CN102106244A - 一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法，属于农业植物保护技术领域。该方法包括：(1)水稻稻瘟病菌分生孢子的采集；(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制；(3)接种液的喷雾接种；(4)观察、记载与统计等步骤。本发明在接种液中添加了保水剂和表面活性剂，能有效保持接种液中的水分，并改善水稻植株表面的亲水性与展着性，既增加了水稻植株对接种液的接受量，又延长了接种液在水稻受体上的留存时间，为稻瘟病菌的诱发提供了有利条件，显著提高了水稻稻瘟病人工接种的诱发率。本发明可在水稻稻瘟病抗性鉴定、抗性育种和稻瘟病研究中推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及植物病害技术领域，尤其涉及一种提高水稻稻瘟病菌接种诱发率的方法。
背景技术
植物病原菌接种液的制备是诱发植物病害实验的重要步骤之一。一般用于诱发植物病害病原菌的接种液是该病原菌的水悬浮液，如孢子的水悬浮液或菌丝碎片的水悬浮液等。考虑受接种植物的表面特性，有时也会在接种液中添加表面活性剂，如吐温20、吐温80等，以增加接种液与植物的亲合性。
与上述方法相类似，水稻稻瘟病的诱发所用接种液一般也为稻瘟病菌的水悬浮液，有时也添加吐温等使发病条件更为有利，但即使如此仍不能保证水稻稻瘟病的必发、重发。因为水稻稻瘟病菌对湿度条件要求很高，必需连续要有较长时间的高湿度，特别是在相对较低的温度条件下仍要求连续保持高湿度，才能诱发稻瘟病的发生，这在一般的自然环境下往往不能满足连续高湿度的需求而导致稻瘟病菌不能萌发。这在大规模的水稻稻瘟病诱发试验中，如大批量的品种抗性鉴定中，由于规模大、条件较难控制，经常会出现由于湿度不足而导致影响发病的情况，这对季节性强、参试品种种子数量受限制(如杂交稻种子)的抗性鉴定工作来讲，往往会造成难以弥补的损失。因此，在与稻瘟病诱发有关的实验工作中，迫切希望能有一种提高水稻稻瘟病菌接种诱发率的辅助方法。
发明内容
本发明目的是，针对现有诱发水稻稻瘟病技术所存在的因不能充分满足水稻稻瘟病菌对高湿度条件的要求，而导致稻瘟病菌萌发困难、人工接种诱发率低的缺陷，提供一种使用方便、能充分满足水稻稻瘟病菌对高湿度条件的要求、提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法。
本发明目的通过以下技术方案得以实现。
一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法，该方法按以下步骤进行：
(1)水稻稻瘟病菌分生孢子的采集：选择对水稻致病性强、能产生较多分生孢子的水稻稻瘟病菌株进行采集；菌株经大麦粒培养基培养后，将分生孢子从大麦粒上用水洗下得孢子液，经滤纸真空过滤得表层附着有分生孢子的滤纸，快速风干后，备用；
(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制：先按重量百分比将0.05-5％的保水剂和0.025-1％的表面活性剂，并以无菌水补足至100％后混合成基础液；再将步骤(1)表层附着有孢子的风干滤纸剪成碎块，分批投入基础液中、充分搅动以使滤纸上的孢子脱落至基础液中，并随时测定该液，直至液中分生孢子含量达105-106个/ml时止，即为水稻稻瘟病菌接种液，备用；
(3)水稻稻瘟病菌接种液的喷雾接种：选择晴天或阴天的傍晚，将步骤(2)的接种液喷雾接种到生长健壮水稻植株的叶片或穗颈上，至叶片或穗颈滴液时止；
(4)观察、记载与统计：接种后第二天开始观察、调查、记载，至第十天统计出水稻稻瘟病菌的接种诱发率。
所述保水剂为聚水保、丙三醇或透明质酸中的任选一种。
所述表面活性剂为XB804、蔗糖脂或聚山梨酯中的任选一种。
所述水稻稻瘟病菌接种液的基础液是按重量百分比0.1％的聚水保和0.1％的XB804，并以无菌水补足至100％后混合配制而成。
本发明的有益效果是：
一、本发明在稻瘟病菌接种液中添加的聚水保、丙三醇、透明质酸等保水剂，对水稻稻瘟病菌的发芽和水稻的生长发育均无不利影响，且有较强的保水作用，能够有效保持稻瘟病菌接种液中的水分(见试验例1、2)。
二、本发明在稻瘟病菌接种液中添加的XB804、蔗糖脂、聚山梨酯表面活性剂，对水稻稻瘟病菌的发芽和水稻的生长发育均无不利影响，能够改善水稻植株表面的亲水性能，有利于稻瘟病菌接种液在水稻植株上的展着(见试验例1、2)。
三、本发明的稻瘟病菌接种液在添加的保水剂和表面活性剂的综合作用下，既增加了水稻植株对接种液的接受量，即稻瘟病菌孢子的数量和水的接受量，又延长了接种液中的水在水稻受体上的留存时间；这为水稻稻瘟病菌的诱发提供了充分的有利条件，有效解决了传统稻瘟病人工接种诱发中存在的湿度不足的难题，显著提高了水稻稻瘟病人工接种的诱发率(见试验例6)。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的详细描述，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。
实施例1：(一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法1)
(1)水稻稻瘟病菌分生孢子的采集：选择对水稻致病性强、经大麦粒培养基培养产生分生孢子较多的水稻稻瘟病菌株进行采集；菌株经大麦粒培养基培养后将分生孢子从大麦粒上用水洗下得孢子液，经滤纸真空过滤得表层附着有分生孢子的滤纸，快速风干后，备用；
(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制：先按重量百分比将0.05％的透明质酸和0.025％的蔗糖脂，并以无菌水补足至100％后混合成基础液；再将步骤(1)表层附着有孢子的风干滤纸剪成碎块，分批投入基础液中、充分搅动以使滤纸上的孢子脱落至基础液中，并随时测定该液至液中分生孢子含量达105-106个/ml时止，即为水稻稻瘟病菌接种液，备用；
(3)水稻稻瘟病菌接种液的喷雾接种：选择晴天或阴天的傍晚，将步骤(2)的接种液喷雾接种到生长健壮水稻植株的叶片或穗颈上，至叶片或穗颈滴液时止；
(4)观察、记载与统计：接种后第二天开始观察、调查、记载，第十天统计出水稻稻瘟病菌的接种诱发率。
实施例2：(一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法2)
本例中，步骤(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制：按重量百分比将0.1％的聚水保和0.1％的XB804，并以无菌水补足至100％后混合成基础液；其余步骤与工艺同于实施例1。
实施例3：(一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法3)
本例中，步骤(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制：按重量百分比将5％的丙三醇和1％的聚山梨酯，并以无菌水补足至100％后混合成基础液；其余步骤与工艺同于实施例1。
为了明确本发明稻瘟病菌接种液的有益效果，申请人进行了以下的试验。试验例1：(保水剂和表面活性剂对稻瘟病菌分生孢子萌发率的影响试验)
采用凹玻片萌发法：将稻瘟病菌分生孢子水悬浮液与保水剂、表面活性剂混合制得不同浓度的保水剂、表面活性剂分生孢子水悬浮液(见表1)，上述每种分生孢子水悬浮液均用滴管取2滴分别加入1片凹玻片的2个凹槽中；将凹玻片置25℃温度、100％相对湿度下8h，显微镜下观察分生孢子水悬浮液中孢子萌发情况，统计孢子的萌发率。萌发试验显示，含0.05％-0.5％聚水保、0.7％-5％丙三醇、0.5％-1％透明质酸、和0.025％-1％XB804、0.025％-1％蔗糖脂、0.025％-1％聚山梨酯等26种分生孢子水悬浮液中，稻瘟病菌孢子萌发率均在96％以上，与对照相近，表明上述不同浓度的保水剂、表面活性剂对稻瘟病孢子萌发无不良影响(表1)。
表1保水剂和表面活性剂对稻瘟病孢子萌发率的影响(％)
| 处理 | 萌发率(％) | 处理 | 萌发率(％) |
| 0.5％聚水保 | 98.2 | 5％丙三醇 | 96.4 |
| 0.25％聚水保 | 97.1 | 2.5％丙三醇 | 97.5 |
| 0.13％聚水保 | 98.8 | 1.3％丙三醇 | 98.0 |
| 0.05％聚水保 | 98.5 | 0.7％丙三醇 | 98.8 |
| 1％透明质酸 | 96.7 | 1％蔗糖脂 | 97.2 |
| 0.75％透明质酸 | 97.5 | 0.025％蔗糖脂 | 98.5 |
| 0.5％透明质酸 | 99.6 | 0.05％蔗糖脂 | 99.1 |
| 1％XB804 | 97.6 | 1％聚山梨酯 | 96.9 |
| 0.5％XB804 | 96.9 | 0.5％聚山梨酯 | 97.7 |
| 0.25％XB804 | 97.1 | 0.025％聚山梨酯 | 98.9 |
| 0.025％XB804 | 99.5 | 0.05％聚山梨酯 | 98.5 |
| 对照(水) | 99.4 |
试验例2：(保水剂和表面活性剂对水稻生长的影响试验)
将上述保水剂、表面活性剂制成同试验例1不同浓度的水溶液(见表1)，每种水溶液均用喷雾器对水稻苗(三叶期)、水稻成株喷雾，然后观察水稻生长发育情况，试验水稻品种为原丰早。结果显示0.05％-0.5％聚水保、0.7％-5％丙三醇、0.5％-1％透明质酸、0.025％-1％XB804、0.025％-1％蔗糖脂、0.025％-1％聚山梨酯等26种水液对水稻生长发育均无可见之影响。
试验例3：(保水剂对水稻稻瘟病菌接种液的保水作用试验)
取不同浓度(见表2，以重量计)的保水剂水溶液3滴，加在3片玻片上，分别放在相对湿度为67％、75％、86％的3个保湿盒中，在温度25℃的温箱中放置5h，测定液滴放置前后的重量，计算保水率，保水率(％)＝100×(放置前的液滴重-放置5h后的液滴重)/放置前的液滴重。试验结果表明0.05％-0.5％聚水保、0.7％-5％丙三醇、0.5％-1％透明质酸均有较强的保水作用，使用浓度越高，保水作用越强(表2)。
表2保水剂的保水作用研究(保水率％)
试验例4：(保水剂和表面活性剂对提高水稻叶片接种液载液量的试验)
叶片载液量在本发明中是用来量度水稻叶片接受稻瘟病菌接种液数量的指标，是指叶片接受接种液重量占叶片重量的百分数。其测定方法是：配制含保水剂和(或)表面活性剂的稻瘟病菌接种液(表3，以重量计)，用接种液对水稻植株喷雾至叶片滴液为止，剪取叶片中段(手势尽量轻，以免震落叶片上的液滴)称重(W1)，然后立即清水冲洗叶段，用吸水纸吸干表面水份，再称重(W2)；剪不喷雾水稻叶片中段，称重(W3)，水洗用吸水纸吸干表面水份，再称重(W4)；最后计算出载液量，载液量(％)＝(W1×W4-W2×W3)×100/(W2×W3)。供试水稻品种为9311，处于分蘖期。
表3保水剂和表面活性剂对提高水稻叶片接种载液量的作用(％)
试验比较了保水剂单剂、表面活性单剂及保水剂与表面活性复配剂对提高叶片载液量的作用。0.05％-0.5％聚水保、0.7％-5％丙三醇、0.5％-1％透明质酸等3种保水剂均能显著提高叶片载液量，其中，聚水保作用最强，次则丙三醇，透明质酸再次；各保水剂的效能均随浓度增加而增强，但保水剂的效能增幅明显慢于其应用浓度增幅。0.025％-1％XB804、0.025％-1％蔗糖脂、0.025％-1％聚山梨酯等3种表面活性剂亦均能显著提高叶片载液量，其中，XB804的作用稍强，次则聚山梨酯，蔗糖脂再次；表面活性剂的作用效能与其使用浓度的关系类似于保水剂。但保水剂与表面活性的复配剂能大幅度提高叶片载液量的作用，如0.1％聚水保+0.1％聚山梨酯、0.1％聚水保+0.1％XB804、0.25％聚水保+0.1％XB804等3种复配剂能使叶片载液量超过100，1％丙三醇+0.1％聚山梨酯则能使叶片载液量超过80(表3)。试验结果表明保水剂单剂、表面活性剂单剂及二者的复配剂均可通过提高水稻叶片载液量，即叶片接受接种液的数量，以增加叶片上稻瘟病菌的数量及其水份供给，从而更有利于稻瘟病的发生；其中，又以二者的复配剂作用更强。
试验例5：(保水剂和表面活性剂对提高水稻稻瘟病诱发率的筛选与鉴定试验)
本例筛选试验品种为秀水63，为苗瘟试验，试验结果显示0.05％-0.5％聚水保、0.7％-5％丙三醇、0.5％-1％透明质酸等3种保水剂均能显著促进稻瘟病的诱发，其中，聚水保作用最强，次则丙三醇，透明质酸再次。0.025％-1％XB804、0.025％-1％蔗糖脂、0.025％-1％聚山梨酯等3种表面活性剂亦能显著促进稻瘟病的诱发，其中，XB804作用最强，次则聚山梨酯，蔗糖脂再次(见表4)。
本例鉴定试验品种为原丰早，稻瘟病菌孢子水悬浮接种液(对照)和稻瘟病菌化学添加物水悬浮接种液(处理)经系列苗瘟试验比较后明确，以0.1％聚水保+0.1％％XB804的诱病作用最强，0.1％％XB804优于0.1％吐温80(常规)(见表5)。
表4保水剂和表面活性剂诱发稻瘟病的筛选试验
| 处理 | 发病率/％ | 病旨 | 处理 | 发病率/％ | 病旨 |
| 0.5％聚水保 | 100 | 70.37 | 1％蔗糖脂 | 53.8 | 27.77 |
| 0.25％聚水保 | 93.75 | 68.75 | 0.5％蔗糖脂 | 50.5 | 26.85 |
| 0.05％聚水保 | 83.33 | 63.96 | 0.025％蔗糖脂 | 47.79 | 20.32 |
| 5％丙三醇 | 68.75 | 53.47 | 1％XB804 | 72.72 | 46.46 |
| 2.5％丙三醇 | 50 | 29.16 | 0.5％XB804 | 78.57 | 46.82 |
| 0.7％丙三醇 | 6 | 3.7 | 0.025％XB804 | 70.45 | 43.35 |
| 1％透明质酸 | 16.67 | 9.25 | 1％聚山梨酯 | 71.42 | 41.26 |
| 0.75％透明质酸 | 12.18 | 5.87 | 0.5％聚山梨酯 | 60 | 33.88 |
| 0.5％透明质酸 | 9.09 | 5.05 | 0.025％聚山梨酯 | 57.89 | 31.44 |
表5保水剂和表面活性剂诱发稻瘟病的鉴定试验
| 处理 | 总株数 | 发病率(％) | 病旨 |
| CK | 24 | 50 | 26.9 |
| 0.1％吐温80 | 21 | 71 | 41.3 |
| 0.1％％XB804 | 27 | 88 | 54.3 |
| 0.1％聚水保 | 25 | 100 | 66.7 |
| 0.1％聚水保+0.1％％XB804 | 28 | 100 | 93.3 |
试验例6：(不同接种液对提高水稻稻瘟病诱发率的效果对比试验)
试验比较常规接种液(对照)和本发明接种液(处理)对水稻稻瘟病诱发效果，其中，常规接种液为稻瘟病菌孢子水悬浮接种液，本发明接种液为添加保水剂和(或)表面活性剂的稻瘟病菌孢子水悬浮接种液，在本例中为0.1％聚水保+0.1％％XB804。稻瘟病菌孢子水悬浮接种液接种；经苗瘟试验、叶瘟试验、穗瘟试验均显示本发明接种液均优于常规接种液(表6)。
表6常规方法与本发明方法诱发稻瘟病的比较试验
注：穗颈瘟试验1为定穗调查结果，接种时抽出穗挂牌，调查时只统计挂牌穗；穗颈瘟试验2则调查所有穗。
Claims (4)
1.一种提高水稻稻瘟病接种诱发率的方法，其特征在于按以下步骤进行：
(1)水稻稻瘟病菌分生孢子的采集：选择对水稻致病性强、能产生分生孢子较多的水稻稻瘟病菌株进行采集；菌株经大麦粒培养基培养后将分生孢子从大麦粒上用水洗下得孢子液，经滤纸真空过滤得表层附着有分生孢子的滤纸，快速风干后，备用；
(2)水稻稻瘟病菌接种液的配制：先按重量百分比将0.05-5％的保水剂和0.025-1％的表面活性剂，并以无菌水补足至100％后混合成基础液；再将步骤(1)表层附着有孢子的风干滤纸剪成碎块，分批投入基础液中、充分搅动以使滤纸上的孢子脱落至基础液中，并随时测定该液，至液中分生孢子含量达105-106个/ml时止，即为水稻稻瘟病菌接种液，备用；
(3)水稻稻瘟病菌接种液的喷雾接种：选择晴天或阴天的傍晚，将步骤(2)的接种液喷雾接种到生长健壮水稻植株的叶片或穗颈上，至叶片或穗颈滴液时止；
(4)观察、记载与统计：接种后第二天开始观察、调查、记载，第十天统计出水稻稻瘟病菌的接种诱发率。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述的保水剂为聚水保、丙三醇或透明质酸中的任选一种。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述的表面活性剂为XB804、蔗糖脂或聚山梨酯中的任选一种。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于所述水稻稻瘟病菌接种液的基础液是按重量百分比0.1％的聚水保和0.1％的XB804，并以无菌水补足至100％后混合配制而成。
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| CN102106244B (zh) | 2012-05-30 |
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Granted publication date: 20120530 Termination date: 20121122 |