CN102080114A - 一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，包括：棉织物在离子液体中于90℃-130℃预处理15min-10h，然后加入去离子水，搅拌再生，再加入纤维素酶进行酶水解，得酶解液；将酶解液进行脱毒处理后，作为培养细菌纤维素的培养基，加入酵母膏和胰蛋白胨，配制成培养基，再加入细菌纤维素生产菌的种子液，25-30℃静置培养8-28天得到细菌纤维素。本发明利用通常废旧丢弃的棉织物为原料，开发为一种廉价的碳源，不但减少了环境污染，而且可以用于生产高附加值产品，为相关产业创造了良好的经济效益。

Description

一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法

技术领域

本发明属于细菌纤维素的制备领域，特别是涉及一种用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法。

背景技术

细菌纤维素(Bacterial cellulose，BC)是一种由微生物生产的纤维素。与植物纤维相比，细菌纤维素具有高结晶度，高持水性，高杨氏模量，高纯度，优秀生物相容性等特点，因此细菌纤维素在医用敷料等生物医学材料、食品、造纸、纺织等领域有着广阔的应用。但是细菌纤维素的高生产成本限制了它的工业规模，因此降低细菌纤维素成本是当前工业生产的一个亟待解决的难题。细菌纤维素成本高的一个主要因素是培养基中碳源的成本高，因此本实验公开了发明一种利用生活废弃物——棉织物生产细菌纤维素的方法。

纤维素物质是全球最丰富的生物质资源，并且未被充分利用。每年，全世界各地生产的棉纤维和再生纤维素纤维(如人造丝等)超过260万吨。这些纤维素纤维最常见的是纺成纱线或线程，用来使纺织品柔软，透气。我国每年被废弃的棉织物以及工业上的棉花下脚料的数量极其庞大，除有少量回收使用外，大量的废旧纤维素基服装和纺织品最终将作为废物填埋或焚烧处理。如能利用这些废弃棉织物及工业棉花下脚料作为发酵产品的原料，不仅变废为宝，而且降低了发酵生产成本，是今后纺织、发酵等工业低碳经济绿色生产重要的研究方向。

离子液体是一种新型绿色溶剂，沸点高，蒸汽可以忽略不计，不会对大气造成污染，不可燃，具有较好的化学稳定性，可回收利用，利于环保。由于离子液体的这些特性。目前，研究报道过离子液可以完全溶解纤维素，再生后的纤维素结晶度降低，酶解效率明显提高。本实验采用(AMIM)Cl和(BMIM)Cl以及LiCl/DMAc来处理棉织物，选用(AMIM)Cl是因为(AMIM)Cl合成温度低，无毒，预处理温度低并且时间短，回收率高等特点，因此选用此种溶剂预处理棉织物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，该方法以通常生活废弃物——棉织物为原料，开发为一种廉价的碳源，不但减少了环境污染，而且可以用于生产高附加值产品，为相关产业创造了良好的经济效益。

本发明的一种利用棉织物制备细菌纤维素的方法，包括：

(1)棉织物的离子液体预处理、再生及酶解反应

a.棉织物的离子液体预处理：将棉织物剪切为小块，以1％-20％(w/w)的比例加入到离子液体中，于90℃-130℃处理15min-10h，静置冷却；

离子液体/棉织物混合液再生：加入与离子液体5-10倍体积的去离子水，搅拌再生，然后离心或者过滤，再用去离子水洗涤得到的沉淀或滤渣，直至上清或者滤液至无色；

同时，将离心得到的上清液或者过滤得到的滤液置于蒸馏瓶中，在温度100-170℃下常压蒸馏或者在温度50-150℃和-0.09～-0.1Mpa的真空度条件下减压蒸馏，去除与离子液体共混的水，蒸馏至蒸不出水为止，蒸馏瓶中剩余的即为回收的离子液体；其中，蒸馏过程中冷凝管所用冷却液为10℃以下的冷却液，连接真空泵前的系统中加装一个冷阱，冷阱置于盛有液氮冷却剂的保温瓶中；

酶解：向上述沉淀或滤渣中加入缓冲溶液至固液比为0.005g∶1ml～1g∶10ml，再加入纤维素酶至终浓度为5-1000U/mL，调节pH至4.0-5.5，在40-60℃条件下反应1-24h，离心或者过滤分离未降解棉织物和酶解液，将酶解液于4℃冷藏；

或者b.棉织物无需进行离子液体预处理及再生，而是直接将其加入到缓冲溶液至固液比为0.005g∶1ml～1g∶10ml，再加入纤维素酶至终浓度为5-600U/mL，调节pH至4.0-5.5，在40-60℃条件下反应48-72h，离心或者过滤分离未降解棉织物和酶解液，将酶解液于4℃冷藏；

(2)酶解液制备细菌纤维素

将上述A或B方法制备的酶解液直接作为培养细菌纤维素的培养基，加入相对酶解液0.1-1％(w/v)的酵母膏和0.1-0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，再加入6％-10％细菌纤维素生产菌的种子液，25-30℃静置培养8-28天得到细菌纤维素。

或将步骤(1)中A或B方法制得的酶解液用Ca(OH)₂调酶解液pH到9.5-11.0，25℃-60℃水浴里脱毒反应12h-24h，然后过滤并微调pH至4.5-5.0，加入活性炭室温下搅拌反应5-10min，过滤得到脱毒处理的酶解液；将脱毒处理的酶解液作为培养细菌纤维素的培养基，加入相对酶解液0.1-1％(w/v)的酵母膏和0.1-0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，再加入6％-10％细菌纤维素生产菌的种子液，25-30℃静置培养8-28天得到细菌纤维素。

所述步骤(1)中的离子液体为(AMIM)Cl、(BMIM)Cl或者LiCl/DMAc。

所述步骤(1)中棉织物为废弃的无色棉织物或有色棉织物。

所述步骤(1)中棉织物在离子液体中的浓度为10％(w/w)，预处理温度为110℃，处理至棉织物完全溶解。

所述步骤(1)中的离心的条件为，速度4000-10000rpm，时间5-20min。

所述步骤(2)中的活性炭的加入量为相对于酶解液质量的1％-6％。

所述步骤(3)中的细菌纤维素生产菌株为醋酸菌属(Acetobacter sp.)、葡萄糖酸杆菌属(Gluconobacter sp.)、葡糖酸醋杆菌属(Gluconacetobacter sp.)、根瘤菌属(Rhizobium sp.)、八叠球菌属(Sarcina sp.)、假单胞菌属(Pseudomounas sp.)、无色杆菌属(Achromobacter sp.)、产碱菌属(Alcaligenes sp.)、气杆菌属(Aerobacter sp.)、固氮菌属(Azotobacter sp.)、土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)、洋葱假单胞菌(Seudomonas cepacia)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)或红茶菌(kombucha)；其中优选菌株为木醋杆菌(Acetobacter xylinum)或红茶菌。

本发明采用离子液体预处理棉织物，可以提高酶解率，制备含高浓度糖的酶解液，并分析预处理后棉织物酶解效率提高的原因；然后再用此酶解液直接或者经脱毒后发酵制备细菌纤维素，并对细菌纤维素进行表征，最后探讨该方法制备的细菌纤维素与传统方法制备的细菌纤维素之间的差别。

采用的酶解原料是再生后的棉织物，直接酶解，没有历经烘干。这样保持了原料经预处理后疏松的结构，有利于酶的接触和催化水解，而且省掉一步工序，节省能源和人力。

红外光谱分析可知离子液体再生出的物质是纤维素；X-射线衍射分析发现经过离子液体处理过的棉织物的结晶度比未处理的低，因此利于酶解反应进行。这些都是解释预处理后棉织物酶解得率提高的原因。

无色棉织物酶解液培养的细菌纤维素膜产量高(7.42g/L)，而以葡萄糖为碳源(17g/L)，水为溶剂培养的细菌纤维素膜的产量是5.38g/L；有色棉织物脱毒酶解液培养的细菌纤维素膜产量高(8.72g/L)，而以葡萄糖为碳源(15g/L)，水为溶剂培养的细菌纤维素膜的产量是5.11g/L。通过比对细菌纤维素与微晶纤维素的红外图谱可知棉织物酶解液培养得到的产物是纯纤维素。相比于水和缓冲液为溶剂葡萄糖为碳源培养得到的细菌纤维素，棉织物酶解液培养得到的细菌纤维素膜干重的产量高，绝对拉力高。

有益效果

本发明的通过离子液体预处理废弃棉织物，提高了酶水解效率，得到的无色棉织物酶解液可以直接培养出细菌纤维素，而有色棉织物酶解液经过脱毒也能培养出细菌纤维素，为工业化低成本生产细菌纤维素提供了一条可行的途径，有利于工业化规模生产该纤维素；另外棉织物作为生活用品的废弃物，一般都是丢弃或焚烧，即污染环境又耗费人力，现在用它来培养细菌纤维素，将会是一种非常廉价的碳源，不仅变废为宝，而且有利于回收资源，发展低碳经济。

附图说明

图1预处理温度和时间对预处理效果的影响。

图2离子液体中棉织物的添加量对预处理效果的影响。

图3最优预处理条件下的酶解曲线图。

图4最优预处理条件下的酶解曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)无色棉织物的预处理

90℃，110℃，130℃，500rpm磁力搅拌转速下，以每次0.05g的添加量不断向10g离子液体(AMIM)Cl中添加无色棉织物，直至棉织物不能在离子液体中溶解。

实验结果见图1。试验结果表明预处理温度越低，相同体积离子液中溶解的棉织物量越少，同等质量的棉织物溶解所需要的时间越长。但是温度过高，溶解到离子液中的纤维素炭化损失严重，为了降低纤维素损失，选择110℃为最佳预处理温度。

实施例2

(1)棉织物的预处理

110℃，500rpm磁力搅拌转速下，将0.5g，0.7g，1.0g，1.2g棉织物置于50ml盛有10g的离子液体(AMIM)Cl中的三角锥形瓶中，预处理相应时间直至完全溶解。

(2)棉织物的再生

在以上处理后的棉织物离子液体混合液中加入5倍于离子液体体积的去离子水于三角烧瓶，搅拌30min，将混合物倒入布氏漏斗抽滤，滤渣反复冲洗，直至滤液为无色透明，收集滤渣和滤液备用。或将混合物在4000rpm转速下离心10min，沉淀反复冲洗，直至上清液为无色透明，收集沉淀和上清液备用。

(3)离子液体的蒸馏回收

将收集的滤液置于蒸馏瓶中，在温度130℃下和-0.09～-0.1Mpa的真空度条件下减压蒸馏去除与离子液体共混的水，蒸馏至蒸不出水为止，蒸馏瓶中剩余的即为回收的离子液体。蒸馏中冷凝管所用冷却液为10℃以下的冷却液，连接真空泵前的系统中加装一个冷阱，冷阱置于盛有液氮冷却剂的保温瓶中。离子液体回收率约为98％。该回收的离子液体用于处理棉织物效果良好。

(4)再生棉织物的称重

将上述再生棉织物置于105±0.2℃恒温鼓风干燥箱至恒重，用电子天平称量其重量。实验结果见图2。

结果表明棉织物在离子液体中的量较少(≤10％)时，因为溶解时间短，因此纤维素不容易损失，当溶解的量比较多时，溶解所需要的时间较长，因此纤维素损失严重，1.2g棉织物溶于10g离子液体中再生后仅剩1.03g。为了充分利用离子液体，又为了最大程度降低纤维素损失，选择10％(w/w)的添加量作为棉织物在离子液中的处理量。

实施例3

(1)棉织物的预处理

在110℃温度和500rpm的转速下，以0.05g的量不断向10g离子液中投加1g无色棉织物，完全溶解后取下样品，冷却至室温。

(2)棉织物的再生

在以上处理后的棉织物离子液体混合液中加入5倍于离子液体体积的去离子水，搅拌30min，将混合物在4000rpm转速下离心10min，沉淀反复冲洗，直至上清液为无色透明，收集沉淀备用。

(3)再生棉织物的酶解

将1g沉淀完全转移到50ml三角瓶，加入20ml，50mmol pH 4.8的醋酸缓冲液，再加入60mg的纤维素酶(11U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应24h。1g未处理棉织物的酶解反应为对照。反应结束后在4000-10000rpm条件下离心5-20min分离未降解棉织物和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，计算还原糖得率。

实验结果见图3。试验结果表明预处理后的无色棉织物酶解率比未处理棉织物高，酶解24h，处理后棉织物酶解率为81.6％，未处理棉织物酶解率为12.1。

实施例4

(2)棉织物的预处理

在110℃温度和500rpm的转速下，以0.05g的量不断向10g离子液中投加1g黄色棉织物，完全溶解后取下样品，冷却至室温。

(2)棉织物的再生

在以上处理后的棉织物离子液体混合液中加入5倍于离子液体体积的去离子水，搅拌30min，将混合物在4000rpm转速下离心10min，沉淀反复冲洗，直至上清液为无色透明，收集沉淀备用。

(3)再生棉织物的酶解

将1g沉淀完全转移到50ml三角瓶，加入20ml，50mmol pH 4.8的醋酸缓冲液，再加入60mg的纤维素酶(11U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应24h。1g未处理棉织物的酶解反应为对照。反应结束后在4000-10000rpm条件下离心5-20min分离未降解棉织物和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，计算还原糖得率。实验结果见图4。

试验结果表明预处理后的黄色棉织物酶解率比未处理棉织物高，酶解24h，处理后棉织物酶解率为74.5％，未处理棉织物酶解率为5.3％。

实施例5

(1)棉织物的预处理

将3g的无色棉织物在110℃，500rpm的条件下溶于10g的离子液体。

(2)棉织物的再生

在以上处理后的棉织物离子液体混合液中加入5倍于离子液体体积的去离子水，搅拌30min，将混合物在4000rpm转速下离心10min，沉淀反复冲洗，直至上清液为无色透明，收集沉淀备用。

(3)再生棉织物的酶解

将1g沉淀完全转移到250ml三角瓶，加入60ml，50mmol pH4.8的醋酸缓冲液，再加入3g的纤维素酶(11U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应24h，在4000rpm条件下离心5-20min分离棉织物残渣和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，为17g/L。

(4)培养基的配置及细菌纤维素的制备

以上述酶解液直接作为碳源，再加入0.3％(w/v)的酵母浸膏和0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，121℃灭菌20min，以6％的接种量加入醋酸杆菌、葡萄糖酸杆菌或者红茶菌，30℃静置培养12天即可得到细菌纤维素膜，其中空白对照为以水溶剂，加入相同浓度的葡萄糖作为碳源。

(5)膜的表征

膜的干重：培养得到的细菌纤维素含有大量的杂质，为了除去这些杂质，首先采用清水冲去部分杂质，接着全部转移至经预先恒重的G₃玻砂坩锅中，在105±0.1℃的烘箱里烘至恒重，经分析天平称重计算，即得到细菌纤维素的绝干重。

细菌纤维素含水率，结晶度和相对拉力表征的样品处理：发酵培养基静置培养12天后，取出细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗多次后，置于1％的NaOH溶液中，80℃保温120min，去除残存的菌体和培养基，用去离子水反复冲洗至中性，此时细菌纤维素膜变为半透明的乳白色。

将干净G₃玻砂坩埚放置105±0.1℃的烘箱里烘至恒重，测得玻砂坩埚的质量，将处理备用的细菌纤维素膜用滤纸吸取膜表面的水分，再放入玻砂漏斗中称重，计算得到细菌纤维素湿膜重。含细菌纤维素膜的玻砂坩埚在105±0.1℃的烘箱烘至恒重，经分析天平称重得到细菌纤维素膜的绝干重。计算可得细菌纤维素膜的含水率。

细菌纤维拉伸强度表征：将处理备用的细菌纤维素膜用剪刀剪切为3cm×1cm的条状，每个样品四条做平行试验，用万能材料测试机测试拉伸强度，设定两个夹具之间的距离为3cm，速度为100mm/min。

BC膜的绝对拉伸强度＝直接测得的拉伸强度

X-射线衍射表征：将处理备用的细菌纤维素冷冻干燥。结晶度测试条件：功率：40kV，300mA；扫描范围5-60°；步宽：0.02°。实验结果见表1。

表1无色棉织物酶解液培养的细菌纤维素膜的表征

实验结果表明：相比于水为溶剂葡萄糖为碳源制备的细菌纤维素膜，酶解液制备的细菌纤维素膜干重大，相对干膜拉力高，结晶度高。因此通过离子液体处理棉织物这种方法得到的碳源是一种优质碳源。

实施例6

(1)棉织物的预处理

将3g的黄色棉织物在110℃，500rpm的条件下溶于10g的离子液体。

(2)棉织物的再生

在以上处理后的棉织物离子液体混合液中加入5倍于离子液体体积的去离子水，搅拌30min，将混合物在4000rpm转速下离心10min，沉淀反复冲洗，直至上清液为无色透明，收集沉淀备用。

(3)再生棉织物的酶解

将1g沉淀完全转移到250ml三角瓶，加入60ml，50mmol pH4.8的醋酸缓冲液，再加入3g的纤维素酶(11U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应24h，在4000rpm条件下离心5-20min分离棉织物残渣和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，为15g/L。

(4)培养基的脱毒及配制

以Ca(OH)₂调酶解液pH值到10.0，30℃水浴里脱毒反应12h，然后过滤并微调pH5.0，加入相对于酶解液质量1％的活性炭室温下反应5-10min，过滤得到酶解液；

以上述脱毒酶解液作为碳源，再加入0.3％(w/v)的酵母浸膏和0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，121℃灭菌20min，以6％的接种量加入醋酸杆菌、葡萄糖酸杆菌或者红茶菌，30℃静置培养12天即可得到细菌纤维素膜，其中空白对照为以水为溶剂，加入相同浓度的葡萄糖作为碳源。

(5)膜的表征

见实施例5，实验结果见表2。

表2有色棉织物酶解液培养的细菌纤维素膜的表征

实验结果表明：相比于水为溶剂葡萄糖为碳源制备的细菌纤维素膜，酶解液制备的细菌纤维素膜干重大，相对干膜拉力低，含水率高。

实施例7

(1)棉织物的酶解

将3g的无色棉织物剪切为小块置于250ml三角瓶中，加入60ml，50mmol pH 4.8的醋酸缓冲液，再加入3g的纤维素酶(20U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应48-72h，在4000rpm条件下离心5-20min分离棉织物残渣和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，为15g/L。

(2)培养基的配置及细菌纤维素的制备

以上述酶解液直接作为碳源，再加入0.3％(w/v)的酵母浸膏和0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，121℃灭菌20min，以6％的接种量加入醋酸杆菌、葡萄糖酸杆菌或者红茶菌，30℃静置培养12天即可得到细菌纤维素膜，其中空白对照为相同浓度的葡萄糖作为碳源。

实施例8

(1)棉织物的酶解

将3g的黄色棉织物剪切为小块置于250ml三角瓶中，加入60ml，50mmol pH 4.8的醋酸缓冲液，再加入3g的纤维素酶(20U/mg)，放于震荡水浴锅中，50℃，100rpm下进行酶解反应48-72h，在4000rpm条件下离心5-20min分离棉织物残渣和酶解液，取酶解液用DNS法测定还原糖浓度，为15g/L。

(2)培养基的脱毒及配制

以Ca(OH)₂调酶解液pH值到10.0，30℃水浴里脱毒反应12h，然后过滤并微调pH5.0，加入相对于酶解液质量1％的活性炭室温下反应5-10min，过滤得到酶解液；

以上述脱毒酶解液作为碳源，再加入0.3％(w/v)的酵母浸膏和0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，121℃灭菌20min，以6％的接种量加入醋酸杆菌、葡萄糖酸杆菌或者红茶菌，30℃静置培养12天即可得到细菌纤维素膜，其中空白对照为以水为溶剂，加入相同浓度的葡萄糖作为碳源。

Claims (7)

1.一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，包括：

(1)棉织物的酶解反应

A.棉织物的离子液体预处理：将棉织物剪切为小块，以1％-20％(w/w)的比例加入到离子液体中，于90℃-130℃处理15min-10h，静置冷却；

离子液体/棉织物混合液再生：加入与离子液体5-10倍体积的去离子水，搅拌再生，然后离心或者过滤，再用去离子水洗涤得到的沉淀或滤渣，直至上清或者滤液至无色；

同时，将离心得到的上清液或者过滤得到的滤液置于蒸馏瓶中，在温度100-170℃下常压蒸馏或者在温度50-150℃和-0.09～-0.1Mpa的真空度条件下减压蒸馏，去除与离子液体共混的水，蒸馏至蒸不出水为止，蒸馏瓶中剩余的即为回收的离子液体；其中，蒸馏过程中冷凝管所用冷却液为10℃以下的冷却液，连接真空泵前的系统中加装一个冷阱，冷阱置于盛有液氮冷却剂的保温瓶中；

酶解：向上述沉淀或滤渣中加入缓冲溶液至固液比为0.005g∶1ml～1g∶10ml，再加入纤维素酶至终浓度为5-1000U/mL，调节pH至4.0-5.5，在40-60℃条件下反应1-24h，离心或者过滤分离未降解棉织物和酶解液，将酶解液于4℃冷藏；

或者B.棉织物无需进行离子液体预处理及再生，而是直接将其加入到缓冲溶液至固液比为0.005g∶1ml～1g∶10ml，再加入纤维素酶至终浓度为5-600U/mL，调节pH至4.0-5.5，在40-60℃条件下反应48-72h，离心或者过滤分离未降解棉织物和酶解液，将酶解液于4℃冷藏；

(2)酶解液制备细菌纤维素

将上述A或B方法制备的酶解液直接作为培养细菌纤维素的培养基，加入相对酶解液0.1-1％(w/v)的酵母膏和0.1-0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，再加入6％-10％细菌纤维素生产菌的种子液，25-30℃静置培养8-28天得到细菌纤维素；

或将步骤(1)中A或B方法制得的酶解液用Ca(OH)₂调酶解液pH到9.5-11.0，25℃-60℃水浴里脱毒反应12h-24h，然后过滤并微调pH至4.5-5.0，加入活性炭室温下搅拌反应5-10min，过滤得到脱毒处理的酶解液；将脱毒处理的酶解液作为培养细菌纤维素的培养基，加入相对酶解液0.1-1％(w/v)的酵母膏和0.1-0.5％(w/v)的胰蛋白胨，配制成培养基，再加入6％-10％细菌纤维素生产菌的种子液，25-30℃静置培养8-28天得到细菌纤维素。

2.根据权利要求1所述的一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的离子液体为(AMIM)Cl、(BMIM)Cl或者LiCl/DMAc。

3.根据权利要求1所述的一种利用废弃棉织物制备纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的棉织物为废弃的无色棉织物或有色棉织物。

4.根据权利要求1所述的一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(1)棉织物在离子液体中的浓度为10-20％(w/w)，棉织物的预处理温度为110℃，处理至棉织物完全溶解。

5.根据权利要求1所述的一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的离心的条件为，速度4000-10000rpm，时间5-20min。

6.根据权利要求1所述的一种利用棉织物制备细菌纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的活性炭的加入量为相对于酶解液质量的1％-6％。

7.根据权利要求1所述的一种利用废弃棉织物制备细菌纤维素的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的细菌纤维素生产菌株为醋酸菌属(Acetobacter sp.)、葡萄糖酸杆菌属(Gluconobacter sp.)、葡糖酸醋杆菌属(Gluconacetobacter sp.)、根瘤菌属(Rhizobium sp.)、八叠球菌属(Sarcina sp.)、假单胞菌属(Pseudomounas sp.)、无色杆菌属(Achromobacter sp.)、产碱菌属(Alcaligenes sp.)、气杆菌属(Aerobacter sp.)、固氮菌属(Azotobacter sp.)、土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)、洋葱假单胞菌(Seudomonas cepacia)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)或红茶菌(kombucha)；其中优选菌株为木醋杆菌(Acetobacter xylinum)或红茶菌。

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