于10mL的刻度离心管中，于45℃水浴中氮吹至1mL，备用(供气相色谱-火焰光度检测器测定)。

1.4.2甲胺磷基质匹配标准工作溶液的制备

取不含甲胺磷的阴性黄酒样品，按1.4.1步骤操作，获取1mL不含甲胺磷的空白样品基质。使用乙酸乙酯稀释甲胺磷标准溶液储备液至所需的浓度，配制5、10、20、50、100μg/L标准工作溶液。各取200μL空白样品基质，氮气吹干后加入同体积的5、10、20、50、100μg/L标准工作溶液，涡旋混匀后得5、10、20、50、100μg/L的基质匹配标准工作溶液。

1.4.3测定

1.4.3.1气相色谱条件

a)色谱柱：DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)；柱温：100℃(1min)

b)载气：氦气，纯度≥99.999％。

c)进样口温度：180℃；

d)进样量：2μL；

e)进样方式：采用恒压模式，20.0psi。不分流进样(0.75min后打开分流阀)。

f)检测器部分：火焰光度检测器，磷滤光片。检测器温度：240℃；辅助加热区温度：240℃；氢气：75mL/min；空气：100mL/min；尾吹气：氮气，60mL/min。

1.4.3.2气相色谱测定

采用基质匹配标准工作溶液外标法定量，将1.4.2所配制的基质匹配标准工作溶液按浓度从低到高依次注入气相色谱测定，以峰面积对浓度绘制标准曲线。

将1.4.1获得的样液注入气相色谱测定，以标准曲线外标法计算样液中所含的甲胺磷浓度。

1.4.4定性确证

1.4.4.1液相色谱-串联质谱条件

a)甲胺磷的母子离子对及碰撞电压为：142.0→94.2(14V)、125.1(13V)。

b)质谱条件：ESI(+)：电喷雾电压4000V；雾化气35psi；辅助气5psi；

c)液相条件：进样量10μL；色谱柱：Waters

T3，100×2.1mm，3μm；流动相：水/甲醇，梯度洗脱程序如表1。

表1梯度洗脱程序表

时间/min	水/％	甲醇/％	流速/μL/min
				0	90	10	200
2	90	10	200
				6	20	80	200
7	20	80	200
				7.01	90	10	200
10	90	10	200

1.4.4.2液相色谱-串联质谱测定

当进行气相色谱测定时，检出试样中甲胺磷的含量大于方法定量检测限10μg/L时，取0.5mL气相色谱上机测定溶液，氮气吹干后用0.5mL初始比例的流动相(10％甲醇/90％水)定容，过0.22μm滤膜后供液相色谱-串联质谱定性确证。在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准物质中对应的保留时间一致，且样品组分中各定性离子的相对丰度与浓度相近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2的规定，被确证的样品可判定为阳性检出。

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/％	＞50	＞20～50	＞10～20	≤10
					允许的相对偏差/％	±20	±25	±30	±50

1.4.5空白试验

使用纯水代替黄酒加到固相萃取小柱上，其余操作相同，按照上述步骤(1)～(4)进行。按式(1)计算空白值，记为X₀。

$X=\frac{A\×C\×V}{\mathrm{As}\×m}---\left(1\right)$

式中：

X------样品中甲胺磷的残留量，单位为微克每升(μg/L)；

A------样液中甲胺磷的峰面积；

C------基质匹配标准溶液中甲胺磷的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

V------样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

As-----基质匹配标准溶液中甲胺磷的峰面积；

m------试样溶液所代表的试样质量。

1.4.6结果计算和表述

按式(1)计算样品中甲胺磷的残留量，记为X₁。

样品中甲胺磷的最终残留量需扣除空白值，记为X，X＝X₁-X₀，所得X即样品中甲胺磷的残留量。

1.4.7方法的三项技术指标

1.4.7.1线性关系

在本发明方法确定的实验条件下，甲胺磷在5-100μg/L范围内与响应值有很好的线性关系，线性方程为：Y＝32.59X+9.09，相关系数为：0.9997。

1.4.7.2定量检测限

本发明方法对黄酒中甲胺磷的定量检测限为10μg/L。

1.4.7.3回收率和精密度

本发明方法的回收率试验是添加回收率试验，选择不含甲胺磷的空白黄酒样品，分别添加10、20、50μg/L，每个浓度平行测定6次，以相对标准偏差(RSD)来衡量精密度，回收率和精密度数据见表3。

表3回收率和精密度数据

添加水平	回收率/％	RSD/％
			10μg/L	76.8	6.85
20μg/L	85.0	6.82
			50μg/L	82.9	3.95

Claims (5)

1.一种黄酒中甲胺磷的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取和净化

依次用丙酮、超纯水活化固相萃取小柱，使小柱保持润湿状态，备用；取待测黄酒样品加入到已经活化好的小柱上，让酒样在重力作用下缓慢通过小柱，待酒样全部通过后，抽真空排干小柱中的水分，再用乙酸乙酯洗脱保留在小柱上的甲胺磷，收集洗脱液刻度离心管中，收集到的洗脱液于40～50℃水浴中氮吹至与所加的黄酒相同体积，所得样液备用，供气相色谱-火焰光度检测器测定；

(2)基质匹配标准工作溶液的配制

取不含甲胺磷的阴性黄酒样品，按步骤(1)操作的提取和净化步骤，获取不含甲胺磷的空白样品基质；

使用乙酸乙酯稀释甲胺磷标准溶液储备液至所需的浓度，配制若干不同浓度的标准工作溶液；

取空白样品基质，氮气吹干后加入同体积的标准工作溶液，涡旋混匀后得同样浓度的基质匹配标准工作溶液；

(3)气相色谱定性筛选和定量

采用基质匹配标准工作溶液外标法定量，将步骤(2)所配制的基质匹配标准工作溶液按浓度从低到高依次注入气相色谱测定，以峰面积对浓度绘制标准曲线，基质匹配标准工作溶液中甲胺磷响应值应在仪器检测线性范围内，线性下限应低于定量检测限10μg/L；

将步骤(1)所获得的样液注入气相色谱测定，以标准曲线计算所含的甲胺磷含量；

样液中甲胺磷响应值应在仪器检测线性范围内，若响应值超出上限，则需要将样液用乙酸乙酯稀释后再重新注入气相色谱测定；若响应值低于下限，则直接给出定性检测结果“＜10μg/L”；

(4)液相色谱-串联质谱定性确证

当进行气相色谱测定时，若检出试样中甲胺磷的含量大于方法定量检测限10μg/L时，取一定体积的经步骤(3)中气相色谱测定后的样液，在40℃～50℃水浴中氮吹干后，用初始比例的流动相-10％甲醇/90％水定容至相同体积，过0.22μm滤膜后供液相色谱-串联质谱定性确证；

在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与标准物质中对应的保留时间一致，且样品组分中各定性离子的相对丰度与浓度相近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过下述最大允许偏差的规定：

相对离子丰度/％      ＞50    ＞20～50    ＞10～20    ≤10

允许的相对偏差/％    ±20    ±25        ±30        ±50

则被确证的样品可判定为阳性检出，并去下一步骤获取定量结果。若偏差超过上述规定，则样品可判定为阴性检出；

(5)空白试验

使用纯水代替黄酒加到固相萃取小柱上，其余操作相同，按照上述步骤(1)～(4)进行；

按式(1)计算空白值，记为X₀，

$X=\frac{A\×C\×V}{\mathrm{As}\×m}---\left(1\right)$

式中：

X------样品中甲胺磷的残留量，单位为微克每升(μg/L)；

A------样液中甲胺磷的峰面积；

C------基质匹配标准溶液中甲胺磷的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

V------样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

As-----基质匹配标准溶液中甲胺磷的峰面积；

m------试样溶液所代表的试样质量；

(6)结果计算和表述

按式(1)计算样品中甲胺磷的残留量，记为X₁；

样品中甲胺磷的最终残留量需扣除空白值，记为X，X＝X₁-X₀，所得X即样品中甲胺磷的残留量。

2.如权利要求1所述的黄酒中甲胺磷的测定方法，其特征在于：所述的固相萃取小柱为极性双官能团改性的聚苯乙烯-二乙烯基苯吸附树脂为填料的固相萃取小柱。

3.如权利要求2所述的黄酒中甲胺磷的测定方法，其特征在于：所述的固相萃取小柱为德国MN公司的商品名为Easy的小柱，规格：500mg/3mL。

4.如权利要求1所述的黄酒中甲胺磷的测定方法，其特征在于：所述的黄酒样品的用量为0.2～1mL。

5.如权利要求1所述的黄酒中甲胺磷的测定方法，其特征在于：所述的水浴温度为45℃。

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