CN102091061B

CN102091061B - 1,2-二苯乙烯衍生物在制药中的应用

Info

Publication number: CN102091061B
Application number: CN 201010541715
Authority: CN
Inventors: 张海林; 张璇; 杜肖娜; 祁金龙
Original assignee: Hebei Medical University
Current assignee: Hebei Medical University
Priority date: 2010-11-12
Filing date: 2010-11-12
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2030-11-12
Also published as: CN102091061A

Abstract

本发明公开了一种1，2-二苯乙烯衍生物的新用途，即用1，2-二苯乙烯衍生物作为辣椒素受体激活增效剂。本发明所述的1，2-二苯乙烯衍生物与TRPV1激动剂具有协同效应，其可作为TRPV1激动增效剂以及在制备镇痛药物制剂中得到应用。

Description

1,2-二苯乙烯衍生物在制药中的应用

技术领域

本发明涉及化合物在制药中的应用，具体地说是1，2-二苯乙烯衍生物在制药中的应用。

背景技术

辣椒素受体(即瞬时受体电位香草酸受体亚型1，简称TRPV1)是一种对钙离子有高渗透性的非选择性阳离子通道，选择性的高表达于伤害性感觉神经元[1]。该受体可被辣椒素，氢离子(pH＜5.8)，高温(＞43℃)及一些内源性配体如炎症发生时产生的某些炎症因子等激活，此学说被认为是介导疼痛的主要分子学机制之一[2]。TRPV1主要的拓扑结构与Shaker相关电压门控钾通道相似，包括存在于胞内的N末端和C末端及六跨膜结构，其中在第五和第六跨膜结构之间存在一个较短的孔形成区[3]。研究发现TRPV1在许多疼痛传导途径的上游区调节，因此TRPV1成为治疗疼痛的新靶点。辣椒素是最早被发现的TRPV1激动剂。作为局部镇痛药物，辣椒素已经被收入美国药典。目前对于TRPV1激动剂的镇痛机制普遍被认为有两种情况，(1)一次性大剂量给予TRPV1激动剂致使TRPV1脱敏，从而在短时间内发挥镇痛作用；(2)长时间反复给予高浓度TRPV1激动剂一方面可打开TRPV1通道，钙离子大量内流，选择性的致使表达了TRPV1的外周感觉神经元因发生钙中毒，从而发挥镇痛作用，与此同时TRPV1也会产生快速脱敏现象。但研究表明，大剂量使用辣椒碱会产生一些不良反应，如局部使用辣椒碱会有灼热感、数天至几星期后会导致痛觉丧失以及对各种有害刺激失去反应，这也许与TRPV1的脱敏现象有关。为了克服TRPV1激动剂所导致的不良反应，人们期待能够发明一种能够与TRPV1激动剂产生协同作用的药物，以此减少TRPV1激动剂的负面效应。

发明内容

本发明的目的就是提供一种与TRPV1激动剂具有协同效应的TRPV1激动增效剂。

本发明的目的是这样实现的：

本发明提供了一种1，2-二苯乙烯衍生物的新用途，即用1，2-二苯乙烯衍生物作为辣椒素受体激活增效剂，该衍生物具有以下(I)所示通式：

其中R和R₁中为异硫氰基；或其中之一为异硫氰基，另一个为硝基或乙酰氨基。

本发明更为优选的化合物是如下所列的具体化合物

4，4′-二异硫氰基均二苯乙烯-2，2′-二磺酸(以下简称DIDS)其化学结构式为：

4-乙酰氨基-4’-异硫氰基均二苯乙烯-2，2′-二磺酸(以下简称SITS)，其化学结构式为：

DIDS、SITS长期以来被用作氯通道及一些转运体的阻断剂，在很多研究领域被大量应用。但从未有人发现其与TRPV1激动剂具有协同作用。本发明人经研究发现，DIDS及其结构类似物本身并不具有TRPV1激动剂效应，但其与TRPV1激动剂合用可增强TRPV1激动剂打开TRPV1通道的能力，能够加大钙离子得内流量，甚至可取消TRPV1的脱敏现象，故其可加快伤害性神经元钙中毒的进程，另外其作用具有TRPV1激动剂依赖性的特点，其作用仅发生在存在可引发疼痛物质的神经末梢，而并非所有可接触到的神经元。故可以认定本发明所述的1，2-二苯乙烯衍生物与TRPV1激动剂具有协同效应，其可作为TRPV1激动增效剂以及在制备镇痛药物制剂中得到应用。

本发明化合物可以以游离碱或盐的形式存在。游离碱在应用时，可选择生理上允许的无机酸(如盐酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸)、有机酸(如乙酸、丙酸、柠檬酸、马来酸、苹果酸、酒石酸、甲磺酸)成盐。

本发明提供的1，2-二苯乙烯衍生物作为辣椒素受体激活增效剂的应用，即以所说的1，2-二苯乙烯衍生物为活性成分，与药学上允许使用的载体或稀释剂混合，制备成药物制剂。在使用时与TRPV1激动剂一并使用，由此在降低TRPV1激动剂用量的情况下，可获得同样的镇痛效果。

本发明所述化合物均可从商业渠道获得。

本发明所指药学上可以接受的载体或稀释剂，可选自药物制剂中常用的赋形剂、辅料或溶剂。如乳糖、蔗糖、糊精、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁、硬脂酸、纤维素的低级烷基醚、玉米淀粉、马铃薯淀粉、树胶、糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、单硬脂酸甘油脂或二硬脂酸甘油脂、着色剂、矫味剂、防腐剂、水、乙醇、丙醇、生理盐水、葡萄糖溶液等等。

本发明提供的以1，2-二苯乙烯衍生物作为辣椒素受体激活增效剂的具体制备方法可按照制剂常规进行。如可以本发明所述化合物作为活性成份，与水、蔗糖、山梨醇糖、果糖等制备成口服液体制剂；也可以乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇糖等为赋形剂，以淀粉等为崩解剂，以硬脂酸、滑石粉等为润滑剂，明胶、聚乙烯醇为结合剂制备成片剂或胶囊剂；还可与生理盐水、葡萄糖溶液或盐水与葡萄糖组成的混合载体制备成注射液。还可制成无菌粉针剂以及各种缓释剂、混悬剂、乳剂等等。

本发明所述的1，2-二苯乙烯衍生物作为辣椒素受体激活增效剂应用时，还可以质量比为1∶1的比例，与辣椒素混合后制备成外用贴剂使用，由此可降低50％的辣椒素用量。具体用法、用量可参照辣椒素贴剂。

本发明所提供的增效剂可与TRPV1激动剂合用缓解和解除因各种原因引起或诱发的疼痛。

附图说明

图1为DIDS与辣椒素联合应用以及单独应用DIDS的TRPV1电流图。

图2为DIDS与辣椒素联合应用电流增大数据统计示意图。

图3为单纯多次给予低pH细胞外液以及在联合应用DIDS的TRPV1电流图。

图4为DIDS与低pH细胞外液联合应用电流增大数据统计示意图。

图5为单纯多次给予低pH细胞外液以及在联合应用SITS的TRPV1电流图。

图6为SITS与低pH细胞外液联合应用电流增大数据统计示意图。

图7为在HEK293细胞系中DIDS对辣椒素的增效作用。

图8为在HEK293细胞系中SITS对辣椒素的增效作用。

以下结合附图及具体实施例对本发明作进一步详述。

具体实施方式

实施例1电生理膜片钳测定DIDS对辣椒素(简称CAP)的增效作用。

(1)测试化合物DIDS：市购DIDS CAS：207233-90-7(Sigma批号：068K1116)

(2)测试方法：成年SD大鼠(200～250g)背根神经元(DRG)的培养：取成年SD大鼠全部背根神经节，胶原酶、胰酶消化，在含有10％胎牛血清，100U/ml青霉素和链霉素的DMEM培养液中吹散，胞铺于12mm的圆形盖玻片上，24孔板培养。

膜片钳技术记录细胞膜电流：膜片钳放大器采用Axon 700B。电极内应用两性霉素B(终浓度0.1～0.2mg/ml)做打孔膜片钳记录。微电极抛光后，灌充电极内液，控制电阻值在1.5～2.5MΩ。记录DRG神经元细胞时所用电极内液为(mM)：KCl 150，HEPES 10，MgCl₂5，用KOH调pH至7.4；细胞外液成分为(mM)：NaCl 160，KCl 2.5，HEPES 10，glucose8，MgCl₂1，CaCl₂5。微电极与细胞膜形成巨阻封接后，钳制在-80mV等待5-10min后开始按照不同的刺激程序进行电流记录。

(3)测试结果：从图1可以看出，在辣椒素基础上联合应用100微摩尔DIDS可增大辣椒素引发的TRPV1电流幅度。而单独应用DIDS并不能引发TRPV1电流幅度。DIDS与辣椒素联合应用可使辣椒素引发的电流增大2.16±0.13倍(详见图2)。

实施例2电生理膜片钳测定(DIDS对低pH细胞液激活TRPV1通道的增敏作用)

(1)测试化合物：DIDS

(2)测试方法：同实施例1所用方法

(3)测试结果：如图3所示，采用-60mV连续记录模式记录多次给予pH＝5的细胞外液激活TRPV1通道，TRPV1电流存在明显快速脱敏现象。在pH＝5的细胞外液基础上联合应用100微摩尔DIDS可增大TRPV1电流，并且阻断了TRPV1电流的快速脱敏现象。DIDS与低pH细胞液联合应用可引发电流增大4.48±0.69倍(详见图4)。

实施例3电生理膜片钳测定：SITS对低pH细胞液激活TRPV1通道的增敏作用

本发明所述化合物来源均可从商业渠道获得，在化合物的生物活性测定实施例中所述化合物的具体来源为，DIDS CAS：207233-90-7(Sigma批号：068K1116)；。

(1)测试化合物SITS，市场购得(SITS CAS：51023-76-8(Sigma批号：107K1065))

(2)测试方法：同实施例1所用方法

(3)测试结果：采用-60mV连续记录模式记录多次给予pH＝5的细胞外液激活TRPV1通道，TRPV1电流存在明显快速脱敏现象；单独应用SITS不能引发TRPV1电流；在pH＝5的细胞外液基础上联合应用100微摩尔SITS可增大TRPV1电流(如图5所示)。SITS与低pH细胞外液联合应用可引发电流增大4.21±0.68倍(详见图6)。

实施例4电生理膜片钳测定：DIDS\SITS在HEK293细胞系中辣椒素的增效作用。

(1)测试化合物：DIDS，SITS

(2)测试方法：人胚胎肾细胞(HEK 293A)的培养：采用Lipofectamine 2000reagent(Invitrogen)瞬转了大鼠TRPV1通道的HEK 293A细胞培养于含有10％胎牛血清，100U/ml青霉素和链霉素的DMEM培养液中，胰酶消化传代。将细胞铺于12mm的圆形盖玻片上，24孔板培养

膜片钳技术记录细胞膜电流：膜片钳放大器采用Axon 700B。电极内应用两性霉素B(终浓度0.1～0.2mg/ml)做打孔膜片钳记录。微电极抛光后，灌充电极内液，控制电阻值在1.5～2.5MΩ。记录所用电极内液为(mM)：KCl 150，HEPES 10，MgCl₂5，用KOH调pH至7.4；细胞外液成分为(mM)：NaCl 160，KCl 2.5，HEPES 10，glucose 8，MgCl₂1，CaCl₂5。微电极与细胞膜形成巨阻封接后，钳制在-80mV等待5-10min后开始按照不同的刺激程序进行电流记录。

(3)测试结果：在辣椒素基础上联合应用100微摩尔DIDS可增大辣椒素引发的TRPV1电流幅度(如图7所示)，结果与在DRG神经元的结果一致。在辣椒素基础上联合应用SITS并不能增大辣椒素引发的TRPV1电流(如图8所示)。由此说明SITS对氢离子激动剂具有特异性的增效作用。

实施例5制备外用贴膏制剂

称取DIDS 100g，辣椒素100g，混合均匀，参照贴膏制剂的常规制备方法，制备每贴含5mg辣椒素的贴膏制剂。

实施例6制备口服片剂

按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成分：

DIDS 25mg

乳糖 70mg

硬脂酸镁 5mg

聚乙烯比咯烷酮 100mg

以上实施例是为了更详细地说明本发明，但它不以任何形式限制本发明。

Claims

1.2-二苯乙烯衍生物在制备辣椒素受体激活增效剂中的应用，该衍生物具有以下(I)所示通式：

其中R和R₁均为异硫氰基；或其中之一为异硫氰基，另一个为硝基或乙酰氨基。

2.根据权利要求1所述的1，2-二苯乙烯衍生物在制备辣椒素受体激活增效剂中的应用，其特征在于以所说的1，2-二苯乙烯衍生物为4，4′-二异硫氰基均二苯乙烯-2，2′-二磺酸，其化学结构为：

3.根据权利要求1所述的1，2-二苯乙烯衍生物在制备辣椒素受体激活增效剂中的应用，其特征在于以所说的1，2-二苯乙烯衍生物为4-乙酰氨基-4’-异硫氰基均二苯乙烯-2，2′-二磺酸，其化学结构为：

4.根据权利要求2或3所述的1，2-二苯乙烯衍生物在制备辣椒素受体激活增效剂中的应用，其特征在于以所说的1，2-二苯乙烯衍生物为活性成分，与药学上允许使用的载体或稀释剂混合，制备成药物制剂。