CN102079763B

CN102079763B - 二氧杂双环辛烷化合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN102079763B
Application number: CN200910228857.8A
Authority: CN
Inventors: 苏艳芳; 高秀梅; 丁月旭; 郭浩; 毛浩萍; 刘二伟
Original assignee: Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2009-11-30
Filing date: 2009-11-30
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2029-11-30
Also published as: CN102079763A

Abstract

本发明涉及二氧杂双环辛烷化合物及其制备方法和用途。具体地，本发明涉及式I化合物，其中，R1、R2、和R3各自独立地选自H或式II基团：其中，R4选自H或C_1-4直链或支链烷基，或其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体。本发明还涉及包含所述化合物的提取物，包含所述化合物或提取物的组合物，以及所述化合物或提取物的制备方法。根据本发明的所述化合物或提取物，本发明式I化合物或者包含式I化合物的提取物具有显著抑制儿茶酚胺类神经递质分泌的活性。

Description

二氧杂双环辛烷化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及天然产物化学领域，具体地说涉及一种二氧杂双环辛烷化合物及其制备方法和用途。

背景技术

小蓬草[Conyza canadensis(Linn.)Cronq.]为菊科白酒草属植物小飞蓬的全草，为一、二年生草本，广泛分布于中国各地，作为民间药应用，具有止血、利尿的功效。小篷草常用于清热解毒，祛风止痒，治疗腹泻、痢疾、水肿、口腔炎、中耳炎、结膜炎、风火牙痛、风湿骨痛。

儿茶酚胺(catecholamine，CA)类神经递质，是一类重要的生理物质，包括肾上腺素(epinephrine，E)，去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)和多巴胺(dopamine，DA)。NE、E是由少数脑干神经核、交感神经元、肾上腺髓质细胞合成分泌；DA是NE生物合成的前体，仅由脑部的少数神经核产生。由于外周血液中的CA不能进入血脑屏障，因此外周和中枢神经系统的CA分属两个独立的代谢系统。儿茶酚胺是机体维持正常生命活动的内源性物质，太过或不及均会造成病理性损伤。研究表明，儿茶酚胺类神经递质与心脑血管疾病、精神病、肥胖、免疫系统、泌尿系统等疾病有密切的关系，其分泌失调(例如分泌过高或过低，特别是例如分泌过高)可引起上述疾病。因此通过药物干预儿茶酚胺类神经递质的合成和分泌对于上述疾病具有重要的意义。因此，寻找一种具有能够干预儿茶酚胺类神经递质的合成和分泌进而可用于治疗和/或预防疾病的物质，仍是本领域所需要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够干预CA的合成和分泌物质。本发明人令人意外地发现，从植物小蓬草中提取得到的一类具有二氧杂双环辛烷结构的化合物或其混合物，或者它们的提取物，它们对CA的合成和分泌的作用具有非常有医学价值的效果。本发明基于上述发现而得以完成。

发明概述

为此，本发明第一方面提供了一种式I化合物，

其中，

R1、R2、和R3各自独立地选自H或式II基团：

其中，

R4选自H或C_1-4直链或支链烷基，

或其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体。

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R1为式II基团：

其中，R4选自H或C_1-4直链或支链烷基，或其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体。进一步的，在一个实施方案中，R4为H；在一个实施方案中，R4为C_1-4直链或支链烷基；在一个实施方案中，R4为甲基；在一个实施方案中，R4为乙基；在一个实施方案中，R4为正丙基；在一个实施方案中，R4为异丙基；在一个实施方案中，R4为正丁基；在一个实施方案中，R4为异丁基；在一个实施方案中，R4为仲丁基；在一个实施方案中，R4为叔丁基。

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R2为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R3为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R1和R2各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R1和R3各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R2和R3各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R1、R2和R3各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R3为H，R1、和R2各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其中R2为H，R1、和R3各自独立地为式II基团：

根据本发明第一方面任一项的化合物，其选自：

式(1)，

式(2)，和

式(3)，

本发明第二方面提供了一种提取物，其中包含至少一种本发明第一方面任一项所述的式I化合物或其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体。

根据本发明第二方面任一项的提取物，其中包含至少一种选自以下的化合物：

式(1)，

式(2)，和

式(3)，

根据本发明第二方面任一项的提取物，其中包含以下的化合物：

式(1)，

式(2)，和

式(3)，

根据本发明第二方面任一项的提取物，其中包含任意比例的式I化合物。

根据本发明第二方面任一项的提取物，其中包含式(2)和式(3)化合物，并且式(2)和式(3)化合物在该组合物中的重量比为1∶0.3～1∶0.9，优选1∶0.4～1∶0.8，优选1∶0.5～1∶0.7，优选1∶0.6(即式(2)和式(3)化合物在该组合物中的重量比为5∶3)。

根据本发明第二方面任一项的提取物，其为从植物小蓬草提取得到的。在一个实施方案中，该提取物为从植物小蓬草的全草提取得到的。

根据本发明第二方面任一项的提取物，其为根据本发明第三方面或第四方面任一项所述的方法，从植物小蓬草提取得到的。

本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述化合物的方法，其包括以下步骤：

(1)将植物小蓬草用溶剂(选自水、乙醇、甲醇或它们的一种或多种的混合物)在适宜的温度下(例如10～50℃，例如20～40℃，例如在室温下)浸泡1～72小时(例如2～48小时，例如3～24小时，例如约6小时、约8小时、或约12小时)，然后回流提取0.5～10小时(例如1～8小时，例如2～6小时，例如约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、或约6小时)，收集提取液，提取液减压浓缩，得浓缩物；

(2)将步骤(1)所得浓缩物分散于相当于该浓缩物重量的2-20倍(例如5-15倍，例如约10倍)的水中，形成分散液，然后依次用水饱和的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每次萃取至萃取液近无色，再将正丁醇萃取液减压浓缩，得浓缩物；

(3)将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的2-20倍(例如5-15倍，例如8-12倍，例如约10倍)的水中，滤去不溶物，滤液过大孔树脂柱，用水、10-35％乙醇水溶液或甲醇水溶液、40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脱，收集40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液，减压浓缩得到提取物；

(4)取步骤(3)所得提取物，进行色谱层析(例如硅胶柱层析、凝胶柱层析、聚酰胺柱层析等，或者它们的组合)分离，得到本发明的式I化合物；

(5)任选的，将步骤(4)所得的式I化合物通过化学反应或分离方法或其组合进一步处理，得到式I化合物的其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体。

根据本发明第三方面任一项所述的方法，其还包括以下步骤：

(4-1)取步骤(3)所得提取物进行硅胶柱层析，用二氯甲烷∶甲醇＝(92∶8)、(83∶17)、(70∶30水饱和)三个梯度进行洗脱，每500～1000mL接收一个流分，共接收41个流分；将其中的流分10～11进行凝胶柱层析，得到次级流分5～11；同时将流分12～13进行凝胶柱层析，得到次级流分8～9；将以上分别得到的次级流分5～11和次级流分8～9合并，将该合并液进行聚酰胺柱层析(三氯甲烷-甲醇)；将聚酰胺柱层析得到的流分4～5再进行凝胶柱层析，得到化合物(1)；将聚酰胺柱层析得到的流分2～3经过一次凝胶柱层析和一次硅胶柱层析(层析条件：三氯甲烷-甲醇)，分别得到化合物(1)(即式(1)化合物，下同)、以及式(2)化合物和式(3)化合物的混合物；

(4-2)任选的，将步骤(4-1)所得的式(2)化合物和式(3)化合物的混合物进一步进行色谱层析，可以分别得到式(2)化合物、以及式(3)化合物。

本发明第四方面提供了制备本发明第二方面任一项所述提取物的方法，其包括以下步骤：

(3)将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的2-20倍(例如5-15倍，例如8-12倍，例如约10倍)的水中，滤去不溶物，滤液过大孔树脂柱，用水、10-35％乙醇水溶液或甲醇水溶液、40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脱，收集40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液，减压浓缩得到本发明第三方面任一项的提取物。

根据本发明第四方面任一项所述的方法，其还包括以下步骤：

(4)取步骤(3)所得提取物，进行色谱层析(例如硅胶柱层析、凝胶柱层析、聚酰胺柱层析等，或者它们的组合)分离，得到包含本发明式I化合物的本发明第三方面任一项的提取物；

(5)任选的，将步骤(4)所得的包含本发明式I化合物的本发明第三方面任一项的提取物通过化学反应或分离方法或其组合进一步处理，得到包含本发明式I化合物的其药学可接受的溶剂合物、水合物、异构体、酯或者该酯的药学可接受的盐、溶剂合物、水合物、异构体的本发明第三方面任一项的提取物。

(4-1)取步骤(3)所得提取物进行硅胶柱层析，用二氯甲烷∶甲醇＝(92∶8)、(83∶17)、(70∶30水饱和)三个梯度进行洗脱，每500～1000mL接收一个流分，共接收41个流分；将其中的流分10～11进行凝胶柱层析，得到次级流分5～11；同时将流分12～13进行凝胶柱层析，得到次级流分8～9；将以上分别得到的次级流分5～11和次级流分8～9合并，将该合并液进行聚酰胺柱层析(三氯甲烷-甲醇)；将聚酰胺柱层析得到的流分4～5再进行凝胶柱层析，得到包含本发明化合物(1)的本发明第三方面任一项的提取物；将聚酰胺柱层析得到的流分2～3经过一次凝胶柱层析和一次硅胶柱层析(层析条件：三氯甲烷-甲醇)，分别得到包含本发明化合物(1)的本发明第三方面任一项的提取物、以及包含本发明式(2)化合物和式(3)化合物的混合物的本发明第三方面任一项的提取物；

(4-2)任选的，将步骤(4-1)所得的包含本发明式(2)化合物和式(3)化合物的混合物的本发明第三方面任一项的提取物进一步进行色谱层析，可以分别得到包含本发明式(2)化合物、式(3)化合物的本发明第三方面任一项的提取物。

在本发明第三方面或第四方面所述方法的一个实施方案中，该方法包括以下步骤：

(1)将干燥的小蓬草全草用乙醇水溶液或甲醇水溶液在室温下浸泡，然后回流提取，收集提取液，提取液减压浓缩得膏状物；

(2)将膏状物分散于相当于膏状物质量5-15倍的水中制成分散液，依次用水饱和的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每次萃取至萃取液近无色，正丁醇萃取液减压浓缩得浓缩物；

(3)将浓缩物溶解于相当于浓缩物质量8-12倍的水中，滤去不溶物；过大孔树脂柱，用水、10-35％乙醇水溶液或甲醇水溶液、40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脱，收集40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液，减压浓缩得到提取物(在本发明上下文中，可以以符号CCB50表示)；

(4)取CCB50样品，进行硅胶柱层析，用二氯甲烷∶甲醇＝(92∶8)、(83∶17)、(70∶30水饱和)三个梯度进行洗脱，每500～1000mL接收一个流分，共接收41个流分；将其中的流分10～11进行凝胶柱层析，得到次级流分5～11；同时将流分12～13进行凝胶柱层析，得到次级流分8～9；将以上分别得到的次级流分5～11和次级流分8～9合并，将该合并液进行聚酰胺柱层析(三氯甲烷-甲醇)；得到的流分4～5再进行凝胶柱层析，得到化合物(1)；流分2～3经过一次凝胶柱层析和一次硅胶柱层析(层析条件：三氯甲烷-甲醇)，得到化合物(1)、化合物(2)和(3)5∶3的混合物，或者得到包含式(1)、(2)、或(3)化合物的一种或多种的提取物。

本发明第五方面提供了一种组合物，其包含治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述化合物或者第二方面任一项所述提取物，以及任选的药学可接受的载体或赋形剂。

本发明第六方面提供了本发明第一方面任一项所述化合物或者第二方面任一项所述提取物在制备用于治疗和/或预防与儿茶酚胺类神经递质分泌失调(例如过高或过低，特别是例如过高)有关的疾病的产品(例如，药物)中的用途。

本发明第六方面还提供本发明第一方面任一项所述化合物或者第二方面任一项所述提取物在制备用于在哺乳动物(例如人)中抑制儿茶酚胺类神经递质过度分泌的产品(例如，药物)中的用途。

本发明第六方面还提供了本发明第一方面任一项所述化合物或者第二方面任一项所述提取物在制备用于治疗和/或预防心脑血管疾病的产品(例如，药物)中的用途。所述的心脑血管疾病例如高血压、高血脂、冠心病、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化甚至是慢性心衰；特别地，所述的心脑血管疾病例如高血压。

本发明第六方面还提供了本发明第一方面任一项所述化合物或者第二方面任一项所述提取物在制备用于治疗和/或预防神经疾病、肥胖、免疫系统疾病、或泌尿系统疾病产品中的用途。所述的神经疾病、肥胖、免疫系统疾病、或泌尿系统疾病例如帕金森综合症、阿尔兹海默综合症、抑郁症、肥胖症、糖尿病等；特别地，所述的精神病、肥胖、免疫系统疾病、或泌尿系统疾病例如帕金森综合症和糖尿病。

本发明第七方面提供了一种在有需要的哺乳动物(例如，人)中治疗和/或预防与儿茶酚胺类神经递质分泌失调(例如过高或过低，特别是例如过高)有关的疾病的方法，或者在有需要的哺乳动物(例如，人)中抑制儿茶酚胺类神经递质过度分泌的方法，或者在有需要的哺乳动物(例如，人)中治疗和/或预防心脑血管疾病、精神病、肥胖、免疫系统疾病、或泌尿系统疾病的方法，所述方法包括给有需要的哺乳动物施用治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述的式I化合物或者本发明第二方面任一项所述提取物或者本发明第五方面任一项所述药物组合物。

发明详述：

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

如本文使用的，短语“C_1-4直链或支链烷基”是指具有指定数目碳原子的取代或未取代的烷基基团，其实例包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基，该烷基可任选被一个或多个选自以下的基团取代：羟基、卤素(例如氟、氯、溴、碘)、硝基、氰基等。

如本文使用的，短语“与儿茶酚胺类神经递质分泌失调有关的疾病”或“与儿茶酚胺类神经递质分泌失调(例如过高或过低，特别是例如过高)有关的疾病”是指例如高血压、高血脂、冠心病、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化甚至是慢性心衰等心脑血管疾病以及帕金森综合症、阿尔兹海默综合症、抑郁症、肥胖症、糖尿病等神经及内分泌疾病。

根据本发明，可以容易地通过例如提取方法得到本发明第一方面任一项的式I化合物，或者包含式I化合物的本发明第二方面任一项的提取物。另外，根据本领域技术人员已有的知识，结合现有技术和本发明公开的精神和内涵，也可以通过化学合成的方法制备得到本发明第一方面任一项的式I化合物。

在通过提取或者化学合成制备本发明第一方面任一项的式I化合物或者本发明第二方面任一项的提取物的方法中，操作过程中所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。操作过程中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以结合已有知识，根据本发明第三方面或者第四方面任一项的方法，获得本发明第一方面未具体列举的其它式I化合物，或者获得本发明第一方面和第二方面未具体示例的其它可能的提取物。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。

本发明式I化合物还包括其异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯，本发明式I化合物以及它的异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。对于本发明第二方面的提取物，为了本发明的目的，在本文中也欲意涵盖上述的精神和范围。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。对于本发明第二方面的提取物，为了本发明的目的，在本文中也欲意涵盖上述的精神和范围。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。对于本发明第二方面的提取物，为了本发明的目的，在本文中也欲意涵盖上述的精神和范围。例如，在以提取物给予哺乳动物的情况下，其使用量可以按该提取物中所包含的式I化合物折算，即给予的提取物的量以式I化合物计，可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。对于本发明第二方面的提取物，为了本发明的目的，在本文中也欲意涵盖上述的精神和范围。

本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为1-5000mg，优选的单元剂型含有10-500mg，更优选的单元剂型含有20-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott，Ed.，Methods in Cell Biology，Volume XIV，Academic Press，New York，N.Y.(1976)，p.33。

本发明人惊奇地发现，本发明式I化合物或者包含式I化合物的提取物具有显著抑制儿茶酚胺类神经递质分泌的活性。

附图说明

图1描绘了化合物(1)100μM对不同刺激剂诱导牛肾上腺髓质细胞CA分泌的影响数据用细胞分泌CA量占细胞总CA量的百分比表示。与相应的刺激剂组相比，^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。

图2描绘了式(2)化合物和式(3)化合物以5∶3的混合物(10^-4mol·L^-1)对不同刺激剂诱导牛肾上腺髓质细胞CA分泌的影响数据用细胞分泌CA量占细胞总CA量的百分比表示。与相应的刺激剂组相比，^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。

图3描绘了CCB50(50μg/mL)对不同刺激剂诱导牛肾上腺髓质细胞CA分泌的影响数据用细胞分泌CA量占细胞总CA量的百分比表示。与相应的刺激剂组相比，^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01。

具体实施方式

下面通过具体的实施例和实验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和实验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

实施例1——式I化合物或包含它的提取物的制备

小蓬草全草约15kg，先用95％乙醇室温下浸泡2周，收集提取液；将冷提取后的药材用95％乙醇浸泡2h，然后热回流加热2h，收集提取液；残留的药渣加入60％乙醇浸泡2h后，热回流提取2h，收集提取液；最后再用60％乙醇热回流提取一次。将收集得到的提取液减压浓缩蒸去乙醇，直至提取液没有乙醇味为止。共得到2087g的固体提取物，加入蒸馏水得到浓度约为20％左右的溶液。依次用水饱和过的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每次萃取至萃取液近无色，得正丁醇萃取物304g。

取正丁醇萃取物274g，用适量蒸馏水溶解，滤去不溶物。上D101大孔树脂柱，用H₂O，30％EtOH，50％EtOH，70％EtOH和95％EtOH梯度洗脱，回收溶剂，得到50％EtOH部分(即本发明提取物，以CCB50表示)共43g。

取CCB50样品40g，进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇-水＝92∶8、83∶17、70∶30∶水饱和三个梯度进行洗脱，每500～1000mL接收一个流分，共接收41个流分。其中流分10～11进行凝胶柱层析所得次级流分5～11，与流分12～13进行凝胶柱层析所得次级流分8～9合并，进行聚酰胺柱层析(三氯甲烷-甲醇)：得到的流分4～5再进行凝胶柱层析，得到化合物(1)；流分2～3经过一次凝胶柱层析和一次硅胶柱层析(层析条件：三氯甲烷-甲醇)，分别得到化合物(1)、以及式(2)化合物和式(3)化合物的混合物(经检测，在该混合物中化合物(2)和(3)的重量比为5∶3)。

实施例2——式(1)化合物的表征

化合物(1)为浅黄色无定形粉末，根据高分辨ESI-MS质谱中分子离子峰[M-H]^-m/z 571.1452，结合NMR氢、碳谱确定其分子式为C₂₈H₂₈O₁₃。

化合物(1)氢谱中的信号δ7.54(1H，d，J＝16.0Hz，H-7′)，6.54(1H，d，J＝16.0Hz，H-8′)，7.49(1H，d，J＝15.5Hz，H-7″)，6.35(1H，d，J＝16.0Hz，H-8″)提示分子中有两个反式双键，信号δ7.32(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.78(1H，d，J＝8.5Hz，H-5′)，7.10(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，7.06(1H，d，J＝2.0Hz，H-2″)，6.77(1H，d，J＝8.5Hz，H-5″)，7.02(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6″)提示分子中有两个1，3，4-三取代苯环，信号δ3.83(3H，s)提示分子中有一个甲氧基，综合以上三点，结合碳谱和相应的二维谱图相关信号，说明分子中含有一个咖啡酰基和一个阿魏酰基。

综合使用氢谱、碳谱、COSY、HMQC、HMBC二维谱，其余的氢谱、碳谱信号提示分子中有一个甲酯化的羧基(δ_H3.72，3H，s，δ_C167.3和52.6)，一个氧甲基(δ_H5.35和4.36，各1H，dd及δ_C62.8)，以及一个C-2和C-3氧化的6，8-二氧杂-双环[3.2.1]辛烷，HMBC谱中H-3(δ5.37)和C-9′(δ165.9)之间的相关峰说明阿魏酰基通过酯基连接在C-3，H-9(δ5.35和4.36)和C-9″(δ166.7)之间的相关峰说明咖啡酰基通过酯基连接在C-9。通过J-HMBC谱，测定以下³J_CH耦合常数C-7和H-2(³J_CH＝4.9Hz)，C-1和H-3(³J_CH＝5.1Hz)，C-5和H-3(³J_CH＝5.0Hz)，C-3和H-1(³J_CH＝5.0Hz)，C-2和H-7(³J_CH＝5.6Hz)确定C-1、C-2、C-3、C-7的构型；同时NOESY谱中H-2(δ4.13)和H-4a(δ2.37)、H-9a(δ5.35)和H-8′(δ6.54)之间的NOE相关峰进一步确证化合物(1)的结构为(7R)-甲基7-咖啡酰氧基甲基-2-羟基-3-阿魏酰氧基-6，8-二氧-二环[3.2.1]辛烷-5-羧基酯。

化合物(1)的波谱数据如下：

[α]³⁰ _D+126.8(c 0.97，MeOH)；IR(KBr)v_max 3423，1690，1690，1631，1514，1273，1156cm^-1。

¹H NMR(DMSO-d₆)：4.55(dd，J＝4.5，4.0Hz，H-1)，4.13(dd，J＝5.0，5.5Hz，H-2)，5.67(brs，OH-2)，5.37(br dd，J＝5.5，5.5Hz，H-3)，2.37(dd，J＝15.5，5.5Hz，H_a-4)，2.11(br d，J＝15.0，Hz，H_b-4)，4.42(ddd，J＝9.0，2.5，3.0Hz，H-7)，5.35(dd，J＝9.5，12.5Hz，H_a-9)，4.36(dd，J＝2.5，12.5Hz，H_b-9)，3.72(s，COOCH₃)；3-位取代的阿魏酰基：7.32(d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.78(d，J＝8.5Hz，H-5′)，7.10(dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，7.54(d，J＝16.0Hz，H-7′)，6.54(d，J＝16.0Hz，H-8′)，3.83(s，OCH₃)；9-位取代的咖啡酰基：7.06(d，J＝2.0Hz，H-2″)，6.77(d，J＝8.5Hz，H-5″)，7.02(dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6″)，7.49(d，J＝15.5Hz，H-7″)，6.35(d，J＝16.0Hz，H-8″)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)：76.3(C-1)，65.6(C-2)，65.9(C-3)，37.6(C-4)，102.7(C-5)，79.0(C-7)，62.8(C-9)，167.3(C-10)，52.6(CH₃)；3-位取代的阿魏酰基：125.6(C-1′)，110.6(C-2′)，148.0(C-3′)，149.4(C-4′)，115.5(C-5′)，123.4(C-6′)，144.8(C-7′)，114.9(C-8′)，165.9(C-9′)，55.6(OCH₃)；9-位取代的咖啡酰基：125.5(C-1″)，115.0(C-2″)，145.6(C-3″)，148.5(C-4″)，115.8(C-5″)，121.4(C-6″)，145.4(C-7″)，113.8(C-8″)，166.7(C-9″)。

HRESIMS：m/z 571.1452(计算值：[M-H]^- C₂₈H₂₇O₁₃，571.1457)。

实施例3——式(2)化合物的表征

化合物(2)的波谱数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆)：4.57(dd，J＝4.5，4.0Hz，H-1)，4.15(ddd，J＝5.0，5.0，5.0Hz，H-2)，5.67(d，J＝5.0Hz，2-OH)，5.39(br dd，J＝5.5，5.5Hz，H-3)，2.39(dd，J＝15.0，5.5Hz，H_a-4)，2.13(br d，J＝15.0Hz，H_b-4)，4.44(ddd，J＝9.0，3.5，2.5Hz，H-7)，5.33(dd，J＝12.0，9.5Hz，H_a-9)，4.41(dd，J＝12.0，2.5Hz，H_b-9)，3.74(s，CH₃)；3-位取代的阿魏酰基：7.36(d，J＝1.5Hz，H-2′)，6.81(d，J＝8.0Hz，H-5′)，7.13(dd，J＝8.5，2.0Hz，H-6′)，7.57(d，J＝16.0Hz，H-7′)，6.53(d，J＝16.0Hz，H-8′)，3.83(s，OCH₃)；9-位取代的阿魏酰基：7.31(d，J＝2.0Hz，H-2″)，6.79(d，J＝8.5Hz，H-5″)，7.11(dd，J＝8.5，2.0Hz，H-6″)，7.55(d，J＝16.0Hz，H-7″)，6.59(d，J＝16.0Hz，H-8″)，3.83(s，OCH₃)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)：76.2(C-1)，65.5(C-2)，65.8(C-3)，37.5(C-4)，102.6(C-5)，79.0(C-7)，62.8(C-9)，167.3(C-10)，52.5(CH₃)；3-位取代的阿魏酰基：125.5(C-1′)，110.1(C-2′)，147.9(C-3′)，149.4(C-4′)，115.5(C-5′)，123.2(C-6′)，145.2(C-7′)，114.9(C-8′)，165.8(C-9′)，55.6(OCH₃)；9-位取代的阿魏酰基：125.5(C-1″)，110.7(C-2″)，147.9(C-3″)，149.4(C-4″)，115.5(C-5″)，123.2(C-6″)，144.7(C-7″)，114.3(C-8″)，166.7(C-9″)，55.6(OCH₃)。

实施例4——式(3)化合物的表征

化合物(3)的波谱数据如下：

¹H NMR(DMSO-d₆)：4.76(dd，J＝4.5，4.0Hz，H-1)，5.06(dd，J＝5.0，5.0Hz，H-2)，4.28(ddd，J＝5.0，5.0，5.0Hz，H-3)，5.36(d，J＝4.5Hz，3-OH)，2.30(dd，J＝14.5，5.0Hz，H_a-4)，2.20(br d，J＝14.5Hz，H_b-4)，4.37(ddd，J＝8.0，4.0，4.0Hz，H-7)，5.01(dd，J＝11.5，8.0Hz，H_a-9)，4.84(dd，J＝11.5，4.0Hz，H_b-9)，3.75(s，CH₃)；2-位取代的阿魏酰基：7.28(d，J＝1.5Hz，H-2′)，6.77(d，J＝8.5Hz，H-5′)，7.13(dd，J＝8.5，2.0Hz，H-6′)，7.63(d，J＝16.0Hz，H-7′)，6.40(d，J＝16.0Hz，H-8′)，3.82(s，OCH₃)；9-位取代的阿魏酰基：7.28(d，J＝1.5Hz，H-2″)，6.80(d，J＝8.0Hz，H-5″)，7.06(dd，J＝8.5，2.0Hz，H-6″)，7.53(d，J＝16.0Hz，H-7″)，6.51(d，J＝16.0Hz，H-8″)，3.80(s，OCH₃)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)：74.2(C-1)，69.5(C-2)，61.2(C-3)，40.0(C-4)，103.3(C-5)，78.5(C-7)，62.8(C-9)，167.3(C-10)，52.5(CH₃)；2-位取代的阿魏酰基：125.4(C-1′)，110.1(C-2′)，147.9(C-3′)，149.4(C-4′)，115.4(C-5′)，122.8(C-6′)，145.6(C-7′)，114.0(C-8′)，165.2(C-9′)，55.6(OCH₃)；9-位取代的阿魏酰基：125.4(C-1″)，111.5(C-2″)，147.9(C-3″)，149.4(C-4″)，115.6(C-5″)，123.1(C-6″)，145.2(C-7″)，114.1(C-8″)，166.5(C-9″)，55.6(OCH₃)。

实施例5——本发明化合物或提取物抑制儿茶酚胺分泌的活性

化合物(1)、化合物(2)和(3)以5∶3的混合物的抑制儿茶酚胺的分泌活性实验方法和结果如下：

取新鲜的牛肾上腺用组织切片器切取牛肾上腺髓质，用胶原酶消化成单个细胞后，以每孔5×10⁵个细胞的密度接种于24孔细胞培养板，培养于含10％新生牛血清、100U·ML^-1青霉素、100mg·L^-1链霉素、0.25mg·L^-1两性酶素B和3μmol·L^-1阿糖胞苷的MEM培养基中。置于37℃含5％CO2/95％空气细胞培养箱中培养3～7d内使用。将培养的牛肾上腺髓质细胞用KRP缓冲液冲洗3次后于37℃水浴中孵育，分别加入500μL反应液(含药物及相应刺激剂的KRP缓冲液或含药的高K⁺缓冲液)。10min后取出反应液，加入2000μL 2mol·L^-1高氯酸溶液(PCA)终止反应。采用氢氧化铝吸附法浓缩提纯分泌至反应液中的肾上腺素和去甲肾上腺素，HPLC-ECD检测肾上腺素和去甲肾上腺素的量，两者之和作为细胞分泌CA的量。反应结束后，取对照孔细胞，用2000μL去离子水洗刮收集细胞悬液，加入500μL 2mol·L^-1PCA。3000r·min^-1离心10min后，取上清液250μL，加入1800μL水和450μL 2mol·L^-1PCA后进行铝吸附，用HPLC检测肾上腺素和去甲肾上腺素，两者之和的10倍作为细胞总CA量。数据用细胞分泌CA量占细胞总CA量的百分比表示。数据用均值±标准差表示。使用SPSS 11.0软件包进行单因素方差分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

本发明化合物或提取物对牛肾上腺髓质细胞中不同刺激剂诱导的CA分泌的影响

试验样品：化合物(1)、化合物(2)和(3)5∶3的混合物和CCB50。

300μmol·L^-1乙酰胆碱(Ach)、100μmol·L^-1藜芦定碱(Ver)或56mmol·L^-1K⁺溶液均能刺激牛肾上腺髓质细胞中CA的分泌。浓度均为100μmol·L^-1的化合物(1)、化合物(2)和(3)5∶3的混合物、以及50μg/mL的CCB50均能显著抑制由Ach，Ver和56m mol·L^-1K⁺溶液引起的CA分泌，结果如以下表1所示以及图1、2、3。

表1 三种不同物质对不同刺激剂引起CA分泌的抑制率

CA分泌(特别是CA分泌过高)与本发明所述疾病例如心脑血管疾病等有密切关系。CA分泌增加，可提高中枢神经系统兴奋性，增快心率，加强心肌收缩，增加心输出量，升高血压，减少内脏血流，增加骨骼肌血液，升高血糖，促进脂肪分解和氧化等。各种应激是造成CA合成分泌增加的主要原因，长期的应激会造成一系列的免疫功能异常，同时加重原发性疾病，如高血压、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、糖尿病以及慢性心衰等。

从活性试验结果可见，本发明中的成分能显著抑制牛肾上腺髓质嗜铬细胞中儿茶酚胺的分泌，具有对心脑血管疾病、神经疾病、肥胖、免疫系统疾病、或泌尿系统疾病的治疗作用。

实施例6

口服液的制备

将小蓬草提取物2.5g加入400毫升蒸馏水中溶解，滤过，加入适量单糖浆、苯甲酸钠，再加蒸馏水至1000毫升，冷藏，滤过，封装于10毫升安瓿中，100℃灭菌30分钟，即得。

实施例7

片剂的制备

取小蓬草提取物(CCB50)4g粉碎后，加入淀粉150g、乳糖50g、适量乙基纤维素、交联聚维酮，用50％-95％的乙醇制颗粒，干燥后，整粒，加入剩余量的交联聚维酮及硬酯酸镁，压片(片重100mg)，即得。

实施例8

胶囊剂的制备

将小蓬草提取物4g(CCB50)粉碎后，加入20g半乳糖，加入适量硬酯酸镁，混匀后过200目筛，灌胶囊(内容物重100mg)，即得。

实施例9

片剂的制备

取实施例1所得化合物(1)0.1g，加入淀粉20g、乳糖10g、适量乙基纤维素、交联聚维酮，用50％-95％的乙醇制颗粒，干燥后，整粒，加入剩余量的交联聚维酮及硬酯酸镁，压片(片重100mg)，即得。

实施例10

胶囊剂的制备

将实施例1所得化合物(2)和化合物(3)的混合物(5∶3)0.05g，加入半乳糖5g、适量硬酯酸镁，装入胶囊(内容物重100mg)，即得。

Claims

1.制备式(1)化合物的方法，其包括以下步骤：

(1)将植物小蓬草用溶剂在适宜的温度下浸泡1～72小时，然后回流提取0.5～10小时，收集提取液，提取液减压浓缩，得浓缩物；其中，所述溶剂选自水、乙醇、甲醇中的一种，或者多种的混合物；

(2)将步骤(1)所得浓缩物分散于相当于该浓缩物重量的2-20倍的水中，形成分散液，然后依次用水饱和的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每次萃取至萃取液近无色，再将正丁醇萃取液减压浓缩，得浓缩物；

(3)将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的2-20倍的水中，滤去不溶物，滤液过大孔树脂柱，用水、10-35％乙醇水溶液或甲醇水溶液、40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脱，收集40-60％乙醇水溶液或甲醇水溶液，减压浓缩得到提取物；

(4)取步骤(3)所得提取物，进行色谱层析分离，得到式(1)化合物，

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述适宜的温度为10～50℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述适宜的温度为20～40℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述适宜的温度为室温。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述浸泡的时间为2～48小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述浸泡的时间为3～24小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述浸泡的时间为6小时、8小时或12小时。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述回流提取的时间为1～8小时。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述回流提取的时间为2～6小时。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，所述回流提取的时间为2小时、3小时、4小时、5小时或6小时。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，将步骤(1)所得浓缩物分散于相当于该浓缩物重量的5-15倍的水中。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，将步骤(1)所得浓缩物分散于相当于该浓缩物重量的10倍的水中。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的5-15倍的水中。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的8-12倍的水中。

15.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，将步骤(2)所得浓缩物溶解于相当于该浓缩物重量的10倍的水中。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中，所述色谱层析为硅胶柱层析、凝胶柱层析、聚酰胺柱层析、或者它们的组合。

17.制备包含至少一种权利要求1中的式(1)化合物或者式(2)和(3)所示化合物的提取物的方法，其包括权利要求1至15任一项中的步骤(1)至(3)；

18.一种提取物，其由权利要求17所述的方法制得。

19.权利要求18的提取物在制备用于治疗和/或预防与儿茶酚胺类神经递质分泌升高有关的疾病的产品中的用途。

20.权利要求18的提取物在制备用于在哺乳动物中抑制儿茶酚胺类神经递质分泌升高的产品中的用途。

21.根据权利要求20所述的用途，其中，所述哺乳动物是人。

22.权利要求18的提取物在制备用于治疗和/或预防心脑血管疾病的产品中的用途。

23.根据权利要求22所述的用途，其中，所述的心脑血管疾病为高血压、高血脂、冠心病、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化或慢性心衰。

24.根据权利要求22所述的用途，其中，所述的心脑血管疾病为高血压。

25.权利要求18的提取物在制备用于治疗和/或预防精神病、肥胖、免疫系统疾病或泌尿系统疾病的产品中的用途。

26.权利要求18的提取物在制备帕金森综合症、阿尔兹海默综合症、抑郁症、肥胖症或糖尿病的产品中的用途。

27.根据权利要求20至26任一项所述的用途，其中，所述产品为药物。