CN102154211A - 一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 - Google Patents
一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102154211A CN102154211A CN201010612800.0A CN201010612800A CN102154211A CN 102154211 A CN102154211 A CN 102154211A CN 201010612800 A CN201010612800 A CN 201010612800A CN 102154211 A CN102154211 A CN 102154211A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- branchiostoma
- transfection
- clone
- qingdao
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 241000012665 Branchiostoma belcheri tsingtauense Species 0.000 title abstract 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000251534 Branchiostoma Species 0.000 claims description 35
- 241000251538 Branchiostoma lanceolatum Species 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 17
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 claims description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 8
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 8
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 8
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 claims description 4
- KXDSHDKQUXYLDB-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-1-(2,4,6-trimethoxyphenyl)butan-1-one Chemical compound COC1=CC(OC)=C(C(=O)CCCCl)C(OC)=C1 KXDSHDKQUXYLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical group [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 claims description 4
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 4
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 claims description 4
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 claims description 4
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 4
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 claims description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 4
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims description 4
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims description 4
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 4
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 claims description 4
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 4
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 claims description 3
- 241000539698 Moyer virus Species 0.000 claims description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 3
- 238000002224 dissection Methods 0.000 claims description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 3
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-DHVFOXMCSA-N L-galactose Chemical compound OC[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 2
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 claims description 2
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 MONOBASIC Chemical compound 0.000 claims description 2
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 claims description 2
- CMNWUCGLNTVCSI-UHFFFAOYSA-J [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Cl-].[O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Cl-].[O-]P([O-])([O-])=O CMNWUCGLNTVCSI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 2
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 78
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 6
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 6
- 206010003594 Ataxia telangiectasia Diseases 0.000 description 5
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 5
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251537 Branchiostoma belcheri Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102100032938 Telomerase reverse transcriptase Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101150063416 add gene Proteins 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/04—Immortalised cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于细胞生物学领域。本发明采用青岛文昌鱼腮部原代细胞,通过用人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染来实现细胞的成功传代,建立了青岛文昌鱼细胞系。该原代细胞为淋巴细胞样细胞。本发明还提供了一种建立青岛文昌鱼细胞系的方法以及专用于该建系方法的细胞培养液,成功地解决了离体传代培养文昌鱼细胞的技术难题,有利于促进遗传、免疫、进化、发育和基因组学等领域的深入研究。
Description
技术领域
本发明属于细胞生物学领域,具体涉及一种青岛文昌鱼细胞系及其建系的方法。
背景技术
海洋模式动物文昌鱼,拉丁文学名为Branchiostoma belcheri,属于原索动物,既保留了无脊椎动物的一些特性,又具有脊椎动物的特点,是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型。文昌鱼早在5亿年前就已经出现,被认为是现存的脊椎动物始祖代表,素有“活化石”之称。由于其独特的进化地位,被认为是研究动物进化和胚胎发育的典型模式动物,在学术上有很高的进化地位,是国内外近年来遗传、免疫、进化、发育和基因组学研究的热点。但文昌鱼对栖息地生态环境的要求十分严格和苛刻,在世界分布范围很窄,产量很少。它生活在沙质中,要求海水透明度较高,水质洁净,水深在5-10米,最适盐度为每升海水中含14-29克盐,酸碱度在8.1-8.2。文昌鱼在我国主要分布在厦门、青岛和烟台沿海。
为进一步深化文昌鱼的研究,建立文昌鱼细胞系是至关重要的一个环节。二十世纪八十年代就有人尝试培养文昌鱼细胞,但只局限于原代培养,细胞无法传代。如《厦门大学学报(自然科学版)》2006年第B05期第181-183页《文昌鱼离体细胞原代培养初步研究》一文中就公开了一种原代培养文昌鱼细胞的方法。至今国内外也尚无文昌鱼细胞建系的报道,研究文昌鱼基因功能只能通过其他物种的细胞系来进行。其主要原因是文昌鱼细胞在体外不增殖,迅速进入衰老期,因而无法扩增和传代培养。
端粒为细胞染色体末端一种有6kb串联的短片段重复序列(TTAGGG)n及一些结合蛋白组成的特殊结构。细胞在体外培养过程中进入复制性衰老与端粒有关。每次细胞分裂端粒丢失30-50个核苷酸。端粒酶通过维持和延伸细胞染色体末端端粒,避免了染色体末端的不稳定性。目前认为细胞永生化过程中的一个关键点是维持或延长细胞染色体的端粒,使端粒酶重新表达。端粒酶催化亚单位TERT在维持端粒酶的活性中起着致关重要的作用。现有技术中的一个例子是,Choy-Pik Chiu的研究小组将人端粒酶催化亚单位hTERT导入人皮肤成纤维细胞,此转染细胞可以在体外持续传代,而且保持亲本细胞的生物学特性,同样有接触性抑制。Carmela P.Morales等人同样将hTERT导入人皮肤成纤维细胞,他们发现高表达hTERT的成纤维细胞可以进行280次population doublings(PD),而亲本细胞则只有70-80PD。这些细胞的增殖速度与亲本细胞基本相同。现有技术中的另一个例子是,共济失调毛细血管扩张Ataxia-telangiectasia(A-T)患者对离子辐射十分敏感,体外培养A-T患者的细胞十分困难,依赖高浓度血清,而且很容易衰老。Wood LD等人将hTERT导入A-T患者的成纤维细胞,有效地抑制了细胞衰老。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术中无法实现离体传代培养文昌鱼细胞的技术难题,提供一种稳定的青岛文昌鱼细胞系以及建立这种细胞系的方法,为文昌鱼的研究建立良好的实验平台,以利于对遗传、免疫、进化、发育和基因组学的进一步深入的研究。
本发明所述的青岛文昌鱼细胞系通过人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞。
本发明提供的青岛文昌鱼细胞系中,所述的人端粒酶催化亚单位hTERT的表达载体为逆转录病毒载体pBABE。
本发明提供的青岛文昌鱼细胞系中,所述的原代细胞为淋巴细胞样细胞。
本发明还提供了一种建立所述青岛文昌鱼细胞系的方法,包括以下步骤:
1)培养青岛文昌鱼腮部原代细胞:将青岛文昌鱼冰浴至昏迷,70~75%酒精消毒体表,无菌解剖,取文昌鱼腮部组织,用含青霉素和链霉素的细胞培养液漂洗后,剪切为细小组织块,将其移至六孔细胞培养板,涂布均匀,25~29℃下恒温静置培养使其贴壁,每日观察细胞生长状态,并补加0.5~1ml细胞培养液;3日后更换1/2体积的细胞培养液;
2)将人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞:转染前24小时选择生长状态良好的293T细胞,胰酶消化后传代后,接种于24孔培养中,每孔4X105个细胞,待细胞覆盖率达到60%后用于转染;转染步骤如下:将8μl lipofectamine2000与500μl无抗生素、无血清的细胞培养液充分混合并室温静置5分钟;与此同时,将2μg包装质粒pCL-Ampho与2μg pBABE-hTERT和500μl无抗生素无血清的细胞培养液充分混合,5分钟后将上述两种混合液混匀并室温静置20分钟。20分钟后将此混合液加入到293T细胞中,补足培养液至2ml,37℃、5%CO2中培养,6小时后换为普通培养液,48小时后收集上清液,用0.45μm的滤膜过滤。病毒感染液1/4体积+文昌鱼细胞培养液3/4体积,混合后加入原代细胞;
3)获得存活细胞,并进行传代培养:转染hTERT的细胞开始增殖后,细胞数目增多,细胞生长密度较大时,用移液管轻轻吸打的方法稀释传代悬浮细胞,传代稀释比例为1∶4;以后每次传代视细胞生长状态,3~4日传代一次;
4)进行细胞生物学鉴定,验证细胞特征。
本发明还提供了一种专用于所述建立青岛文昌鱼细胞系的方法的培养液,该培养液以Leiboviz’s L15培养基为基础培养基,并含有以下组分:至少一种必须氨基酸及非必须氨基酸、至少一种维生素、至少一种盐类、至少一种缓冲液及糖类、至少一种酚类化合物;
所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸;
所述的维生素为氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺、维生素B6、核黄素、硫胺磷酸酯、无旋光肌醇;
所述的盐类为氯化钙、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、磷酸二氢钠、丙酮酸钠;
所述的糖类为右旋半乳糖;
所述酚类化合物为酚红;
所述培养液的渗透压为750-800mOsm/kg;
使用前在所述培养液中加入占体积百分比为10%的胎牛血清。
本发明所述的专用于建立青岛文昌鱼细胞系的方法的培养液,各组分含量为:甘氨酸为380-420mg/L,L-丙氨酸为400-480mg/L,L-左型精氨酸为800-1100mg/L,L-天冬酰胺酸为450-530mg/L,L-半胱氨酸为200-260mg/L,L-谷氨酰胺为570-620mg/L,L-组氨酸为480-520mg/L,L-异亮氨酸为480-520mg/L,L-亮氨酸为220-270mg/L,L-赖氨酸为120-170mg/L,L-蛋氨酸为120-170mg/L,L-苯丙氨酸为230-280mg/L,L-丝氨酸为360-420mg/L,L-苏氨酸为550-610mg/L,L-色氨酸为36-43mg/L,L-酪氨酸为530-620mg/L,L-缬氨酸为160-220mg/L,氯化胆碱为1.7-2.2mg/L,D-泛酸钙为1.8-2.3mg/L,叶酸为1.7-2.2mg/L,烟酰胺为1.6-2.2mg/L,维生素B6为1.8-2.3mg/L,核黄素为0.18-0.22mg/L,硫胺磷酸酯为1.9-2.1mg/L,无旋光肌醇为3.6-4.3mg/L,氯化钙为250-300mg/L,氯化镁为170-198mg/L,硫酸镁为180-200mg/L,氯化钾为770-810mg/L,磷酸二氢钾为110-130mg/L,氯化钠为19500-20100mg/L,磷酸二氢钠为370-390mg/L,丙酮酸钠为1050-1120mg/L,右旋半乳糖为1650-1900mg/L,酚红为18-21mg/L。
本发明通过上述建系方法及其专用培养液提供了一种青岛文昌鱼细胞系,成功地解决了离体传代培养文昌鱼细胞的技术难题,有利于对青岛文昌鱼的科学研究,并相应的促进遗传、免疫、进化、发育和基因组学等领域的深入研究。
附图说明
图1:将文昌鱼的腮部组织进行原代培养,12小时后细胞游离出组织块。
图2:部分细胞在贴壁的状态下可以伸出长长的触角。
图3:利用本发明建立的文昌鱼细胞系的第三代传代细胞。
图4:利用本发明建立的文昌鱼细胞系的第六代传代细胞。
图5:利用本发明建立的文昌鱼细胞系的第八代传代细胞。
图6:Wright-Gimsa染色结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的应用范围。
本发明提供的的青岛文昌鱼细胞系通过人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞。所述的人端粒酶催化亚单位hTERT的表达载体为逆转录病毒载体pBABE。所述的原代细胞为淋巴细胞样细胞。
实施例1
本发明提供的建立所述青岛文昌鱼细胞系的具体步骤如下:
1)培养青岛文昌鱼腮部原代细胞:将青岛文昌鱼冰浴至昏迷,70~75%酒精消毒体表,无菌解剖,取文昌鱼腮部组织,用含青霉素和链霉素的细胞培养液漂洗后,剪切为细小组织块,将其移至六孔细胞培养板,涂布均匀,25~29℃下恒温静置培养使其贴壁,每日观察细胞生长状态,并补加0.5~1ml细胞培养液;3日后更换1/2体积的细胞培养液。如图1所示,利用文昌鱼腮部组织进行原代培养后,可见贴壁细胞和悬浮细胞从组织中游离出来,悬浮细胞呈圆形,贴壁细胞呈多角形,但原代细胞不分裂。
2)将人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞。所述的人端粒酶催化亚单位hTERT的表达载体为逆转录病毒载体pBABE(购自Addgene公司,Plasmid1771#)。转染前24小时选择生长状态良好的293T细胞(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库),胰酶消化后传代后,接种于24孔培养中,每孔4X105个细胞,待细胞覆盖率达到60%后用于转染;转染步骤如下:将8μl lipofectamine2000与500μl无抗生素、无血清的细胞培养液充分混合并室温静置5min;与此同时,将2μg包装质粒pCL-Ampho(购自Imgenex公司)与2μg pBABE-hTERT和500μl无抗生素无血清的细胞培养液充分混合,5分钟后将上述两种混合液混匀并室温静置20分钟。20分钟后将此混合液加入到293T细胞中,补足培养液至2ml,37℃、5%CO2中培养,6小时后换为普通培养液,48小时后收集上清液,用0.45μm的滤膜过滤。病毒感染液1/4体积+文昌鱼细胞培养液3/4体积,混合后加入原代细胞。
对贴壁细胞和悬浮细胞同时进行hTERT转染5天后,悬浮细胞开始出现分裂,并有大部分细胞逐渐趋于半贴壁状态,少部分细胞贴壁,与细胞培养皿底部粘着紧密。半贴壁和贴壁的细胞形态与原代的悬浮细胞基本相同。在倒置显微镜下观察,细胞虽然大小不一,但均呈圆形,细胞核位于细胞的中央。如图2所示,贴壁细胞有时会伸出长长的触角,但最长持续2天,之后触角会逐渐消失,细胞恢复原状。随着传代次数的增加,细胞的大小差异有逐渐缩小的趋势,但细胞大小不等的现象仍然存在。转染后贴壁多角形细胞死亡,只有圆形的悬浮细胞生存下来。
3)获得存活细胞,并进行传代培养。转染hTERT的细胞开始增殖后,细胞数目增多,细胞生长密度较大时,用移液管轻轻吸打的方法传代悬浮细胞,传代稀释比例为1∶4;以后每次传代视细胞生长状态,3~4日传代一次。图3为第三代传代细胞,图4为第六代传代细胞,图5为第八代传代细胞。由此可见,第一代至第八代的细胞形态没有十分明显差别,但证明了此细胞成功实现了传代培养,是可以传代培养的文昌鱼细胞系。至目前已传到了第16代,细胞增殖旺盛。
4)进行细胞生物学鉴定,验证细胞特征。将细胞悬浊液滴至载玻片上进行涂片,干燥后进行Wright-Gimsa染色。结果如图6所示。从染色结果上判断,此细胞系为淋巴细胞样细胞。
实施例2~5
本发明提供的专用于上述建立青岛文昌鱼细胞系的方法的培养液组分优选:
制备实施例
本发明提供的专用于建立所述青岛文昌鱼细胞系方法的细胞培养液的配制:
将各组分加入0.8升的超纯水(电阻率18.2Ω)中,将渗透压调配至750-800mOsm/kg,将酸碱度调至7.0-7.2,用超纯水(电阻率18.2Ω)将培养液的总体积调至1升,充分混匀,过滤灭菌后4℃保存;使用前加入占体积百分比为10%的胎牛血清。
本发明提供的建立所述青岛文昌鱼细胞系的方法具有重复可再现性,对于所属技术领域的技术人员而言,只要按照以上所述的具体步骤操作,即可获得本发明所述的青岛文昌鱼细胞系。
Claims (6)
1.一种青岛文昌鱼细胞系,其特征在于用人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞。
2.根据权利要求1所述的青岛文昌鱼细胞系,其特征在于:所述人端粒酶催化亚单位hTERT的表达载体为逆转录病毒载体pBABE。
3.根据权利要求1所述的青岛文昌鱼细胞系,其特征在于:所述原代细胞为淋巴细胞样细胞。
4.一种建立权利要求1所述青岛文昌鱼细胞系的方法,包括以下步骤:
1)培养青岛文昌鱼腮部原代细胞:将青岛文昌鱼冰浴至昏迷,70~75%酒精消毒体表,无菌解剖,取文昌鱼腮部组织,用含青霉素和链霉素的细胞培养液漂洗后,剪切为细小组织块,将其移至六孔细胞培养板,涂布均匀,25~29℃下恒温静置培养使其贴壁,每日观察细胞生长状态,并补加0.5~1ml细胞培养液;3日后更换1/2体积的细胞培养液;
2)将人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA转染青岛文昌鱼腮部原代细胞:转染前24小时选择生长状态良好的293T细胞,胰酶消化后传代后,接种于24孔培养中,每孔4X105个细胞,待细胞覆盖率达到60%后用于转染;转染步骤如下:将8μl lipofectamine2000与500μl无抗生素、无血清的细胞培养液充分混合并室温静置5分钟;与此同时,将2μg包装质粒pCL-Ampho与2μg pBABE-hTERT和500μl无抗生素无血清的细胞培养液充分混合,5分钟后将上述两种混合液混匀并室温静置20分钟。20分钟后将此混合液加入到293T细胞中,补足培养液至2ml,37℃、5%CO2中培养,6小时后换为普通培养液,48小时后收集上清液,用0.45μm的滤膜过滤。病毒感染液1/4体积+文昌鱼细胞培养液3/4体积,混合后加入原代细胞;
3)获得存活细胞,并进行传代培养:转染hTERT的细胞开始增殖后,细胞数目增多,细胞生长密度较大时,用移液管轻轻吸打的方法稀释传代悬浮细胞,传代稀释比例为1∶4;以后每次传代视细胞生长状态,3~4日传代一次;
4)进行细胞生物学鉴定,验证细胞特征。
5.一种专用于权利要求4所述建立青岛文昌鱼细胞系的方法的培养液,以Leiboviz’sL15培养基为基础培养基,并含有以下组分:至少一种必须氨基酸及非必须氨基酸、至少一种维生素、至少一种盐类、至少一种缓冲液及糖类、至少一种酚类化合物;
所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸;
所述的维生素为氯化胆碱、泛酸钙、叶酸、烟酰胺、维生素B6、核黄素、硫胺磷酸酯、无旋光肌醇;
所述的盐类为氯化钙、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、磷酸二氢钠、丙酮酸钠;
所述的糖类为右旋半乳糖;
所述酚类化合物为酚红;
所述培养液的渗透压为750-800mOsm/kg;
使用前在所述培养液中加入占体积百分比为10%的胎牛血清。
6.根据权利要求5所述的一种专用于建立青岛文昌鱼细胞系的方法的培养液,其特征在于其各组分含量:甘氨酸为380-420mg/L,L-丙氨酸为400-480mg/L,L-左型精氨酸为800-1100mg/L,L-天冬酰胺酸为450-530mg/L,L-半胱氨酸为200-260mg/L,L-谷氨酰胺为570-620mg/L,L-组氨酸为480-520mg/L,L-异亮氨酸为480-520mg/L,L-亮氨酸为220-270mg/L,L-赖氨酸为120-170mg/L,L-蛋氨酸为120-170mg/L,L-苯丙氨酸为230-280mg/L,L-丝氨酸为360-420mg/L,L-苏氨酸为550-610mg/L,L-色氨酸为36-43mg/L,L-酪氨酸为530-620mg/L,L-缬氨酸为160-220mg/L,氯化胆碱为1.7-2.2mg/L,D-泛酸钙为1.8-2.3mg/L,叶酸为1.7-2.2mg/L,烟酰胺为1.6-2.2mg/L,维生素B6为1.8-2.3mg/L,核黄素为0.18-0.22mg/L,硫胺磷酸酯为1.9-2.1mg/L,无旋光肌醇为3.6-4.3mg/L,氯化钙为250-300mg/L,氯化镁为170-198mg/L,硫酸镁为180-200mg/L,氯化钾为770-810mg/L,磷酸二氢钾为110-130mg/L,氯化钠为19500-20100mg/L,磷酸二氢钠为370-390mg/L,丙酮酸钠为1050-1120mg/L,右旋半乳糖为1650-1900mg/L,酚红为18-21mg/L。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010612800.0A CN102154211B (zh) | 2010-11-17 | 2010-12-29 | 一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201010548193 | 2010-11-17 | ||
CN201010548193.6 | 2010-11-17 | ||
CN201010612800.0A CN102154211B (zh) | 2010-11-17 | 2010-12-29 | 一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012102445212A Division CN102757939A (zh) | 2010-12-29 | 2010-12-29 | 一种青岛文昌鱼细胞系培养液及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102154211A true CN102154211A (zh) | 2011-08-17 |
CN102154211B CN102154211B (zh) | 2012-12-12 |
Family
ID=44435886
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201010612800.0A Expired - Fee Related CN102154211B (zh) | 2010-11-17 | 2010-12-29 | 一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102154211B (zh) |
WO (1) | WO2012065322A1 (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103937736A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-23 | 山西农业大学 | 鱼鳃细胞系的建立方法 |
CN104498429A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-08 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种等渗透压平衡培养液 |
CN105255827A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-01-20 | 中国海洋大学 | 一种用于鲆鲽鱼类淋巴细胞增殖的培养基 |
CN113637632A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-12 | 宁波大学 | 一种银鲳肌肉组织细胞系 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1273599C (zh) * | 2004-12-24 | 2006-09-06 | 中山大学 | 中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶基因及其应用 |
CN100535115C (zh) * | 2006-04-30 | 2009-09-02 | 中山大学 | 文昌鱼半乳糖凝集素AmphiGAL13基因及其应用 |
WO2007142582A1 (en) * | 2006-06-08 | 2007-12-13 | Innoventus Project Ab | Fluorescent proteins and genes encoding them |
WO2008094316A2 (en) * | 2006-09-22 | 2008-08-07 | Stowers Institute Of Medical Research | Novel branchiostoma derived fluorescent proteins |
-
2010
- 2010-12-02 WO PCT/CN2010/079372 patent/WO2012065322A1/zh active Application Filing
- 2010-12-29 CN CN201010612800.0A patent/CN102154211B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
《nature genetics》 20000131 Wyllie1 FS. .,et al. Telomerase prevents the accelerated cell ageing of Werner syndrome fibroblasts 16-17 1-6 第24卷, * |
《海洋科学》 20091231 石松林,等 文昌鱼鳃组织原代培养 44-48 1-6 第33 卷, 第3 期 * |
《福建水产》 19881231 洪满贤,黄明 文昌鱼细胞培养的初步研究 67-70 1-6 , 第4期 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103937736A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-23 | 山西农业大学 | 鱼鳃细胞系的建立方法 |
CN104498429A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-08 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种等渗透压平衡培养液 |
CN104498429B (zh) * | 2014-12-12 | 2017-08-11 | 中国水产科学研究院长江水产研究所 | 一种等渗透压平衡培养液 |
CN105255827A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-01-20 | 中国海洋大学 | 一种用于鲆鲽鱼类淋巴细胞增殖的培养基 |
CN105255827B (zh) * | 2015-12-02 | 2018-07-17 | 中国海洋大学 | 一种用于鲆鲽鱼类淋巴细胞增殖的培养基 |
CN113637632A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-12 | 宁波大学 | 一种银鲳肌肉组织细胞系 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012065322A1 (zh) | 2012-05-24 |
CN102154211B (zh) | 2012-12-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Laird et al. | Stem cells are units of natural selection in a colonial ascidian | |
Romanenko et al. | Segmental paleotetraploidy revealed in sterlet (Acipenser ruthenus) genome by chromosome painting | |
Nakano | Establishment of cell lines in vitro from a mammary ascites tumor of mouse and biological properties of the established lines in a serum containing medium | |
CN102154211B (zh) | 一种青岛文昌鱼细胞系及其建立方法 | |
KR100832592B1 (ko) | 폴리머 막을 이용한 줄기세포와 피더세포의 공배양방법 | |
NØRBY | A specific nutritional requirement for pyrimidines in rudimentary mutants of Drosophila melanogaster | |
CN102344906B (zh) | 一种毛囊干细胞的分离培养方法 | |
Huber et al. | The evolution of anural larvae in molgulid ascidians | |
JP2012527890A (ja) | 茄子科の形成層由来植物幹細胞及びこれの分離培養方法 | |
CN102766654A (zh) | 特异促进肝细胞cyp1a2基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用 | |
CN102453716A (zh) | 猪骨骼肌特异性表达基因α-actin启动子的克隆及应用 | |
EP2892996A2 (en) | Stem cell bank | |
KR101703783B1 (ko) | 참돔 지느러미 유래 세포주의 개발 | |
CN102634481A (zh) | 一种金钱鱼肾细胞体外培养方法 | |
CN102757939A (zh) | 一种青岛文昌鱼细胞系培养液及其制备方法 | |
CN102876716B (zh) | 特异促进肝细胞cyp2e1基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用 | |
Shashikumar et al. | Development of cell line from the testicular tissues of crab Scylla serrata | |
Glick et al. | DNA-induced pigment production in a hamster cell line | |
Guan et al. | Establishment and biological characterization of fibroblast cell line from the Langshan chicken | |
Zhou et al. | Establishment and identification of a Debao pony ear marginal tissue fibroblast cell line | |
Lee et al. | Identification of embryonic stem cell activities in an embryonic cell line derived from marine medaka (Oryzias dancena) | |
Stetten et al. | 33258 Hoechst enhances the selectivity of the bromodeoxyuridine—light method of isolating conditional lethal mutants | |
AU2016354255B2 (en) | A WW homogametic male decapod crustacean and methods of using the same | |
Sashikumar et al. | Development of primary cell culture from Scylla serrata: primary cell cultures from Scylla serrata | |
Gallo et al. | Sources of cardiomyocytes for stem cell therapy: an update |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121212 Termination date: 20191229 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |