CN102153619A - 一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽、其提取分离方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽、其提取分离方法及用途,中药材僵蚕粉碎后,通过提取、超滤、浓缩和乙醇沉淀提取分离获得有功能作用的有效部分糖肽,该小分子量糖肽分子量在6000道尔顿以下,固态呈浅棕色或浅黄色,其提取分离方法简单,分离的小分子量糖肽纯度高,回收率高,适宜于工业化生产,得到小分子量糖肽的具有镇痛作用,可研制成具有镇痛作用的药品,具有价格便宜、药效显著、食用安全性好等特点,对于新药开发具有重要意义。
Description
技术领域:
本发明涉及一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽、其提取分离方法及其用途,属于生药学技术领域。
背景技术:
僵蚕是临床常用的中药,为蚕蛾科昆虫家蚕Bombyx mori L.4~5龄的幼虫感染(或人工接种)白僵菌Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.而致死的干燥体。
研究表明,僵蚕醇水浸出液对小鼠、家兔均有催眠、抗惊厥作用;其提取液在体内、外均有较强的抗凝作用;僵蚕粉有较好的降血糖作用;体外试验,对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有轻度的抑菌作用,其醇提取物体外可抑制人体肝癌细胞的呼吸,可用于直肠瘤型息肉的治疗。化学成分研究表明,僵蚕含蛋白质,脂肪,多种氨基酸以及铁、锌、铜、锰、铬等微量元素,白僵蚕体表的白粉中含草酸铵,对其所含的主要药效成分及其药理作用至今尚不完全了解,从僵蚕中提取的具有镇痛作用的小分子量糖肽的研究目前尚未见报道。已有报道从古尼虫草、古尼拟青霉提取糖肽,但古尼虫草和古尼拟青霉原料来源稀少,价格昂贵,僵蚕作为一种常用中药材,具有原料来源广泛、价格低的优点。
发明内容:
本发明的目的在于克服已有技术的不足而提供一种从僵蚕中提取分离的小分子量糖肽、其提取分离方法及其用途,其提取分离方法简单,分离的小分子量糖肽纯度高,回收率高,适宜于工业化生产,得到小分子量糖肽的具有镇痛作用。
本发明的目的可以通过如下措施来达到:一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽,其特征在于其特征在于小分子量糖肽以僵蚕为原料,通过提取、超滤、浓缩和乙醇沉淀制备得到。
一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽的提取分离方法,其特征在于其包括如下步骤:
(1)符合国家药典质量标准的僵蚕药材,晾干后粉碎得僵蚕原料;
(2)将僵蚕原料中加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为5-10∶1的水,80℃-100℃提取1.5-2.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为3-5∶1的水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为3-5∶1的水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣,合并三次提取的滤液;
(3)将步骤(2)所得的滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/10;
(4)将步骤(3)所得的浓缩液加入到3-5倍体积的乙醇中,搅拌后静置、沉淀,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物;
(5)将步骤(4)所得的沉淀物加入到去离子水中,去离子水与沉淀物的体积重量比(L/kg)为50-100∶1,搅拌溶解;
(6)将步骤(5)所得的溶液用截留分子量6000的膜进行超滤,收集透过液部分;
(7)对超滤透过液进行减压浓缩,至原来体积的1/5-1/10;
(8)将步骤(7)所得的浓缩液加入到3-5倍体积的乙醇中,搅拌后静置、沉淀,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物,获得分子量在6000道尔顿以下的小分子量糖肽产品;
为了进一步实现本发明的目的,将步骤(8)所得沉淀物用丙酮脱水2-3次,60℃-105℃干燥,获得小分子量糖肽产品。
为了进一步实现本发明的目的,将步骤(8)所得沉淀物60℃-105℃烘干、粉碎,获得小分子量糖肽产品。
一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽用于镇痛。
本发明同已有技术相比可产生如下积极效果:本发明以僵蚕为原料分离提取小分子量糖肽,僵蚕原料来源广泛易得,价格便宜;其提取分离方法简单,只需要用提取、超滤、浓缩和乙醇沉淀,就能完成分离和纯化,适宜于工业化生产。本发明中分离得到的小分子量糖肽,是首次在僵蚕中发现的具有镇痛作用的成分。本发明中提取分离小分子量糖肽,可为僵蚕在更多方面的开发利用提供理论支撑,可以开发新的镇痛药物。
具体实施方式:下面对本发明的具体实施方式作详细说明:
实施例1:
(1)符合国家药典质量标准的僵蚕药材2Kg,晾干后粉碎至80目大小颗粒;
(2)将粉碎后的僵蚕,加入20L的水,80℃-100℃提取0.5-2.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入10L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入10L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣。合并三次提取的滤液。
(3)取步骤(3)所得的滤液30L减压浓缩至3L。
(4)3L浓缩液加入到15L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;下层沉淀部分离心,收集沉淀物。
(5)取步骤(4)所得的沉淀物0.05kg加入到5L的去离子水中,搅拌溶解。
(6)将步骤(5)所得的溶液用截留分子量6000的膜进行超滤,收集透过液部分,得到清液。
(7)取4L清液进行减压浓缩至400ml。
(8)将步骤(7)所得的浓缩液400ml加入到2L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物,获得分子量在6000道尔顿以下的小分子量糖肽产品60g;
小白鼠扭体实验法测定小分子量糖肽的口服镇痛效果如下:
实施例2:
(1)符合国家药典质量标准的僵蚕药材2Kg,晾干后粉碎至60目大小颗粒;
(2)将粉碎后的僵蚕,加入12L的水,80℃-100℃提取0.5-2.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入8L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入8L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣。合并三次提取的滤液。
(3)取步骤(3)所得的滤液21L减压浓缩至3L。
(4)3L浓缩液加入到12L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;下层沉淀部分离心,收集沉淀物。
(5)取步骤(4)所得的沉淀物0.04kg加入到3L的去离子水中,搅拌溶解。
(6)将步骤(5)所得的溶液用截留分子量6000的膜进行超滤,收集透过液部分,得到清液。
(7)取2L清液进行减压浓缩至300ml。
(8)将步骤(7)所得的浓缩液300ml加入到1.2L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物。丙酮脱水2-3次,60℃-105℃干燥,获得分子量在6000道尔顿以下的小分子量糖肽产品44g;
小白鼠扭体实验法测定小分子量糖肽的口服镇痛效果如下:
实施例3:
(1)符合国家药典质量标准的僵蚕药材2Kg,晾干后粉碎至60目大小颗粒;
(2)将粉碎后的僵蚕,加入10L的水,80℃-100℃提取0.5-2.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入6L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入6L水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣。合并三次提取的滤液。
(3)取步骤(3)所得的滤液15L减压浓缩至3L。
(4)3L浓缩液加入到9L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;下层沉淀部分离心,收集沉淀物。
(5)取步骤(4)所得的沉淀物0.04kg加入到2L的去离子水中,搅拌溶解。
(6)将步骤(5)所得的溶液用截留分子量6000的膜进行超滤,收集透过液部分,得到清液。
(7)取1.75L清液进行减压浓缩至350ml。
(8)将步骤(7)所得的浓缩液350ml加入到1.05L乙醇中,搅拌后静置、沉淀过夜,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物,60℃-105℃烘干、粉碎,获得分子量在6000道尔顿以下的小分子量糖肽产品41g;
小白鼠扭体实验法测定小分子量糖肽的口服镇痛效果如下:
Claims (5)
1.一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽,其特征在于其特征在于小分子量糖肽以僵蚕为原料,通过提取、超滤、浓缩和乙醇沉淀制备得到。
2.权利要求1所述的一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽的提取分离方法,其特征在于其包括如下步骤:
(1)符合国家药典质量标准的僵蚕药材,晾干后粉碎得僵蚕原料;
(2)将僵蚕原料中加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为5-10∶1的水,80℃-100℃提取1.5-2.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为3-5∶1的水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣;滤渣再加入与僵蚕原料体积重量比(L/kg)为3-5∶1的水,80℃-100℃提取0.5-1.5小时,过滤,分离滤液和滤渣,合并三次提取的滤液;
(3)将步骤(2)所得的滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/10;
(4)将步骤(3)所得的浓缩液加入到3-5倍体积的乙醇中,搅拌后静置、沉淀,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物;
(5)将步骤(4)所得的沉淀物加入到去离子水中,去离子水与沉淀物的体积重量比(L/kg)为50-100∶1,搅拌溶解;
(6)将步骤(5)所得的溶液用截留分子量6000的膜进行超滤,收集透过液部分;
(7)对超滤透过液进行减压浓缩,至原来体积的1/5-1/10;
(8)将步骤(7)所得的浓缩液加入到3-5倍体积的乙醇中,搅拌后静置、沉淀,除去上层清液部分;沉淀部分离心,收集沉淀物,获得分子量在6000道尔顿以下的小分子量糖肽产品。
3.根据权利要求2所述的一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽的提取分离方法,其特征在于将步骤(8)所得沉淀物用丙酮脱水2-3次,60℃-105℃干燥,获得小分子量糖肽产品。
4.根据权利要求2所述的一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽的提取分离方法,其特征在于将步骤(8)所得沉淀物60℃-105℃烘干、粉碎,即得小分子量糖肽产品。
5.权利要求1所述的一种从僵蚕中提取的小分子量糖肽用于镇痛。
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