CN102070646B - 一种黄独素b的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄独素B的提取方法，包括黄药子丙酮回流提取，提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏；浸膏与硅胶拌样，加入石油醚提取，滤渣蒸干，加入氯仿提取，提取液蒸干得氯仿部位；氯仿部位与硅胶拌样，上柱，用氯仿-甲醇体积比为98:2的混合液洗脱， 分段收集洗脱液；洗脱液回收溶剂，用丙酮溶解、析晶，得结晶，滤液再上柱，用氯仿-甲醇体积比为99:1的混合液洗脱，洗脱液回收溶剂，用丙酮溶解、析晶，结晶合并，得黄独素B。本发明通过对提取工艺及洗脱液的选择，对黄独素B进行提取，所得的提取物中，不含其他物质，不用进一步进行分离纯化。本方法操作较简单，能够有效地提取黄独素B，对进一步研究其药理及药效具有重大意义。

Description

一种黄独素B的提取方法

技术领域

本发明涉及一种中药有效成分的提取方法，具体涉及一种黄药子有效成分——黄独素B的提取方法，属于中药提取技术领域。

背景技术

黄药子为薯蓣科薯蓣属植物黄独Dioscorea Bulbifera L.的干燥块茎，又名黄药、黄独、木药子、黄药根、黄药脂、山慈菇等，在世界范围分布广泛，我国主产于湖北、湖南、江苏等地，而河南、山东、浙江、安徽、福建等省亦有生产。其性凉味苦，具有散结消瘿、清热解毒、凉血降火之功效。黄药子中含有黄独萜酯A（diosbulbine A）、皂甙、鞣质和淀粉、黄独素 B、 C、薯蓣皂甙元等成分，其药用历史悠久，历代本草对其治疗瘿疾、血证、外科诸证的良效均有详尽记载。现代临床上常用于治疗甲状腺疾病及各种癌症，糖尿病等，均取得一定的疗效，但由于肝、肾毒性，限制了其广泛应用。研究表明，黄独的化学成分具有多种药理作用，如抗炎、抑菌、止血、抗癌、抗病毒等，其氯仿部位的黄独素B是其抗炎活性成分之一，对大鼠角叉菜胶性足跖肿及大鼠棉球肉芽肿有显著的抑制作用，同时也是抗肿瘤活性成分，尤其对于甲状腺腺瘤有独特的疗效。现今，黄药子有效成分的提取方法较少，能够单独提取黄独素B的方法更是少见，因此，寻找一种能够简单、有效地提取黄独素B的方法对更加深入的研究其药理作用具有重大意义。

发明内容

本发明针对上述不足，提供了一种黄药子有效成分——黄独素B的提取方法，本方法操作简单，所得提取物中黄独素B的纯度高。

本发明是通过以下措施实现的：

一种黄独素B的提取方法，其特征是包括以下步骤：

（1） 将黄药子加入丙酮中，回流提取2次，合并提取液待用；

（2） 将上述提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏，然后浸膏加入硅胶拌样，干燥；

（3） 将干燥后的硅胶加入石油醚，回流提取3次，过滤将滤渣减压蒸干，然后加入氯仿回流提取3次，过滤、合并滤液，将滤液蒸干得氯仿部位； 

（4） 将氯仿部位用乙醇溶解，与硅胶拌样，上硅胶柱，用氯仿-甲醇体积比为98:2的混合液洗脱， 分段收集洗脱液； 

（5） 将分段收集的洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液进行抽滤，滤饼洗涤得结晶，滤液合并进入下一步；

（6） 将上述步骤（5）的滤液与硅胶拌样，上柱，用氯仿-甲醇体积比为99:1的混合液洗脱，分段收集洗脱液，洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液抽滤、滤饼洗涤得结晶，与步骤（5）的结晶合并，得黄独素B。

上述步骤（3）中，石油醚提取的目的是脱脂，目标成分还在滤渣中；步骤（4）和（6）中，洗脱过程中不同成分会依次被洗脱下来，应小体积分段收集以确保分离效果，然后依照薄层层析色谱确定目标物在那一段；步骤（5）和（6）中，黄独素B在丙酮中容易析出结晶，因此洗脱液蒸干后用丙酮溶解静置，随丙酮慢慢挥发便会有黄毒素B结晶析出。

上述步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的4-7倍，回流提取时，每次提取2-3h。

进一步的，上述步骤（1）中，丙酮的加入量优选为黄药子质量的5倍。

上述步骤（2）中，浸膏和硅胶的质量比为1:1，将拌样后的硅胶在50℃下减压干燥。

上述步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的2-5倍，回流提取时每次提取1-2h；氯仿的加入量为滤渣质量的5-8倍，每次回流提取的时间为2-3h。

进一步的，上述步骤（3）中，石油醚的用量优选为硅胶质量的3倍；氯仿的加入量优选为滤渣质量的6倍

上述步骤（4）中，所用的硅胶为柱层析硅胶，氯仿部位与柱层析硅胶的质量比为1:1。

上述步骤（5）和（6）中，加入丙酮的量至少应完全溶解洗脱液回收溶剂后所留下的残留物，其具体量可根据情况进行调整。

黄药子中的有效成分很多，在提取时一般会将很多药物有效成分同时提取出来，如果需要单独研究某一成分还要进行进一步的分离纯化，不但浪费时间还不好分离。本发明通过对提取工艺及提取液、洗脱液的选择，对黄药子的有效成分进行提取，所得的提取物中，全部为黄独素B，不含其他物质，所得黄独素B纯度高，不用进一步进行分离纯化。本方法操作较简单，能够有效地提取黄独素B，对进一步研究其药理及药效具有重大意义。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行阐述。

本发明实施例中所用的试药与仪器如下：

黄药子药材经本院中药资源室林慧彬研究员鉴定为黄独Dioscorea Bulbifera L.的干燥块茎。柱层析硅胶（100-200目）、薄层层析硅胶G均为青岛海洋化工有限公司生产，丙酮、石油醚、氯仿、甲醇等试剂均为分析纯。

晶玻HH-S4数显电子恒温水浴锅，BP211D赛多利斯电子天平，XT3A显微熔点测定仪（北京市科仪电光仪器厂）。

实施例1

取黄药子药材1.75kg，加入5倍量的丙酮，水浴加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并浓缩至无丙酮味，得浸膏47g，加入等量硅胶拌样，50℃减压干燥。将干燥后的硅胶样品加入3倍量的石油醚，水浴加热回流提取3次，每次1小时，提取液过滤。将滤渣减压蒸干，加入6倍量氯仿，加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并蒸干，得氯仿部位10g，用少量95乙醇加热溶解，加入等量柱层析硅胶拌样。将氯仿部位上硅胶柱（4cm×13cm），氯仿-甲醇（98:2体积比）洗脱，因为洗脱过程中不同成分会依次被洗脱下来，所以采用小体积分段收集洗脱液的方式来进行洗脱，以确保分离效果，然后依照薄层层析色谱确定目标物在那一段。本次试验以每150ml为一段，分段收集洗脱液，所得洗脱液共1950ml。各洗脱液分别回收溶剂至干得残留物，因为黄毒素B易溶于丙酮中，所以残留物用丙酮溶解、静置析晶，随着丙酮的挥发，有些洗脱液中析出大量的无色结晶，将这些洗脱液进行抽滤、丙酮洗涤，共得结晶1.5g。将析出结晶的抽滤液合并，用等质量柱层析硅胶拌样，上硅胶柱（2.5cm×16cm），氯仿-甲醇（99:1体积比）洗脱，以每100ml为一段，分段收集洗脱液，每段洗脱液分别回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置，随着丙酮的挥发析出无色方柱状结晶共50mg。

用薄层层析色谱法（氯仿-甲醇（13:1））观察分离结果，所得结晶均为同一物质，香草醛-硫酸显色为单一紫红色斑点，Rf值为0.5。测得其熔点为285-288℃，核磁共振波谱数据与文献中黄独素B的一致，确定该化合物为黄独素B。

实施例2

取黄药子药材1.75kg，加入7倍量的丙酮，水浴加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液合并浓缩至无丙酮味，得浸膏，浸膏加入等量硅胶拌样，50℃减压干燥。将干燥后的硅胶样品加入2倍量的石油醚，水浴加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤。将滤渣减压蒸干，加入8倍量氯仿，加热回流提取3次，每次3小时，提取液过滤，滤液合并蒸干，得氯仿部位，用少量乙醇加热溶解，加入等量柱层析硅胶拌样。将氯仿部位上硅胶柱（4cm×13cm），氯仿-甲醇（98:2体积比）洗脱，分段收集洗脱液，回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置，析出大量无色结晶，抽滤，少量丙酮洗，得结晶保存。将析出结晶的抽滤液合并，柱层析硅胶拌样，上硅胶柱（2.5cm×16cm），氯仿-甲醇（99:1体积比）洗脱，分段收集洗脱液，回收溶剂，残留物加丙酮溶解放置。析出结晶，最终提取结晶质量为1.52g。

薄层层析色谱法（氯仿-甲醇（13:1））观察分离结果，所得结晶均为同一物质，香草醛-硫酸显色为单一紫红色斑点，Rf值为0.5。其熔点为285-288℃，核磁共振波谱数据与文献^[7]一致，确定该化合物为黄独素B。

实施例3

采用与实施例1相同的方法提取黄独素B，不同的是，所用各种提取溶剂的量不同，具体为，丙酮的加入量为黄药子质量的4倍，干燥后的硅胶样品加入5倍量的石油醚提取，提取后的滤渣中加入5质量倍的氯仿。所得的结晶质量为1.51kg，将检测全部为黄独素B。

实施例4

采用与实施例2相同的方法提取黄独素B，不同的是，所用各种提取溶剂的量不同，具体为，丙酮的加入量为黄药子质量的6倍，干燥后的硅胶样品加入4倍量的石油醚提取，提取后的滤渣中加入7质量倍的氯仿。所得的结晶质量为1.54kg，将检测全部为黄独素B。

Claims (9)

1.一种黄独素B的提取方法，其特征是包括以下步骤：

（1）将黄药子加入丙酮中，回流提取2次，合并提取液待用；

（2）将上述提取液浓缩至无丙酮味，得浸膏，然后浸膏加入硅胶拌样，干燥；

（3）将干燥后的硅胶加入石油醚，回流提取3次，过滤将滤渣减压蒸干，然后加入氯仿回流提取3次，过滤、合并滤液，将滤液蒸干得氯仿部位； 

（4）将氯仿部位用乙醇溶解，与硅胶拌样，上硅胶柱，用氯仿-甲醇体积比为98:2的混合液洗脱， 分段收集洗脱液； 

（5）将分段收集的洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液进行抽滤，滤饼洗涤得结晶，滤液合并进入下一步；

（6）将上述步骤（5）的滤液与硅胶拌样，上柱，用氯仿-甲醇体积比为99:1的混合液洗脱，分段收集洗脱液，洗脱液分别回收溶剂至干，然后用丙酮溶解、静置析晶，将有结晶析出的洗脱液抽滤、滤饼洗涤得结晶，与步骤（5）的结晶合并，得黄独素B。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的4-7倍，回流提取时，每次提取2-3h。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征是：步骤（1）中，丙酮的加入量为黄药子质量的5倍。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（2）中，浸膏和硅胶的质量比为1:1，将拌样后的硅胶在50℃下减压干燥。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的2-5倍，回流提取时每次提取1-2h。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征是：步骤（3）中，石油醚的用量为硅胶质量的3倍。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（3）中，氯仿的加入量为滤渣质量的5-8倍，每次回流提取的时间为2-3h。

8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征是：步骤（3）中，氯仿的加入量为滤渣质量的6倍。

9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤（4）中，所用的硅胶为柱层析硅胶，氯仿部位与柱层析硅胶的质量比为1:1。