CN102086472B - 小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用。本发明提供了辅助检测小麦千粒重性状的方法，包括如下1)-3)中任一技术方案：1)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为T还是为C，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；2)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为T还是为C，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；3)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为A还是为G，AA基因型的待测小麦的千粒重低于GG基因型的待测小麦。以上单核苷酸多态的发现基于本发明提供的小麦千粒重性状相关基因。本发明提供的基因和方法在小麦产量育种中将具有广阔的应用前景。

Description

小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用

技术领域

本发明涉及一种小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用。 

背景技术

蔗糖是高等植物光合作用的主要产物，是碳运输的主要形式，即大多数植物叶片中的最初光合产物-葡萄糖在酶的作用下转化成蔗糖后(源)才能转运到植物的其他各器官(库)(Fisher D B，Wang N.Sucrose Concentration Gradients along thePost-Phloem Transport Pathway in the Maternal Tissues of Developing Wheat Grains.Plant Physiol，1995，109：587-592.；Wang H L，Lee P D，Chen W L，et al.Osmoticstress-induced changes of sucrose metabolism in cultured sweet potato cells.J Exp Bot，2000，51：1991-1999.)。蔗糖由源器官运转到库器官后，只有转化为己糖或磷酸己糖后才能进入细胞内的其他代谢过程，否则将出现蔗糖积累。而蔗糖转化为己糖或磷酸己糖是通过一些酶的作用实现的。目前研究认为与蔗糖代谢有关的酶主要有三类，即转化酶或β-呋喃果糖苷酶(Invertase，β-fructofuranosidase，EC3.2.1.26，Inv)，蔗糖合成酶(Sucrose Synthase，EC2.4.1.13，SS)和蔗糖磷酸合成酶(Sucrose PhosphateSynthase，EC2.3.1.14，SPS)(Fisher D B，Wang N.Sucrose Concentration Gradientsalong the Post-Phloem Transport Pathway in the Maternal Tissues of Developing WheatGrains.Plant Physiol，1995，109：587-592.；Wang H L，Lee P D，Chen W L，et al.Osmotic stress-induced changes of sucrose metabolism in cultured sweet potato cells.JExp Bot，2000，51：1991-1999.)。其中SS对于调节“源”与“库”的关系具有重要的意义，在马铃薯中反义表达SS的研究中发现，SS是决定马铃薯块茎库强(sink strength)的关键因素(Rita Z，Marcel S，Lothar W，Uwe S.Evidence of the crucial role of sucrosesynthase for sink strength using transgenic potato plants(Solanum tuberosum L.)ThePlan Journal，1995，7：97-107)。在大多数植物中，它已经被确认有2种不同的存在形式sst1和sst2。 

小麦品种的籽粒性状如饱满度，千粒重等都存在很大的差异，所有的育种家都希望找到最优异的变异类型。SNP(Single-Nucleotide Polymorphisms)最大限度地代表了不同个体之间的遗传差异，这种在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起 的DNA序列多态性，更有助于解释个体间的表型差异，因而成为研究复杂性状的重要遗传标记(Collins F S，Guyer M S，Chakravarti A.Variations on a theme：cataloginghuman DNA sequence variation.Science，1997，279：1580-1581.；Kim M Y，Ha B K，Jun T H，Hwang E Y，Van K，Kuk Y I，Lee S K.Single nucleotide polymorphismdiscovery and linkage mapping of lipoxygenase-2 gene(Lx2)in soybean.Euphytica，2004，135：169-177.)。研究发现，位于同一条染色体上的SNPs之间不是孤立的，相邻的等位基因往往倾向于同时出现。如果相邻的等位基因同时出现的频率超过随机发生的概率，则称为连锁不平衡(Linkage Disequilibrium，LD)(Smith A V，ThomasD J，Munro H I M，et al.Sequence features in regions of weak and strong linkagedisequilibrium.Genome Res，2005，15：1519-1534.)。位于一条染色体特定区域、相互关联、倾向于以整体模式遗传给后代的SNPs组合称为单倍型(Wail J D，Pritchard J K.Haplotype blocks and linkage disequilibrium in the human genome.NatRev Genet，2003，4：587-597.)，利用单倍型信息进行与表型性状间的关联研究分析自然是优于利用单个SNP标记。如今，单倍型多样性被越来越广泛地应用于群体遗传学研究，首先选择少量样本寻找和鉴定个体单倍型，然后开发SNP marker，在较大数量的样本中进行单倍型分型，最后用所有分型样本进行单倍型和表型的关联分析，希望找到具有功能的优异单倍型，从而服务于育种实践或进化等理论方面的研究。 

发明内容

本发明的目的是提供一种小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用。 

本发明提供了一种辅助检测小麦千粒重性状的方法，包括如下1)-3)中任一技术方案： 

1)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为T还是为C，确定待测小麦的基因型是TT还是CC，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；所述TT基因型为序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为T的纯合体；所述CC基因型为序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为C的纯合体； 

2)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为T还是为C，确定待测小麦的基因型是TT还是CC，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；所述TT基因型为序列1所示基因自5’末端第566位核 苷酸为T的纯合体；所述CC基因型为序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为C的纯合体； 

3)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为A还是为G，确定待测小麦的基因型是AA还是GG，AA基因型的待测小麦的千粒重低于GG基因型的待测小麦；所述AA基因型为序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为A的纯合体；所述GG基因型为序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为G的纯合体。 

所述确定待测小麦的基因型的方法可包括如下步骤： 

(1)提取待测小麦的基因组DNA； 

(2)以待测小麦的基因组DNA为模板进行PCR扩增，根据PCR产物确定待测小麦的基因型。 

所述步骤(2)具体可为：以待测小麦的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果采用引物对乙没有得到扩增产物，采用引物对甲得到423bp的扩增产物，针对序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸，待测小麦的基因型为CC；如果采用引物对甲没有得到扩增产物，采用引物对乙得到381bp的扩增产物，针对序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸，待测小麦的基因型为TT；所述引物对甲为序列表的序列2和序列表的序列3所示核苷酸组成的引物对；所述引物对乙为序列表的序列4和序列表的序列5所示核苷酸组成的引物对。 

本发明还保护用于辅助检测小麦千粒重性状的专用引物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲为序列表的序列2和序列表的序列3所示核苷酸组成的引物对；所述引物对乙为序列表的序列4和序列表的序列5所示核苷酸组成的引物对。 

所述专用引物在制备辅助检测小麦千粒重性状的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。 

本发明同时保护一种辅助检测小麦千粒重性状的试剂盒，包所述专用引物。 

所述专用引物或所述试剂盒均可应用于辅助检测小麦千粒重性状。 

本发明还保护小麦千粒重性状相关基因，是如下1)或2)或3)的DNA分子： 

1)序列表中序列1所示的DNA分子； 

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且与小麦千粒重性状相关的DNA分子； 

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且与小麦千粒重性状相 关的DNA分子。 

扩增所述基因及其任一片段的引物对也属于本发明的保护范围，如序列表的序列6和序列表的序列7组成的引物对。 

所述方法、试剂盒或所述基因均可应用于小麦育种。 

本发明得到了与小麦千粒重相关的基因，并基于该基因在不同品种的小麦中发现了3个SNP位点，该三个SNP位点紧密连锁，呈现两个单倍型。将单倍型与千粒重性状进行关联分析，发现两种单倍型与千粒重显著相关，两种单倍型的千粒重平均相差3克以上。本发明提供的基因、方法和试剂盒在小麦产量育种中将具有广阔的应用前景。 

附图说明

图1为Tasst2B序列SNP位点。 

图2为基于AS-PCR原理开发SNP marker示意图。 

图3为应用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增，扩增产物的电泳结果； 

(a)1.5％琼脂糖凝胶电泳；1：原冬822；2：骊英5号；3：苏麦3号；4：恩麦4号；5：京红5号；6：鄂麦6号；7：安徽3号；8：晋麦2148；9：丰产3号；10：内麦11；11：百农3217；12：西农6028；13：冀麦2号；14：小偃6号；15：陕农7859；16：晋春3号；17：温麦6号；18：莱州953；19：甘麦8号；20：金麦4号；M：Marker； 

(b)6％聚丙烯酰胺变性凝胶电泳；A：原冬822；2：骊英5号；3：苏麦3号；4：恩麦4号；5：鄂麦6号；6：农大311；7：农大311；8：京红5号；9：内麦11；10：晋春3号；11：北京8号；CS：中国春。 

图4为不同育成年代(40s：1940-1949；50s：1950-1959；60s：1960-1969；70s：1970-1979；80s：1980-1989；90s：1990-1999)育成的品种中Tasst2B的两种单倍型所占的比例。 

图5为不同省份的品种中Tasst2B的两种单倍型所占的比例。 

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的“％”，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的所有小麦样本均获自国家种质库 (http://icgr.caas.net.cn/cgris国家种质库.html)，表1和表4中的编号均为种质资源数据库统一编号，其中没有列出编号的，为种质库中的新增品种，尚无编号。 

实施例1、单倍型的发现 

1、根据小麦II型蔗糖合成酶基因Tasst2的cDNA序列(GENBANK ACCESSIONNUMBER AJ000153)设计引物(sst2-167，sst2-168)获得Tasst2的基因组序列Tasst2B，全长4344bp(见序列表的序列1)。 

引物对丙： 

sst2-167：5’-CGCCCTGAGCCGCATCCACA-3’； 

sst2-168：5’-CGCTCGCCCGCCATTTATTTCTCT-3’。 

2、选择微核心种质黄淮麦区的65份小麦品种，扩增并分析Tasst2的基因组序列Tasst2B，发现Tasst2B序列在品种间具有单核苷酸多态性(SNP：single-nucleotide polymorphisms)(见图1)。 

在序列1所示Tasst2的基因组序列Tasst2B中，存在3个SNP位点：自5’末端第114位核苷酸为T或C，自5’末端第566位核苷酸为T或C，自5’末端第2645位核苷酸为A或G。3个SNP位点紧密连锁出现：当自5’末端第114位核苷酸为T时，自5’末端第566位核苷酸一定为T，自5’末端第2645位核苷酸一定为A；当自5’末端第114位核苷酸为C时，自5’末端第566位核苷酸一定为C，自5’末端第2645位核苷酸一定为G。所以该基因呈现两个单倍型(Hyplotype)：单倍型TTA(在序列1所示Tasst2的基因组序列Tasst2B中，自5’末端第114位核苷酸为T，第566位核苷酸为T，第2645位核苷酸为A)和单倍型CCG(在序列1所示Tasst2的基因组序列Tasst2B中，自5’末端第114位核苷酸为C，第566位核苷酸为C，第2645位核苷酸为G)。将单倍型CCG命名为Tasst2B-M，将单倍型TTA命名为Tasst2B-F。 

3个SNP位点临近序列如下所示： 

第114位(T/C)：5’-TTGATCTTTTGCAGGCTARACTGGCTGCCGGTTTGTAG-3’； 

第566位(T/C)：5’-CAATGCCGCGATCCCAGAGGCCGAGCGRGAGAAGCTC-3’； 

第2645位(A/G)：5’-CTATCCCCTTTTGCTCARTACAAGATGTATTCT-3’。 

3、根据等位基因特异性PCR(allele-specific PCR，AS-PCR)的原理，据566bp处的SNP开发基因组特异的SNP marker(两个特异性引物对：由162和566M组成的引物对甲和由204和566F组成的引物对乙；见图2)。并用已测序列验证此marker的准确性。 

引物对甲 

162(上游引物)：5’-TAAGCGATGAATTATGGC-3’； 

566M(下游引物)：5’-GGTGTCCTTGAGCTTCTgG-3’。 

引物对乙： 

204(上游引物)：5’-ctataGTATGAGCTGGATCAATGGC-3’； 

566F(下游引物)：5’-GGTGTCCTTGAGCTTCTgA-3’。 

566M、566F引物在3’端除了包含SNP位点一个碱基差异外，人为地在3’端第二个碱基处引入了一个与已知序列不同的错配碱基。162和204引物是基因组特异引物，根据小麦A，B，D基因组sst2序列差异设计。 

实施例2、单倍型与千粒重的关联分析 

微核心种质材料的所有育成品种共89份，提取基因组DNA作为模板，分别用引物对甲(由162和566M组成的引物对)和引物对乙(由204和566F组成的引物对)进行PCR，通过PCR产物的大小获得单倍型数据，将得到的单倍型数据与千粒重(2002，2005，2006三年的调查数据)进行相关分析(采用SPSS12.0软件，选择Pearson相关系数)。 

提取基因组DNA的具体步骤如下： 

1)取2-3g新鲜叶片，加入液氮迅速研磨，然后将粉末装入到1.5mL离心管中(约占1/3管)，加入900μl 65℃预热的缓冲液S(pH8.5Tris·Cl 100mM，NaCl100mM，pH8.0 EDTA 50mM，SDS 2％)，充分混匀。 

2)将离心管置于65℃水浴中温浴1.5-2h，其间轻轻摇晃数次。 

3)10000rpm离心10min，取上清液入另一个1.5mL离心管，加入700μL的酚-氯仿，轻摇10min以上，室温下10000rpm离心10min。 

4)将上清液转移到另一个1.5mL离心管中，加入等体积氯仿，轻摇10min左右，10000rpm离心10min。 

5)将上清液转移至另一个1.5mL离心管内，加入0.6倍体积的异丙醇，摇匀后-20℃静置30分钟，勾出絮状DNA沉淀，转入另一离心管中，用70％(体积百分比)的乙醇浸洗2-3次(或：10000rpm离心10min)，小心倒掉溶液，最后将DNA转移到一新管中。 

6)将DNA置于通风厨中通风干燥，干燥后，先加入80μL×TE，加入5μL RNaseA(20mg/ml)，37℃消化2小时，纯化前再加入620μL 1×TE，再纯化。 

7)加入等体积的酚-氯仿(1∶1)，轻摇10min以上，于10000rpm下离心10min。 

8)取上清液，加入等体积氯仿，轻轻摇匀后，于10000rpm下离心10min。 

9)取上清液，加入1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2)，混匀后加入2倍体积冰冷的无水乙醇。 

10)轻轻摇匀后置于-20℃下15-20min、10000rpm离心10min，弃上清，DNA用70％乙醇漂洗2-3次，充分干燥后加入适量的1×TE溶解，用作DNA原液。 

11)用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，在Smart SpecTM3000(BIO-RAD)上测定浓度后，取适量的DNA原液用1×TE稀释为80-100ng/μL，置于4℃备用，并将剩下的DNA原液保存于-20℃。 

PCR在PTC-225(MJ.Research，Inc)型热循环仪上运行。 

将采用引物对甲得到的PCR产物和采用引物对乙得到的PCR产物混合，然后在1.5％的琼脂糖凝胶上(部分结果见图3a)或者6％聚丙烯酰胺变性凝胶上检测(部分结果见图3b)。 

如果采用引物对甲得到的PCR产物和采用引物对乙得到的PCR产物的混合物中，只有423bp的条带，待测样本中为单倍型Tasst2B-M的纯合体；如果采用引物对甲得到的PCR产物和采用引物对乙得到的PCR产物的混合物中，只有381bp的条带，待测样本中为单倍型Tasst2B-F的纯合体；如果采用引物对甲得到的PCR产物和采用引物对乙得到的PCR产物的混合物中，同时具有423bp和381bp的条带，待测样本中为单倍型Tasst2B-M和单倍型Tasst2B-F的杂合体。将PCR产物进行测序，验证电泳结果，结果表明，电泳结果与测序结果一致。 

89个样本的单倍型和千粒重性状(2002，2005，2006三年的调查数据)见表1。 

表1 89个样本的单倍型和千粒重性状 

*：杂合；空格：没有扩增；1：Tasst2B-M；0：Tasst2B-F。 

将单倍型数据与千粒重性状进行相关分析，相关系数见表2。统计两种单倍型Tasst2B-M和Tasst2B-F对应的品种的平均千粒重(克)，结果见表3。发现Tasst2B的两种单倍型与千粒重显著相关，单倍型Tasst2B-M对应的品种的千粒重比Tasst2B-F对应的平均高3克以上。 

表2 Tasst2B单倍型与农艺性状的相关系数 

农艺性状

2006年

2005年

2002年

[0077] 

千粒重

0.037*

0.009*

0.010*

*，显著水平p＜0.05。 

表3两种单倍型Tasst2B-M和Tasst2B-F对应的品种的平均千粒重(克)比较 

	Tasst2B-F	Tasst2B-M	千粒重差值
				2006年	39.9	43.6	3.7
2005年	37.5	41.7	4.2
				2002年	40.2	44.8	4.6

实施例3、不同小麦品种的单倍型分析 

核心种质中的所有育成品种共348份，提取基因组DNA作为模板，分别用引物对甲(由162和566M组成的引物对)和引物对乙(由204和566F组成的引物对)进行PCR，根据PCR产物的大小获得单倍型数据。分析Tasst2B的两种单倍型与品种育成年代的关系。 

提取基因组和PCR步骤同实施例2。 

348份样本的单倍型数据见表4。 

表4 348份样本的单倍型数据 

*：杂合；空格：没有扩增；1：Tasst2B-M；0：Tasst2B-F。 

结果表明：单倍型Tasst2B-M在育种过程中正逐渐被育种家所选择并保留下来(见图4)，在育种实力相对较强的河南、陕西等地，单倍型Tasst2B-M被选择的痕迹更为明显(见图5)。 

序列表 

<110>中国农业科学院作物科学研究所 

<120>小麦千粒重性状相关基因、基因的单倍型及其应用 

<130>CGGNARY92729 

<160>7 

<210>1 

<211>4344 

<212>DNA 

<213>小麦属普通小麦(Triticum aestivum L.) 

<400>1 

cgccctgagc cgcatccaca gcgtgaggga gcgcatcggc gattccctct ccgcgcacac      60 

caatgagctt gtcgccgtct tctcaaggtc tgtccttgat cttttgcagg ctatactggc     120 

tgccggtttg tagaaatctc tgcatataag aatgatatgg ttaagcgatg aattatggct     180 

gccttgtgta tttctatgtt atgctatagt atgagctgga tcaatggctt ttttctttaa     240 

aaagtcttgt tactaaggac cattaaaaga actgatgatg aagtttcaac aattgttcct     300 

gcatttctat atagtactgc tccttctatt tgtcttttaa cttctttctt aatctagttg     360 

tatttatact ataacaaagt acctgaacat tttcttactg ctacaattgt taccatactt     420 

tgttcttcaa gtaacgtttg ttgatagatc tgacccactg gctgttacat gataacttgt     480 

tcaggcttgt taaccaagga aaggggatgc tgcagcccca tcagataact gctgagtaca     540 

atgccgcgat cccagaggcc gagcgtgaga agctcaagga caccgccttt gaggatctcc     600 

taaggggcgc acaggtttgc accaccaaaa ctcactgcag tgtcattcaa gtgatgttca     660 

gctcttgatc tgttggtttc tcatacagga ggcaattgtc atccctccat gggttgctct     720 

cgccatccgg ccaaggcccg gcgtctggga gtatgtgagg gtcaatgtga gcgagcttgg     780 

tgttgaggag ttaagcatcg ctgagtattt gcagttcaag gaacaactgg cgaatggaag     840 

gtatctgtga ttttgtgaaa tcattaagat tcaagagtcc accttatacc ttagttttat     900 

catacaacgc ttcttctgtt caaattgcag catcgataac aactttgtgc ttgagctgga     960 

ctttgagcca ttcaacgcct ccttccctcg cccatcgctg tcgaagtcca ttggcaacgg    1020 

tgtgcagttt ctgaacaggc acttgtcatc gaagctgttc catgacaagg agagcatgta    1080 

cccattgctc aacttccttc gcgcgcacaa ctacaagggg atggtaggtt acactctcca    1140 

gtgtctggct ctgtagattg gatcatttgg ctttgtagat tggatcattc aactatatct    1200 

ttgctgaagg ttctctagaa aaactatatc tttgttgttg aaggcttaca tcatttgttt    1260 

atagcatgtc aatctcttag atatatctaa aagcagcata tgagcatacc cagcctgtaa    1320 

gaaaatatag atacaatcta cttaatgtgt tgggcatttg ccctgatgat atgtgcattt    1380 

gtaagtaaaa aaaaagtttt agaacaaatt ctttaagaag tgcaaaagcc tgattgctat    1440 

ctatgagcca actgaaagtt taaactggaa ctattagacc tgttgtttaa tcacaatgag    1500 

catgtaatat tttctttctt tcttcagacc atgatgttga acgacagaat tcggagtctc    1560 

agtaccctcc aaggtgcact caggaaggca gagacacatc tgtcaggcct tccagctgac    1620 

accccttact cggagttcca ccaccggtac tgtatataat catcatacac atgatcattg    1680 

aaacccttat tgctctcaac aaagaactaa aatcgttgcg tatcaatttt ttcgttgcat    1740 

aattcaggtt ccaggaactt ggtctggaga aaggttgggg cgactgtgct cagcgtgcga    1800 

gtgagactat ccaccttctc ttggaccttc tcgaggcccc tgatccatcc tccttggaga    1860 

agttcctcgg aacaatccca atggtgttca atgttgttat cctctctcct catggttact    1920 

ttgctcaggc caatgtcttg gggtaccctg atactggtgg acaggtagaa tcctctaccc    1980 

cacttttgac agcttgacat atttcctctt gataaactga acaccaggaa atatttatta    2040 

tcaccaattt tactatgtca tggcacacag attgtctaca ttttggacca agtccgtgct    2100 

atggagaatg agatgctgtt gagaatcaag cagcaaggtc ttgacattac accaaagatt    2160 

ctaatagtaa gtttagtacc cccaatatga tcgaatatga actctctatt ttaatgatcc    2220 

ctaatgaggt atctttgtcc tgacatagtc accaggttgc tccctgatgc acatggcacc    2280 

acctgtggcc agcgccttga gaaggtcctt ggcaccgagc acacccacat cctgcgtgtg    2340 

ccattcaaaa cagaagatgg tattgttcgc aaatggatct cccgctttga agtctggcct    2400 

tacctggaag cttacactga tgatgcattt cactttccag caggttgttt gtagtgtttc    2460 

attagaatag caatccatca tttttttcat gttgctttca ggatgtggca cacgagatcg    2520 

ccggagagct gcaggccact cctgacctga tcattggaaa ctacagtgat ggcaacctag    2580 

tcgcgtgttt gttggctcac aagttgggag ttactcattg taccattcta tccccttttg    2640 

ctcaatacaa gatgtattct gatctccgta gtatcctatg atatttctta tttcctcatg    2700 

tgcagtgtac cattgcgcat gcactcgaga aaaccaagta tcccaactcc gacctttact    2760 

ggaagaaatt tgaggatcac taccacttct cctgccagtt cacagctgac ctgattgcaa    2820 

tgaatcatgc tgacttcatc atcaccagta ctttccaaga gattgccgga aagtaagatt    2880 

ctctctttca cagaaacacc gccatggtca tttgcaaata gcataaactg atctaatgtt    2940 

atcgtccaat tttcagcaag gacaccgtag ggcagtacga gtcgcacatg gcattcacaa    3000 

tgccaggcct ctatcgtgtt gtccatggta ttgatgtctt cgaccccaag ttcaacatcg    3060 

tctcccctgg tgctgacatg tccatctact tcccatacac tgaacagcag aagaggctta    3120 

cctccctcca tactgagatt gaggagctac tcttcagtga tgttgagaat gctgagcaca    3180 

agtataatca tatataagtc ttgacttctt ataaaataga ttgcctacca tgctggttat    3240 

ctaacttgac tacctcttca gatttgtgct gaaggacaag aagaagccga tcatcttctc    3300 

gatggctagg ctggaccgtg tcaagaatat gactggcctg gtagaaatgt atgggcggaa    3360 

tcctcgccta caggagctgg taaacctggt ggttgtttgt ggtgaccatg gaaaggtgtc    3420 

caaggacaag gaggagcagg cagagttcaa aaagatgttt gatcttatcg aacagtacaa    3480 

cctgattggt cacatccgct ggatctctgc tcagatgaac cgtgtccgca atggtgagct    3540 

ctaccgctac atctgcgaca tgaagggagc ctttgtgcag gtgaaggaca ctgtcaacct    3600 

agcaactcac tatgactgaa tcacgacatt tactagttct gacaatcttt tttcatgttt    3660 

ggcttcctgt gctcagcctg ctttctatga ggctttcggt cttaccgtga tagaggccat    3720 

gacatgtggc cttccaacat tcgccactgc atatggtggt ccagctgaga tcattgtgca    3780 

cggtgtgtcc ggctaccaca tcgatcctta ccagaatgac aaggcctccg cactgcttgt    3840 

ggacttcttt gggaagtgcc aggaagaccc gagccactgg aacaagatct cgcagggagg    3900 

actccagcgc atcgaggaga agtatataag caattctcta tcgtctacat gtgttatcat    3960 

ctgatgcaca tgctctgact cttttaacag cactgagctg agattgatgc cctgtgatct    4020 

tgacgcaggt acacctggaa gctgtactct gagaggctga tgaccctttc tggtgtctat    4080 

ggtttctgga agtatgtctc caacctcgac aggcgcgaga ctcgtcgcta ccttgaaatg    4140 

ctctacgccc tcaagtaccg caaaatggta tgtgccatga cattgcgttc gaccaccttg    4200 

ataatttcag ctcggttcat atcttgagac ttaatttctc tgtgcctttg ttgcgtgcag    4260 

gctgcaactg tcccattggc tgttgagggc gagacctcgg gcaaatgatt tgtccttacc    4320 

agagaaataa atggcgggcg agcg                                           4344 

<210>2 

<211>18 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>2 

taagcgatga attatggc                                                 18 

<210>3 

<211>19 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>3 

ggtgtccttg agcttctgg                                     19 

<210>4 

<211>25 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>4 

ctatagtatg agctggatca atggc                              25 

<210>5 

<211>19 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>5 

ggtgtccttg agcttctga                                     19 

<210>6 

<211>20 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>6 

cgccctgagc cgcatccaca                                           20 

<210>7 

<211>24 

<212>DNA 

<213>人工序列 

<220> 

<223> 

<400>7 

cgctcgcccg ccatttattt ctct                                      24 

Claims (7)

1.辅助检测小麦千粒重性状的方法，包括如下1)-3)中任一技术方案：

1)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为T还是为C，确定待测小麦的基因型是TT还是CC，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；所述TT基因型为序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为T的纯合体；所述CC基因型为序列1所示基因自5’末端第114位核苷酸为C的纯合体；

2)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为T还是为C，确定待测小麦的基因型是TT还是CC，TT基因型的待测小麦的千粒重低于CC基因型的待测小麦；所述TT基因型为序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为T的纯合体；所述CC基因型为序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸为C的纯合体；

3)检测待测小麦的基因组中的序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为A还是为G，确定待测小麦的基因型是AA还是GG，AA基因型的待测小麦的千粒重低于GG基因型的待测小麦；所述AA基因型为序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为A的纯合体；所述GG基因型为序列1所示基因自5’末端第2645位核苷酸为G的纯合体；

所述确定待测小麦的基因型的方法包括如下步骤：

(1)提取待测小麦的基因组DNA；

(2)以待测小麦的基因组DNA为模板进行PCR扩增，根据PCR产物确定待测小麦的基因型；

步骤(2)中，以待测小麦的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增；如果采用引物对乙没有得到扩增产物，采用引物对甲得到423bp的扩增产物，针对序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸，待测小麦的基因型为CC；如果采用引物对甲没有得到扩增产物，采用引物对乙得到381bp的扩增产物，针对序列1所示基因自5’末端第566位核苷酸，待测小麦的基因型为TT；所述引物对甲为序列表的序列2和序列表的序列3所示核苷酸组成的引物对；所述引物对乙为序列表的序列4和序列表的序列5所示核苷酸组成的引物对。

2.用于辅助检测小麦千粒重性状的专用引物，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲为序列表的序列2和序列表的序列3所示核苷酸组成的引物对；所述引物对乙为序列表的序列4和序列表的序列5所示核苷酸组成的引物对。

3.权利要求2所述专用引物在制备辅助检测小麦千粒重性状的试剂盒中的应用。

4.一种辅助检测小麦千粒重性状的试剂盒，包括权利要求2所述专用引物。

5.权利要求2所述专用引物或权利要求4所述试剂盒在辅助检测小麦千粒重性状中的应用。

6.小麦千粒重性状相关基因，是序列表中序列1所示的DNA分子。

7.扩增权利要求6所述基因的引物对，是序列表的序列6和序列表的序列7组成的引物对。

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