CN102125570A - 竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓的药物中的应用。药效实验表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷v对血凝块均有明显的溶解作用,体内抗血栓形成实验结果显示竹节参总皂苷及竹节参皂苷v具有较强抗体内血栓形成的作用。竹节参皂苷v和竹节参总皂苷用于制备抗血栓的药物具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓药物中的应用。
背景技术
血栓的形成涉及到心脑血管疾病。特别是脑血栓的形成,可以由脑出血引起,可以由脑缺血引起,可以由脑血管硬化引起,也可以由血液生化学变化引起。脑血栓的形成的致死率和致残率极高。心肌梗塞同样是由血栓形成引起。心脑血管的血栓形成造成的危害,居人类死亡率的首位。
目前,治疗该类疾病临床应用的西药主要有抗血小板药和溶栓药物。其中常用的有:
影响花生四烯酸代谢药,其代表药为阿司匹林(aspirin)。但是阿司匹林有许多不良反应,如:出血、胃肠道刺激症状及腹泻、皮疹等。对于经皮冠状动脉介入术(PCI)后需用大剂量阿司匹林时,可同时使用胃黏膜保护剂、H2受体拮抗剂及质子泵抑制剂,有助于减少胃肠黏膜出血的发生。
血栓素A2(TXA2)合成酶抑制药和TXA2受体拮抗药,其代表药为奥扎格雷(ozagrel)。但是奥扎格雷会导致过敏反应,呼吸困难,过敏性休克,脑出血,眼结膜出血等不良反应。
环核苷酸磷酸二酯酶抑制药,其代表药为双嘧达莫(dipyridamole)(潘生丁)、西洛他唑。双嘧达莫(潘生丁)是磷酸二酯酶抑制剂,其缺点为化学稳定性差,半衰期短,必须加倍剂量或者使用缓释剂才能在24h内起到抑制血小板功能的作用。推荐每日总量为400mg。与ASA合用时剂量为100~200mg/d。副作用:诱发心肌缺血,引起血压升高,引起III度房室传导阻滞,双嘧达莫性结石病。双嘧达莫不良反应轻而短暂,长期服用可有头痛、头晕、呕吐、腹泻、面红、皮疹和皮肤瘙痒等。而西洛他唑不良反应有皮疹、头晕、头痛、心悸、恶心、呕吐,偶有消化道出血、尿路出血等。
抗凝血药,其代表药为普通肝素(UFH)及低分子量肝素(LMWH)。肝素有如下不良反应:(1)可逆的血小板减少症:①发生于开始肝素化的第10~15d;②是免疫复合物和免疫球蛋白交互作用即免疫机理产生;③肝素过量或与抗血小板药并用可出现出血的反应,但严重出血危及生命者少。(2)偶见过敏反应,包括发热。(3)其他:①脱发;②骨质疏松。直接凝血酶抑制剂代表药:水蛭素(hirudin)、重组水蛭素(recombinanthirudin)、来匹卢定、比伐卢定(bivalirudin)、阿加曲班。
溶栓药物的代表药为纤维蛋白溶解药尿激酶,但是其抗血栓的疗效也不甚理想。
因此,目前研究具有消栓作用确切、安全性高、质量可控的中药新药,具有重要的社会意义和经济意义。
发明内容
竹节参为五加科人参,属多年生草本植物Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根,含有多种皂苷、挥发油、糖类和多种氨基酸。原是一种名贵的民间中草药,现已收载于《中华人民共和国药典》,药用功能类似人参和三七。竹节参生于山坡沟边、阴湿地区或岩石沟涧旁,主要分布于贵州、湖南、云南、安徽、江西、湖北等地。每年秋季采挖,除去茎叶,分出肉质根,将根茎除去外皮,晒干或阴干即可入药。始载于《本草纲目拾遗》。竹节参甘、微苦,温。具有活血化瘀、消肿止痛、滋补强壮等多种功效,既有类似人参的滋补强壮作用,又有类似三七的散瘀止痛、止血、祛痰作用,主要用于病后虚弱、劳嗽咳血、咳嗽痰多、跌打损伤。
本发明的目的是提供一种竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷在制备抗血栓药物中的应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗血栓药物中应用。特别是竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷可作为活性成分在制备抗脑血栓的药物中的应用。所述的脑血栓可由脑出血引起、由脑缺血引起、由脑血管硬化引起或由血液生化学变化引起。
其中,竹节参总皂苷中竹节参皂苷v的含量≥50%;所述的竹节参皂苷v的纯度≥90%。
竹节参总皂苷是由如下方法制备得到的:取竹节参药材,加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时,滤过,得滤液;药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.05-0.5g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,减压干燥,得到竹节参总皂苷。所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为10-90%,优选50-70%。
竹节参皂苷v是由如下方法制备得到的:取竹节参药材,加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时,滤过,得滤液;药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.05-0.5g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,减压干燥,得到竹节参总皂苷,竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压干燥,得竹节参皂苷V。所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为10-90%,优选50-70%。
所述的竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷作为活性成分可与药学上可接受的载体或者常规辅料制备成抗血栓的组合物。上述药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案,该组合物可以是口服制剂或注射用制剂,其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。所用辅料包括:淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料,制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术,本发明对此不作限定,故在此不予详述。
上述组合物口服给药的剂量为2-3次/天,每次折合成竹节参皂苷v或竹节参总皂苷的剂量分别为0.075~0.15g/次和0.15~0.30g/次。
竹节参是常用的中草药,有长期的中医用药经验,该药使用安全性高,无明显毒性作用记载。本发明所述的竹节参皂苷v或竹节参总皂苷是从天然的中药竹节参中提取得到的,药效实验表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷v对血凝块均有明显的溶解作用,并且体内抗血栓形成实验结果显示竹节参总皂苷、竹节参皂苷v具有较强抗体内血栓形成的作用。
与现有技术比较本发明的有益效果:本研究首次表明竹节参总皂苷、竹节参皂苷v有显著的抗血栓的作用,因此,将竹节参总皂苷、竹节参皂苷v开发成抗血栓药物具有广阔的应用前景。
具体实施方式
实施例1
竹节参皂苷v(也称人参皂苷Ro,简称Ro)和竹节参总皂苷部位(简称Z5)的体外溶栓试验
1、受试药物
竹节参总皂苷,制备方法为:取竹节参粗颗粒200克,置于3000ml的圆底烧瓶中,加入竹节参粗粉10倍量的60%的乙醇,浸泡2小时,水浴回流提取2小时,滤过,得滤液。药渣再用10倍量的60%的乙醇回流提取2次,每次2小时,滤过。合并3次滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成浓度为含0.5g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,经65℃减压干燥,得到竹节参总皂苷约15克。
竹节参皂苷v,制备方法为:取竹节参粗粉,加入竹节参粗粉10倍量的60%的乙醇,浸泡2小时,水浴回流提取2小时,滤过,得滤液。药渣再用10倍量的60%的乙醇回流提取2次,每次2小时,滤过。合并3次滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成浓度为含0.5g药材/ml的药液。上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱。合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,经65℃减压干燥,得到竹节参总皂苷。竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,减压干燥,得竹节参皂苷V。
对照药:注射用尿激酶,规格:10万单位,丽珠制药厂,批号:100403。
2.竹节参皂苷v及其竹节参总皂苷的含量测定
(1)色谱条件
SPD-20A高效液相色谱仪,色谱柱为Boston analytics,Green ODS-AQ 4.6×150mm 5um,波长为203nm,进样量为20ul,流速为1.0ml/min,柱温为25℃,流动相为乙腈(A):10mM磷酸缓冲水溶液(B)(称取KH2PO4药物0.68g,加入500ml纯净水,用K2HPO4调pH值至5.8,混匀,经0.45um的微孔滤膜过滤,超声10-15分钟即得)梯度洗脱(洗脱的梯度为:0-19分钟,A∶B=27∶73;20-33分钟,A∶B=28∶72;34-43分钟,A∶B=34∶66;44-57分钟,A∶B=43∶57;57.5-64分钟,A∶B=85∶15;65-80分钟,A∶B=27∶73)。
(2)对照品竹节参皂苷v(也称人参皂苷Ro,可简称Ro)溶液的配制:取竹节参皂苷v适量,以水配制成对照品溶液,其浓度为1.45mg/ml。
(3)竹节参皂苷v及其竹节参总皂苷样品液的制备:
称取的竹节参总皂苷样品23.71mg,以水定溶为25ml,为竹节参总皂苷样品液。
称取的竹节参皂苷v样品12.00mg,以水定溶为25ml,为竹节参皂苷v样品液。
(4)竹节参皂苷v及其竹节参总皂苷样品的含量测定:
分别精取上述竹节参总皂苷样品液、竹节参皂苷v样品液和对照品溶液各20ul,注入色谱柱,按上述色谱条件测定,测得的对照品Ro峰面积为5750034.5,测得的竹节参总皂苷样品中Ro峰面积为1962145.125,测得的竹节参皂苷v样品中Ro峰面积为1758717.5,
计算得到的竹节参总皂苷样品中Ro的浓度,C竹节参总皂苷样品=C对照品×S竹节参总皂苷样品/S对照品=1.45×1962145.125/5750034.5=0.495mg/ml。计算竹节参总皂苷样品中Ro的百分含量,为C竹节参总皂苷样品×V竹节参总皂苷样品/W竹节参总皂苷样品=0.495mg/ml×25ml/23.71mg=52.2%。
计算得到的竹节参皂苷v样品中Ro的浓度,C竹节参皂苷v样品=C对照品×S竹节参皂苷v样品/S对照品=1.45×1758717.5/5750034.5=0.4435mg/ml。计算竹节参皂苷v样品中Ro的百分含量,为C竹节参皂苷v样品×V竹节参皂苷v样品/W竹节参皂苷v样品=0.4435mg/ml×25ml/12.00mg=92.4%。
3、实验动物
家兔,普通级,体重:2kg,雌性。由江宁县青龙山动物繁殖场提供,动物质量合格证号:SCXK(苏)2007-0008。
4、主要试剂与仪器
(1)生理盐水,山东鲁抗辰欣药业有限公司,批号:1005319012。
(2)Sartorius分析天平:北京赛多利斯天平有限公司;数显恒温水浴锅(HH-2):国华电器有限公司。
5、试验方法
家兔颈总动脉插管采血,待血液凝固后分取大小近似的血块。各血块用滤纸吸取液体部分,天平称重后(W)放入洁净的试管内,各试管加入等体积的试药,阴性对照组加相应的生理盐水。3h后取出,用滤纸吸取液体部分,天平称重(G)。比较给药前后血凝块的重量,计算血凝块溶解率。
溶解率=(W-G)/W×100%
6、统计学处理
7、试验结果
由表1可见,与生理盐水组相比较,RO和Z5各剂量组对血凝块均有明显的溶解作用,且有统计学意义。与尿激酶组比较,RO的25mg/ml、5mg/ml、1mg/ml、0.2mg/ml剂量组与Z5的0.4mg/ml剂量组有显著性差异。
表1.竹节参皂苷v和竹节参总皂苷部位对兔血凝块的溶解作用
注:各时间点内,与生理盐水组相比较,*p<0.05,**p<0.01;与尿激酶组比较,#p<0.05,##p<0.01。
实施例2
竹节参皂苷v和竹节参总皂苷部位的体内抗血栓形成试验
1、受试药物
(1)竹节参皂苷v、竹节参总皂苷部位(制备同实施例1)
(2)对照药:阿司匹林片(杭州民生药业集团有限公司,规格:0.3g/片)。
2、实验动物
SPF级雄性SD大鼠,体重180-220g,购自上海西普尔-必凯公司,合格证号:2008001601479。动物于25℃、相对湿度60-75%条件下饲养1~2周后用于实验。
3、主要试剂与仪器
生理盐水,山东鲁抗辰欣药业有限公司,批号:1005319012。
Sartorius分析天平:北京赛多利斯天平有限公司;数显恒温水浴锅(HH-2):国华电器有限公司。
4、试验方法
选取体重为200-250g的SD大鼠,按体重随机分为6组,每组8只。对照组:i.g.0.5%CMC-Na;阿司匹林(ASA)组:i.g.100mg/kg ASA;Z5部位高剂量组:i.g.300mg/kg;Z5部位低剂量组:i.g.150mg/kg;RO高剂量组:i.g.150mg/kg;RO低剂量组:i.g.75mg/kg。连续给药5天,末次给药2h后,腹腔注射3%戊巴比妥钠溶液(30mg/kg),大鼠麻醉后仰位固定,颈正中切口,分离右颈总动脉和左颈外静脉,在聚乙烯管的中段放入一根长6cm的丝线(放入管腔前丝线先称重),以肝素生理盐水(50U/mL)充满聚乙烯管。将聚乙烯管插入分离出的血管中,使动静脉形成回路。开放血流15min后取出丝线,用滤纸吸去残留的血液后立即称重,总重减去丝线重为血栓湿重。并将带血栓丝线放入60℃烘箱2小时后称重,总重减去丝线重为血栓干重。
抑制率=(模型组血栓重-给药组血栓重)/模型组血栓重*100%
5、统计学处理
6、试验结果
结果见表2,与空白对照组比较,阿司匹林组与Z5部位、RO高低剂量组均能显著降低大鼠实验性动脉血栓的湿重及干重(P<0.01或P<0.001)。因此,竹节参皂苷v和竹节参总皂苷部位具有较强抗体内血栓形成的作用。
表2.竹节参皂苷v和竹节参总皂苷部位对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响
与CMC-Na(scontrol group)组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
实施例3
竹节参总皂苷,制备方法为:取竹节参粗颗粒置于3000ml的圆底烧瓶中,加入竹节参粗粉12倍重量的50%的甲醇,浸泡2小时,水浴回流提取1小时,滤过,得滤液。药渣再用12倍重量的50%的甲醇回流提取2次,每次3小时,滤过。合并3次滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.1g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,经65℃减压干燥,得到竹节参总皂苷。加入片剂常用辅料,按常规制备工艺制备成片剂。
取按上述方法得到的竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,减压干燥,得竹节参皂苷V。加入片剂常用辅料,按常规制备工艺制备成片剂。
也可将竹节参总皂苷和竹节参皂苷V按任意比例混合加入片剂常用辅料,按常规制备工艺制备成片剂。
实施例4
竹节参总皂苷,制备方法为:取竹节参粗颗粒置于3000ml的圆底烧瓶中,加入竹节参粗粉6倍重量的70%的乙醇,浸泡2小时,水浴回流提取3小时,滤过,得滤液。药渣再用6倍重量的70%的乙醇回流提取2次,每次1小时,滤过。合并3次滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.05g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,经65℃减压干燥,得到竹节参总皂苷。加入胶囊剂常用辅料,按常规制备工艺制备成胶囊剂。
取按上述方法得到的竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,减压干燥,得竹节参皂苷V。加入胶囊剂常用辅料,按常规制备工艺制备成胶囊剂。
也可将竹节参总皂苷和竹节参皂苷V按任意比例混合加入胶囊剂常用辅料,按常规制备工艺制备成胶囊剂。
实施例5
竹节参总皂苷,制备方法为:取竹节参粗颗粒置于3000ml的圆底烧瓶中,加入竹节参粗粉6倍重量的70%的乙醇,浸泡2小时,水浴回流提取3小时,滤过,得滤液。药渣再用6倍重量的70%的乙醇回流提取2次,每次1小时,滤过。合并3次滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.3g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,经65℃减压干燥,得到竹节参总皂苷。加入口服液常用辅料,按常规制备工艺制备成口服液。
取按上述方法得到的竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,减压干燥,得竹节参皂苷V。加入口服液常用辅料,按常规制备工艺制备成口服液。
也可取竹节参总皂苷和竹节参皂苷V按任意比例混合加入口服液常用辅料,按常规制备工艺制备成口服液。
Claims (10)
1.竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗血栓的药物中的应用。
2.竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷作为活性成分在制备抗脑血栓的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于所述的脑血栓为由脑出血引起、由脑缺血引起、由脑血管硬化引起或由血液生化学变化引起。
4.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于所述的竹节参总皂苷中竹节参皂苷v的含量≥50%。
5.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于所述的竹节参皂苷v的纯度≥90%。
6.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于所述的竹节参总皂苷是由如下方法制备得到的:取竹节参药材,加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时,滤过,得滤液;药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.05-0.5g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,减压干燥,得到竹节参总皂苷。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为10-90%,优选50-70%。
8.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于所述的竹节参皂苷v是由如下方法制备得到的:取竹节参药材,加入竹节参6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时,滤过,得滤液;药渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,配制成含0.05-0.5g药材/ml的药液,上HPD-100大孔树脂柱,依次用水、60%的乙醇洗脱,弃去水洗脱液,合并60%的乙醇洗脱液,回收溶剂至近干,减压干燥,得到竹节参总皂苷,竹节参总皂苷再经ADS-7大孔树脂柱纯化,收集50%-90%的乙醇洗脱液,减压干燥,得竹节参皂苷V。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于所述的回流提取用的乙醇或甲醇的浓度为10-90%,优选50-70%。
10.一种抗血栓的药物组合物,含有权利要求1-9中任意一项的竹节参皂苷v或/和竹节参总皂苷及药物上可接受的载体。
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CN105602810A (zh) * | 2016-03-18 | 2016-05-25 | 三峡大学 | 一种保健茶酒及其制备方法和用途 |
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