CN102149400A

CN102149400A - 旨在促进有益的阴道微生物区系形成和生长的组合物

Info

Publication number: CN102149400A
Application number: CN2009801352700A
Authority: CN
Inventors: 萨米.鲍安图恩
Original assignee: ALLIOSPHARMA
Current assignee: ALLIOSPHARMA
Priority date: 2008-07-10
Filing date: 2009-07-09
Publication date: 2011-08-10
Anticipated expiration: 2029-07-09
Also published as: JP2011527315A; US20110124594A1; PT2303300E; BRPI0915829A2; ES2416365T3; HRP20130511T1; PL2303300T3; WO2010004005A1; CN102149400B; DK2303300T3; RU2011103123A; FR2933617B1; EP2303300A1; FR2933617A1; EP2303300B1

Abstract

药物组合物和皮肤病学组合物，其包含选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)、寡聚半乳糖及其混合物的益生元；和选自大豆(Glycine max)提取物、三叶草(Trifolium sp.)提取物及其混合物的含有异黄酮的植物提取物。治疗细菌性阴道病和/或处理阴道粘膜的用途，其目的在于促进有益的阴道微生物区系的形成和生长。

Description

旨在促进有益的阴道微生物区系形成和生长的组合物

本发明涉及皮肤学组合物或药物组合物，其旨在促进有益的阴道微生物区系的形成和生长。

在健康女性中，泌尿生殖菌群(urogenital flora)由接近50种不同的微生物物种组成。在这些微生物中，种群的95％由乳杆菌属的多种菌株构成。这些乳杆菌通过包括过氧化氢生成、乳酸生成、细菌素生成和抑制病原体粘附和扩张在内的多种机制针对病原体发挥保护作用。如此，阴道菌群中许多病原体(如阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)、二路普雷沃氏菌(Prevotella bivia)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)和白色念珠菌(Candida albicans))的生长受到乳杆菌的抑制。阴道的特定乳杆菌值得注意的有卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)和阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis)。

因此正常阴道菌群主要由在粘膜表面形成保护性生物膜的乳杆菌组成。这些乳杆菌与包括潜在病原体的众多其它物种共存。这种平衡的丧失可为诱发由于阴道pH增加和乳杆菌减少引起的阴道病的因素，由此使得病原体的形成成为可能。这些失衡在绝经之后的女性中显著地存在，但并非她们所独有。

抗生素治疗是通常用于治疗阴道微生物区系失衡的治疗方法之一。然而，其具有抗生素治疗的常见弊端并且证实其效果越来越差。另外，其目的是消除病原性菌群，但是其也破坏正常菌群。

市场上已经存在的、旨在促进有益的阴道微生物区系形成和生长的用于阴道粘膜护理的产品受到效力不足的影响。

本发明以一种意想不到的方式显示选自寡聚葡糖(GOS)和寡聚果糖(FOS)的益生性寡糖与主要选自大豆和三叶草提取物的含有异黄酮的植物提取物的组合对阴道菌群的有益乳杆菌生长具有协同作用。GOS本身对乳杆菌生长具有益生作用。该结果在意料之中并且已经在现有技术中得到了描述。然而令人惊讶的是，这种益生作用在含有异黄酮的植物提取物存在下得到改进。如此，三叶草提取物增加乳杆菌生长和葡萄糖消耗。这种结果在意料之外，因为已知含有异黄酮的植物提取物的类激素作用并将其用于补偿主要在绝经后女性中的雌激素缺乏。这些含有异黄酮的植物提取物对乳杆菌生长的直接作用在此之前从未在文件中证明。

文献Database WPI XP-002514149描述了包括FOS/GOS和大豆提取物的组合物用于预防女性骨质疏松。这篇文献没有描述这些组合物用于治疗和预防绝经对阴道粘膜的影响的用途，或用于治疗和预防细菌性阴道病的用途。此外，该文献没有描述含有三叶草提取物的组合物。

FR 2 874 825描述了有益于阴道菌群的益生性寡糖。益生性寡糖是根据它们促进有益的内源性阴道细菌菌株生长的能力而选择的。这篇文献没有描述包括寡糖和含有异黄酮的植物提取物二者的组合物。

WO 93/00 067描述了含有寡糖的化妆品组合物。这些组合物可维持有利于产生有益的内源性菌群的环境。这类组合物的实例包括液体肥皂、洗发水、身体乳、面霜以及阴道凝胶(vaginal gel)。然而，WO 93/00 067没有描述包含寡糖和含有异黄酮的植物提取物二者的组合物。

Rousseau等的文件(Anaerobe，11：145-153，2005)描述了某些寡糖对阴道乳杆菌和对病原性微生物的益生作用。这篇文献没有描述包含含有异黄酮的植物提取物的组合物。

WO 2004/084832描述了含有FO-Ti、红三叶草或大豆提取物的组合物。这些组合物特别适合于与主要在绝经期期间的雌激素减少有关的治疗作用。然而，这篇文献没有描述还含有GOS和FOS的组合物。

EP-A-1 348 439描述了用于阴道卫生的组合物，所述组合物含有异黄酮和含羞草提取物。这篇文献没有描述还含有寡糖的组合物。

文件Database WPI XP-002517089描述了一种用于提取大豆异黄酮的方法。这些异黄酮可随后用于治疗绝经后女性的潮热和阴道病，用于预防心血管疾病以及用于预防癌症。这篇文件没有描述还含有寡糖的组合物。

因此，关于植物提取物在阴道用组合物中的用途方面，现有技术没有指明当将寡糖与三叶草或大豆提取物组合时寡糖的益生性作用的改进。

本申请论证了选自GOS和FOS的益生性寡糖与主要选自大豆和三叶草提取物的含有异黄酮的植物提取物对阴道菌群的有益乳杆菌具有提高的益生性作用。

因此这些组合物特别适合于治疗阴道菌群失衡，如随着细菌性阴道病、念珠菌病或霉菌病产生的失衡。这种阴道菌群失衡可能受到绝经的促进。

阴道病、念珠菌病和霉菌病通常通过抗生素治疗。在抗生素治疗之后，本发明的组合物有助于重建有益的阴道微生物区系和重建阴道的生理pH。

本发明还涉及本发明组合物的非治疗性用途。本发明的组合物能够用于日常阴道护理或卫生从而维持有益的阴道菌群和维持阴道的生理pH。

本发明涉及组合物，其含有：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-含有至少2、5、10、15、20、30、40、50或100ppm异黄酮的植物提取物。

本发明涉及组合物，其含有：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-含有至少2、5、10、15、20、30、40、50或100ppm芒柄花素(formononetin)、鹰嘴豆素A(biochanin A)、染料木黄酮(genistein)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷(genistine)、大豆黄苷(daidzine)和/或雌马酚(equol)的植物提取物。

本发明涉及组合物，其含有：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-含有至少2、5、10、15、20、30、40、50或100ppm大豆黄素、染料木黄酮和/或芒柄花素的植物提取物。

如此本发明涉及组合物，其含有：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-选自大豆(Glycine max)提取物、三叶草(Trifolium sp.)提取物及其混合物的含有异黄酮的植物提取物。

本发明更具体地涉及用于预防和治疗阴道微生物区系失衡的组合物。

本发明更具体地涉及用于预防和治疗阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病的组合物。

优选地，这些组合物包括至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％益生元和至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％或10％含有异黄酮的植物提取物。

优选地，这些组合物包括至少0.5％-7％益生元和0.5％-5％含有异黄酮的植物提取物。

有利地，所述异黄酮选自芒柄花素、鹰嘴豆素A、染料木黄酮、大豆黄素、染料木苷、大豆黄苷、雌马酚及其混合物。

在有利的实施方案中，所述植物提取物选自大豆(Glycine max)提取物、三叶草(Trifolium sp.)提取物及其混合物。

优选地，所述植物提取物是选自以下品种的三叶草提取物：地三叶草(Trifolium subterraneum L.)、白三叶草(Trifolium repens L.)和红三叶草(Trifolium pratense L.)。

更优选地，所述植物提取物是至少含有染料木黄酮、大豆黄素和芒柄花素的红三叶草的提取物。

在本发明的一个实施方案中，所述益生元包含聚合度为至少4的α-1，6/α-1，4GOS。

在另一实施方案中，所述益生元包含FOS，所述FOS含有聚合度为4、5和6的FOS的混合物或由聚合度为4、5和6的FOS的混合物组成。

所述组合物可以是阴道凝胶、肥皂、喷雾剂或乳膏的形式以供阴道应用。

本发明进一步涉及所述组合物用于阴道卫生和护理的用途。具体而言，本发明涉及包含益生元和含有异黄酮的植物提取物的组合物在阴道局部应用中用于阴道卫生和护理的非治疗性用途。

本发明进一步涉及这些组合物用于维持有益的阴道微生物区系和/或将阴道pH维持在约4.5的生理pH的非治疗性用途。

如此本发明涉及皮肤病学组合物或药物组合物，其含有：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-含有异黄酮的植物提取物。

益生元通常为由约2-20个糖单元构成的短链寡糖或多糖。这些是不能被消化的化合物，其通过选择性地刺激一种或有限数量的细菌的生长和/或代谢活性而发挥对健康的有益作用。本发明的组合物中选择的益生元充当位于阴道中的一种或有限数量的有益细菌的选择性底物，并刺激这些有益细菌的生长。更具体地，本发明的组合物中使用的益生元靶向卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、惰性乳杆菌(Lactobacillus iners)和阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis)。

最容易在商业上获得的益生元是寡糖、天然植物基质的提取物或通过合成(化学或生物技术)获得。存在各种类型的具有益生潜力的寡糖，如寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)、寡聚半乳糖等。阴道的益生性寡糖不同于肠的益生性寡糖。事实上，肠含有许多可能分解寡糖的酶。寡糖必须具有长且复杂的化学结构以使其能够抵抗酶的攻击。相反，在阴道中，不存在酶的限制，益生性寡糖具有更短且更简单的结构。

FOS是由果糖分子构成的短链寡聚果糖并且可以在一端含有葡萄糖分子(根据FOS的来源)。FOS以自然状态存在于一定数量的植物中如洋葱、番茄、洋蓟(artichoke)、香蕉、耶路撒冷洋蓟(Jerusalem artichoke)、芦笋(asparagus)、韭(leek)、小麦、黑麦和蒜。

FOS在工业上可以通过两种不同的方法生产：

-

FOS(Orafti，Belgium)来自菊苣菊粉(chicory inulin)的水解。有这种类型的FOS的其它生产者。

-

FOS(Béghin Meiji，France)通过酶合成获得。

FOS根据以下机制产自蔗糖和酶(β-果糖基转移酶)：

其中n优选等于3、4或5。

果糖基转移酶由黑曲霉(Aspergillus niger)或出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)产生。从n个蔗糖分子，获得蔗糖、葡萄糖和寡聚果糖的混合物。然后通过层析来纯化

FOS。

FOS含有范围多至6的聚合度，其中葡萄糖、果糖和蔗糖的平均比例为5％：

FOS的结构

GOS是由α1-6连接的葡萄糖单元的链构成的短链寡聚葡糖并且也可以含有α1-2、α1-3和α1-4键。

α1-6GOS是由通过α1-6键连接在一起的葡萄糖单元的链构成的直链寡聚葡糖。其通过始于供体(蔗糖)的对受体的酶促转葡糖基反应获得，所述受体可以是葡萄糖、甲基α-葡糖苷、异麦芽糖、异麦芽三糖或麦芽糖。如果受体是麦芽糖(α1-4连接的葡萄糖)，那么发生α1-6/α1-4GOS的酶促合成。

GOS是小的葡聚糖。它们通过由葡聚糖-蔗糖酶家族的酶催化的转葡糖基反应合成。这些酶确保葡糖基单元从供体底物转移至受体产物上的非还原端。如此产生的寡糖随后成为底物以产生聚合度更高的寡糖。葡聚糖-蔗糖酶接受的供体底物(通常为蔗糖)的数量有限，但是受体产物(例如，葡萄糖或麦芽糖)的数量可变。

存在大量不同的葡聚糖-蔗糖酶，其具有不同的特异性并催化多种类型糖苷键(α-(1-2)、α-(1-3)、α-(1-4)、α-(1-6))的形成。反应的产率(yield)强烈地依赖于[供体]/[受体]比例和培养基中的总含糖量。反应速率取决于受体类型；例如，用麦芽糖作为受体的合成比用葡萄糖更有效。

α1-6/α1-4GOS的酶促合成

这种酶反应由肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)NRRL B-512(F.)的葡聚糖-蔗糖酶催化。

α-1，6/α-1，4GOS是寡糖的混合物。所述混合物由高至11的聚合度的寡糖组成。

(1)肠膜明串珠菌NRRL B-1299的葡聚糖-蔗糖酶

(2)肠膜明串珠菌NRRL B-512F的葡聚糖-蔗糖酶

α1-6/α1-4GOS的结构

在能够在本发明的组合物中使用的益生元中，EP-B-0 591 443中描述的寡糖，并且特别是聚合度为至少4的α1-2/α1-6 GOS，可以更特别地引用。另一优选的益生元是DP3的FOS。

在本发明的一个优选实施方案中，所述组合物含有阴道微生物区系的特定益生元的混合物。

本发明的组合物进一步含有植物提取物异黄酮，其具有类似于雌激素的空间结构。植物雌激素的作用是已知的：它们改善阴道细胞学(状态)、营养机能和阴道粘膜的水合，这有助于使阴道微生物区系的生长环境变得更有利。令人惊讶的是，这些异黄酮还对阴道微生物区系的生长具有直接作用。

在许多已知的植物雌激素来源中，大豆(Glycine max)提取物、三叶草(Trifolium sp.)提取物及其混合物是特别优选的。植物提取物通常是甘油涂覆的、二醇的(glycolic)、含水的或干燥的形式或在超临界CO₂中。

这些植物提取物包含至少2、至少5、至少10、至少15、至少20、至少30、至少40、至少50或至少100ppm异黄酮，优选2至20ppm异黄酮。

优选地，所述异黄酮选自芒柄花素、鹰嘴豆素A、染料木黄酮、大豆黄素、染料木苷、大豆黄苷、雌马酚及其混合物。更优选地，所述植物提取物包含大豆黄素、染料木黄酮和芒柄花素。

足够量的含有异黄酮的植物提取物根据本领域技术人员熟知的技术制备。有利地，这些提取物是从三叶草或从大豆制备的。这些提取物是商业上可得到的，一个这样的例子是由Sederma出售的

三叶草提取物。

在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包括三叶草红三叶草的提取物，其含有至少2ppm大豆黄素、至少11ppm染料木黄酮和至少9ppm芒柄花素。

所述组合物可进一步包括天然植物、无机物或合成来源的至少一种胶凝剂，其与水接触形成不带电荷的触变(thixotropic)水胶体性凝胶。实例包括丙烯酸的聚合物衍生物、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、黄原胶、瓜尔胶、半乳甘露聚糖、琥珀酰聚糖、κ或ι角叉藻聚糖、膨润土、锂蒙脱石和硅酸镁。胶凝剂在最终组合物中占0.5％至5％。

所述组合物可进一步包括二醇(glycol)如单丙二醇(monopropylene glycol)、二丙二醇(dipropylene glycol)、甘油、双甘油、三甘油、单丙二醇(monopropanediol)、丁二醇或己二醇。其可以以1％-80％的比例，优选以总组合物的3％-10％的比例添加至所述组合物。

本发明的组合物可以进一步包括由1至4种抑真菌剂和抑细菌剂构成的防腐剂体系，其为有机酸的盐的形式，所述有机酸如乳酸、柠檬酸、山梨酸、苯甲酸、水杨酸、酒石酸、乙醇酸等。它们可以以总组合物的0.1％-2％的比例添加至所述组合物中。

有利地，所述组合物将包括pH调节剂以使所述制备物具有生理pH，所述pH调节剂如柠檬酸、乳酸、乙醇酸、盐酸或硼酸、氢氧化钠、氢氧化钾、环腺苷酸、三乙醇胺、氨丁三醇(tromethamine)、乙二胺四乙酸、柠檬酸/柠檬酸盐缓冲液等。pH调节剂以最终组合物的0.05％-5％，特别是最终组合物的0.05％-1％的比例添加至所述组合物。

所述组合物可以进一步包括至少一种选自下组的化合物：

-通常用于皮肤病学的活性成分，如软化剂(emollient)、水合活性成分(hydrating active ingredient)、角质屏障重构剂(cutaneous barrier restructuring agent)、抗刺激剂(anti-irritant)、润肤剂(soothing agent)，

-具有补充性治疗作用的活性成分，如抗生素、抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗炎剂等。

本发明的组合物可以配制成多种适合于局部、口服或阴道施用的制备物的形式。

根据优选的实施方案，所述多种制备物适合于局部应用并且包括乳膏(cream)、乳剂(emulsion)、乳液(milk)、润发油(pomade)、洗剂(lotion)、油(oil)、含水的或水-醇或二醇溶液(aqueous or hydro-alcohol or glycol solution)、粉剂(powder)、喷雾剂(spray)、胶冻(jelly)、凝胶(gel)、水凝胶(hydrogel)或任何其它供外部应用的产品。

本发明进一步涉及包含如上限定的益生元和含有异黄酮的植物提取物以及合适的药物载剂(pharmaceutical carrier)的药物组合物。

在用于口服施用的本发明的药物组合物中，活性成分可以与传统药物载体(pharmaceutical support)混合，以单位剂量形式施用。合适的单位剂量形式包括口服途径的形式，如片剂、明胶胶囊、粉剂、颗粒和口服溶液或悬液。

当制备了片剂形式的固体组合物时，将主要的活性成分与药物载剂混合，所述药物载剂如明胶、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、滑石、阿拉伯胶或类似物。片剂可以用蔗糖或其它合适的材料涂覆或可以以这样一种方法处理，即使它们具有延长的或延迟的活性和使它们持续释放预定量的活性成分。

明胶胶囊形式的制备物通过将活性成分与稀释剂混合并通过将获得的混合物倾注到软的或硬的明胶胶囊中来获得。

糖浆或酏剂形式的制备物可以含有与甜味剂、防腐剂以及增香剂(flavouring agent)和合适的着色剂一起的活性成分。

水分散性粉剂或颗粒可以含有与分散剂或润湿剂、或悬浮剂、以及与香味校正剂或甜味剂混合的活性成分。

优选地，本发明的药物组合物以凝胶、胶冻、肥皂、喷雾剂或乳膏的形式提供以供阴道局部应用。

更具体地，本发明的组合物适合于治疗和预防阴道微生物区系的失衡，特别是预防和治疗细菌性阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病。

更具体地，绝经对粘膜的影响能够促进阴道微生物区系的这些失衡的产生。

“阴道病”或“细菌性阴道病”是指阴道微生物区系的失衡。其特征在于乳杆菌的消失和厌氧细菌如阴道加德纳氏菌的增殖。这表明阴道菌群的失衡，其中

杆菌的保护作用消失。

“阴道微生物区系的失衡”是指乳杆菌的任何缺乏并且特别是卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、加氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、惰性乳杆菌或阴道乳杆菌的缺乏。

“阴道念珠菌病”是指阴道微生物区系的失衡或由念珠菌属(genusCandida)的酵母引起的阴道感染。

“阴道霉菌病”是指更通常是由真菌引起的阴道微生物区系的失衡。

本发明进一步涉及治疗性处理阴道微生物区系失衡的方法，包括向个体施用有效量的本发明的组合物。

本发明进一步涉及治疗性处理细菌性阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病的方法，包括向个体施用有效量的本发明的组合物。

本发明进一步涉及这些组合物中的一种在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和预防阴道微生物区系失衡，并且更具体地用于治疗和预防细菌性阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病。

本发明进一步涉及这些组合物中的一种在制备用于治疗和预防绝经对阴道粘膜的影响的药物中的用途。

本发明进一步涉及如上文所限定的益生元和含有异黄酮的植物提取物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和预防阴道微生物区系的失衡，并且更具体地用于治疗和预防细菌性阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病。

本发明进一步涉及如上文所限定的益生元和含有异黄酮的植物提取物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和预防绝经对阴道粘膜的影响。

本发明进一步涉及用于阴道卫生和阴道护理的皮肤病学组合物。本发明的组合物特别适合于绝经后女性的阴道卫生和护理。

在皮肤病学应用的上下文中，有利地将所述组合物配置成适合于局部应用的制备物的形式。

本发明还涉及阴道卫生和阴道护理的方法，特别是用于绝经后的女性。

本发明进一步涉及本发明的组合物用于阴道护理和卫生的非治疗性用途。具体而言，本发明涉及包含益生元和含有异黄酮的植物提取物的组合物在阴道局部应用中用于阴道卫生和护理的非治疗性用途。

附图

图1：卷曲乳杆菌BLL 2008的生长

图2：卷曲乳杆菌BLL 2005的生长

实施例

实施例1：阴道胶冻

的浓度也可以从0.5％到3％变化。配方的剩余部分保持不变。对于凝胶制备物，加入脂肪物质(fatty agent)。

包含2ppm大豆黄素、11ppm染料木黄酮和9ppm芒柄花素。

实施例2：安慰剂凝胶配方

这是同一配方但不含GOS和

实施例3：洗涤泡沫(或个人卫生凝胶)

GOS和红三叶草的浓度可以在0.5％-1.5％变化。

实施例4：明胶胶囊

益生性寡糖(GOS和/或FOS)

异黄酮(三叶草和/或大豆的)

赋形剂：一水合乳糖、马铃薯淀粉、谷氨酸钠、硫代硫酸钠、明胶胶囊外壳(E171二氧化钛，明胶)。

实施例5：乳膏

益生性寡糖(GOS和/或FOS)

异黄酮(三叶草和/或大豆的)

赋形剂：石油冻(petroleum jelly)、西土马哥(cetomacrogol)1000中的非离子乳化蜡、液体石蜡、甘氨酸、山梨酸、浓缩氢氧化钠溶液qsp pH 4-5，纯化的水。

实施例6：

我们选择了两个乳杆菌属菌株，BLL 2005和2008(在益生活性方面两种最重要的菌株)，对于它们我们测试了1)单独的葡萄糖，其是乳杆菌属的通用底物，和葡萄糖+

(1.5％和3％)，和2)单独的GOS和GOS+(1.5％和3％)。

在两种情况下，我们都观察到

增加了乳杆菌的底物消耗并由此增加了它们的生长(图1)。

实施例7：乳酸细菌随时间的生长：在存在或不存在阴道卫生凝胶的条件下的生长

初始糖浓度5g/l；2％接种。

使用实施例1和2的活性配方和安慰剂配方的阴道卫生凝胶。

上述结果和图2中的结果毫无疑问地显示活性凝胶使所述菌株能够生长，安慰剂则不然。

实施例8：在经治疗和未经治疗的女性中Nugent得分和阴道pH的比较

方案

处理的两组女性患有细菌性阴道炎并通过抗生素进行了治疗。第一组接受所述活性产品而第二(安慰剂)组接受不含益生元和三叶草提取物的产品。

处理由每天一次施用所述产品(含有益生元和异黄酮的产品以及安慰剂)组成。所述产品以含有5％GOS和含2％异黄酮的植物提取物(阴道胶冻，实施例1)的一次性单剂量管的形式提供。

处理每日进行持续8天。

在D0时，由妇科医生对所述女性进行听诊，取得阴道样本并测量阴道pH。

在D8时，第二次会见和(取)阴道样本和pH测量。

如此，在D0和D8时，测量了Nugent得分和pH从而在同一组内比较得分和pH并比较两个组的受试者。

Nugent得分的分析

Nugent得分的目的：

-确定阴道菌群的质量

-区分正常阴道菌群、中间阴道菌群(能够发展成阴道病)和阴道病。

活性组和安慰剂组之间Nugent得分的变化的比较。

8日后：

在处理8日后活性组的全部受试者显示了正常阴道菌群的重建。

在8日后安慰剂组显示了更随机的分布(dispersion)，其中33％的个体具有中间菌群的特征，而11％具有阴道病的特征。

D8时Nugent得分的统计学分析。

D8Nugent得分	均值	标准差	区间
				活性的(8)	1	1	[0-2]
安慰剂(9)	3	3.67	[0-6.6]

在安慰剂组与活性组的对比中观察到了更大的Nugent得分变化。安慰剂群体中的标准差确实高2.5倍。

8日后活性组Nugent得分的动态变化。

	正常阴道菌群的稳定化	正常阴道菌群的重建
			活性的(8)	75％	25％

处理致使Nugent得分在8日后稳定在3以下。

75％的受试者的得分≤1

12.5％的受试者的得分＝2

12.5％的个体具有从5至3的得分

结论：

基于这种样本，处理对活性组具有显著效果并导致正常阴道菌群的更快的重建。

安慰剂组中11％的个体在8日后具有阴道病的复发。

阴道pH的分析

阴道粘膜的生理pH为酸性并为约4.5。

阴道病的特征在于更高的pH。

活性组和安慰剂组之间阴道pH的变化的比较。

8日后：

相对于安慰剂组中的受试者，活性组中受试者的阴道pH趋向于在8日处理后降低，在安慰剂组中观察到相反的效果。

在D0和D8之间活性组的受试者中阴道pH的变化。

	A1	A3	A4	A5	A7	A8	A9
								ΔpH(D0-D8)	0	-1	0.5	0	2	2	0

在D0和D8之间安慰剂组的受试者中阴道pH的变化。

	P1	P2	P3	P4	P5	P6	P7	P8	P9
										ΔpH(D0-D8)	-2	0	1.5	-1	-0.5	0	0	0	0

活性组中86％的受试者显示了阴道pH的稳定化或降低。

28％具有等于5的最终pH。

安慰剂组中66％的受试者显示了阴道pH的稳定化或降低，了解到在66％的情况下该最终pH等于或大于4.5。

结论：

基于这种样本，处理对于活性组具有显著效果并且：

-促进pH向生理值(4-4.5)降低，或

-维持通过抗生素处理重建的阴道生理pH。

在安慰剂组的受试者中仅在33％的病例中阴道pH的稳定性或降低达到生理值。

对活性组中受试者的治疗作用对菌群质量和阴道pH具有显著的正效应。

在趋向于正常菌群的趋势和趋向于酸性pH的趋势之间注意到的整体关联反映了“共生(commensal)”乳酸细菌的流行率(prevalence)。

实施例9：异黄酮测定

本研究的目的为在局部应用本发明的组合物之后测试雌兔血液中益生元和异黄酮的存在。

每组两只雌兔每天一次接受局部阴道内施用对照凝胶(石油冻)和实施例1的凝胶(含有5％GOS和含2％异黄酮的植物提取物的凝胶)，持续8天。在施用之前一天(T₀)和使用结束后一天(T₈)抽取血样。

通过HPLC，可以检测处理组和对照组的雌兔血浆中异黄酮(大豆黄素、染料木黄酮和芒柄花素)或GOS的存在。作为阳性对照，组合物中使用的三叶草的植物提取物包括2ppm大豆黄素、11ppm染料木黄酮和9ppm芒柄花素。

如此所述组合物只具有局部效果；活性成分GOS和异黄酮不被吸收而不具有系统效果。因此异黄酮的作用不是激素-样作用。

Claims

1.用于预防和治疗阴道微生物区系失衡的组合物，其中所述组合物包含：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

-含有异黄酮的植物提取物，所述异黄酮选自芒柄花素、鹰嘴豆素A、染料木黄酮、大豆黄素、染料木苷、大豆黄苷、雌马酚及其混合物。

2.权利要求1的组合物，用于细菌性阴道病、阴道念珠菌病和阴道霉菌病的预防和治疗。

3.权利要求1的组合物，用于在抗生素治疗之后重建有益的阴道菌群。

4.权利要求1的组合物，用于重建约4.5的阴道生理pH。

5.根据权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述组合物包含0.5％-7％益生元和0.5％-5％含有异黄酮的植物提取物。

6.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述植物提取物含有至少10ppm异黄酮。

7.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述植物提取物选自大豆(Glycine max)提取物、三叶草(Trifolium sp.)提取物及其混合物。

8.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述植物提取物是选自以下品种的三叶草提取物：地三叶草(Trifolium subterraneum L.)、白三叶草(Trifolium repens L.)和红三叶草(Trifolium pratense L.)。

9.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述植物提取物是至少含有染料木黄酮、大豆黄素和芒柄花素的红三叶草的提取物。

10.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述益生元包含聚合度为至少4的α-1，6/α-1，4GOS。

11.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述益生元包含FOS，所述FOS含有聚合度为4、5和6的FOS的混合物或由聚合度为4、5和6的FOS的混合物组成。

12.根据前述权利要求中任一项的组合物，其中所述组合物是阴道凝胶、肥皂、喷雾剂或乳膏的形式以供阴道应用。

13.组合物在阴道局部应用中用于阴道卫生和护理的非治疗性用途，所述组合物包含：

-选自寡聚葡糖(GOS)、寡聚果糖(FOS)及其混合物的益生元；和

14.权利要求13的用途，用于维持有益的阴道微生物区系。

15.根据权利要求13和14中任一项的用途，用于将阴道pH维持在约4.5的生理pH。