CN102085295B - 口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物及其制法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，由(1)10-20wt％油、30-80wt％的水、1-5wt％表面活性剂、1-10wt％助表面活性剂、1-15wt％小葱提取物、0-4wt％的渗透促进剂、0-15wt％的凝胶基质组成的纳米乳药物组合物，将凝胶基质加入该纳米乳中即得可原位凝胶化的纳米乳凝胶药物组合物，其由口腔黏膜给药吸收进入体循环，起效快，由于采用了用原位凝胶技术，使纳米乳在口腔喷雾后原位凝胶化(37℃)，迅速黏附于口腔黏膜表面，可避免药液损失，延长药物在黏膜表面吸收时间，延长药效持续时间。

Description

口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物及其制法

技术领域

本发明属于生物医学材料领域，涉及口腔粘膜给药的纳米乳药物制剂，具体涉及一种可快速起效的用于口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物及其制备方法。

背景技术

纳米制剂技术是纳米技术与现代制剂技术交叉、融合而产生的一种新型制剂技术，可通过包裹、吸附或偶联等方式改变药物的理化特性和生物学特性如生物黏附性、透皮/黏膜/血脑屏障作用、缓控释特性、靶向性、长循环特性等。纳米乳(nanoemulsion)由油相、水相、表面活性剂组成，乳滴粒径为100-1000nm的透明或者半透明液体载药系统，纳米乳因其在提高药物的溶解性、黏膜渗透性和生物利用度等方面的优势，为速效制剂的研制提供了契机。同时采用原位凝胶技术，使纳米乳在口腔喷雾后原位凝胶化(37℃)，迅速黏附于口腔黏膜表面，从而避免药液的损失，延长药物在黏膜表面吸收时间，进而延长药效持续时间。

合作单位在申请号200510019202.1，公开号CN1907420A名为“一种治疗心肌缺血性疾病的药物及其制备方法”中发现百合科葱属植物小葱提取物具有扩张冠状动脉、抗氧化损伤、改善微循环、减轻心脏负荷及改善心肌缺血等作用，药效学研究表明采用传统中药制剂技术的小葱提取物用于心肌缺血的症状控制时疗效确切且无不良反应和青光眼禁忌，但与化学药物相比，起效相对较慢，仍不能满足急性发作时的症状缓解。采用纳米乳技术，开发舌下黏膜给药的小葱提取物纳米乳，解决其起效慢、顺应性差等问题，为中药速效制剂的研制提供了契机。

发明内容

本发明的任务是提供一种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物及其制备方法，将具有多组分特征的小葱提取物包裹于适当处方组成的纳米乳中，通过口腔粘膜吸收进入体循环，达到快速起效的作用。

实现本发明的技术方案是：

本发明提供的这种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物包含以下组分：

(1)10-20wt％油；

(2)30-80wt％的水；

(3)1-5wt％表面活性剂

(4)1-10wt％助表面活性剂；

(5)1-15wt％小葱提取物；

(6)0-4wt％的渗透促进剂；

(7)0-15wt％的凝胶基质。

所述的油为选自下列一组物质中的一种或多种的混合物：十四酸异丙酯(Isopropyl Myristate IPM)、十六酸异丙酯(Isopropyl Palmitate IPP)、玉米油、大豆油和橄榄油。

所述的表面活性剂为选自吐温80、卵磷脂、普洛沙姆188中的一种或多种的混合物；

所述的助表面活性剂为选自乙醇、丙二醇、异丙醇正丁醇中的一种或多种的混合物。

所述的凝胶基质的是泊洛沙姆407、卡波姆或纤维素衍生物。

渗透促进剂是冰片、薄荷脑或樟脑。

本发明提供的这种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：称取质量分数为1-15％的小葱提取物和质量分数为1-5％的表面活性剂加入到质量分数为10-20％的油中，搅拌4小时混匀，得到含小葱提取物和表面活性剂的油相；所述的质量分数为10-20％的油由十四酸异丙酯(Isopropyl MyristateIPM)、十六酸异丙酯(Isopropyl Palmitate IPP)、玉米油、大豆油和橄榄油中的一种或多种的混合物构成；所述的表面活性剂由吐温80、卵磷脂和普洛沙姆188中的一种或多种的混合物构成；

步骤二：称取质量分数为1-10％的助表面活性剂和质量分数为0-4％的渗透促进剂加入到质量分数为30-80％的纯净水中，搅拌使溶解，得到含助表面活性剂和渗透促进剂的水相；所述的助表面活性剂由乙醇、丙二醇和异丙醇正丁醇中的一种或多种的混合物构成；所述的渗透促进剂是冰片、薄荷脑或樟脑；

步骤三：搅拌条件下，将含小葱提取物和表面活性剂的油相缓慢加入含助表面活性剂和渗透促进剂的水相，得到总质量分数为100％的混合溶液；

步骤四：将步骤三得到的混合溶液，按以下步骤(a)或步骤(b)进行匀质化处理：

(a)使用高压匀质机，将步骤三得到的混合溶液在400～1000MPa下，经过1～8次循环，即形成均一的本发明口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物；或

(b)采用超声波的方法，将步骤三得到的混合溶液在800～1600W功率下，超声工作次数15～80次，即制得口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物。

本发明进一步采用用原位凝胶技术，制备口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物，使纳米乳在口腔喷雾后原位凝胶化(37℃)，迅速黏附于口腔黏膜表面，可避免药液损失，延长药物在黏膜表面吸收时间，延长药效持续时间。本发明提供的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物的制备方法是：在冰水浴条件下，将凝胶基质加入到按前述方法制备的本发明口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物中，搅拌均匀，即得到口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物，其中所述的凝胶基质是泊洛沙姆407、卡波姆或纤维素衍生物。

本发明将由植物小葱提取的活性提取物制成纳米乳，舌下黏膜喷雾给药用于冠心病心绞痛的治疗起效时间在0-5min，药效维持时间30-60min，能快速缓解急性心肌缺血症状，疗效与硝酸甘油相当。

本发明实验资料：

1)稳定性考察

在不同温度(4℃，25℃，40℃)下留样观察。取适量实施例2纳米乳，密封于试管中，分别置于不同温度(4℃，25℃，40℃)下保存6个月，定期观察样品的粒径、外观、性状以及是否出现分层、絮凝等现象。在4℃，25℃和40℃下，小葱提取物纳米乳在6个月内未出现分层、絮凝现象，粒径外观均无明显改变。

2)药效学实验研究

采用结扎兔的左冠状动脉前降支制备急性心肌缺血(Acute myocardialischemia，AMI)的经典模型，该模型是造成急性心肌缺血及心肌梗死的最常用的方法。结扎冠状动脉后动物血流动力学和心肌代谢的改变与冠心病人严重心肌缺血有某些相似之处，而且梗死发生快，缺血的范围较稳定，通过测定心肌缺血范围和损伤程度，可评价药物对急性心肌缺血的保护作用。选用健康雄性体重为2.5-3.0kg的日本大耳白兔48只，禁食12小时后(自由饮水)腹腔注射25％乌拉坦溶液(4.25ml/kg)麻醉，仰卧位固定于手术台，四肢连接心电图分析系统，记录正常心电图。胸前区备皮，碘伏消毒，沿胸骨左侧缘剪断肋软骨，用动物开胸器撑开胸骨充分暴露纵隔及心脏，纵行剪开心包，并用镊子轻轻将左心耳提起，找出左冠状动脉前降支，于左室主支起点与心尖连线的中点位置线结扎左冠脉左室支。记录心电图，观察到肢体导联ST段抬高，左心室前壁及心尖部颜色变暗，搏动减弱，表明左室支完全结扎，造模成功。退出开胸器，关闭胸腔。假手术组左室支下心肌穿线，但不结扎，其余同以上步骤。

分组与给药：按表1分组与给药方法进行分组与给药。

表1分组与给药

模型动物随机分为假手术组、模型组、硝酸甘油组、小葱提取物混悬液组(按专利申请号为200510019202.1，公开号为CN1907420A，名为“一种治疗心肌缺血性疾病的药物及其制备方法”的专利申请公开的制备方法制备)、小葱提取物纳米乳组(按本发明实施例2制备)和小葱提取物纳米乳原位凝胶组(按本发明实施例4制备)，每组8只。假手术组和模型组舌下给予生理盐水(0.2mg.kg^-1)，硝酸甘油组舌下给予硝酸甘油混悬液(1mg.kg^-1)。小葱提取物混悬液组、小葱提取物纳米乳组和小葱提取物纳米乳原位凝胶组舌下给药剂量为20mg.kg^-1。

心电图、心梗面积及相关生化指标测定：记录给药前及用药后0，1，5，10，15，30，60，120和180min的心电图，ST段的抬高通过J点校计算。心梗面积按一下方法测定：记录完心电图后迅速开胸取出心脏，分离左心室并称重(LV)，取左心室沿纵轴方向切成厚度约0.2cm薄片，放入1％TTC染色液中于37.0℃恒温水浴箱温浴30分，梗死心肌因脱氢酶的缺失而无法染色颜色呈灰白色，而有活性的心肌组织被染色呈暗红色。观察颜色变化，用眼科剪剪取坏死心肌组织并称量(LA)。记录并计算测心梗面积。计算公式：心梗面积＝梗死区湿重/左心室湿重(LA/LV)。处死动物前取血液样品，离心(3000×g 10min)分离血清，采用试剂盒测定血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和C-反应蛋白(CRP)水平。

表2小葱提取物纳米乳及对照组对急性心肌缺血兔心梗面积的影响X±S.D

注：与模型比：※p＜0.05，△p＜0.01

对心肌梗死面积的影响：表2显示急性心肌缺血模型组心肌梗死面积是46.5％±5.5％，与模型组比较，小葱提取物、小葱提取物纳米乳、小葱提取物纳米乳原位凝胶和硝酸甘油舌下给药后均可缩小兔冠脉结扎所致心肌梗死范围，使梗死心肌质量明显减轻(P＜0.05)，小葱提取物、小葱提取物纳米乳和小葱提取物纳米乳原位凝胶减小心肌梗死面积的程度与硝酸甘油相当(p＞0.05)，小葱提取物与小葱提取物纳米乳、小葱提取物纳米乳原位凝胶比较无显著差别(p＞0.05)。表明小葱提取物、小葱提取物纳米乳和小葱提取物纳米乳原位凝胶对兔冠状动脉前降支结扎所致心肌梗死具有明显的改善作用，能明显减轻心肌缺血范围，其作用与硝酸甘油相当。

对急性心肌缺血兔ST段的影响：ST段的下降一定程度上反应心肌缺血的缓解，而用药后ST段开始变化的时间也可以反应AMI兔心肌缺血缓解的快慢程度。图1显示各给药组对急性心肌缺血兔心电图ST段的影响，和假手术组比较模型组ST段显著上抬(P＜0.001)；和模型组比较，小葱提取物、小葱提取物纳米乳和纳米乳原位凝胶、硝酸甘油舌下给药后均可以使ST段显著降低(P＜0.01)，小葱提取物纳米乳组与小葱提取物混悬液组比较有显著性差别(p＜0.05)，与硝酸甘油组比较作用相当(P＞0.05)。从心电图的变化可以知道各给药组的起效时间，小葱提取物纳米乳组优于小葱提取物组和小葱提取物纳米乳原位凝胶组。小葱提取物纳米乳组起效时间为0-5分钟，与硝酸甘油起效时间相当。

对急性心肌缺血兔血清中CK、IDH水平的影响：血清中CK、IDH水平是心肌损伤的重要指标，图2显示模型组与假手术组比较有显著差别(P＜0.001)；与模型组比较，小葱提取物混悬液组、小葱提取物纳米乳组、纳米乳原位凝胶组和硝酸甘油对照组均能非常显著降低血清中IDH的水平(p＜0.001)；各组血清中CK水平比较，硝酸甘油给药组、小葱提取物混悬液组、小葱提取物纳米乳组、纳米乳原位凝胶组与模型组比较均有显著降低(P＜0.01)，说明硝酸甘油和小葱提取物都具有很好的心肌保护作用；与小葱提取物混悬液组比较，硝酸甘油给药组、小葱提取物纳米乳原位凝胶组能更显著降低血清中CK水平(P＜0.05)；硝酸甘油和小葱提取物纳米乳原位凝胶组两者心肌保护作用相当(p＞0.05)，而小葱提取物纳米乳组与小葱提取物混悬液组作用无显著差异(p＞0.05)。这个结果表明小葱提取物纳米乳原位凝胶组舌下给药后对急性心肌缺血兔有更好的心肌保护作用。

CRP为体内重要的非特异性炎性标志物，是一种急性期反应蛋白，是冠心病诊断极有价值的标志物。在排除其他引起CRP水平增高的因素外，CRP的高低可反应冠状动脉病变炎症反应的强弱，可作为心绞痛病人发生急性冠脉事件的独立预测因子。图3显示与模型组比较小葱提取物混悬液组、小葱提取物纳米乳组、纳米乳原位凝胶组均能显著降低血清中CRP水平(p＜0.05)，说明小葱提取物具有明显的抑制炎症细胞因子介导肝脏合成CRP反应发生，从而缓解急性心肌缺血症状。小葱提取物纳米乳凝胶组降低CRP的水平显著优于硝酸甘油组(p＜0.01)和小葱提取物混悬液组(p＜0.05)，这一结果说明纳米乳能帮助有效成分透黏膜吸收，而原位凝胶化能延长药物作用时间，增强药效。

附图说明

图1：小葱提取物纳米乳及对照组对急性心肌缺血兔心电图ST段的影响X±S.D.(n＝8)；

图2：小葱提取物纳米乳及对照组对血清中CK、IDH水平的影响X±S.D.(n＝8)##P＜0.001与假手术组比较，***P＜0.001，与模型组比较；

图3小葱提取物纳米乳及对照组对血清中CRP水平的影响X±S.D.(n＝8)#P＜0.01与假手术组比较，*P＜0.01，**P＜0.01，与模型组比较。

下面以实施例方式对本发明作进一步说明。

具体实施方式

实施例1

称取5g小葱提取物，2gTween80，0.2g油酸加入到15g大豆油中使溶解，得到油相；将2g大豆卵磷脂，10g丙二醇分散到65g水中得到水相。在磁力搅拌下，缓慢将油相滴入水相，将得到的混合物在高速剪切机中以7500rpm剪切15分钟，形成初乳，将初乳在功率1600W，超声时间6s，间隙时间6s的超声条件下，超声工作次数60次，制得平均粒径162.5nm，PDI为0.125纳米乳。

实施例2

称取10g小葱提取物，2gTween80，0.2g油酸加入到20g大豆油中使溶解，得到油相；将2g大豆卵磷脂，10g丙二醇，0.2g薄荷脑分散到55g水中得到水相。在磁力搅拌下，缓慢将油相滴入水相，将得到的混合物在高速剪切机中以7000rpm剪切15分钟，形成初乳，将初乳加入到高压匀质机，压力为800MPa，循环8次，制得纳米乳。制得平均粒径131.1nm，PDI为0.135的纳米乳。

实施例3

称取10g小葱提取物，1gTween80，0.2g油酸加入20g大豆油中使溶解，得到油相；将2g大豆卵磷脂，10g丙二醇，0.2g薄荷脑分散到57g水中得到水相。在磁力搅拌下，缓慢将油相滴入水相，将得到的混合物在高速剪切机中以7500rpm剪切15分钟，形成初乳，将初乳在功率1600W，超声时间6s，间隙时间6s的超声条件下，超声工作次数60次，制得的纳米乳平均粒径162.8nm，多分散指数PDI为0.156。

实施例4

称取10g小葱提取物，2gTween80，0.2g油酸加入到20g大豆油中使溶解，得到油相；将2g大豆卵磷脂，10g丙二醇，0.2g薄荷脑分散到40.5g水中得到水相。在磁力搅拌下，缓慢将油相滴入水相，将得到的混合物在高速剪切机中以7000rpm剪切15分钟，形成初乳，将初乳加入到高压匀质机，压力为800MPa，循环8次，制得纳米乳。称取14.5g普洛沙姆407溶胀于14.5ml水中，冰箱放置过夜；取上述小葱提取物纳米乳样品，在冰水浴条件下将两者混合均匀，所得的纳米乳原位凝胶凝胶温度为36.7±0.2℃，平均粒径135.1nm，PDI为0.130。

实施例5

称取15g小葱提取物，1.5gTween80，0.2g油酸加入到20g大豆油中使溶解，得到油相；将2g大豆卵磷脂，5g丙二醇，0.12g冰片分散到56.18g水中得到水相。在磁力搅拌下，缓慢将油相滴入水相，将得到的混合物在高速剪切机中以7000rpm剪切15分钟，形成初乳，将初乳加入到高压匀质机，压力为800MPa，循环8次，制得纳米乳。制得的纳米微乳平均粒径297.8nm，多分散指数PDI为0.194。

Claims (10)

1.一种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，该组合物由以下重量配比的组分组成： 

（1）10-20wt%油；

（2）30-80wt%的水； 

（3）1-5wt%表面活性剂

（4）1-10wt%助表面活性剂；

（5）1-15wt%小葱提取物；

（6）0-4wt%的渗透促进剂；

（7）0-15wt%的凝胶基质。

2.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，所述的油为选自下列一组物质中的一种或多种的混合物：十四酸异丙酯、十六酸异丙酯、玉米油、大豆油和橄榄油。

3.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，所述的表面活性剂为选自吐温80 、卵磷脂、普洛沙姆188中的一种或多种的混合物。

4.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，所述的助表面活性剂为选自乙醇、丙二醇、异丙醇正丁醇中的一种或多种的混合物。

5.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，所述的凝胶基质的是泊洛沙姆407、卡波姆或纤维素衍生物。

6.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，渗透促进剂是冰片、薄荷脑或樟脑。

7.根据权利要求1所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物，其特征在于，所述的水是纯净水。

8.口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一：称取质量分数为1-15%的小葱提取物和质量分数为1-5%的表面活性剂加入到质量分数为10-20%的油中,搅拌4小时混匀,得到含小葱提取物和表面活性剂的油相；所述的质量分数为10-20%的油由十四酸异丙酯、十六酸异丙酯、玉米油、大豆油和橄榄油中的一种或多种的混合物构成；所述的表面活性剂由吐温80 、卵磷脂和普洛沙姆188中的一种或多种的混合物构成；

步骤二：称取质量分数为1-10%的助表面活性剂和质量分数为0-4%的渗透促进剂加入到质量分数为30-80%的纯净水中，搅拌使溶解，得到含助表面活性剂和渗透促进剂的水相；所述的助表面活性剂由乙醇、丙二醇和异丙醇、正丁醇中的一种或多种的混合物构成；所述的渗透促进剂是冰片、薄荷脑或樟脑；

步骤三：搅拌条件下，将含小葱提取物和表面活性剂的油相缓慢加入含助表面活性剂和渗透促进剂的水相，得到总质量分数为100%的混合溶液；

步骤四：将步骤三得到的混合溶液，按以下步骤（ａ）或步骤（b）进行匀质化处理：

（ａ）使用高压匀质机，将步骤三得到的混合溶液在400～1000MPa下,经过1～8次循环,即制得本发明口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物；或

（b）采用超声波的方法, 将步骤三得到的混合溶液在800～1600W功率下,超声工作次数15～80次,即制得本发明口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物。

9.一种口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物的制备方法，其特征在于，在冰水浴条件下，将凝胶基质加入到按权利要求８所述方法制得的本发明口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳药物组合物中，搅拌均匀，即得到口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物。

10.根据权利要求9所述的口腔粘膜给药的小葱提取物纳米乳原位凝胶药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的凝胶基质是泊洛沙姆407、卡波姆或纤维素衍生物。

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