CN102146468A

CN102146468A - 辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用

Info

Publication number: CN102146468A
Application number: CN 201110041448
Authority: CN
Inventors: 刘文军; 毕玉海; 李晶
Original assignee: Institute of Microbiology of CAS
Current assignee: Institute of Microbiology of CAS
Priority date: 2011-02-21
Filing date: 2011-02-21
Publication date: 2011-08-10
Anticipated expiration: 2031-02-21
Also published as: CN102146468B

Abstract

本发明公开了一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。本发明提供的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。本发明提供的专用引物可以辅助鉴定和鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型，应用本发明提供的专用引物进行检测，具有特异、灵敏、快速等优点，可以防患于未然，对人和动物感染猪链球菌的防控具有重要意义。

Description

辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。

背景技术

猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人兽共患病原菌，可侵害各年龄阶段的猪，病猪通常以败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结炎为主要特征。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原(CPS)可将其分为35个血清型，其中能引起人和动物发病的致病性猪链球菌血清型主要是1型(SS1)、2型(SS2)、7型(SS7)和9型(SS9)。不同血清型分布不同，加拿大以2、1/2、3、4、8型流行最广；意大利以2型流行最广，其次是1、9、1/2、3、7、4、8型；荷兰法国以2和9型为主；巴西以2型流行最广，其次14、9、7、11、8、1、1/2、3、5、6、10型。近年来这些高致病性血清型菌株的流行呈上升趋势，造成了巨大的经济损失，并引起多例人的感染和死亡。SS2和SS7都是能够同时感染人和猪的病原菌。但目前对于这两类病原菌血清型鉴别的报道还相对较少。

近些年国外学者对SS2的鉴定研究主要利用限制性片段长度多态性分析、免疫色谱法、间接荧光抗体试验、ELISA、多位点酶电泳法、脉冲场凝胶电泳法、随机扩增核酸片段多态性分析以及原位分子杂交等研究方法，这些方法作为科学研究的方法是十分有效和必要的，但作为SS2的快速诊断就显得无力了。对于SS7亚型的研究，1999年，Smith HE等人，根据SS7CPS基因的特异性，设计引物并建立了SS7型PCR诊断方法；2003年，Okwumabua O等人，根据GDH基因设计一条可扩增出688bp基因片段长度的引物，可用来检测各种血清型的SS；同时根据SS各血清型间CPS基因的差异，建立了1/2、1、2、7、9型的多重PCR鉴别诊断方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。

本发明提供的辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

所述专用引物可用于制备辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒，所述专用引物。所述试剂盒还可包括PCR扩增的常规试剂，琼脂糖凝胶电泳的常规试剂等。

所述专用引物或所述试剂盒可用于辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型。

本发明还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法I，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌2型且为候选的非猪链球菌7型。

本发明还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法II，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果应用所述引物对甲得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果应用所述引物对甲没有得到211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌2型；如果应用所述引物对乙得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果应用所述引物对乙没有得到347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。

本发明还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法III，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；所述待测细菌为猪链球菌2型或猪链球菌7型；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型。

本发明还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法IV，包括如下步骤：

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果应用所述引物对甲得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果应用所述引物对乙得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型。

本发明还保护一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法V，包括如下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测样品疑似含有猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似含有猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似不含有猪链球菌2型和猪链球菌7型。

本发明还保护一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法VI，包括如下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果应用所述引物对甲得到了211bp的PCR扩增产物，待测样品疑似含有猪链球菌2型；如果应用所述引物对甲没有得到211bp的PCR扩增产物，待测样本疑似不含有猪链球菌2型；如果应用所述引物对乙得到了347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似含有猪链球菌7型；如果应用所述引物对乙没有得到347bp的PCR扩增产物，待测待测样本疑似不含有猪链球菌7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。

所述方法I和/或所述方法II和/或所述方法III和/或所述方法IV和/或所述方法V和/或所述方法VI中，所述PCR扩增的反应条件为：94℃2min预变性；94℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃延伸10min。所述方法I和/或所述方法II中，所述待测细菌可为猪链球菌2型、猪链球菌7型、猪大肠埃希氏菌、猪布氏杆菌或金黄色葡萄球菌。所述方法V和/或所述方法VI中，所述动物可为猪。所述方法I和/或所述方法II和/或所述方法III和/或所述方法IV均可用于待测细菌的分类鉴定。

本发明提供的专用引物可以辅助鉴定和鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型，应用本发明提供的专用引物进行检测，具有特异、灵敏、快速等优点，可以防患于未然，对人和动物感染猪链球菌的防控具有重要意义。

附图说明

图1为SS2特异性引物对和SS7特异性引物对鉴定猪链球菌2型阳性样本的结果；1：DNA Marker DL5000；2：SS2特异性引物对；3：SS7特异性引物对；4：阴性对照。

图2为SS2特异性引物对和SS7特异性引物对鉴定猪链球菌7型阳性样本的结果；1：DNA Marker DL5000；2：SS7特异性引物对；3：SS2特异性引物对；4：阴性对照。

图3为为SS2特异性引物对和SS7特异性引物对鉴定双阳性样本的结果；1：DNAMarker DL5000；2：SS2特异性引物对；3：SS7特异性引物对；4：阴性对照。

图4为SS2特异性引物对敏感性试验结果；1：DNA Marker DL5000；2：猪链球菌2型10⁷CFU/mL；3：猪链球菌2型10⁶CFU/mL；4：猪链球菌2型10⁵CFU/mL；5：猪链球菌2型10⁴CFU/mL；6：猪链球菌2型10³CFU/mL；7：猪链球菌2型10²CFU/mL。

图5为SS7特异性引物对敏感性试验结果；1：DNA Marker DL5000；2：猪链球菌7型10⁷CFU/mL；3：猪链球菌7型10⁶CFU/mL；4：猪链球菌7型10⁵CFU/mL；5：猪链球菌7型10⁴CFU/mL；6：猪链球菌7型10³CFU/mL；7：猪链球菌7型10²CFU/mL。

图6为SS2特异性引物对和SS7特异性引物对特异性试验结果；1、5：DNA MarkerDL5000；2：猪链球菌2型；3：猪链球菌7型；4：大肠埃希氏菌；6：猪布氏杆菌；7：金黄色葡萄球菌。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。杜×大×长三元杂交猪(杜×大×长三元杂交猪即杜洛克猪、大白猪和长白猪的三元杂交猪)：购自北京大兴种猪种禽厂。猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2，SS2；又称猪链球菌血清2型或猪链球菌荚膜2型)：购自中国兽医药品监察所，产品目录号为CVCC1940。猪大肠埃希氏菌：购自中国兽医药品监察所，产品目录号为CVCC216。猪布氏杆菌：购自中国兽医药品监察所，产品目录号为CVCC1079。金黄色葡萄球菌：购自中国兽医药品监察所，产品目录号为CVCC3052。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

猪链球菌7型(Streptococcus suis sequence type 7，SS7)公众可以从中国科学院微生物研究所获得；参考文献：Ye C，Bai X，Zhang J，et al.Spread ofStreptococcus suis sequence type 7，China.Emerg Infect Dis.，2008，14(5)：787-791。

猪链球菌2型和猪链球菌7型的形态特征和生理特征如下：在绵羊血琼脂培养基上培养：猪链球菌2型和猪链球菌7型菌落均呈灰绿色，但猪链球菌7型溶血特性更易于观察到，猪链球菌2型显示α溶血环，猪链球菌7型显示β溶血环；在显微镜下观察，二者猪链球菌2型和猪链球菌7型均显球形或卵圆形、多呈链状，但猪链球菌2型菌体比猪链球菌7型菌体略小。

实施例1、猪链球菌的特异型引物的设计

在菌属保守序列、CPS2J基因引物序列区域设计SS2特异性引物对如下：

SS-CPS2J-F：5’-CGGTTACCAAATGGTGGTG-3’(序列表的序列1)；

SS-CPS2J-R：5’-ACTTTTGCAGCTCAGATTCTTG-3’(序列表的序列2)。

目的扩增片段长度为211bp(靶序列见序列表的序列5)。

在菌属保守序列、CPS7H基因引物序列区域设计SS7特异性引物对如下：

SS-CPS7H-F：5’-GGCAGCTCTAACACGAAATAAG-3’(序列表的序列3)；

SS-CPS7H-R：5’-TCTTACACAATTGAAGTAATATCGC-3’(序列表的序列4)。

目的扩增片段长度为347bp(靶序列见序列表的序列6)。

实施例2、样本的制备

一、双阳性样本的制备

每只杜×大×长三元杂交猪口腔上颚扁桃体部位喷雾接种1ml浓度为10⁴cfu/ml的猪链球菌2型菌液和1ml浓度为10¹⁰cfu/ml的猪链球菌7型菌液。

接种感染后第5天，采集扁桃体试纸，分离细菌进行形态特征和生理特征鉴定，可以鉴定出猪链球菌2型和猪链球菌7型的猪为双阳性样本。

二、猪链球菌2型阳性样本的制备

每只杜×大×长三元杂交猪口腔上颚扁桃体部位喷雾接种1ml浓度为10⁴cfu/ml的猪链球菌2型菌液。

接种感染后第5天，采集扁桃体试纸，分离细菌进行形态特征和生理特征鉴定，可以鉴定出猪链球菌2型且没有鉴定出猪链球菌7型的猪为猪链球菌2型阳性样本。

三、猪链球菌7型阳性样本的制备

每只杜×大×长三元杂交猪口腔上颚扁桃体部位喷雾接种1ml浓度为10¹⁰cfu/ml的猪链球菌7型菌液。

接种感染后第5天，采集扁桃体试纸，分离细菌进行形态特征和生理特征鉴定，可以鉴定出猪链球菌7型且没有鉴定出猪链球菌2型的猪为猪链球菌7型阳性样本。

实施例3、猪链球菌的特异型引物的应用

分别取实施例2制备的双阳性样本、猪链球菌2型阳性样本和猪链球菌7型阳性样本的扁桃体试纸进行检测。

一、基因组DNA的提取

(1)在血液中加入3倍体积的红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次，10000rpm离心1min(或5000rpm离心5min也可)，弃上清，用100μLTE缓冲液充分悬浮沉淀；

(2)取100μL步骤(1)得到的溶液，加入50μL溶菌酶(100μg/mL)，37℃处理1h。

(3)每管加入200μL裂解缓冲液，震荡15s。

(4)每管加入100μL 5mol/L NaCl水溶液，充分混匀后，12000rpm离心10min，除去蛋白质复合物及细胞壁等残渣，取上清。

(5)将上清转移到新离心管中，加入等体积的Tris饱和酚，充分混匀后，12000rpm离心3min，进一步沉淀蛋白质。

(6)吸取离心后水层，加等体积的氯仿，颠倒混匀，12000rpm离心3min，去除苯酚。

(7)吸出上清，加入两倍体积预冷的无水乙醇，15000rpm高速离心15min，弃上清液，收集沉淀。

(8)用900μL 70％酒精洗涤两次。

(9)真空干燥后，用10μL-30μL TE(用超纯水也可)溶解DNA，进行检测或-20℃冰箱放置备用。

二、猪链球菌的PCR的检测

以步骤一提取的基因组DNA为模板，分别用实施例1设计的SS2特异性引物对(SS-CPS2J-F和SS-CPS2J-R)和SS7特异性引物对(SS-CPS7H-F和SS-CPS7H-R)进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

PCR反应体系甲见表1。灭菌双蒸水作为阴性对照。

表1PCR反应体系甲

dNTP	2μL
		SS-CPS2J-F(10pmol/μL)	1μL
SS-CPS2J-R(10pmol/μL)	1μL
		Taq DNA Polymerase	0.5μL
10×Buffer	2.5μL
		ddH₂O	15μL
模板	3μL
		合计	25μL

PCR反应体系乙见表2。灭菌双蒸水作为阴性对照。

表2PCR反应体系乙

dNTP

2μL

SS-CPS7H-F(10pmol/μL)	1μL
		SS-CPS7H-R(10pmol/μL)	1μL
Taq DNA Polymerase	0.5μL
		10×Buffer	2.5μL
ddH₂O	15μL
		模板	3μL
合计	25μL

反应体系甲和反应体系乙的反应程序相同，均如下：94℃2min预变性；94℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃延伸10min。

PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳。

猪链球菌2型阳性样本的结果见图1。应用SS2特异性引物对得到了200bp左右的目的条带，应用SS7特异性引物对没有得到200bp左右的目的条带。回收目的条带进行测序，结果表明应用SS2特异性引物对得到了211bp的DNA片段。

猪链球菌7型阳性样本的结果见图2。应用SS7特异性引物对得到了350bp左右的目的条带，应用SS2特异性引物对没有得到350bp左右的目的条带。回收目的条带进行测序，结果表明应用SS7特异性引物对得到了347bp的DNA片段。

双阳性样本的结果见图3。应用SS2特异性引物对得到了200bp左右的目的条带，应用SS7特异性引物对得到了350bp左右的目的条带。回收目的条带进行测序，结果表明应用SS2特异性引物对得到了211bp的DNA片段，应用SS7特异性引物对得到了347bp的DNA片段。

实施例4、敏感性试验

一、猪链球菌2型引物对的敏感性

猪链球菌2型的菌液梯度稀释，得到各种稀释液。

分别将1mL各个稀释液5000rpm离心5min，弃上清；沉淀用100μL TE缓冲液充分悬浮，100℃煮沸10分钟，迅速于-20℃放置10min，12000rpm离心10min；取上清作为PCR扩增的模板。

分别将各稀释液制备的模板采用实施例3的PCR反应体系甲(表1)进行PCR扩增。灭菌双蒸水作为阴性对照。PCR反应体系甲中，猪链球菌2型的浓度分别为10⁷CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁵CFU/mL、10⁴CFU/mL、10³CFU/mL或10²CFU/mL。

PCR反应条件：94℃2min预变性；94℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃延伸10min。

PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果见图4。猪链球菌2型在PCR反应体系中的浓度为10³CFU/mL以上，均可检测到211bp的DNA片段。

二、猪链球菌7型引物对的敏感性

猪链球菌7型的菌液梯度稀释，得到各种稀释液。

分别将各稀释液制备的模板采用实施例3的PCR反应体系乙(表2)进行PCR扩增。灭菌双蒸水作为阴性对照。PCR反应体系乙中，猪链球菌7型的浓度分别为10⁷CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁵CFU/mL、10⁴CFU/mL、10³CFU/mL或10²CFU/mL。

PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果见图5。猪链球菌7型在反应体系中的浓度为10³CFU/mL以上，均可检测到347bp的DNA片段。

实施例5、特异性试验

分别将猪链球菌2型、猪链球菌7型、猪大肠埃希氏菌、猪布氏杆菌和金黄色葡萄球菌作为待测菌，用SS2特异性引物对和SS7特异性引物对分别进行如下检测：

将1mL菌液5000rpm离心5min，弃上清；沉淀用100μL TE缓冲液充分悬浮，100℃煮沸10分钟，迅速于-20℃放置10min，12000rpm离心10min；取上清作为PCR扩增的模板。

将各菌液制备的模板分别采用实施例1设计的SS2特异性引物对(SS-CPS2J-F和SS-CPS2J-R)和SS7特异性引物对(SS-CPS7H-F和SS-CPS7H-R)进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。PCR反应体系见表3。灭菌双蒸水作为阴性对照。PCR扩增体系中，待测菌的浓度为10⁵CFU/mL。PCR反应条件：94℃2min预变性；94℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃延伸10min。

表3PCR反应体系

dNTP	2μL
		SS-CPS2J-F(10pmol/μL)	1μL
SS-CPS2J-R(10pmol/μL)	1μL
		SS-CPS7H-F(10pmol/μL)	1μL
SS-CPS7H-R(10pmol/μL)	1μL
		Taq DNA Polymerase	0.5μL
10×Buffer	2.5μL
		ddH2O	13μL
模板	3μL
		合计	25μL

PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，结果见图6。猪链球菌2型显示一条211bp的DNA片段，猪链球菌7型显示一条347bp的DNA片段，猪大肠埃希氏菌、猪布氏杆菌和金黄色葡萄球菌均不显示任何DNA片段。

实施例6、猪链球菌临床样品的检测

利用SS2特异性引物对和SS7特异性引物对共检测2009-2010年采集自河北省、山东省、广东省的猪全血385份，其中2型和7型双阳性22份，仅2型阳性29份，仅7型阳性为24份，阴性310份，阳性率为19.48％。

本实施例中检测血液样本和细菌培养物样品，实际应用中，也可以检测待测动物的组织样品、咽喉、扁桃体试纸等。组织样品的处理方法：无菌剪刀、镊子剪取1mg待检样品，加3倍体积PBS，于研磨器中充分研磨，5000rpm离心5min，将组织悬液移入无菌Eppendorf管中，用来提取DNA。咽喉、扁桃体试纸的处理方法：将试纸置于无菌Eppendorf管中，加PBS至管1/3体积，震荡混匀，5000rpm离心5min，弃上清，沉淀用100μL TE缓冲液充分悬浮。

Claims

1.辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

2.权利要求1所述专用引物在制备辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒中的应用。

3.一种辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒，包括权利要求1所述专用引物。

4.权利要求1所述专用引物或权利要求3所述试剂盒在辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型中的应用。

5.辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法，为方法I或方法II；

所述方法I包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌2型且为候选的非猪链球菌7型；所述专用引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成；

所述方法II包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述待测细菌为猪链球菌2型、猪链球菌7型、猪大肠埃希氏菌、猪布氏杆菌或金黄色葡萄球菌。

7.鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法，为方法III或方法IV；

所述方法III包括如下步骤：

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型；所述专用引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成；

所述方法IV包括如下步骤：

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果应用所述引物对甲得到了211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果应用所述引物对乙得到了347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。

8.一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用专用引物进行PCR扩增；如果得到了211bp的PCR扩增产物，待测样品疑似含有猪链球菌2型；如果得到了347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似含有猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似不含有猪链球菌2型和猪链球菌7型；所述专用引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。

9.一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样品的基因组DNA；

10.如权利要求5至9中任一所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：94℃2min预变性；94℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃延伸10min。