CN102146084B - 3-氰基-6-氨基喹啉类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及3-氰基-6-氨基喹啉类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示新的3-氰基-6-氨基喹啉类衍生物及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂特别是作为蛋白激酶抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。
Description
技术领域
本发明涉及一种新的3-氰基-6-氨基喹啉类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为蛋白质激酶抑制剂的用途。
背景技术
信号传导作为细胞的一种基础调节机制，将胞外的各种信号传递到细胞内部，使细胞做出相应的生物应答，实现诸如增殖、分化、凋亡等过程。大多数的信号传导是利用蛋白质可逆的磷酸化过程实现的，其中涉及到特定蛋白激酶和磷酸酶。
蛋白激酶(PKs)可以分成两类：蛋白酪氨酸激酶(PTKs)和丝氨酸-苏氨酸激酶(STKs)。PTKs可使蛋白质上的酪氨酸残基磷酸化，STKs可以磷酸化丝氨酸、苏氨酸残基。酪氨酸激酶又可以分为受体型(receptor tyrosine kinase，RTKs)和非受体型(non-receptor tyrosine kinase)。目前，在人类基因中已有90种酪氨酸激酶编码基因被识别，其中约60种是受体型，约30种是非受体型。
RTKs家族可划分为许多亚族：诸如(1)生长因子受体家族，成员包括EGFR，Her-2，Her-3，Her-4；(2)胰岛素受体家族，包括胰岛素受体IR、胰岛素样生长因子I受体(IGF1)和胰岛素受体相关性受体(IRR)；(3)III型家族，如血小板衍生生长因子受体PDGF，干细胞因子SCF(c-Kit)，fms-相关酪氨酸激酶3(Flt3)受体和集落刺激因子1受体(CSF-1R)等等。此外，如肝细胞生长因子受体c-Met，血管内皮生长因子受体VEGFR等也属于RTKs家族成员。它们在调节细胞周期和分化凋亡方面均起着关键作用，也是诱导生长因子等细胞因子生成的信号通路上的关键信号传递者，参见Schlessinger and Ullrich，Neuron 1992，9，383。
EGFR(ErbB)亚族在调控细胞增殖和存活的诸多过程中都扮演着非常重要的角色。结构上，该家族受体由胞外的配体结合区域、跨膜区域及胞内催化区域三部分组成。其酪氨酸激酶活性通过配体介导的受体间同型或异型二聚化过程被激活，二聚化使受体催化区内的酪氨酸残基磷酸化，并作为后续信号分子的结合位点，从而激活下一级信号级联，诸如丝裂原激活蛋白激酶(MAP激酶)和磷脂酰肌醇激酶(PIP-3激酶)，这些信号级联的激活能够调节细胞周期和细胞调亡。在大部分人类实体肿瘤中，如乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌等，都有EGFR、Her-2发生突变异常活化或过度表达的情况，从而使其与肿瘤发生发展的关联性得到了进一步确认。
作为RTKs Class III成员的血小板衍生生长因子受体(PDGFR)，c-Kit和fms-相关酪氨酸激酶3(FLT-3)，其结构和活化过程均与EGFR家族类似，通过二聚化 过程活化传递信号，从而调节细胞的增殖，分化和迁移，以及血管生成过程。因而该家族成员与肿瘤的发生发展也有着密切的关系。例如对不同实体瘤中的c-Kit表达情况进行研究，在小细胞支气管癌、睾丸瘤、黑素瘤、乳房癌、成神经细胞瘤中都发现c-kit的高度表达，尤其是胃肠道胶质瘤(GIST)，参见Weber等，J.Clin.Oncol.22(14S)，9642(2004)。大多数的(50～80％)GIST均是由于c-Kit基因发生突变而产生。突变能够使c-Kit具有持续活化的酪氨酸激酶活性，从而使细胞分裂率增加，导致基因组的不稳定，从而诱发癌变。
受体酪氨酸激酶家族的另外一个重要成员是血管内皮生长因子受体(VEGFR)。VEGFR与血管生成密切相关，VEGF与其结合后可激活相关信号通路促进血管生成。最近的证据表明，VEGF能够诱导内皮细胞增殖和迁移促进毛细血管生成，从而形成超渗透、不成熟的血管网络，提供营养帮助肿瘤生长。除了其促血管生成活性，VEGFR及VEGF也可以在肿瘤细胞内直接通过pro-survival性质促进肿瘤生长。研究发现，VEGFR在各种恶性实体肿瘤中，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和黑素瘤中均有强烈表达，因此通过抑制VEGFR活性而实现抑制肿瘤生长，对于肿瘤治疗有很大的应用价值。
此外，作为RTKs成员的肝细胞生长因子受体c-MET(HGFR)，经大量文献证实其与肿瘤生成、侵袭和转移，细胞运动性增强等也密切相关(参见Ma，P.C等(2003b).Cancer Metastasis Rev.，22，309-25；Maulik，G.等(2002b).Cytokine GrowthFactor Rev，13，41-59)。
作为PTKs的另一成员，非受体型酪氨酸激酶[缩写为NRTKs或CTKs(细胞质酪氨酸激酶)]，是细胞质中的蛋白酪氨酸激酶，与RTKs相比缺少胞外功能域和跨膜域结构。CTKs的酪氨酸活性与肿瘤也有密切关系，关于CTKs更为详尽的描述，可参见iBolen，1993，Oncogen 8：2025-2031。
癌症的两个最主要特征是肿瘤细胞基因组不稳定和调节细胞周期和增殖分裂相关的信号通路的失控。基因组不稳定导致部分信号传导的关键调节蛋白的生物功能发生改变或丧失，使信号传导过程遭到干扰或破坏，异常的信号通路无法正常调节控制细胞周期进程和细胞凋亡，使得肿瘤细胞能够在基因损伤的状态下持续存活和增殖。作为实现这些调节过程的根本，PKs，包括上面讨论的受体RTKs和细胞质PTKs(CTKs)与肿瘤的发生发展过程息息相关，从而成为治疗肿瘤疾病的重要靶点。
人们期待着能够合成具有抑制肿瘤细胞增殖活性的化合物，希望能够通过抑制RTKs、CTKs或者STKs中的一种或者多种，从而有效地治疗和改善非正常条件下由RTKs、CTKs或者STKs以及血管生成作用介导的细胞非正常增殖造成的生理紊乱。
目前已公开一系列的蛋白激酶抑制剂的文献，如WO03/089439A1公开了喹啉或喹唑啉衍生物、其药物，用途及制备方法。Hwei-Ru Tsou等，在J.Med.Chem. 48，1107-1131(2005)中也公开了喹啉类衍生物作为蛋白激酶抑制剂。
本发明目的是提供一种蛋白质激酶抑制剂，设计具有通式(I)所示的化合物，本发明化合物同现有技术中具体公开的化合物具有较大的结构差异，且表现出优异的效果和作用。
发明内容
为了克服现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的新的3-氰基-6-氨基喹啉类衍生物，以及它们的互变异构体、对映体、非对映体、消旋体和可药用的盐，以及代谢产物和代谢前体或前药，
其中：
R1具有下列结构： 
其中：
D选自芳基或杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基或三氟甲基的取代基所取代；
T选自-(CH2)r-，-O(CH2)r-，-N(CH2)r-或-S(O)r(CH2)r-；
L选自芳基或杂芳基，其中所述的芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个氢原子、烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、烯基、炔基、芳基或-NR11R12的取代基所取代；
R2选自氢原子、烷基、环烷基或杂环烷基，其中所述的烷基、环烷基或杂环烷基任选进一步被一个或多个烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基、杂环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
R3选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选进一步被卤素或烷氧基的取代基取代；
R4选自双环烷基、杂双环烷基、桥环烷基、桥杂环烷基、螺环烷基或螺杂环烷基，其中所述双环烷基、杂双环烷基、桥环烷基、桥杂环烷基、螺环烷基或螺杂环烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
或者，R3与R4与其相连接的氮原子一起形成5～14元的杂双环烷基、桥杂环烷基或螺杂环烷基，其中所述的杂双环烷基、桥杂环烷基或螺杂环烷基任选进一步被一个或多个烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、 -O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
条件是，当R3与R4与其相连接的氮原子一起形成单螺杂环烷基时，所述单螺杂环烷基不包括基团-O-(CR10)2)s-O-；
R5选自氢原子、烷基、环烷基或芳基；
R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR8R9、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR8R9、-NHC(O)R5或-NR8R9的取代基所取代；
或者，R6和R7与其相连的氮原子一起形成3～8元的杂环基，其中所述3～8元杂环内进一步含有一个或多个N、O或S(O)n原子，并且所述3～8元杂环任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR8R9、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR8R9、-NHC(O)R5或-NR8R9的取代基所取代；
R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基或芳基；
R10选自氢原子、烷基或环烷基；
r为0、1或2；
s为1、2、3、4、5或6；
n为0、1或2；且
m为O、1或2。
本发明的优选方案，其中：
R1具有下列结构： 
D选自芳基，其中所述的芳基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基或三氟甲基的取代基所取代；
T选自-O(CH2)r-；
L选自杂芳基，其中所述的杂芳基任选进一步被一个或多个氢原子、烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、烯基、炔基、芳基或-NR11R12的取代基所取代；
R2选自烷基；
R3选自氢原子或烷基；
R4选自双环烷基、杂双环烷基、桥环烷基、桥杂环烷基、单螺环烷基、单螺杂环烷基，其中所述的双环烷基、杂双环烷基、桥环烷基、杂桥环烷基、单螺环烷基或单螺杂环烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
或者，R3与R4与其相连接的氮原子一起形成杂双环烷基、桥杂环烷基或单螺杂环烷基，其中所述的杂双环烷基、桥杂环烷基或单螺杂环烷基任选进一步被一个或多个烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
条件是，当R3与R4与其相连接的氮原子一起形成单螺杂环烷基时，所述单螺杂环烷基不包括基团-O-(CR10)2)s-O-；
R5选自氢原子、烷基、环烷基或芳基；
R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR8R9、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR8R9、-NHC(O)R5或-NR8R9的取代基所取代；
或者，R6和R7与其相连的氮原子一起形成3～8元的杂环基，其中所述3～8元杂环内进一步含有一个或多个N、O或S(O)n原子，并且所述3～8元杂环任选进一步被一个或多个选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR8R9、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR8R9、-NHC(O)R5或-NR8R9的取代基所取代；
R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基或芳基；
R10选自氢原子、烷基或环烷基；
r为0、1或2；
s为1、2、3、4、5或6；
n为0、1或2；且
m为0、1或2。
通式(I)化合物可以含有不对称碳原子，因此可以以旋光纯的非对映体、非对映体混合物、非对映体外消旋体、非对映外消旋体的混合物的形式存在或作为内消旋体化合物存在。本发明包括所有这些形式。非对映体混合物、非对映外消旋体或非对映外消旋体的混合物可以通过常规方法，例如通过柱色谱法、薄层色谱法和HPLC等来分离。
本发明的优选化合物包括，但不限于：
或其可药用的盐。
本发明的一个方面是提供通式(I)所示的化合物或其可药用的盐的合成方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与通式(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物；
其中X选自卤素，R1～R4的定义如通式(I)化合物所述。
本发明的一个方面是提供通式(I)所示的化合物或其可药用的盐在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。所述蛋白激酶选自EGFR受体酪氨酸激酶和HER-2受体酪氨酸激酶。
本发明的一个方面是提供通式(I)所示的化合物或其可药用的盐在制备治疗癌症的药物中的用途。所述癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鳞癌或胃癌。
本发明的一个方面是提供一种药物组合物，含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物或其可药用的盐及可药用的载体或赋形剂。所述的药物组合物在制备治 疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途，所述蛋白激酶选自EGFR受体酪氨酸激酶和HER-2受体酪氨酸激酶。所述药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鳞癌或胃癌。
本发明的另一个方面是提供一种蛋白激酶催化活性的调节方法，包括使蛋白激酶与通式(I)的化合物或其可药用的盐相接触，所述蛋白激酶选自EGFR受体酪氨酸激酶和HER-2受体酪氨酸激酶。
本发明的另一个方面是提供通式(I)化合物或其可药用的盐，含有所述化合物或其可药用的盐的药物组合物，在制备蛋白激酶抑制剂中的用途，其中所述蛋白激酶选自EGFR和HER-2受体酪氨酸激酶。
本发明的另一个方面涉及通式(I)所述的化合物或其可药用的盐，含有它们的药物组合物，用作与蛋白激酶有关的疾病的药物，其中所述的蛋白激酶选自选自EGFR受体酪氨酸激酶和HER-2受体酪氨酸激酶。
本发明的一个方面是提供通式(I)所示的化合物或其可药用的盐，含有它们的药物组合物，用作治疗癌症的药物，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鳞癌或胃癌。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基等。更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“环烷基”指3至8元全碳单环基团，其中3至8元全碳单环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的7π电子系统。例如环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己烷基、环己二烯基、环庚烷基、环庚三烯基等。环烷基可以是取代或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、 -OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“杂环烷基”指3至8元单环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些环还可以具有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。例如吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。杂环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“双环烷基”指5至14元全碳稠合环(“稠合”环系意味着系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。例如
优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。双环烷基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“杂双环烷基”指5至14元稠合环(“稠合”环系意味着系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个 双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为7至10元。例如
更优选为5元/5元或5元/6元杂双环烷基。杂双环烷基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7
“桥环烷基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为7至10元。例如
根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“桥杂环烷基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为7至10元。例如：
根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环烷基可以是取代或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“螺环烷基”指5至14元，单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。例如：
更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“螺杂环烷基”指5至14元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环烃，其中一个或两个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为7至10元。例如
根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基，更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环烷基。螺杂环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“3～8元杂环基”指构成环原子的数量为3～8元，构成环的原子中含有一个或多个N、O或S(O)n杂原子，环内可以含有1～2个双键，为单环或双环的非芳 香族的环基，构成环的原子中含有氮原子时，可以从氮原子伸出结合键。优选为4～6元杂环基，更优选为5～6元，例如吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基等。3～8元杂环基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
p元/q元的双环烷基、杂双环烷基、单螺环烷基或单螺杂环烷基，指双环烷基、杂双环烷基、单螺环烷基或单螺杂环烷基的两个环的环原子数量分别为p个和q个，p或q选自3～8的整数，优选为4～7的整数。
“芳基”指6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，优选为6至10元，例如苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“杂芳基”指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基优选为是5元或6元。例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。杂芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、羰基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-S(O)nR5、-OSO2R5、-SO2NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7。
“芳氧基”指-O-芳基和-O-杂芳基，芳基和杂芳基定义同上。例如苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未取代的环烷基)。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。烷氧基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个，独立地选自为卤素、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、环烷基或杂环烷基。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团” 意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
m，n和R5～R7的定义如通式(I)化合物中所述。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明通式(I)化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
通式(IA)化合物与通式(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物，
其中X选自卤素，R1～R4的定义如通式(I)化合物所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(d-DMSO)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：FinniganLCQ advantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
激酶IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的起始原料是已知的，并且可以在市场上购买到，购买自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司，或者可以采用或者按照本领域已知的方法来合成。
实施例中无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，石油醚和乙酸乙酯体系，丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
柱层析的洗脱剂的体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和丙酮体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的氨水和醋酸等进行调节。
实施例1
(E)-4-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚-6-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(396mg，0.70mmol，采用公知的方法“Journal of MedicinalChemistry，2000，43(17)，3244-3256”制备而得)，碘化钠(315mg，2.10mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.6mL，3.50mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷草酸盐1b(264mg，1.4mmol，采用公知的方法“Organic Letters，2008，10(16)，3525-3526”制备而得)，搅拌反应12小时。将反应液倒入50mL冰水中，用二氯甲烷萃取(75mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(40mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法洗脱剂体系A纯化所得残余 物，得到(E)-4-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚-6-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1(61mg，淡黄色固体)，产率：14.3％。
LC-MS m/z：611[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.55(s，1H)，8.93(s，1H)，8.60(d，J＝4.4Hz，1H)，8.46(s，1H)，7.89(m，1H)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H)，7.38(m，3H)，7.26(m，2H)，6.69(m，1H)，6.56(d，J＝15.6Hz，1H)，5.28(s，2H)，4.62(s，4H)，4.33(dd，J＝6.8Hz，J＝14Hz，2H)，3.50(s，4H)，1.48(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例2
(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将(3aR，6aS)-5-氧代-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2a(500mg，2.22mmol，根据现有文献WO2008089636制备而得)溶于100mL甲醇中，冰浴冷却至0℃，缓慢加入硼氢化钠(168mg，4.44mmol)，搅拌反应30分钟。加入1mL水，反应液减压浓缩，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(441mg，浅褐色油状物)，产物不经分离直接进行下一步反应。
第二步
(3aR，6aS)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(441mg，1.94mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到(3aR，6aS)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐2c(318mg，黄色固体)，产率：100％。
第三步
(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(548mg，0.97mmol)，碘化钠(437mg，2.92mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.50mL，2.92mmol)溶于8mL N，N-甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aS)-八氢环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐2c(318mg，1.94mmol)，搅拌反应12小时。将反应液倒入80mL冰水中，用二氯甲烷萃取(80mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(40mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺2(125mg，黄色固体)，产率：20.1％。
LC-MS m/z::639[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.55(s，1H)，8.93(s，1H)，8.60(d，J＝4Hz，1H)，8.47(s，1H)，7.89(m，1H)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40(m，3H)，7.26(m，2H)，6.81(m，1H)，6.59(d，J＝15.2Hz，1H)，5.28(s，2H)，4.33(dd，J＝6.8Hz，J＝13.6Hz，2H)，3.89(m，1H)，3.37(m，2H)，2.72(m，2H)，2.69(m，2H)，2.32(m，2H)，1.92(m，2H)，1.48(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例3
(3aR，6aS，E)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
第一步
2，2，5-三甲基-[1，3]二恶烷-5-羧酸
将3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸3a(10.01g，0.075mol，购于韶远化学科技有限公司)，2，2-二甲氧基-丙烷(11mL，0.09mol)和一水合对甲苯磺酸(1.40g，0.075mol)溶于100mL丙酮中，搅拌反应12小时。减压浓缩，残余物用100mL二氯甲烷溶解，依次用水(50mL×2)，饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到2，2，5-三甲基-[1，3]二恶烷-5-羧酸3b(3.9g，白色固体)，产率：30.0％。
MS m/z(ESI)：173.1[M-1]-
第二步
(3aR，6aS)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐
将2，2，5-三甲基-[1，3]二恶烷-5-羧酸3b(348mg，2mmol)，(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(454mg，2mmol)，N，N′-二环己基碳二亚胺(500mg，3mmol)和4-二甲氨基吡啶(24mg，0.20mmol)溶于10mL二氯甲烷中，搅拌反应12小时。加入10mL水，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到淡黄色油状物。
将上述淡黄色油状物溶于10mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应2小时。反应液减压浓缩，得到(3aR，6aS)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐3c(500mg，淡黄色固体)，产率：98.2％。
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ5.25(m，1H)，3.87(d，J＝8Hz，2H)，3.77(d，J＝8Hz，2H)，3.06(m，2H)，2.95(m，2H)，2.23(m，3H)，1.84(m，2H)，1.35(m，2H)，1.08(s，3H)
第三步
(3aR，6aS，E)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(150mg，0.25mmol)，碘化钠(38mg，0.25mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.13mL，0.76mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aS)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐3c(130mg，0.51mmol)，搅拌反应12小时。加入20mL水，用二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS，E)-3-羟基-2-羟甲基-2-甲基-丙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯3(100mg，黄色固体)，产率：52.3％。
MS m/z(ESI)：777.3[M+23]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ8.97(s，1H)，8.58(d，J＝4Hz，1H)，8.46(s，1H)，7.91(m，1H)，7.74(m，1H)，7.42(m，3H)，7.23(m，2H)，7.02(m，1H)，6.79(m，1H)，5.29(s，2H)，4.38(m，2H)，4.00(d，J＝4Hz，2H)，3.78(d，J＝12Hz，2H)，3.62(m，5H)，3.20(s，4H)，2.18(m，2H)，2.01(m，3H)，1.59(m，3H)
实施例4
(3aR，6aS)-5-(3-{(E)-4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰}-烯丙基氨基)-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
第一步
(3aR，6aS)-5-甲磺酰基氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(8.11g，0.036mol)溶于50mL二氯甲烷中，冰浴冷却至0℃，加入三乙胺(19.80mL，142.40mmol)和甲磺酰氯(4.16mL，53.40mmol)，室温下搅拌反应1小时。加入100mL冰水，用二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-5-甲磺酰基氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4a(10.87g，红棕色油状物)。
第二步
(3aR，6aS)-5-叠氮基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-甲磺酰基氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4a(10.87g，0.036mol)和叠氮化钠(4.61g，0.071mol)溶于50mL N，N-二甲基甲酰胺中，在90℃下搅拌反应3小时。将反应液中加入200mL冰水，用乙酸乙酯萃取(300mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(150mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-5-叠氮基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4b(黄色油状液体)。
第三步
(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-叠氮基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4b(8.90g，0.036mol)和三苯基膦(18.66g，0.071mol)溶于110mL四氢呋喃和水(V/V＝10∶1)的混合溶剂中，在90℃下搅拌反应1.5小时。反应液减压浓缩，残留物中加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4c(6.1g，无色油状物)，产率： 75.3％。
MS m/z(ESI)：227[M+1]+
第四步
(3aR，6aS)-5-(3-{(E)-4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰}-烯丙基氨基)-六氢-环戊并[c]咯-2-羧酸叔丁酯
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.34mmol)，碘化钠(51mg，0.34mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.18mL，1.02mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4c(154mg，0.68mmol)，40℃下搅拌反应12小时。将反应液倒入20mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS)-5-(3-{(E)-4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰}-烯丙基氨基)-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4(35mg，黄色固体)，产率：13.9％。
MS m/z(ESI)：738[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.64(s，1H)，9.58(s，1H)，8.93(s，1H)，8.59(m，1H)，8.48(s，1H)，7.88(m，1H)，7.58(m，1H)，7.36(m，3H)，7.23(m，2H)，6.84(m，1H)，6.64(m，1H)，5.29(s，2H)，4.32(m，2H)，3.50(m，2H)，3.43(m，2H)，3.01(m，2H)，2.75(m，2H)，1.77(s，3H)，1.46(m，3H)，1.39(m，2H)，1.38(s，9H)
实施例5
(E)-4-((3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氨基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基胺
将(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4c(500mg，2.20mmol)溶于10mL四氢呋喃中，加入氢化铝锂(251mg，6.60mmol)，回流反应4小时。冰浴下，缓慢滴加二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂至不产生气泡为止。离心，取上清液，减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基胺5a(490 mg，无色油状物)，产物不经分离直接进行下一步反应。
第二步
(E)-4-((3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氨基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(300mg，0.55mmol)，碘化钠(83mg，0.55mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.29mL，1.65mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基胺5a(309mg，2.20mmol)，搅拌反应12小时。将反应液倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氨基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺5(21mg，黄色固体)，产率：5.8％。
MS m/z(ESI)：652[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.68(s，1H)，8.92(s，1H)，8.60(s，1H)，8.48(s，1H)，7.88(m，1H)，7.57(m，1H)，7.35(s，1H)，7.25(m，2H)，6.88(m，1H)，6.72(d，J＝8Hz，1H)，5.28(s，1H)，4.31(dd，J＝8Hz，J＝4Hz，2H)，3.94(s，3H)，2.99(s，3H)，2.88(4H，s)，2.81(s，3H)，1.91(s，4H)，1.48(m，4H)，1.23(m，3H)
实施例6
(E)-4-((3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(570mg，2.50mmol)溶于10mL四氢呋喃中，冰浴冷却至0℃，加入60％氢化钠(180mg，4.50mmol)，搅拌30分钟后，加入碘甲烷(1.06g，7.50mmol)，室温下搅拌24小时。反应液中加入10mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-5-甲氧 基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯6a(710mg，浅黄色油状物)。
MS m/z(ESI)：241[M+1]+
第二步
(3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯盐酸盐
将粗品(3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯6a(603mg，2.50mmol)溶于10mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯盐酸盐6b(410mg，无色油状物)。
MS m/z(ESI)：142[M+1]+
第三步
(E)-4-((3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(300mg，0.51mmol)，碘化钠(230mg，1.53mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.45mL，2.55mmol)溶于10mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯盐酸盐6b(288mg，2.04mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-5-甲氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺6(168mg，黄色固体)，产率：50.5％。
MS m/z(ESI)：654.4[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.63(s，1H)，9.57(s，1H)，8.93(s，1H)，8.59(d，J＝4Hz，1H)，8.47(s，1H)，7.87(m，1H)，7.58(m，1H)，7.37(m，3H)，7.14(m，2H)，6.81(m，1H)，6.63(d，J＝8Hz，1H)，5.28(s，2H)，4.31(m，2H)，3.66(s，2H)，3.19(m，3H)，2.52(m，2H)，1.99(s，3H)，1.45(m，5H)，1.29(s，1H)
实施例7
(E)-4-((3aR，6aS)-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(300mg，0.51mmol)，碘化钠(77mg，0.51mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.45mL，2.55mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aS)-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯盐酸盐7a(190mg，1.02mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺7(168mg，黄色固体)，产率：50.5％。
MS m/z(ESI)：625.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.53(s，1H)，8.94(s，1H)，8.61(d，J＝4Hz，1H)，8.48(s，1H)，7.87(m，1H)，7.59(m，1H)，7.38(m，3H)，7.19(m，2H)，6.83(m，1H)，6.63(m，1H)，5.29(s，2H)，4.32(dd，J＝8Hz，J＝4Hz，2H)，2.29(m，5H)，2.71(d，J＝8Hz，2H)，2.36(s，2H)，1.46(m，4H)
实施例8
(E)-4-[(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯
冰浴下，将粗品(3aR，6aS)-2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基胺5a(617mg，4.40mmol)溶于55mL二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂中，加入二碳酸二叔丁酯(1.92g，8.80mmol)，室温下搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入50mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS)-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯8a(850mg，无色油状物)，产率：80.2％。
MS m/z(ESI)：241.2[M+1]+
第二步
(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺
将(3aR，6aS)-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯8a(850mg，3.50mmol)溶于25mL四氢呋喃中，加入氢化铝锂(670mg，17.80mmol)，回流反应3小时。冰浴下，缓慢滴加二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂至不产生气泡为止，加入50mL二氯甲烷，离心，取上清液，减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺8b(无色油状物)，产物不经分离直接进行下一步反应。
第三步
(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯
冰浴下，将粗品(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺8b(540mg，3.50mmol)溶于50mL二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂中，加入二碳酸二叔丁酯(1.53g，7mmol)，室温下搅拌12小时。反应液减压浓缩，加入50mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯8c(670mg，白色固体)，产率：75.3％。
MS m/z(ESI)：255.1[M+1]+
第四步
(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐
将(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基甲酸叔丁酯8c(635mg，2.51mmol)溶于10mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐8d(无色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第五步
(E)-4-[(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基- 喹啉-6-基}-酰胺1a(300mg，0.51mmol)，碘化钠(228mg，1.52mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.51mL，3.04mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐8d(231mg，1.01mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-[(3aR，6aS)-甲基-(2-甲基-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺8(168mg，黄色固体)，产率：8.9％。
MS m/z(ESI)：666.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.61(s，1H)，9.51(s，1H)，8.94(s，1H)，8.57(d，J＝4Hz，1H)，8.74(s，1H)，7.86(m，1H)，7.36(m，1H)，7.25(m，3H)，7.2(m，2H)，6.80(m，1H)，6.08(s，1H)，6.04(m，1H)，5.88(m，1H)，5.27(s，2H)，4.30(t，J＝8Hz，3H)，3.61(m，2H)，3.47(m，3H)，3.32(m，2H)，2，76(s，3H)，2.50(m，3H)，2.22(s，3H)
实施例9
(E，E)-4-(4-氧代-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(R)-2-羟甲基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将吡咯烷-2-基-甲醇9a(4g，39.5mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入三乙胺(11.13mL，80mmol)，冰浴下冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(12.91g，0.059mol)，搅拌反应3小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到(R)-2-羟甲基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9b(7.01g，淡黄色油状物)，产率：88.0％。
MS m/z(ESI+23)：224.2[M+23]+
第二步
(R)-2-甲酰基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将草酰氯(0.77mL，8mmol)溶于5mL二氯甲烷中，反应液冷却至-78℃，滴加二甲基亚砜(14.21mL，14mmol)，搅拌15分钟后，在-78℃下滴加3mL(R)-2-羟甲基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9b(400mg，2mmol)的二氯甲烷溶液，搅拌15分钟后加入三乙胺(31.91mL，14mmol)，继续搅拌15分钟后，升温至0℃反应15分钟。将反应液中加入80mL石油醚，用水洗涤(20mL×2)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到(R)-2-甲酰基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9c(6.09g，淡黄色油状物)，产率：87.7％。
MS m/z(ESI)：199.8[M+1]+
第三步
(R)-2-[(乙氧羰基甲基-氨基)-甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将(R)-2-甲酰基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9c(500mg，2.50mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入甘氨酸乙酯盐酸盐(526mg，26.90mmol)，搅拌30分钟后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.59g，0.053mol)，搅拌反应12小时。反应液用二氯甲烷萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到(R)-2-[(乙氧羰基甲基-氨基)-甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9d(611mg，淡黄色油状物)，产率：62.8％。
MS m/z(ESI)：287.2[M+1]+
第四步
(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-4-酮
将(R)-2-[(乙氧羰基甲基-氨基)-甲基]-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯9d(611mg，12.60mmol)和3mL三氟醋酸溶于10mL二氯甲烷中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，残留物中加入40mL二氯甲烷，滴加1M氢氧化钠溶液至反应液pH为12～13，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-4-酮9e(616mg，褐色油状物)，产率：35.0％。
MS m/z(ESI)：141.1[M+1]+
第五步
(R，E)-4-(4-氧代-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(150mg，0.25mmol)，碘化钠(114mg，0.76mmol)和N，N-二异丙基乙胺(164mg，1.27mmol)溶于2mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-4-酮9e(231mg，1.01mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15 mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析纯化所得残余物(展开剂：适当比例的体系A)，得到(R，E)-4-(4-氧代-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺9(30mg，黄色固体)，产率：18.2％。
MS m/z(ESI)：652.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.61(s，1H)，9.53(s，1H)，8.95(s，1H)，8.60(d，J＝5.6Hz，1H)，8.47(s，1H)，7.89(t，J＝6Hz，1H)，7.59(d，J＝8Hz，1H)，7.39(m，3H)，7.26(d，J＝9.2Hz，1H)，7.21(m，1H)，6.78(m，1H)，6.64(d，J＝15.2Hz，1H)，5.28(s，2H)，4.34(dd，J＝7.2Hz，J＝14Hz，2H)，3.61(m，1H)，3.46(m，1H)，3.27(m，3H)，3.136(m，2H)，2.74(d，J＝16.4Hz，1H)，2.07(m，3H)，1.78(m，1H)，1.48(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例10
(E)-4-((3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基-2-羧酸叔丁酯
将(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4c(200mg，0.88mmol)和1mL 37％的甲醛溶液溶于5mL甲醇中，搅拌2小时后加入氰基硼氢化钠(276mg，4.40mmol)，反应液继续搅拌12小时。反应液减压浓缩，得到粗品((3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基-2-羧酸叔丁酯10a(400mg，黄色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：255.3[M+1]+
第二步
(3aR，6aS)-二甲基-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐
将粗品((3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基-2-羧酸叔丁酯10a(400mg，1.57mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-二甲基-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐10b(250mg，黄色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第三步
(E)-4-((3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.34mmol)，碘化钠(152mg，1.01mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.29mL，1.69mmol)溶于5mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-二甲基-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-胺盐酸盐10b(130mg，0.68mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-5-二甲胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺10(43mg，黄色固体)，产率：19.1％。
MS m/z(ESI)：666.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.48(s，1H)，8.95(s，1H)，8.61(d，J＝4.4Hz，1H)，8.47(s，1H)，7.90(m，1H)，7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39(m，3H)，7.27(m，2H)，6.83(m，1H)，6.57(d，J＝15.6Hz，1H)，5.29(s，2H)，4.34(dd，J＝6.8Hz，J＝14Hz，2H)，3.18(m，4H)，2.64(m，2H)，2.58(m，3H)，2.15(m，2H)，2.12(s，6H)，1.49(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例11
(3aR，6aS，E)-二甲基-氨基甲酸2-(3-{4-3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
第一步
(3aR，6aS)-5-二甲基氨基甲酰氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(500mg，2mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，冰浴条件下依次加入60％氢化钠(528mg，13.20mmol)和二甲基氨基甲酰氯(1.42g，0.013mol)，室温下搅拌反应12小时。在反应液中加入50mL水，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残留物，得到(3aR，6aS)-5-二甲基氨基甲酰氧基-六氢-环戊并[c] 吡咯-2-羧酸叔丁酯11a(600mg，无色油状物)，产率：46.2％。
第二步
(3aR，6aS)-二甲基-氨基甲酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐
将(3aR，6aS)-5-二甲基氨基甲酰氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯11a(600mg，2.01mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-二甲基-氨基甲酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐11b(400mg，黄色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第三步
(3aR，6aS，E)-二甲基-氨基甲酸2-(3-{4-3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.34mmol)，碘化钠(152mg，1.01mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.29mL，1.69mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-二甲基-氨基甲酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯盐酸盐11b(117mg，0.5mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS，E)-二甲基-氨基甲酸2-(3-{4-3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯11(57mg，黄色固体)，产率：32.2％。
MS m/z(ESI)：710.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.61(s，1H)，9.51(s，1H)，8.94(s，1H)，8.60(m，1H)，8.47(s，1H)，7.89(m，1H)，7.59(d，J＝8Hz，1H)，7.39(m，3H)，7.26(m，2H)，6.84(m，1H)，6.59(d，J＝15.6Hz，1H)，5.28(s，2H)，4.83(m，1H)，4.33(dd，J＝6.8Hz，J＝14Hz，2H)，3.23(m，2H)，2.84(m，7H)，2.54(m，3H)，2.42(m，2H)，2.07(m，2H)，1.48(t，J＝7.2Hz，3H)
实施例12
(E)-4-((3aR，6aS)-5-乙酰胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-5-乙酰氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将(3aR，6aS)-5-氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4c(1g，4.40mmol)溶于30mL二氯甲烷中，冰浴下加入乙酰氯(0.64mL，8.80mmol)，反应液在0℃下搅拌1小时。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到(3aR，6aS)-5-乙酰氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯12a(980mg，黄色固体)，产率：83.0％。
第二步
(3aR，6aS)-N-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-乙酰胺盐酸盐
将(3aR，6aS)-5-乙酰氨基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯12a(980mg，3.65mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，得到(3aR，6aS)-N-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-乙酰胺盐酸盐12b(746mg，黄色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第三步
(E)-4-((3aR，6aS)-5-乙酰胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(150mg，0.25mmol)，碘化钠(112mg，0.75mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.21mL，1.25mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aS)-N-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基)-乙酰胺盐酸盐12b(103mg，0.5mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-5-乙酰胺基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺12(51mg，黄色固体)，产率：30.0％。
MS m/z(ESI)：680.4[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.64(s，1H)，9.57(s，1H)，8.94(s，1H)，8.61(m，1H)，8.48(s，1H)，8.48(s，1H)，7.90(m，1H)，7.77(m，1H)，7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.41(m，3H)，7.25(m，2H)，6.84(m，1H)，6.63(m，1H)，5.29(s，2H)，4.34(dd，J＝7.2Hz，J＝14Hz，2H)，4.21(m，1H)，2.67(m，2H)，2.51(m，6H)，1.77(s，3H)，1.66(m，2H)，1.54(m，2H)，1.48(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例13
(R，E)-4-(六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪
将(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-4-酮9e(67mg，0.48mmol)溶于2mL四氢呋喃中，冰浴冷却下加入1M硼烷的四氢呋喃溶液(1mL，1mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到粗品(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪13a，产物不经分离直接进行下一步反应。
第二步
(R，E)-4-(六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(150mg，0.25mmol)，碘化钠(114mg，0.76mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.22mL，1.27mmol)溶于2mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(R)-六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪13a(65mg，0.51mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(R，E)-4-(六氢-吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺13(50mg，黄色固体)，产率：30.9％。
MS m/z(ESI)：638.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.69(s，1H)，9.59(s，1H)，8.98(s，1H)，8.61(d，J＝4.4Hz，1H)，8.49(s，1H)，7.90(m，1H)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H)，7.43(m，3H)，7.27(m，2H)，6.89(m，1H)，6.52(m，1H)，5.28(s，2H)，4.31(dd，J＝6.8Hz，J＝14Hz，2H)，3.63(m，2H)，3.51(m，2H)，3.17(m，2H)，3.00(m，2H)，2.33(m，2H)，2.10(m，3H)，1.49(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例14
(3aR，6aS，E)-乙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
第一步
(3aR，6aS)-5-乙酰氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(1g，4.4mmol)，醋酸酐(0.62mL，6.60mmol)和三乙胺(2mL，13.20mmol)溶于10mL二氯甲烷中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到(3aR，6aS)-5-乙酰氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯14a(350mg，无色油状物)，产率：29.7％。
MS m/z(ESI)：270.9[M+1]+
第二步
(3aR，6aS)-乙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
将(3aR，6aS)-5-乙酰氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯14a(350mg，1.3mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-乙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯14b(327mg，白色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：170.0[M+1]+
第三步
(3aR，6aS，E)-乙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(530mg，0.97mmol)，碘化钠(434mg，2.90mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.33mL，1.93mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-乙酸八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯14b(130mg，0.68mmol)，搅拌反应12小时。将反应液倒入100mL冰水中，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS，E)-乙酸2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2- 基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨基甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基酯14(89mg，淡黄色固体)，产率：13-5％。
MS m/z(ESI)：681.4[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.52(s，1H)，8.94(s，1H)，8.61(d，J＝4.4Hz，1H)，8.59(s，1H)，7.90(m，1H)，7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.40(m，3H)，7.27(m，2H)，6.84(m，1H)，6.60(d，J＝15.6Hz，1H)，5.29(s，2H)，4.86(m，1H)，4.34(dd，J＝6.8Hz，J＝13.6Hz，2H)，3.41(m，2H)，3.23(m，2H)，3.23(m，2H)，2.47(m，4H)，2.16(m，2H)，1.98(s，3H)，1.49(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例15
(E)-4-(3-羟基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.34mmol)，碘化钠(150mg，1mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.20mL，1mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-醇15a(64mg，0.50mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-(3-羟基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺15(65mg，黄色固体)，产率：30.2％。
MS m/z(ESI)：639.4[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)δ10.6(s，1H)，9.65(s，2H)，8.94(s，1H)，8.61～8.60(d，1H，J＝11Hz)，8.49(s，1H)，7.90～7.86(m，1H)，7.60～7.58(d，1H，J＝20Hz)，7.39(s，3H)，7.28～7.20(dd，2H，J＝22Hz)，6.86(d，2H)，5.29(s，2H)，4.35～4.30(q，3H，J＝17Hz)，2.29～1.81(m，8H)，1.49～1.45(t，3H，J＝17Hz)，1.24(s，3H)
实施例16
(E)-4-(3-羟基-金刚烷胺-1-基氨基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.34mmol)，碘化钠(150mg，1mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.20mL，1mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入3-氨基-金刚烷-1-醇16a(112mg，0.67mmol，购于达瑞化学品有限公司)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-(3-羟基-金刚烷胺-1-基氨基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺16(51mg，黄色固体)，产率：22.7％。
MS m/z(ESI)：679.5[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.63(s，1H)，9.52(s，1H)，8.95(s，1H)，8.62(s，1H)，8.48(s，1H)，7.91(d，J＝1.6Hz，1H)，7.71(m，1H)，7.36(m，3H)，7.21(m，2H)，6.77(s，1H)，6.58(s，1H)，5.29(s，2H)，4.43(s，1H)，4.32(m，2H)，3.94(m，1H)，3.21(s，1H)，2.71(m，1H)，2.33(m，2H)，1.671(m，7H)，1.47(m，6H)
实施例17
(E)-4-((4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(4aR，7aR)-六氢-[2]氮茚-3，6-二酮
冰浴下，将四氢-并环戊二烯-2，5-二酮17a(3.4g，0.025mol，根据OrganicSyntheses，64，27-38，1986制备而得)溶于70mL浓盐酸中，搅拌下分批加入叠氮化钠(2.02g，0.031mol)，室温搅拌反应12小时。冰浴下，滴加1M氢氧化钠溶液至反应液pH为10～12，用二氯甲烷萃取(100mL×5)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到(4aR，7aR)-六氢-[2]氮茚-3，6-二酮17b(1.36g，白色固体)，产率：36.2％。
MS m/z(ESI)：154.1[M+1]+
第二步
(4aR，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-3-酮
将(4aR，7aR)-六氢-[2]氮茚-3，6-二酮17b(1.36g，0.009mol)溶于60mL甲苯中，加入乙二醇(1.52g，0.024mol)和一水合对甲苯磺酸(135mg，0.71mmol)，回流反应7小时。滴加饱和碳酸钠溶液至反应液pH为8～9，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到(4aR，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-3-酮17c(1.54g，白色固体)，产率：87.7％。
第三步
(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚
氩气氛下，将氢化铝锂(634mg，17.10mmol)溶于25mL四氢呋喃中，冰浴下，加入25mL(4aR，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-3-酮17c(1.54g，7.80mmol)的四氢呋喃溶液，搅拌反应30分钟后，室温搅拌反应12小时。用15mL冰水，加入20mL二氯甲烷，过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚17d(1.21g，黄色油状物)，产率：84.5％。MS m/z(ESI)：184.2[M+1]+
第四步
(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯
将(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚17d(1.21g，6.6mmol)溶于25mL二氯甲烷中，加入N，N-二异丙基乙胺(23.40mL，0.02mol)，冰浴下，加入二碳酸二叔丁酯(2.86g，0.013mol)，搅拌反应30分钟后，室温搅拌反应12小时。减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17e(545mg，无色油状物)，产率：30.0％。MS m/z(ESI)：228.1[M-C4H9]-
第五步
(4aS，7aR)-6-氧代-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯
将(4aS，7aR)-6，6-(亚乙基缩醛)-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17e(545mg，2mmol)溶于30mL丙酮中，加入一水合对甲苯磺酸(183mg，0.93mmol)，回流反应30分钟。滴加饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为8～9，用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到(4aS，7aR)-6-氧代-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17f(404mg，淡黄色油状物)，产率：88.3％。
MS m/z(ESI)：184.1[M-C4H9]-
第六步
(4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯
将(4aS，7aR)-6-氧代-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17f(1.00g，4.40mmol)溶于30mL甲醇中，冰浴下，加入硼氢化钠(128mg，3.38mmol)，搅拌反应1小时。减压浓缩，加入10mL水，用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到(4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17g(416mg，淡黄色油状物)，产率：76％。
MS m/z(ESI)：182.1[M-C4H9]-
第七步
(4aS，6R，7aR)-八氢-[2]氮茚-6-醇盐酸盐
将(4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-羧酸叔丁酯17g(1g，4.40mmol)溶于6mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应2小时。减压浓缩，得到粗品(4aS，6R，7aR)-八氢-[2]氮茚-6-醇盐酸盐17h(368mg，无色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第八步
(E)-4-((4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(334mg，0.56mmol)，碘化钠(251mg，0.17mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.4mL，2.8mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(4aS，6R，7aR)-八氢-[2]氮茚-6-醇盐酸盐17h(200mg，1.13mmol)，搅拌反应12小 时。反应液减压浓缩，加入10mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((4aS，6R，7aR)-6-羟基-八氢-[2]氮茚-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺17(70mg，黄色固体)，产率：21.0％。
MS m/z(ESI)：653.4[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.63(s，1H)，8.94(s，1H)，8.61(d，J＝4.4Hz，1H)，8.34(s，1H)，7.90(t，J＝7.2Hz，1H)，7.58(d，J＝7.6Hz，1H)，7.38(s，2H)，7.19(q，J＝8.8Hz，J＝20.4Hz，2H)，6.79(m，1H)，6.18(m，1H)，5.29(s，2H)，4.61(m，1H)，4.29(q，J＝6.8Hz，J＝14Hz，2H)，4.18(m，1H)，4.08(q，J＝5.6Hz，J＝10.8Hz，1H)，3.16(d，J＝5.2Hz，2H)，2.33(m，3H)，1.99(m，4H)，1.65(m，2H)，1.41(t，J＝6.8Hz，3H)
实施例18
(3aR，6aS，E)-[2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基]-乙酸甲酯
第一步
(3aR，6aS)-5-(2-甲氧基羰基-甲氧基)-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将粗品(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯2b(1g，4.40mmol)溶于15mLN，N-二甲基甲酰胺中，冰浴下依次加入60％氢化钠(528mg，13.20mmol)和2-氯-乙酸甲酯(960mg，8.80mmol)，室温搅拌12小时。在反应液中加入50mL水，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残留物，得到(3aR，6aS)-5-(2-甲氧基羰基-甲氧基)-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯18a(915mg，无色油状物)，产率：62.7％。
第二步
(3aR，6aS)-3-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基)-乙酸甲酯盐酸盐
将(3aR，6aS)-5-(2-甲氧基羰基-甲氧基)-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯18a(200mg，0.67mmol)溶于5mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，得到粗品(3aR，6aS)-3-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基)-乙酸甲酯盐酸盐18b(黄色固体)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第三步
(3aR，6aS，E)-[2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基]-乙酸甲酯
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(150mg，0.25mmol)，碘化钠(112mg，0.75mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.30mL，1.5mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品(3aR，6aS)-3-(八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基)-乙酸甲酯盐酸盐18b(236mg，0.50mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(3aR，6aS，E)-[2-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基氨甲酰基}-烯丙基)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-基氧基]-乙酸甲酯18(32mg，黄色固体)，产率：19.5％。
MS m/z(ESI)：713.5[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.75(s，1H)，9.68(s，1H)，8.93(s，1H)，8.61(d，J＝4Hz，1H)，8.59(s，1H)，7.87(m，1H)，7.59(m，1H)，7.39(m，3H)，7.21(m，2H)，6.70(m，1H)，5.29(s，2H)，4.33(m，3H)，4.21(s，2H)，3.67(m，4H)，3.49(d，J＝4Hz，4H)，1.92(m，4H)，1.47(m，3H)，1.26(s，3H)
实施例19
(E)-4-(2-氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷-8-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.33mmol)，碘化钠(100mg，0.66mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.30mL，1.7mmol)溶于10mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入2-氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷盐酸盐19a(90mg，0.5mmol，采用公知的方法“Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，12(13)，1759-1762；2002”制备而得)，搅拌反应12小时。加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-(2-氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷-8-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺19(75mg，黄色固体)，产率：34.8％。
MS m/z(ESI)：654.2[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.62(s，1H)，9.51(s，1H)，8.95(s，1H)，8.61(d，J＝4Hz，1H)，8.48(s，1H)，7.90(m，1H)，7.59(m，1H)，7.39(m，3H)，7.22(m，2H)，6.79(m，1H)，6.58(d，J＝16Hz，1H)，5.29(s，2H)，4.32(d，J＝8Hz，J＝16Hz，2H)，3.72(t，J＝8Hz，2H)，3.43(s，2H)，3.13(，s，2H)，2.37(s，3H)，1.68(m，2H)，1.47(t，J＝8Hz，3H)，1.25(m，2H)
实施例20
(E)-4-[(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-甲氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-氨基甲酸叔丁酯
将3-氨基-金刚烷胺-1-醇16a(600mg，3.60mmol，购于达瑞化学品有限公司)溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下加入二碳酸二叔丁酯(1.57g，7.20mmol)和三乙胺(1.51mL，10.80mmol)，反应液室温搅拌12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-氨基甲酸叔丁酯20a(1.20g，白色固体)。
第二步
3-甲基氨基-金刚烷胺-1-醇
将粗品(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-氨基甲酸叔丁酯20a(960mg，3.60mmol)溶于20mL四氢呋喃中，加入氢化铝锂(680mg，18mmol)，回流反应3小时。冰浴下， 在反应液中缓慢滴加二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂至不产生气泡为止。离心，取上清液，减压浓缩，得到粗品3-甲基氨基-金刚烷胺-1-醇20b(700mg，无色油状物)，产物不经分离直接进行下一步反应。
第三步
(E)-4-[(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-甲氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.33mmol)，碘化钠(150mg，1mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.20mL，1mmol)溶于10mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入粗品3-甲基氨基-金刚烷胺-1-醇20b(650mg，3.6mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入20mL水，用二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-[(3-羟基-金刚烷胺-1-基)-甲氨基]-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺20(35mg，黄色固体)，产率：15.4％。
MS m/z(ESI)：693.5[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.64(s，1H)，9.47(s，1H)，8.94(s，1H)，8.60(d，J＝4Hz，1H)，8.48(s，1H)，7.90(d，J＝1.6Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.38(m，3H)，7.23(m，2H)，6.79(s，1H)，6.59(s，1H)，5.29(s，2H)，4.45(s，1H)，4.33(m，2H)，3.94(m，1H)，3.25(s，1H)，2.68(m，1H)，2.33(s，4H)，1.69(m，7H)，1.50(m，6H)
实施例21
(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯
将(3aR，6aS)-5-甲磺酰基氧基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯4a(630mg，2mmol)溶于10mL二甲基亚砜和10mL水中，搅拌反应12小时。加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯21a(250mg，白色固体)，产率：50.0％。
第二步
(3aR，6aR)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐
将(3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-羧酸叔丁酯21a(227mg，1mmol)溶于10mL 2M氯化氢的1，4-二氧六环溶液中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到(3aR，6aR)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐21b(170mg，无色油状物)，产率：100％。
第三步
(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(200mg，0.33mmol)，碘化钠(100mg，0.66mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.30mL，1.7mmol)溶于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入(3aR，6aR)-八氢-环戊并[c]吡咯-5-醇盐酸盐21b(82mg，0.50mmol)，搅拌反应12小时。加入20mL水，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(15mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到(E)-4-((3aR，6aS)-5-羟基-六氢-环戊并[c]吡咯-2-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺21(105mg，黄色固体)，产率：50.0％。
MS m/z(ESI)：641.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.63(s，1H)，9.53(s，1H)，8.94(s，1H)，8.60(d，J＝4Hz，1H)，8.48(s，1H)，7.88(m，1H)，7.59(m，1H)，7.39(m，3H)，7.22(m，2H)，6.83(m，1H)，6.57(d，J＝16Hz，1H)，5.29(s，2H)，4.33(m，3H)，4.22(s，1H)，3.18(s，2H)，2.62(s，2H)，2.38(s，3H)，1.69(s，2H)，1.47(m，4H)
实施例22
(E)-4-(2-氧代-7-氮杂-螺[3.5]壬-7-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
第一步
(4-氯甲氧基-哌啶-4-基)-甲醇盐酸盐
将2-氧代-7-氮杂-螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯22a(230mg，1.01mmol，根据专利US2003/236250A1制备而得)溶解于5mL 4M氯化氢1，4-二氧六环溶液中，反应2小时。反应液在减压下浓缩，得到(4-氯甲氧基-哌啶-4-基)-甲醇盐酸盐22b(200mg)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第二步
4-(4-氯甲基-4-羟甲基-哌啶-1-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将(E)-4-溴-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺1a(363mg，0.61mmol)，碘化钠(182mg，1.22mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.61mL，3.66mmol)溶于10mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入(4-氯甲氧基-哌啶-4-基)-甲醇盐酸盐22b(200mg，1mmol)，搅拌反应12小时。加入20mL水，用二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂萃取(40mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到4-(4-氯甲基-4-羟甲基-哌啶-1-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺22c(200mg，黄色固体)，产率：50.0％。
MS m/z(ESI)：639.2[M+1]+
第三步
(E)-4-(2-氧代-7-氮杂-螺[3.5]壬-7-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺
将4-(4-氯甲基-4-羟甲基-哌啶-1-基)-丁-2-烯酸{4-[3-吕-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯 胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺22c(180mg，0.27mmol)溶解于10mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入60％氢化钠(11mg，0.8mmol)，搅拌12小时。加入10mL水，用二氯甲烷和甲醇(V/V＝10∶1)的混合溶剂萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(E)-4-(2-氧代-7-氮杂-螺[3.5]壬-7-基)-丁-2-烯酸{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基}-酰胺22(40mg，黄色固体)，产率23.5％。
MS m/z(ESI)：639.3[M+1]+
1H NMR(400MHz，d-DMSO，ppm)：δ9.13(s，1H)，8.59(d，J＝8Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.09(s，1H)，7.76(m，1H)，7.69(m，1H)，7.67(m，1H)，7.54(m，1H)，7.36(s，1H)，7.32(s，1H)，7.26(s，1H)，7.10(d，J＝8Hz，1H)，7.00(m，2H)，6.17(d，J＝16Hz，1H)，5.31(s，2H)，4.41(s，2H)，4.33(m，2H)，4.22(m，2H)，3.16(d，J＝8Hz，2H)，1.62(m，3H)，1.55(m，3H)，1.27(m，2H)
测试例：
生物学评价
例1本发明化合物对EGFR高表达细胞的增殖抑制测定
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对高表达EGFR的细胞株—人表皮鳞癌细胞A431的增殖抑制活性。
以下所述的体外细胞试验可测定受试化合物对高表达EGFR的肿瘤细胞的增殖抑制活性，其活性可用IC50值来表示。此类试验的一般方案如下：首先将A431细胞(购于Institute of biochemistry and cell biology)以适宜的细胞浓度(e.g.5000个细胞/mL medium)接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培养，当细胞生长至85％汇合后，更换培养基为加有一系列递度浓度的(一般6或7个浓度)受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养72个小时。72小时后，可用磺酰罗丹明B(SRB)方法测定化合物对细胞增殖的抑制活性。IC50值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对于细胞增殖的抑制数值进行计算。本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表1。
| 实施例编号 | IC50(EGFR/A431)(nM) |
| 1 | 44 |
| 2 | 16 |
| 6 | 46 |
| 10 | 15 |
| 11 | 40 |
| 14 | 8 |
| 15 | 9 |
| 16 | 5 |
| 20 | 30 |
| 21 | 28 |
结论：本发明大部分实施例化合物对A431细胞有明显地增殖抑制活性。
例2.本发明化合物对EGFR激酶活性抑制的测定
本发明化合物在体外条件下对EGFR激酶活性的抑制可通过以下的方法进行测定。
下面所述方法用来测定本发明化合物对EGFR激酶的抑制活性。化合物的半数抑制浓度IC50(把酶活性抑制至50％时所需的化合物浓度)是将一定量的酶与特定底物及不同浓度的待测化合物混合并反应后来测定的。本实验所用的EGFR激酶(购于Cell signaling technology #7908)为人源重组蛋白，该酶在含有60mMHEPES(pH7.5)，5mM MgCl2，5mM MnCl2，3μM Na3VO4，1.25M DTT(1000x)的缓冲溶液及20μM ATP的反应体系中与多肽底物以及不同浓度的受试化合物共同反应(25℃，45分钟)，随后用抗磷酸酪氨酸抗体和铕元素标记抗体对磷酸化的底物进行标记，最后以时间分辨荧光方式测定底物的磷酸化程度，间接对EGFR激酶的活性进行定量测定。
本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
| 实施例编号 | IC50(EGFR/BIO)(nM) |
| 1 | 30 |
| 5 | 33 |
| 7 | 31 |
| 8 | 33 |
| 15 | 27 |
| 19 | 44 |
| 20 | 30 |
| 21 | 27 |
结论：本发明大部分实施例化合物对EGFR激酶活性有明显地抑制作用。
例3：本发明化合物对HER-2激酶活性抑制测定
体外HER-2激酶活性通过以下的方法进行测试。
下面所述的方法是用来测定本发明化合物对HER-2激酶活性的抑制能力，以化合物的半数抑制浓度IC50(将酶活性抑制至50％时所需的化合物浓度)表示，IC50值是通过将一定量的激酶与特定底物及不同浓度的待测化合物混合后反应来测定计算出的。本实验所用的Her-2激酶为重组人源蛋白(购于Invitrogen corporation#PV3366)，该酶在含有60mM HEPES(pH 7.5)，5mM MgCl2，5mM MnCl2，3μMNa3VO4，1.25M DTT(1000x)的缓冲溶液及20μM ATP的反应体系中与多肽底物以及不同浓度的受试化合物共同进行反应(25℃，45分钟)，随后用抗磷酸酪氨酸抗体和铕元素标记抗体对磷酸化的底物进行标记，最后以时间分辨荧光方式测定底物的磷酸化程度，间接对HER-2激酶活性进行定量测定。
本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
| 实施例编号 | IC50(HER2/BIO)(nM) |
| 2 | 10 |
| 12 | 2 |
| 17 | 12 |
| 20 | 7 |
结论：本发明大部分实施例化合物对HER-2激酶活性有明显地抑制作用。
例4：本发明化合物对HER-2高表达细胞的增殖抑制测定1
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对高表达HER-2的人类乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖抑制活性，其活性用IC50值来表示。此类试验的一般方案如下：将SK-BR-3细胞(购于Institute of biochemistry and cell biology)，以适宜细胞浓度接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培养，当它们生长至60％汇合，更换培养基为加有一系列递度浓度(一般6或7个浓度)的受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养96个小时。96小时后，可用磺酰罗丹明B(SRB)方法测试化合物抑制细胞增殖的活性。IC50值可通过一系列不同浓度下受试化合物对于细胞增殖的抑制数值进行计算。
本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
| 实施例编号 | IC50(HER2/SK-BR-3)(nM) |
| 1 | 25 |
| 2 | 2 |
| 20 | 27 |
| 21 | 28 |
结论：本发明大部分实施例化合物对SK-BR-3细胞的增殖有明显地抑制活性。
例5：本发明化合物HER-2对高表达细胞抑制增殖测定2
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对高表达HER-2的人胃癌细胞NCI-N87的增殖抑制活性，其活性可用IC50值来表示。此类试验的一般方案如下：将NCI-N87细胞(购于Institute ofbiochemistry and cell biology)，以适宜细胞浓度接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培养，当它们生长至60％汇合，更换培养基为加有一系列递度浓度的(一般6或7个浓度)受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养96个小时。96小时后，用磺酰罗丹明B(SRB)方法测试化合物抑制细胞增殖的活性。IC50值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对于细胞增殖的抑制数值进行计算。
本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
| 实施例编号 | IC50(HER2/N87)(nM) |
| 1 | 19 |
| 2 | 10 |
| 11 | 23 |
| 12 | 23 |
| 15 | 13 |
| 17 | 8 |
| 19 | 12 |
| 20 | 9 |
| 21 | 1 |
结论：本发明大部分实施例化合物对NCI-N87细胞的增殖有明显地抑制活性。
药代动力学评价
测试例1本发明化合物的药代动力学测试
1、摘要
以大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠分别灌胃给予实施例19、22盐酸盐化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例19、实施例21化合物
2.2试验动物
健康成年SD大鼠8只，雌雄各半，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。
2.3药物配制
称取适量药物，加入0.5％羧甲基纤维素钠研磨至样品均匀混悬，样品浓度为2.5mg/mL，临用时配制。
2.4给药
SD大鼠8只，雌雄各半，禁食过夜后分别灌胃给药，给药剂量均为25.0mg/kg，给药体积10mL/kg。
2.5样品采集
SD大鼠8只，雌雄各半，平均分成2组，禁食过夜后灌胃给药，剂量为25mg/kg。于给药前及给药后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，24.0，36.0小时由眼眶采血0.2mL，置于肝素化试管中，3500转/分钟离心10分钟分离血浆，于-20℃保存，给药后2小时进食。
3.操作
取给药后各时刻的大鼠血浆25μL，加入内标溶液20μL，加入甲醇150μL，混匀后涡旋混合3分钟，离心10分钟(13500转/分钟)，取上清液10μL进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数采用DAS 2.0软件计算。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下表：
结论：实施例19和实施例21在大鼠体内血药浓度及暴露水平均较高，具有明显的药代动力学优势。
Claims (6)
1.一种通式(I)所示的化合物或其可药用的盐，
其中：
R1具有下列结构：
其中：
D为苯基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个卤素所取代；
T选自-O(CH2)r-；
L为5元或6元杂芳基；
R2选自C1-10烷基；
R3选自氢原子或C1-10烷基；
R4选自C5-14双环烷基、C5-14杂双环烷基、C5-14桥环烷基、C5-14桥杂环烷基、C5-14单螺环烷基或C5-14单螺杂环烷基，其中所述的C5-14双环烷基、C5-14杂双环烷基、C5-14桥环烷基、C5-14杂桥环烷基、C5-14单螺环烷基或C5-14单螺杂环烷基任选进一步被一个或多个选自C1-10烷基、C1-10烷氧基、羟基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
或者，R3与R4与其相连接的氮原子一起形成C5-14杂双环烷基、C5-14桥杂环烷基或C5-14单螺杂环烷基，其中所述的C5-14杂双环烷基、C5-14桥杂环烷基或C5-14单螺杂环烷基任选进一步被一个或多个C1-10烷基、C1-10烷氧基、羟基、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-O(CH2)mC(O)OR5、-OC(O)NR6R7、-NHC(O)R5或-NR6R7的取代基所取代；
条件是，当R3与R4与其相连接的氮原子一起形成C5-14单螺杂环烷基时，所述C5-14单螺杂环烷基不包括基团-O-(CR10)2)s-O-；
R5选自氢原子或C1-10烷基；
R6和R7各自独立地选自氢原子或C1-10烷基；
R10选自氢原子、C1-10烷基或C3-8环烷基；
r为0、1或2；
s为1、2、3、4、5或6；且
m为0、1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐，其中该化合物选自：
3.一种制备根据权利要求1所述的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与通式(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物，
其中X选自卤素，R1～R4的定义如权利要求1中所述。
4.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用的盐及可药用的载体或赋形剂。
5.根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用的盐，根据权利要求4所述的药物组合物在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途，其中所述蛋白激酶选自EGFR受体酪氨酸激酶或HER-2受体酪氨酸激酶。
6.根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用的盐，根据权利要求4所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、表皮鳞癌或胃癌。
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