CN102108079A

CN102108079A - 作为酪氨酸激酶抑制剂的4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物

Info

Publication number: CN102108079A
Application number: CN2009102654023A
Authority: CN
Inventors: 王晶翼; 范传文; 张龙; 郭宗儒; 刘川; 严守升; 杨清敏; 张明会; 马崇雷; 李小辉
Original assignee: Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: QILU PHARMACEUTICAL (HAINAN) Co.,Ltd.
Priority date: 2009-12-25
Filing date: 2009-12-25
Publication date: 2011-06-29
Anticipated expiration: 2029-12-25
Also published as: CN102108079B

Abstract

本发明涉及作为酪氨酸激酶抑制剂的4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物或其药学可接受的盐、溶剂合物，其中所述的X选自(CH₂)m、CO，R选自其中R₁选自氢、C_1-4烷基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基酰基、C_1-4烷基磺酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷氧基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷氧基酰基。本发明还涉及它的药物组合物以及它们的制药用途。本发明式I化合物是有效的酪氨酸激酶抑制剂。

Description

作为酪氨酸激酶抑制剂的4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及一类新的具有抗肿瘤活性的4-(取代苯胺基)喹唑啉类衍生物及其制备方法，以及4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物在作为用于治疗或辅助治疗哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物方面的应用。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一，据WHO统计，全世界每年死于肿瘤的患者约690万。由于生存环境和生活习性的改变，在不良环境和一些不利因素的作用下，肿瘤的发病率和死亡率近年呈逐步上升趋势。

以往对肿瘤的治疗是通过发现肿瘤并破坏来实现的，现在随着对细胞信号传导途径研究的不断深入，人们对肿瘤细胞内部的癌基因及抗癌基因的作用了解的越来越深入，针对肿瘤的特异性分子靶点设计新的抗肿瘤药物越来越受到关注，成为研究的热点领域，而靶向抗肿瘤药物作为一种新的治疗方法也已经应用于临床，并在短短几年内得到了显著的进展。现在已知，蛋白酪氨酸激酶(Protein tyrosinekinases，PTK)信号通路与肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡有密切关系(Li Sun，et al.，Drug Discov Today，2000，5，344-353)，利用蛋白酪氨酸激酶抑制剂干扰或阻断酪氨酸激酶通路可以用于肿瘤治疗(Fabbro D.，et al.，Curr Opin Pharmacol，2002，2，374-381)。

蛋白酪氨酸激酶(PTK)是在正常和异常增殖过程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成员，是一种能选择性地使不同底物的酪氨酸残基磷酸化的一种酶，它们催化ATP的γ-磷酸基转移到许多重要蛋白质的酪氨酸残基上，使酚羟基磷酸化。蛋白酪氨酸激酶分为受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTK)，非受体酪氨酸激酶以及IR和Janus激酶等(Robinson D.R.，et al.，Oncogene，2000，19，5548-5557)，其中多数为受体型酪氨酸激酶(RTK)。受体酪氨酸激酶(RTK)是一类具有内源性蛋白酪氨酸激酶，参与多种细胞活动的调控，在启动细胞复制的促有丝分裂信号的传导中具有极其重要的地位，调控着细胞的生长与分化。所有的RTK都属于I型膜蛋白，其分子具有相似的拓扑结构：一个大的糖基化的胞外配体结合区，一个疏水的单次跨膜区，以及一个细胞内酪氨酸激酶催化结构域及调控序列。配体的结合(如表皮生长因子(EGF)与EGFR的结合)导致受体细胞内部分编码的受体激酶活性激活，使靶蛋白中的关键酪氨酸磷酸化，导致增生信号跨越细胞质膜转导。

根据胞外配体结合区亚单位结构的不同，可以将受体酪氨酸激酶(RTK)分成四个不同的亚类(Ullrich A.et al.，Cell，1990，61，203-212)：第一亚类erbB家族包括表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor，EGFR)、HER2/Neu、HER3/c-erbB3等；第二亚类包括胰岛素受体、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体等；第三亚类包括PDGFR-α、PDGFR-β、集落刺激因子-1受体(CSF-IR)、c-Kit等；第四亚类包括有FGFR-1、FGFR-2、FGFR-3、FGFR-4等，其中第三、第四亚类在胞外分别有5个和3个免疫球蛋白样的结构域。RTK与相应配体结合后，能触发受体的同源或异源二聚复合物的形成，激活RTK，催化ATP上的磷酸基转移到受体的酪氨酸残基上，使其发生自磷酸化，受体自磷酸化可以起到两个作用，即激活内在的催化活性以及生成下游效应蛋白的结合位点，进而激活下游的信号分子(朱孝峰等，药学学报，2002，37，229-234；邓小强等，药学学报，2007，42，1232-1236)。

受体酪氨酸激酶(RTK)主要信号转导途径是Ras(retrovirus-associated DNA sequences)/Raf(rapidly accelerated fibrosarcoma)/MAPK(mitogen activated protein kinase，丝裂原活化蛋白激酶)途径和PI-3K(phosphatidylinositol-3kinase，磷脂酰肌醇-3-激酶)/Akt(protein kinase B，PKB)途径。Ras/Raf/MAPK途径主要是调控细胞增殖和细胞生存过程。MAPK是促细胞分裂的信号，活化的MAPK进入细胞核通过磷酸化作用激活转录因子(如Elkl、Etsl、c-Myc等)，从而干扰细胞周期和细胞转化过程，最终导致肿瘤形成；MAPKs还能诱导蛋白及基质降解、促进细胞迁移、维持肿瘤生长(Liebmann C.，et al.，Cell Signal，2001，13，777-785)。PI-3K/Akt信号转导途径涉及细胞生长、凋亡抑制、侵袭和转移过程，起着与Ras/Raf/MAPK途径同等重要的作用。其中，Akt转移至细胞核，通过磷酸化调控多种转录因子(如FKHRL1、NF-_kB、Bcl-2等)，从而抑制凋亡基因的表达；Akt还能磷酸化糖原合成激酶-3(glycogen synthase kinase 3，GSK-3)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)，从而上调周期蛋白D(Cyclin D)，以及磷酸化一系列抑制蛋白(如p21^CIPI和p27^KIPI)，引起细胞周期变短，从而导致肿瘤发生(Shaw R.J.，et al.，Nature，2006，441，424-430)。因此PTK催化受体磷酸化的最终结果是促使细胞增殖、抑制细胞凋亡，与肿瘤的发生和发展直接相关。

已有研究结果表明Bcr-abl、EGFR、HER等受体酪氨酸蛋白激酶在肿瘤患者体内呈现高表达。特别是erbB家族(如EFGR、HER2等)过表达在很多人类癌症中都可以检测到，如非小细胞肺癌(NSCLC)(Brabender J.，et al.，Clin Cancer Res，2001，7，1850-1855)、白血病(JoséIgnacio Martín-Suberoac，et al.，Cancer Genet Cvtogenet，2001，127，174-176)、胃肠道癌症(Kapitanovic S.，et al.，Gastroenterology，2000，112，1103-1113；Ross J.S.，et al.，Cancer Invest，2001，19，554-558)、乳腺癌(Klijn J.S.，et al.，Breast Cancer Res Treat，1994，29，73-83)、前列腺癌(Scher H.I.，et al.，J Natl Cancer Inst，2000，92，1866-1868)、卵巢癌(Hellstrom I.，et al.，Cancer Res，2001，61，2420-2423)、头、颈癌(Shiga H.，et al.，Head Neck，2000，22，599-608)等。随着对更多的人类肿瘤组织进行受体酪氨酸激酶的表达测试以及对PTK信号途径与肿瘤之间的关系的研究日益深入，该类靶点必将给肿瘤的治疗方法带来革新。

许多肿瘤细胞中存在着信号转导途径的异常，如上皮细胞来源的肿瘤中常见EGFR家族受体过度表达，胶质瘤中常见PDEFR家族受体过度表达，CML中Bcr-Abl过度激活等。作为一种或多种这种受体错误调节的结果，使得很多肿瘤变得临床上更具侵袭性，因而与患者较差的不良预后密切相关(Ross J.S.，et al.，Cancer Investigation，2001，19，554-568)。除了上述临床发现外，许多临床前研究还显示erbB家族的酪氨酸激酶与细胞变异有关，即很多细胞系过渡表达一种或多种erbB受体，以及EFGR或erbB2在被转染进非肿瘤细胞时具有转化这些细胞的能力。此外，很多临床前研究也显示：通过用小分子抑制剂或抑制性抗体去除一种或多种erbB的活性，可以诱导抗增生效应(Mendelsohn J.，et al.，Oncogene，2000，19，6550-6565)。

近年来，人们致力于抑制细胞信号转导途径以开发新型靶点抗肿瘤药物。信号转导抑制剂下调肿瘤的生存和增殖信号，促进细胞凋亡，而不是通过细胞毒作用，因此选择性较高、毒副作用较小。目前已有十几种信号转导抑制剂应用于临床治疗肿瘤，主要为酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物，其中4-(取代苯胺基)喹唑啉结构类型的化合物开发的比较成熟，如针对EGFR酪氨酸激酶靶点的小分子抑制剂吉非替尼(Iressa)、埃罗替尼(Tarceva)和拉帕替尼(Lapatinib)等。

吉非替尼(Gefitinib)，商品名Iressa(易瑞沙)，AstraZeneca开发的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，是最早进入临床研究的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，于2002年在日本上市，次年在美国上市，用于治疗既往接受过化疗的晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)。埃罗替尼(Erlotinib)，商品名Tarceva(特罗凯)，OSI公司开发的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，受让于Genentech和罗氏公司。2004年在美国上市，用于治疗NSCLC和胰腺癌。属于第一代治疗NSCLC的苯胺喹唑啉类小分子抑制剂，也是目前唯一被证实的对晚期非小细胞肺癌具有生存优势的EGFR酪氨酸激酶抑制剂，对各类非小细胞肺癌患者均有效，且耐受性好，无骨髓抑制和神经毒性，能显著延长生存期，改善患者生活质量。拉帕替尼(Lapatinib)，商品名Tycerb，是GlaxoSmithKline公司开发的EGFR和HER2的双重抑制剂，其对肿瘤增殖和生存的信号传导的抑制作用强于单一受体抑制剂。2007年美国FDA批准该品上市，适应症为与卡培他滨联合治疗过度表达HER2和先前曾接收过化疗如蒽环类、紫杉烷类和曲妥珠单抗的晚期或转移性乳腺癌患者。

此外，专利申请公开号WO 96/33977、WO 97/30035、WO98/13354、WO 00/55141、WO 02/41882、WO 03/82290和EP 837063等公开了在4-位上携带苯胺基取代和在6-和/或7-位上携带取代基的某些喹唑啉衍生物，具有受体酪氨酸激酶活性。

小分子酪氨酸激酶抑制剂作为新的靶向抗肿瘤药物，为肿瘤的治疗和预防打开了一扇新窗口，而且其副作用轻微，有良好的耐受性。虽然目前已有10多个小分子酪氨酸激酶抑制剂为临床肿瘤治疗作出了很大贡献，但仍然需要发现一些较之现有的酪氨酸激酶抑制剂具有更好的体内活性和/或改良的药理学特性的另外的化合物。因此开发新的改进的或更高效的酪氨酸激酶抑制剂，更深入地了解该类药物与已知靶蛋白之间的关系以及其发挥抗肿瘤作用的机理对肿瘤临床治疗具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是寻找具有高的酪氨酸激酶抑制作用的新化合物。

本发明人令人惊奇的发现，具有式I结构的4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物具有令人意外高的酪氨酸激酶抑制作用。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了式I化合物：

I

或其药学可接受的盐、溶剂合物，

其中，X选自(CH₂)_m、CO，其中m选自0-4，R 选自

其中R₁选自氢、C_1-4烷基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基酰基、C_1-4烷基磺酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷氧基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷氧基酰基。其中卤素可独立地选自氟、氯和溴。

根据本发明第一方面任一项所述的式I化合物，其中所述的烷基是直链或支链的烷基基团。

根据本发明第一方面任一项所述的式I化合物，其中所述的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基。在一个实施方案中，其中所述的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基。在一个实施方案中，其中所述的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基。

根据本发明第一方面任一项所述的式I化合物，其中所述的药学可接受的盐选自：盐酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、二甲苯磺酸盐、富马酸盐、马来酸盐，或者这些盐的溶剂合物例如水合物。

根据本发明第一方面任一项所述的式I化合物，其选自：

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-(吗啉基甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-1-哌嗪基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-乙氧基羰基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲磺酰基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-乙酰基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪基-1-)酰基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺；

或其药学可接受的盐、溶剂合物。

本发明第二方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的式I化合物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

本发明第三方面涉及本发明第一方面任一项所述的式I化合物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物(包括人)与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

本发明第三方面还涉及本发明第一方面任一项所述的式I化合物在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。

根据本发明完全可以预期本发明化合物可用于治疗erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。为此，本发明上述“与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症”以及“由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤”或“由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移”所涉及的肿瘤或癌症可以包括上述erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

本发明第四方面涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式I化合物。

本发明第四方面还涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物(包括人)由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式I化合物。

本发明第四方面进一步涉及一种在有需要的哺乳动物中治疗和/或预防哺乳动物(包括人)的肿瘤或癌症的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式I化合物，所述的肿瘤或癌症包括erbB受体酪氨酸激酶敏感癌症，如EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤，包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤等。

下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在本发明式I化合物中，其中喹唑啉环可按如下示例性的顺序编号：

术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴、和碘。

本发明中，当提及时，所采用的术语“烃基”包括烷基、烯基和炔基。

本发明中，当提及时，所采用的术语“烷基”、“烯基”和“炔基”具有本领域公知的一般含义，它们是直链或支链的烃基基团，例如但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、烯丙基、丙烯基、丙炔基等，并且所述的“烷基”、“烯基”和“炔基”可以统称为“烃基”或“链烃基”。

在本发明合成式I化合物的方法中，反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明第二方面方法合成本发明未具体列举的其它式I化合物。

本发明的式I化合物可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。

本发明式I所示的活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。

本发明的化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学可接受的盐的形式使用。词语“药学可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的效果/风险比相称的盐。药学可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge，et al.，J.Pharmaceutical Sciences，1977，66：1中对药学可接受的盐进行了详细描述。所述盐可通过使本发明化合物的游离碱官能度与合适的有机酸反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐，isothionate)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。同样，碱性含氮基团可用以下物质季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卤化物如苄基溴和苯乙基溴及其他。因此得到可溶于或分散于水或油的产品。可用来形成药学可接受的酸加成盐的酸实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

本发明式I化合物还包括其异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯，本发明式I化合物以及它的异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。所述的药物组合物中载体包括：口服制剂使用的粘合剂(如淀粉，通常是玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)，稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素，和/或甘油)，润滑剂(如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，通常是硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇)，以及如果需要，还含有崩解剂，如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐，通常是藻酸钠，和/或泡腾混合物，助溶剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等，可注射的制剂使用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可以将其配制成肠衣片剂。

更具体地说，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为1-5000mg，优选的单元剂型含有10-500mg，更优选的单元剂型含有20-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott，Ed.，Methods inCell Biology，Volume XIV，Academic Press，New York，N.Y.(1976)，p.33。

本发明人惊奇地发现，结构式I所示的喹唑啉衍生物对EGFR和Her2酪氨酸激酶都显示了抑制活性，同时，对EGFR和Her2酪氨酸激酶高表达的细胞株有抑制作用，因此，本发明的化合物可用于EGFR和Her2受体酪氨酸激酶单独或部分介导的疾病，主要通过抑制一种或多种EGFR家族酪氨酸激酶，并通过抑制激酶的活性产生抗增殖、抗迁移、促凋亡作用。具体地说，本发明的化合物可通过对EGFR和Her2酪氨酸激酶的抑制作用，用于预防和治疗一种或多种erbB受体酪氨酸激酶敏感的肿瘤，尤其是EGFR或Her2高表达及EGF驱动的肿瘤。包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺(尤其是非小细胞肺癌)、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴的癌症，非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤。

具体实施方式：

下面通过具体的制备实施例和生物学试验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和试验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

在本中，除非另外说明，其中：(i)温度以摄氏度(℃)表示，操作在室温或温度环境下进行；(ii)有机溶剂用无水硫酸钠干燥，溶剂的蒸发用旋转蒸发仪减压蒸发，浴温不高于60℃；(iii)反应过程用薄层色谱(TLC)跟踪；(iv)终产物具有满意的质子核磁共振光谱(1H-NMR)和质谱(MS)数据。

实施例1：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-(吗啉基甲基)-2- 呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物1)的合成：

a.(5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯胺)-6-喹唑啉)-2-呋喃基)甲醇的合成：

将化合物5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯氨基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛5.0g加入到无水甲醇100ml和二氯甲烷100ml的混合溶剂中，冰浴条件下分批加入硼氢化钠0.8g，TLC检测反应完毕，过滤，少量二氯甲烷洗涤滤饼，干燥滤饼的黄色固体3.8g，产率76％。

b.N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-(吗啉甲基)-2-呋喃基)- 喹唑啉-4-胺的合成：

将化合物(5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯胺)-6-喹唑啉)-2-呋喃基)甲醇100mg和吗啉27mg、三苯基磷71mg和10ml四氢呋喃加入到反应瓶中，然后滴加偶氮二甲酸二乙酯47mg的四氢呋喃溶液，TLC检测反应完毕，减压蒸除溶剂，柱层析分离得橙黄色固体60mg，产率53％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.96(s，1H)，8.73(s，1H)，8.56(s，1H)，8.15(d，1H，J＝8.4)，8.01(s，1H，J＝2.4)，7.80(d，1H，J＝8.4)，7.74(dd，1H，J₁＝9.0，J2＝2.4)，7.48(m，1H)，7.34(d，1H，J＝7.8)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H，J＝9.0)，7.20(m，1H)，7.07(d，1H，J＝3.0)，6.53(d，1H，J＝3.6)，5.27(s，2H)，3.61(s，4H)，3.59(s，2H)，2.46(s，4H).ESI-MS：[M+H]⁺545.5。

实施例2：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪基 -1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物2)的合成：

将化合物5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯氨基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛的对甲基苯磺酸盐300mg和N-甲基哌嗪116mg加入到甲醇/二氯甲烷(1∶3)的混合溶剂中，加入三乙胺0.13ml，室温搅拌过夜，冰浴条件下加入硼氢化钠63mg，TLC检测反应完毕，减压蒸除溶剂，加入饱和氯化铵溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离的淡黄色固体128mg，产率50％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.96(s，1H)，8.72(s，1H)，8.55(s，1H)，8.15(dd，1H，J₁＝9.0，J₂＝1.8)，8.0(s，1H，J＝2.4)，7.80(d，1H，J＝9.0)，7.73(dd，1H，J₁＝9.0，J₂＝3.6)，7.48(m，1H)，7.34(d，1H，J＝7.8)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H，J＝9.0)，7.19(m，1H)，7.07(d，1H，J＝3.6)，6.51(d，1H，J＝3.6)，5.27(s，2H)，3.59(s，2H)，2.39(s，4H)，2.35(s，4H)，2.15(s，3H).ESI-MS：[M+H]⁺ 558.5。

实施例3：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-1-哌嗪基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物3)的合成：

将化合物5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯氨基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛2.0g和哌嗪3.6g加入到甲醇/四氢呋喃(1∶3)的混合溶剂中，室温搅拌过夜，冰浴条件下加入硼氢化钠0.48g，TLC检测反应完毕，减压蒸除溶剂，加入饱和氯化铵溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离的淡黄色固体0.8g，产率36％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.96(s，1H)，8.76(s，1H)，8.56(s，1H)，8.16(d，1H，J＝8.4)，8.01(s，1H)，7.82(d，1H，J＝9.0)，7.45(d，1H，J＝9.0)，7.48(m，1H)，7.34(m，3H)，7.19(t，1H，J＝7.2)，7.10(d，1H，J＝3.0)，6.57(d，1H，J＝3.6)，5.76(s，1H)，5.28(s，2H)，3.70(s，2H)，2.06(s，4H)，2.64(s，4H)，2.00(s，1H).ESI-MS：[M+H]⁺543.5。

实施例4：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-4-乙氧基羰基哌嗪基-1-) 甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物4)的合成：

在反应瓶中加入化合物N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-1-哌嗪基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺100mg、59mg碳酸钠和20ml二氯甲烷，冰浴条件下滴加氯甲酸乙酯的二氯甲烷(25ml)溶液，TLC检测反应完毕，抽滤，少量二氯甲烷洗涤滤饼，滤液用饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，柱层析分离的黄色固体70mg，产率62％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.96(s，1H)，8.73(s，1H)，8.56(s，1H)，8.16(dd，1H，J1＝9.0，J2＝1.8)，8.01(d，1H，J＝9.0)，7.80(d，1H，J＝8.4)，7.73(m，1H)，7.34(m，3H)，7.48(m，3H)，7.35(d，1H，J＝6.6)，7.32(s，J＝3.6)，7.29(d，1H，J＝9.0)，7.19(m，1H)，7.07(d，1H，J＝3.0)，6.53(d，1H，J＝3.6)，5.27(s，2H)，4.02(q，2H)，3.64(s，2H)，3.38(s，4H)，2.44(t，4H)，1.16(t，3H).ESI-MS：[M+H]⁺ 616.7。

实施例5：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲磺酰基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物5)的合成：

在反应瓶中加入化合物N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-1-哌嗪基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺2.0g、1ml三乙胺和100ml二氯甲烷，冰浴条件下滴加甲磺酰氯的二氯甲烷(50ml)溶液，TLC检测反应完毕，抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液洗，水洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离的黄色固体1.3g，产率59％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.95(s，1H)，8.73(s，1H)，8.56(s，1H)，8.16(d，1H，J＝9.0)，8.01(s，1H，J＝1.8)，7.80(d，1H，J＝8.4)，7.73(dd，1H，J＝9.0，J＝2.4)，7.48(m，1H)，7.34(d，1H，J＝7.8)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H，J＝8.4)，7.19(m，1H)，7.08(d，1H，J＝3.0)，6.55(d，1H，J＝3.0)，5.27(s，2H)，3.68(s，2H)，3.14(s，4H)，2.87(s，3H)，2.57(s，4H).ESI-MS：[M+H]⁺ 622.4。

实施例6：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-乙酰基哌嗪基-1-)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物6)的合成：

在反应瓶中加入化合物N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((-1-哌嗪基)甲基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺5.8g、4ml三乙胺和150ml二氯甲烷，冰浴条件下滴加乙酰氯的二氯甲烷(50ml)溶液，TLC检测反应完毕，饱和碳酸氢钠溶液洗，水洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分离的黄色固体3.2g，产率51％。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：9.96(s，1H)，8.73(s，1H)，8.56(s，1H)，8.16(dd，1H，J₁＝8.4，J₂＝1.8)，8.01(s，1H，J＝2.4)，7.80(d，1H，J＝9.0)，7.73(dd，1H，J₁＝9.0，J₂＝2.4)，7.48(m，1H)，7.34(d，1H，J＝7.2)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H，J＝8.4)，7.20(m，1H)，7.08(d，1H，J＝3.0)，6.55(d，1H，J＝3.0)，5.27(s，2H)，3.65(s，2H)，3.44(m，4H)，2.41(m，4H)，2.0(s，3H).ESI-MS：[M+H]⁺ 586.4。

实施例7：N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪基 -1-)酰基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺(化合物7)的合成：

10g三氧化铬、11ml浓硫酸和50ml蒸馏水混合均匀，降温至0℃，取5-(4-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯氨基)-6-喹唑啉基)呋喃-2-甲醛(1g)混悬于100ml丙酮中，于0℃缓慢滴加所配的三氧化铬硫酸溶液，约1h加完，于0℃继续反应2h，加入150ml水稀释，抽滤，滤饼用饱和氯化铵洗涤数次，二氯甲烷洗涤数次，干燥得到淡黄色粉末(0.98g)。将该粉末混悬于二氯甲烷中，向其中加入二氯亚砜(0.3ml)，50℃回流2h，减压移除溶剂及过量的二氯亚砜得到黄色固体，将该固体混选于二氯甲烷中，加入过量N-甲基哌嗪(2ml)，60℃回流反应4h，向其中加入150ml水，分液，收集有机层和乳化层，减压浓缩，抽滤，得到灰黄色固体，柱层析得到目标产物(0.48g，产率40％)。

¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆，δ_ppm)：10.04(s，1H)，8.89(s，1H)，8.23(s，1H)，8.22(d，1H，J＝9.0)，8.03(s，1H，J＝2.4)，7.85(d，1H，J＝9.0)，7.75(dd，1H，J₁＝9.0，J2＝2.4)，7.48(m，1H)，7.31(m，4H)，7.19(m，2H)，5.27(s，2H)，3.75(s，4H)，2.41(s，4H)，2.24(s，3H).ESI-MS：[M+H]⁺ 572.5。

生物学实验

可以使用以下实验来测定本发明所述化合物在体外对erbB酪氨酸激酶的活性抑制作用以及作为Calu-3细胞、BT474细胞、NCI-N87和A431细胞抑制剂的作用。

所有肿瘤细胞株均购自中科院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所。

A)蛋白酪氨酸激酶磷酸化测定

体外激酶分析用Cell Signaling Technology公司的HTScan EGFReceptor Kinase Assay Kit(#7909)和HTScan HER2/ErbB2KinaseAssay Kit(#7058)检测。操作步骤参照试剂盒说明书，该方法在体外检测待测化合物对EGFR或Her2受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑制作用。室温下激酶反应缓冲液中温育ATP和底物肽以及待测化合物，孵育一段时间后，加入终止液终止反应并将样品转移到链霉亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP标记的抗底物磷酸化抗体检测底物肽上的磷酸化水平，用TMB显色，2M硫酸中止反应。检测450nm吸收波长，计算IC₅₀值(μM)。结果见下表1。

表1：本发明化合物对EGFR和Her2激酶的抑制活性分析

B)细胞增殖抑制

参考Rusnak等，Cell Prolif，2007，40，580-594中描述的方法进行试验。细胞增殖抑制试验采用人乳腺癌细胞BT474、人胃癌细胞系NCI-N87、人肺癌细胞Calu-3和人皮肤癌细胞A431，BT474高表达Her2受体，N87高表达EGFR和Her2受体。

在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中，在37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养细胞，应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)从细胞培养瓶中收获细胞。细胞以4000/孔(0.1ml培养基)加入96孔细胞培养板贴壁过夜，加入0.1ml待测化合物的稀释液，DMSO的最终浓度为0.25％，将细胞培养板在37℃，5％的CO₂条件下温育72h。然后在显微镜下观察细胞形态的变化，然后每孔加入50％(质量/体积)的三氯乙酸(TCA)50μl固定细胞。TCA的终浓度为10％，静置5min后在4℃冰箱中放置1h，培养板各孔用去离子水冲洗5遍，以去除TCA，甩干，空气干燥至无湿迹。每孔加0.4％(质量/体积)的SRB100μl，室温放置10min，弃去各孔内液体后用1％乙酸冲洗5遍，空气干燥后用pH为10.5，10mMTris base(三羟甲基氨基甲烷)150μl萃取，检测540nm的吸收波长。结果IC₅₀值(μM)见下表2。

表2：本发明化合物对四种肿瘤细胞的抑制活性分析

在蛋白酪氨酸激酶磷酸化和细胞增殖抑制试验中可以看到，本发明的化合物具有较好的生物学活性。无论是激酶磷酸化试验，还是细胞增殖抑制试验，总是有部分化合物活性好于或接近阳性对照Lapatinib：如化合物3和化合物6对EGFR和Her2激酶的活性抑制均好于阳性对照Lapatinib，而对肿瘤细胞增殖的抑制也好于或接近该阳性对照，针对部分肿瘤细胞，抑制活性甚至显著好于Lapatinib。结果表明，本发明的式I化合物是有效的酪氨酸激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤作用。

Claims

1.式I化合物：

或其药学可接受的盐、溶剂合物，

其中，X选自(CH₂)_m、CO，其中m选自0-4，R 选自

其中R₁选自氢、C_1-4烷基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基酰基、C_1-6烷基磺酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷氧基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷氧基酰基；其中卤素可独立地选自氟、氯和溴。

2.根据权利要求1的式I化合物，其中所述的X是CH₂或CO；R是

3.根据权利要求1的式I化合物，其中所述的X是CH₂或CO；R是其中R₁选自氢、C_1-4烷基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基、C_1-4烷基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基酰基、C_1-4烷基磺酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷氧基酰基、一个或多个卤素取代的C_1-4烷氧基酰基。

4.根据权利要求1至3任一项所述的式I化合物，其选自：

N-(4-(3-氟苄氧基)-3-氯苯基)-6-(5-((4-甲基哌嗪基-1-)酰基)-2-呋喃基)-喹唑啉-4-胺，

或其药学可接受的盐、溶剂合物。

5.一种药物组合物，其包含权利要求1至4任一项所述的式I化合物，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

6.权利要求1至4任一项所述的式I化合物在制备酪氨酸激酶抑制剂中的用途。

7.权利要求1至4任一项所述的式I化合物在制备用于治疗和/或预防哺乳动物与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

8.权利要求1至4任一项所述的式I化合物在制备用于治疗和/或预防人与受体酪氨酸激酶相关的疾病或病症的药物中的用途。

9.权利要求1至4任一项所述的式I化合物在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防哺乳动物由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。

10.权利要求1至4任一项所述的式I化合物在制备用于治疗或辅助治疗和/或预防人由受体酪氨酸激酶介导的肿瘤或由受体酪氨酸激酶驱动的肿瘤细胞的增殖和迁移的药物中的用途。