CN102145026B - 用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物及其制备方法、用途 - Google Patents
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Abstract
用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物及其制备方法、用途,涉及从松花粉中提取有效物质的工艺技术领域。先将松花粉在低温下破壁,再以常压常温水浸泡松花粉后超声波提取,除去固体杂质,取松花粉水溶性物质,最后,在1~5℃的环境温度下超滤分离出分子量为5000D以下的有效成分,即为用于治疗卵巢早衰的裸子植物松花粉水提物。可将松花粉水提物用于制备治疗卵巢早衰的口服制剂,吸收效果好、价格低廉;还可将松花粉水提物用于制备治疗卵巢早衰的注射制剂,吸收迅速、治疗针对性强,能作为女性一般保健使用,预防卵巢早衰的发生。
Description
技术领域
本发明涉及从植物,特别是从裸子植物松花粉中用水提取有效物质的工艺技术领域。
背景技术
卵巢早衰(POF)是指正常发育的妇女在40岁以前因某种原因引起卵巢功能衰竭。其表现为继发闭经、低雌激素和高促性腺激素状态,习惯称之为早绝经。40岁前卵巢早衰的发病率约为1%~3%,而30岁内的发病率为0.1%。目前研究认为原始生殖细胞储备的多寡是决定女性生育期长短的关键性因素,而原始生殖细胞的形成受多个基因的控制。除受先天遗传因素调控外,成熟女性卵巢功能的维持还受后天的多种因素的影响,迄今为止尚不十分清楚其发病的真正原因,所以对该病的研究已成为国内外生殖发育界的热点和难点。
目前国内外研究多认为卵巢早衰与遗传、免疫、代谢、病毒感染以及医源性等因素有关。概括为以下几个方面:1 染色体核型异常,通过对染色体异常卵巢早衰患者的研究发现,一些候选基因主要集中在x染色体和常染色体上,染色体核型的异常多少与家族遗传有关,另外环境因素引起的基因突变也是引起POF的关键因素。2免疫性因素,可能与细胞因子诱导颗粒细胞及黄体细胞,主要是组织相容性复合物(MHC)类抗原表达,诱发机体的自身免疫反应,使颗粒细胞及卵泡受到破坏有关。此外,还有认为POF与卵巢自身抗体的产生以及合并其他内分泌腺体或系统的自身免疫性疾病,如自身免疫性甲状腺炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、甲状旁腺功能减退、类风湿性关节炎、特发性血小板减少性紫癜、糖尿病等有关。3 促性腺激素及其受体异常,促性腺激素FSH、LH及其受体(FSHR、LHR)的传导缺陷可引起POF。这类病人卵泡并未完全耗竭,只是对促性腺激素和升高的促性腺激素缺乏反应,即卵巢抵抗综合征。4 酶缺乏可引起半乳糖血症,半乳糖血症与POF发生有关。半乳糖可以直接损害卵母细胞,其代谢产物又可对卵巢实质产生损害,半乳糖分子的渗人还可改变促性腺激素的活性,从而引起卵巢卵泡的过早耗竭。5 卵巢破坏因素,随着女性社会活动的日益频繁,无意长期接触放射线刺激,或因工作、疾病、意外事故接受大剂量或长时期的放射线,均可破坏卵巢引起POF。6 其它相关高危因素,吸烟、抑郁、长期大量接触外源性E2和未产妇与卵巢早衰有密切的关系。而重金属类环境激素对卵巢早衰的影响研究还是空白,随着我国经济的高速发展,这类环境因素将对我国人民生殖健康会产生长远的不利影响。
由于卵巢早衰的定义不同,以往各种文献统计的卵巢早衰的发生率存在一定的差异。大约1%~3.8%的妇女将会在40岁前丧失卵巢正常功能,有研究报告在原发闭经的妇女中,卵巢早衰的发生率达10%~28%,因此临床上并不少见。调查结果表明:月经初潮年龄越早,绝经发生得越早。首次怀孕年龄越大,绝经也越早。另外,哺乳时间越长,绝经也越晚。还有,口服避孕药时间越长,绝经也越晚。每周吃两到三次鱼、虾的妇女,绝经年龄较晚;常年坚持喝牛奶的妇女,喝牛奶量较多、坚持时间越长,绝经也越晚;从不锻炼身体的妇女,绝经年龄早;受到被动吸烟侵害越多、时间越长,绝经也越早。“塑身内衣”的压迫,导致卵巢发育受限,卵巢受伤。尤其是少女长期穿紧身衣,不仅会影响发育,还会诱发乳腺增生或囊肿等疾病。生活节奏加快导致的心理压力过大,也会使女性提早出现隐性更年期的症状。据一项问卷调查资料显示,在30多岁的白领女性中,有27%的人存在着不同程度的隐性更年期现象。她们自诉身心疲惫、体重攀升、烦躁失眠、皮肤干燥、发色枯黄、月经紊乱等,有时还会厌倦工作,莫名其妙地病一场,服用了大量保健品也无济于事,严重影响了自己与家人的生活与工作。在妇科门诊,这种受到更年期过早侵袭的女性已占到门诊量的20%左右。心理学家研究后发现,造成这些女性卵巢功能早衰、过早出现更年期症状的原因是心理压力过大。心理压力过大其实质也是一种应激反应,长期处于应激状态会导致内分泌紊乱。许多优秀的女性等到事业成功的时候,其卵巢功能却减退了,生儿育女成了一大难题。卵巢功能早衰的特点是卵巢对正常的促性腺激素不能做出正常反应,出现了体内促性腺激素水平很高,而卵巢产生的雌激素水平很低的现象。并非过早出现闭经、少经,都是卵巢早衰。要确诊卵巢早衰需要做内分泌检查,卵巢早衰会出现促黄体素、促卵泡激素增高,性激素降低。
目前,卵巢早衰尚缺乏理想的治疗方法。对有生育要求或者防止过早衰老者,一般可以采取综合治疗的方法进行调理。西药治疗有一定的作用,主要是补充雌激素,但具有比较大的风险,需要在大夫的指导下同时使用孕激素。据研究使用雌激素与孕激素治疗的时候,有一定的作用,可以改善症状,但对卵巢功能的恢复并不理想,主要表现在停止用药之后,症状重新出现,黄体生成素与卵泡刺激素再度升高,也就是说,西药仅仅起到了治标的作用,特别是对有怀孕要求的女性,作用不够理想。根据这种情况,在临床上,我们对于卵巢功能早衰的不孕症患者,常常在使用中药治疗的同时,进行人工周期替代治疗,这样不仅可以避免过重的副作用,还可以显著提高疗效。这种治疗方法,不仅可以消除绝经期症状,还能够恢复生育能力和改善性功能。特别是阴道干涩、性欲低下者,效果非常明显。近年来卵巢早衰的患者日趋增多,年龄也出现低龄化趋势。出现了卵巢早衰,应及时用药物治疗。目前一些美容院(科)推出了所谓的“卵巢保养”是没有医学根据的。经医学证明能刺激脑垂体,从而使卵巢分泌激素的办法就是使用激素,使用激素需要医生的指导。如果激素的剂量过多,或者有的妇女本身有妇科疾病如乳腺癌等不适合用激素,很可能会诱发或加重病情。卵巢衰老的女性要改善内分泌延缓衰老,除在医生指导下口服雌激素外,还应多吃蔬菜瓜果,保持大量维生素E、维生素B2的吸收,像莲子、黑木耳等都是很好的进补食物,加上适当的体育锻炼,保持平和的心态这才是真正年轻的秘诀。此病病因不确切,治疗效果亦不佳,西医没有很好的治疗方法,而临床上目前此病有逐渐增多的趋势。
从不同的角度定义卵巢早衰,其临床治疗和防治策略是不同的。从生物医学的角度来看,卵巢早衰是一种女性激素降低的内分泌疾病,从临床心理学、社会医学和医学人类学的角度来看,卵巢早衰则是一种典型的心身性疾病,国内外学者曾多次观察到精神创伤可导致月经延期,甚至闭经,绝经前生活中发生重大事件也可能导致提早绝经。在早衰发生与转归中的作用正在得到重视,近年来己经认识到闭经不是单纯的一个疾病,而是具有特异表现的临床综合征。而中医治疗停药后易复发,中医方面研究表明:卵巢早衰病因病机复杂,认为肾脾亏虚,肝郁血癖是其发生的主要机理,具有补肾健脾、调肝活血作用的中药对卵巢早衰具有确切的疗效,但停药后易复发。
目前一旦发展成卵巢早衰,治愈率只有1%~2%。虽然通过药物控制,能维持女性特征,避免乳房、阴道萎缩等,但却很难治愈,会影响生育。治疗卵巢早衰的主要方法:患POF者除闭经外,只有少数人出现类似更年期症状,故常不被重视,也不接受治疗,但长期处于低雌激素状态下,年轻妇女会发生子宫萎缩,阴道分泌物减少,性交痛,甚至长期缺钙以致骨质疏松。所以应及时补充雌激素。对于有可能恢复卵巢功能且期望生育者也可加用促排卵药物。查获明有抗体因素存在者可行免疫治疗。注射免疫疫苗已经成为一种较可靠的治疗手段。对于因卵巢血管因素导致卵巢营养缺失而发生的POF者应早诊断,早治疗,在卵巢功能丧失殆尽前尽早行血管搭桥手术,如将卵巢动脉与肠系膜下动脉或肾动脉等吻合,恢复卵巢血管供应,使卵巢再现生机。对于已处于POF晚期或由于各种原因导致卵巢缺如者,目前卵巢移植已成为很成功的一种治疗手段,借助她人的部分卵巢即可来完成女性生理功能,如卵巢唤醒术,为卵巢早衰这种只能靠外源激素维持的不治之症,开辟了一个新途径。过去人们认为补充雌激素是比较好的方法,其实这种方法具有一定的问题。首先,补充雌激素不能治本,只能是改善症状,并非改善卵巢的功能;其次,长期大量补充雌激素,不仅会给身体带来一定的副作用,同时还使卵巢处于“依赖”状态,当药物停止之后,自身缺乏雌激素的状况可能会更差,甚至有导致卵巢功能更差的可能。祖国医学具有相对比较好的治疗措施。中医认为,卵巢功能早衰的病机与肾水不足、肝阳过盛有关。肾水不足,常常阴精匮乏,出现一系列的阴虚症状,这与颜面烘热、心烦、睡眠不实、耳鸣等相符合。阴虚往往导致阳盛,肾水不能滋养肝木,自然也会导致肝阳上升。这些病机,也给中医治疗奠定了“治病必求于本”的基础。中医采用滋阴扶阳,培元补肾,温润添精,理肾和血,疏肝理气,舒畅气机,平衡阴阳,育卵通经等等,取得了一定的实效。从以上几个方面的情况来看,目前还没有较好的治疗方法,甚至在还没有搞清其病因、病理的情况下,存在着乱用药、乱治疗的误区,长期大量补充外源性雌激素的治疗方法,可能是造成卵巢早衰治愈率低,并发症多且严重的主要原因。
松花粉是植物的雄性生殖细胞,担负着植物繁衍的重任,包含着孕育新生命所必需的全部营养物质,其营养丰富、均衡、搭配合理,是纯天然的营养宝库。松花粉是中国医学宝库中的药食兼用花粉品种,作为中国传统药材,其药食兼用的历史已逾数千年,从2400年前的《神农本草经》到今天的《中华人民共和国药典》等历代医药典籍中都有记载,明代的《本草纲目》中记载“松花,甘、温、无毒。润心肺,益气,除风止血。”在民间更是以其神奇的功效被奉为“仙药”。人工采集的松花粉具有品质纯净、无污染、无异体花粉或有毒花粉掺杂、无动物激素的特点,是纯天然的绿色食品。松花粉中含有丰富的蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、多糖、维生素、膳食纤维、酶类、黄酮、核酸、天然激素等多种营养成分和生物活性物质,众多研究表明裸子植物松花粉能够在激素的受体水平上发挥类雌激素、抗雄激素的药理作用,使早衰的卵巢逆转近似正常,但对松花粉中是何物质起作用目前研究不多。
因此利用裸子植物松花粉提取物干预卵巢抗衰老进程的研究,分离提取裸子植物松花粉中有效成分,并积极应用于防治卵巢衰老具有特别重要的现实意义,可能是目前唯一有效的途径。
发明内容
本发明第一目的在于发明一种从根本上高效治疗卵巢衰老的来源于裸子植物松花粉的水溶性物质。
本发明所述裸子植物松花粉水提取物为从裸子植物松花粉中提取的分子量为5000D以下的水溶性物质。
经研究,裸子植物松花粉中分子量为5000D以下的裸子植物松花粉水溶性物质对于治疗卵巢早衰效果显著,且无副作用。
本发明的第二个目的在于发明上述水溶性物质的制备方法。
包括以下步骤:
1)将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10~20分钟;
2)以常压常温水浸泡10~15分钟后,再以超声波处理20~40分钟;
3)离心法除去固体杂质,取上清;
4)将所述上清在1~5℃的环境温度下以分子筛超滤分离,取得分子量为5000以下的裸子植物松花粉水溶性物质。
本发明工艺简单、易于操作,生产的产品费用低廉,对于治疗卵巢早衰效果显著,且无副作用。
本发明所述步骤1)的破壁时间为10~20分钟,目的是将裸子植物松花粉的细胞壁破坏,便于裸子植物松花粉中有效成份的提取和保持活性。
本发明步骤2)中先采用水浸泡时间为10~15分钟,再经超声波提取20~40分钟,目的是便于裸子植物松花粉中有效成份充分溶解、分离。
本发明步骤3)中除去固体杂质的方法是在转速为8000~12000转的离心机中离心10~15分钟。目的是有效去除裸子植物松花粉中固体杂质,使提取液澄清,透明,使提取液得到进一步提纯。
本发明再一目的在于发明上述裸子植物松花粉水提物的应用方法。
一种应用方法是:用于治疗卵巢早衰的裸子植物松花粉水提物用于制备治疗卵巢早衰的口服制剂。
作为口服制剂的优点是使用方便、吸收效果好、价格低廉,可作为女性一般保健使用,预防卵巢早衰的发生。
第二种应用方法是:用于治疗卵巢早衰的裸子植物松花粉水提物用于制备治疗卵巢早衰的注射制剂。
作为注射制剂的优点是吸收迅速、治疗针对性强。
附图说明
图1为自然健康组卵巢组织切片图。
图2为卵巢早衰对照组卵巢组织切片图。
图3为灌胃松花粉水提物组卵巢组织切片图。
图4为腹腔注射松花粉水提物组卵巢组织切片图。
具体实施方式
一、制备裸子植物松花粉治疗卵巢早衰水提物:
1、分检松花粉:在常温下去除裸子植物松花粉杂质。
2、将除杂的裸子植物松花粉气流粉碎破壁处理10~20分钟。
3、以常压常温水浸泡的花粉10~15分钟后,超声波粉碎20~40分钟。
4、除去固体杂质,取花粉溶液:
在转速为8000~12000转的冷冻离心机中离心10~15分钟,取上清液。
5、将取得的上清在1~5℃的环境温度下,以5000D分子筛超滤,分离出分子量为5000D以下的裸子植物松花粉水提物,即为用于治疗卵巢早衰的裸子植物松花粉水提物。
二、制备口服制剂和注射制剂:
1、制备口服制剂A:
将治疗卵巢早衰裸子植物松花粉水提物与蜂蜜或其他食品添加剂调匀,经超滤和巴氏消毒灭菌后,灌装备用。
2、制备注射制剂B:
将治疗卵巢早衰裸子植物松花粉水提物巴氏消毒灭菌后与注射用生理盐水以1︰1~2的体积比混和,均匀溶解后抽真空密封,待用。
三、应用:
(一)试验对象:
大鼠(体重200~300克)
(二)使用剂量:
1、口服制剂:口服2-3毫升/天,连接服用15~30天。
2、注射:肌肉或腹腔注射1-2毫升/天连续注射15-30天
(三)对比结果:
试验组3月龄SD大鼠卵巢组织切片结果比较:
1、将自然健康组卵巢组织切片,见图1。
从图1可见3月龄雌性大白鼠卵巢已有卵泡闭锁症状。
2、将注射雌二醇对照组卵巢组织切片,见图2。
从图2可见卵巢早衰症状明显,卵泡闭锁很多。
3、将灌胃松花粉水提液组卵巢组织切片,见图3。
从图3可见卵巢早衰症状不明显,卵泡闭锁很少。
4、将腹腔注射松花粉水提液组卵巢组织切片,见图4。
从图4可见卵巢早衰症状不明显,卵泡发育正常。
卵巢(ovary)为一对扁椭圆形的性腺,具有生殖内分泌功能,产生和排出卵细胞,以及分泌性激素,闭经开始卵巢逐渐萎缩变小变硬。卵巢组织结构是鉴定卵巢发育状况,评定其活力及健康状况的重要手段之一。正常成年大鼠对照组卵巢组织镜下可见多个不同发育阶段的卵泡,卵泡内呈多层颗粒细胞;模型组卵巢组织镜下呈卵泡发育受阻,表现为可见多个初级卵泡,而不同发育阶段的生长卵泡数目很少,卵泡闭锁严重;灌胃组、腹注组卵巢组织镜下可见卵泡内呈多层颗粒细胞可见皮质内大多数卵泡为正常发育的卵泡,有初级卵泡、生长卵泡及成熟卵泡及黄体。
用腹腔注射组的治疗效果优于灌胃组,从而可以肯定本发明确实可以将裸子植物松花粉中对卵巢早衰有治疗作用的成份提出来。
检测各试验组大鼠血清FSH、E2、T、LH含量:
各试验组大鼠血清FSH、E2、T、LH含量统计表
组别 | LH(mIU/ml) | E2(pg/ml) | T(nmol/l) | FSH(mIU/ml) |
对照组 | 2.94 ±0.55 | 68.60±57.99 | 2.77±0.31 | 3.01±0.69 |
模型组 | 3.06±0.91 | 97.90±27.46 | 3.38±0.22 | 3.23±0.88 |
灌胃组 | 2.31±0.97 | 104.64±43.48 | 3.70±0.66 | 2.83±0.58 |
腹注组 | 2.28±0.34 | 80.00±43.97 | 3.32±0.36 | 2.42±0.84 |
经过SPSS统计分析得出,血清FSH含量模型组和腹注组差异显著(P<0.05);血清E2含量对照组和灌胃组差异显著(P<0.05);血清LH含量模型组和灌云组、腹注组差异显著(P<0.05);血清T含量对照组和模型组、灌胃组、腹注组差异极显著(P<0.01)。
血清性激素和促性腺激素水平的测定是卵巢早衰早期诊断依据之一,其FSH水平上升,雌激素水平下降是卵巢早衰的主要特征。其中最敏感的指标是FSH水平的升高。本实验结果表明,模型组大鼠血清FSH(3.23±0.88 mIU/ml)、LH(3.06±0.91 mIU/ml)水平显著升高,用松花粉水提液干预后,腹注组(2.42±0.84 mIU/ml)的FSH含量与模型组差异显著偏低,说明使用松花粉水提液后可以调控促性腺激素,使其含量下降。松花粉水提液能通过下丘脑-垂体-性腺轴等途径,作用于垂体、下丘脑或更高中枢,直接或间接调节垂体促性腺机能,增强内源性雌激素分泌,降低血清FSH、LH水平,重建卵巢与垂体之间的负反馈关系,消除或降低外源性雌激素对卵巢发育的影响,以促进机体性激素和促性腺激素建立新的平衡状态。说明松花粉水提液具有调控机体内分泌的作用,对防治卵巢早衰有很好的效果。
总之,通过以上试验表明:本发明产品能有效治疗卵巢早衰,且注射组的疗效好于口服组。
Claims (5)
1.用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物,为从裸子植物松花粉中提取的分子量小于5000D的水溶性物质;从裸子植物松花粉中提取的分子量小于5000D的水溶性物质的方法包括以下步骤:
1)将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10~20分钟;
2)以常压常温水浸泡10~15分钟后,再以超声波处理20~40分钟;
3)离心法除去固体杂质,取上清液;
4)将所述上清液在1~5℃的环境温度下以分子筛超滤分离,取得分子量为5000D以下的松花粉水溶性物质。
2.一种如权利要求1所述用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理10~20分钟;
2)以常压常温水浸泡10~15分钟后,再以超声波处理20~40分钟;
3)离心法除去固体杂质,取上清液;
4)将所述上清液在1~5℃的环境温度下以分子筛超滤分离,取得分子量为5000D以下的松花粉水溶性物质。
3.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于步骤3)中除去固体杂质的方法是在转速为8000~12000转的冷冻离心机中离心10~15分钟。
4.如权利要求1所述用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物用于制备治疗女性卵巢早衰的口服制剂的用途。
5.如权利要求1所述用于治疗女性卵巢早衰的松花粉水提取物用于制备治疗女性卵巢早衰的注射制剂的用途。
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王舟莲等.酶法辅助水提马尾松花粉及其成分检测研究.《安徽农业科学》.2010,第38卷(第9期),4555-4558. |
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