CN102065840B - 用于给药的脂质体和其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供脂质体，其用于将诸如治疗剂的生物学活性物质的递送。其中，本发明的脂质体能够在磷脂酶A2分泌活性增加的位点(sPLA2)递送其有效载荷，因为磷脂酶A2(PLA2)将水解脂质体的脂质。因此，本发明的脂质体可例如用于与癌症相关的治疗。本发明的另一方面是含有本发明脂质体的脂质体制剂。再一个方面是制备本发明的脂质体制剂的方法。

Description

用于给药的脂质体和其制备方法
发明背景
脂质体是二十世纪八十年代作为给药载体/体系开发的微球体。第一个基于脂质体的药物于二十世纪九十年代被批准用于商业用途。
脂质体有三个不同的隔室，其可用于携带各种各样的化合物，诸如，例如药物：内部水性隔室；疏水的双分子层；和内层与外层之间的极性中间相。根据要包封的化合物的化学性质，该化合物科被局限在所述隔室中的任何一个中。现在，在市场上可获得数种不经肠道的脂质体药物制剂。水溶性药物倾向于局限在脂质体的水性隔室中，而包封在脂质体中的药物的例子例如是多柔比星(Doxil)，多柔比星(Myocet)与柔红霉素(DaunoXone)。穿插于脂质体膜中的药物的例子是例如两性霉素B(AmBisome)、两性霉素(Albel-cet B)、苯并卟啉(Visudyne)和胞壁酰三肽-磷脂酰乙醇胺(Junovan)。
因此，脂质体技术已经提供了灵活的方案以解决药理学中的挑战，例如增加药物可溶性、减少药物毒性、改善目标药物释放，等等。
作为给药载体的脂质体的性质决定性地依赖于其表面电荷、渗透性、可溶性、稳定性等等，其显著地受到包含在脂质体组合物中的脂质的影响。另外，在制备稳定的脂质体剂型时，对要被包封在脂质体中的药物可能需要考虑更多的条件。
出于对安全和药物效力的考虑，要求脂质体制剂保持其性质，即从预备直到给药保持稳定。另外，最好这样的剂型在被治疗对象体内运输期间完好，直至其到达靶点，在那里特定地释放药物。如此，仍然需要改善的脂质体制剂。
发明概述
在第一个方面，本发明提供脂质体，其用于递送生物学活性物质，例如治疗剂。其中，本发明的脂质体能够在磷脂酶A2分泌活性增加的位点(sPLA2)递送其有效载荷，因为磷脂酶A2(PLA2)将水解脂质体的脂质。因此，本发明的脂质体可例如用于与癌症相关的治疗。本发明的第二个方面是含有本发明脂质体的脂质体制剂。另一个方面是制备本发明脂质体制剂的方法。
发明详述
附图说明
下面参照附图详细说明本发明，其中：
图1显示了在室温储存期间，储存在含有10％蔗糖和1mM葡萄糖酸钙的溶液中的奥沙利铂(oxaliplatin)的UV光谱。
图2表示在室温储存期间，储存在含有10％蔗糖和1mM葡萄糖酸钙的溶液中的奥沙利铂(图1)在254nm的相对吸收(天/天0)。
图3表示在细胞介质(McCoy)在37摄氏度储存24小时后，不同的葡萄糖酸钙浓度对含有顺铂(cisplatin)(A)或奥沙利铂(B)的脂质体的渗漏的影响(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)(主轴)。最初的包封度(DOE)标于副轴。
图4表示含有1mM葡萄糖酸钙的脂质体(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG 2000)包封的顺铂的细胞毒性。用顺铂或者脂质体包封的顺铂在存在或不存在sPLA2下处理HT-29结肠癌细胞6小时(37摄氏度)。
图5表示含有不同浓度葡萄糖酸钙(a)5mM葡萄糖酸钙、(B)1mM葡萄糖酸钙、(C)0.1mM葡萄糖酸钙、(D)0.01mM葡萄糖酸钙和(E)0mM葡萄糖酸钙的脂质体(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)包封的奥沙利铂的细胞毒性。用奥沙利铂或者脂质体包封的奥沙利铂在存在或不存在sPLA2下处理HT-29结肠癌细胞6小时(37摄氏度)。
图6表示含有不同浓度葡萄糖酸钙的脂质体(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)包封的顺铂的细胞毒性。用顺铂在存在或不存在sPLA2下处理HT-29结肠癌细胞24小时(37摄氏度)。
图7表示在室温下24小时后，对于不含钙的奥沙利铂包封脂质体(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)，颗粒尺寸随着钙浓度的变化。脂质浓度维持在0.84mM。
图8表示在室温下24小时后，从不含钙的脂质体包封的奥沙利铂制剂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的渗漏随着钙浓度的变化。脂质浓度维持在0.84mM。
图9，在25摄氏度，含有0.5mol％NBD-PE的DSPC/DSPG/DSPE-PEG LUV的荧光强度的时间相关性。箭头指示连二亚硫酸盐、钙和Triton-X100的加入。
图10，从超声处理步骤到第一透析步骤(10％蔗糖)后，颗粒尺寸随着包含5mol％DSPE-PEG2000和DSPC的脂质体奥沙利铂制剂中DSPG的变化。
图11，从第一透析步骤(10％蔗糖)到第二透析步骤(10％蔗糖+葡萄糖酸钙)后，颗粒尺寸随着包含5mol％DSPE-PEG2000和DSPC的脂质体奥沙利铂制剂中DSPG的变化。
图12，从超声处理步骤到第二透析步骤(10％蔗糖+/-葡萄糖酸钙)后，颗粒尺寸随着包含DSPC和5mol％DSPE-PEG2000的脂质体奥沙利铂制剂中DSPG的变化。
图13，在第一透析步骤(10％蔗糖溶液)后，含5mol％DSPE-PEG2000和不同量DSPC与DSPG的脂质体奥沙利铂制剂的离子计数率(Pt195/P31)。
图14，在第二透析步骤(10％蔗糖溶液±1mM葡萄糖酸钙)后，含5mol％DSPE-PEG2000和不同量DSPC与DSPG的脂质体奥沙利铂制剂的离子计数率(Pt195/p31)。
图15，在不含钙的溶液中透析的制剂和在含有钙的溶液中透析的制剂相比，离子计数率(Pt195/P31)的％-差异(参见图14)。
图16，在包含5mol％DSPE-PEG2000和不同量的DSPC和DSPG的脂质体奥沙利铂制剂第二透析(10％蔗糖溶液±1mM葡萄糖酸钙)之后透析液中Pt的浓度。
图17，在制剂中最终脂质体的尺寸和奥沙利铂浓度之间的相互关系。在透析期间，使用或不使用1mM葡萄糖酸钙，制备脂质体奥沙利铂制剂(5mol％DSPE-PEG 2000，不同量的DSPC与DSPG)(参见图14)。
图18，脂质体奥沙利铂制剂(5mol％DSPE-PEG2000，不同浓度的DSPC与DSPG)在McCoy细胞介质中(在37摄氏度培养24小时)的稳定性。
图19，无葡萄糖酸钙存在的脂质体包封的奥沙利铂(60/35/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)制剂的1.-6.DSC扫描。
扫描速度：20摄氏度/小时。
图20，无葡萄糖酸钙存在的、含5mol％DSPE-PEG2000和不同浓度DSPC和DSPG的脂质体包封的奥沙利铂制剂的DSC扫描(第一次扫描)。扫描速度：20摄氏度/小时。
图21，在外部有1mM葡萄糖酸钙存在的脂质体包封的奥沙利铂(60/35/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)制剂的1.-6.DSC扫描。扫描速度：20摄氏度/小时。
图22，在外部有1mM葡萄糖酸钙存在的、含5mol％DSPE-PEG2000和不同浓度DSPC和DSPG的脂质体包封的奥沙利铂制剂的DSC扫描(第一次扫描)。扫描速度：20摄氏度/小时。
图23，奥沙利铂的包封脂质体在a)第一透析步骤和b)第二透析步骤(10％蔗糖溶液，含有1mM葡萄糖酸钙)之后透析液中的Pt浓度。
图24，在内外部均有1mM葡萄糖酸钙存在的脂质体包封的奥沙利铂(60/35/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)制剂的1.-6.DSC扫描。扫描速度：20摄氏度/小时。
图25，在内外部均有1mM葡萄糖酸钙存在的、含5mol％DSPE-PEG2000和不同浓度DSPC和DSPG的脂质体包封的奥沙利铂制剂的DSC扫描(第一次扫描)。扫描速度：20摄氏度/小时。
本发明的脂质体
在例如癌症中，一种达到触发药物释放的方法是利用在癌组织附近升高的促分泌磷脂酶A2(sPLA2)的水平。因此，通过小心地设计脂质体的脂质成分，一旦聚集在肿瘤中，脂质体可被sPLA2降解，从而触发释放。
本发明的一个目的是提供稳定性改善的脂质体和脂质体制剂，其可以在靶点释放其荷载(例如，药物)，同时降低由于脂质体膜泄漏导致的不受控制的释放和/或过早的释放。另一个目的是提供在储存期间稳定性增加的脂质体和脂质体制剂。
脂质体的阴离子脂质
在第一个方面，本发明提供一种脂质体，含有25％-45％(mol/mol)的阴离子脂质。本发明人已经考虑了阴离子脂质含量对脂质体重要的特征的影响，诸如sPLA2介导的脂质体脂质水解的速率以及对于脂质体的免疫应答。
当阴离子脂质含量增加，由sPLA2导致的脂质水解的速率增加(药物释放增加)。已经证明，适当的水解速率可以通过25％-45％之间的阴离子脂质含量获得。因此，在一个实施方案中，阴离子脂质含量至少为25％。在另一个实施方案中，阴离子脂质含量不大于45％。在又一个实施方案中，脂质体的阴离子脂质含量选自下列范围组成的组：25％-45％、25％-42％、28％-42％、30％-40％、32％-38％和34％-36％。当关系到％含量时，涉及mol/mol％，除非另外有明确的说明。
如上所述，对于脂质体的免疫应答也受到阴离子脂质含量的影响。因此，体内脂质体的清除速率可通过将脂质体中阴离子脂质含量保持在低于某一水平来降低，本发明人已经认识到，脂质体中阴离子脂质的含量可用于达成sPLA2的水解速率和网状内皮系统清除速率之间的平衡。
优选阴离子脂质是磷脂，优选，磷脂选自PI(磷脂酰肌醇)、PS(磷脂酰丝氨酸)、DPG(二磷脂酰甘油)、PA(磷脂酸)、PEOH(磷脂酰基醇)和PG(磷脂酰甘油)。更优选阴离子磷脂是PG。
亲水聚合物
在一个优选方案中，脂质进一步含有亲水聚合物，选自PEG[聚乙二醇)]、PAcM[聚(N-丙烯酰吗啉)]、PVP[聚(乙烯基吡咯烷酮)]、PLA[聚(丙交酯)]、PG[聚(乙交酯)]、POZO[聚(2-甲基-2-噁唑啉)]、PVA[聚乙烯醇]]、HPMC(羟基丙基甲基纤维素)、PEO[聚(环氧乙烷)]、壳聚糖[聚(D-葡糖胺)]、PAA[聚(氨基酸)]、聚HEMA[聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)]和其共聚物。
最优选聚合是PEG，分子量为100Da至10kDa。尤其优选的是2-5kDa的PEG(PEG2000到PEG5000)，并且最优选PEG2000。
在脂质体上掺杂聚合物是本领域技术人员公知的，可用于增加脂质体在血流中的半衰期，其原因可能是减少网状内皮系统的清除。
优选，聚合物与，磷脂酰基乙醇胺端基连接。另一个选择是神经酰胺(即使该脂质不是由PLA2可水解的)。
连接聚合体的脂质优选以至少2％的量存在。更优选，该量为至少5％且不大于15％。甚至更优选，连接聚合物的脂质为至少3％且不大于6％。含有阴离子磷脂且≤2.5％的DSPE-PEG2000的脂质体在钙存在下聚集的倾向增加。这通常可通过形成高粘性凝胶观察到。含阴离子磷脂且＞7.5％的脂质体导致脂质体沉淀或者分相。因此，另一个优选的区间是2.5％至7.5％。
在脂质体中电中性的脂质成分
优选，本发明的脂质体还含有不带电的磷脂，其选自两性离子磷脂，包括PC(磷脂酰胆碱)和PE(磷脂酰乙醇胺)。最优选的两性离子磷脂是PC。
与阴离子磷脂相反，在脂质体中，两性离子磷脂充当电中性的sPLA2-可水解脂质成分。通过在同一脂质体中结合两性离子磷脂和阴离子磷脂，可调整到希望的表面电荷密度，其满足了足够高的sPLA2水解和在血液中的低清除率。
在脂质体中，两性离子磷脂的量优选为40％-75％，更优选为50％-70％。
醚-磷脂
磷脂的一些或者全部可以是醚-磷脂。
因此，在磷脂的甘油主链的sn-1位，其可以具有醚键而不是酯键。当sPLA2水解这种特别的磷脂时，生成单醚解的磷脂，其对例如癌细胞是有毒的。即，醚磷脂可以视为是单醚解磷脂的前体药物，本发明的脂质体可用于将这样的前体药物递送至癌细胞的sPLA2提高的环境，在那里前体药物由sPLA2水解激活。在EP 1254143和WO 2006/048017中已经描述了醚-磷脂，在此通过援引加入其内容。
其他的前体药物
通过sPLA2从脂质释放生成溶血脂的部分也可以是药物。因此，脂质体可含有单醚溶血脂的前体药物、由sPLA2从脂质释放的前体药物及其他治疗剂，其在下文详述。
稳定剂
脂质体还可通过加入作为脂质体中膜成分的胆固醇而稳定。然而，在脂质体中高含量的胆固醇有被PLA2水解的副作用，因此，优选脂质体含有不大于20％或者不大于10％的胆固醇。更优选脂质体含有小于1％的胆固醇、小于0.1％的胆固醇或者根本不含任何胆固醇。
可调整脂质体所含脂质的烷链长度以求最佳的PLA2水解速率并将被包埋化合物从脂质体的渗漏降到最低。优选烷基链是C18或者C16饱和链。
本发明的脂质体优选用第三方面的方法制备，其中脂质体通过暴露于二价阳离子被稳定。
如上所述，脂质体可包含单醚溶血脂的前体药物和/或由sPLA2从脂质释放形成溶血脂的部分的前体药物。
在优选的实施方案中，脂质体包含生物学活性化合物，例如治疗剂(药物)，其不是单醚溶血磷脂的前体药物或者单醚溶血磷脂。脂质体还可以含有单醚溶血磷脂的前体药物和治疗剂。优选的生物学活性化合物是小分子、肽、蛋白质和核酸，例如质粒和低聚核苷酸。优选的一类蛋白质是抗体，更优选单克隆抗体。优选的低聚核苷酸是核酸适配子、反义寡核苷酸、微小RNA(microRNA)和小干扰RNA(siRNA)。一类特别有利的化合物是小分子抗肿瘤剂，例如氨茴环霉素(anthracyclin)衍生物、顺铂、奥沙利铂、卡铂、多柔比星、紫杉醇(paclitaxel)、5-氟尿嘧啶、依昔舒林(exisulind)、顺式视黄酸、舒林酸硫化物(suldinac sulphide)、甲氨喋呤、博来霉素和长春新碱。另一类特别有利的是抗生素和抗真菌剂，再一类是消炎剂，例如甾体类和非甾体类。脂质体可以包含1、2、3或更多种不同的生物学活性化合物。在一个优选的实施方案中，脂质体仅含有一种生物学活性成分。
在另一个实施方案中，脂质体含有诊断剂。″诊断剂″是指帮助定位靶组织和/或诊断疾病和/或病症的试剂。非限制性的例子可以是造影剂、微粒、放射剂、靶特异剂，诸如特定结合到与疾病和/或病症相关的标示物上的试剂，等等。本领域技术人员清楚本发明的一些实施方案涉及脂质体制剂，其中脂质体含有至少一种药物和一种诊断剂。
本发明脂质体的物质化学特性
脂质体可以是单层的(unilamellar)或者多层的(multilamellar)。最优选脂质体是单层的。脂质体的直径应为50-400nm，优选为80-160nm，最优选为90-120nm。
优选，本发明第二个方面的脂质体制剂的多分散性指数(Poly DispersityIndex，PDI)不超过0.2，更优选是0.15或者更低，甚至更优选0.10或更低。在该范围的PDI值表示在制剂中较窄的颗粒尺寸分布。
由上文可知，优选脂质体所含脂质的至少一种，当存在于脂质体中时，是sPLA2的底物。
在一个实施方案中，脂质体含有的脂质在sn-3位置而不是在sn-2位置被sPLA2水解。在WO 2006/048017中已经公开了这样的非天然脂质和含有非天然脂质的脂质体，所述内容通过援引加入本文。
优选，本发明的脂质体存在于第二个方面的脂质体制剂中。因此，如第二方面所述，已经通过暴露在二价阳离子下将其稳定化。在一个实施方案中，脂质体在形成后仅暴露于二价阳离子。即，脂质体的内部不含有二价阳离子。在另一个实施方案中，仅有脂质体的内部包含二价阳离子。
与本发明脂质体相关的二价阳离子的存在不能直接地检验。然而，本发明描述了指示是否脂质体已经被二价阳离子稳定化的参数。
不存在二阶阳离子的脂质体奥沙利铂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的DSC-扫描具有单一的转变温度，也即观测到一个峰。如果重复扫描，转变温度向较高的温度移动，这可能是由于在通过转变温度时，奥沙利铂释放到脂质体的外部(图19)。已经暴露于二阶阳离子的脂质体的重复DSC扫描具有更恒定的转变温度。因此，在一个实施方案中，本发明的脂质体的特征在于脂质体的重复DSC扫描得到的转变温度，第一次和第二次扫描之间相差不大于2摄氏度。在另一个实施方案中，本发明的脂质体的特征在于脂质体的重复DSC扫描得到的转变温度，第一次和第二次扫描之间的差异小于相同成分的对照脂质体的转变温度差异。
通过暴露于二阶阳离子稳定化的脂质体奥沙利铂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的DSC扫描得到分相的转变温度(在扫描中两个峰；见例如图22)。因此，在一个本发明脂质体的实施方案中，脂质体的特征在于脂质体的DSC扫描得到分相的转变温度。
另外，因为脂质体的转变温度由于暴露于二价阳离子而向较高温度移动，所以确定脂质体是否已经暴露于例如钙的二阶阳离子的一个方法是确定与测试脂质体成分相同的对照脂质体的转变温度，其中所述对照脂质体没有暴露于二阶阳离子。因此，在一个实施方案中，本发明的脂质体的特征在于其具有比对照脂质体更高的转变温度，所述对照脂质体具有相同的成分而没有暴露于二价阳离子。
在另一个实施方案中，本发明的脂质体的特征在于当其暴露于1mM钙时，平均的脂质体尺寸减少不大于10％，更优选不大于5％。如果其预先没有暴露于钙，则当暴露时其会缩小。测试是否试验脂质体已经暴露于钙的一个试验方法是通过与对照脂质体进行比较，对照脂质体具有相同的成分并已知其没有暴露于钙。因此，在一个实施方案中，本发明的脂质体的特征在于当暴露于1mM钙时，其显示的收缩程度小于具有相同成分预先未暴露于二价阳离子的对照脂质体的收缩程度。
脂质体制剂
本发明的第二个方面是含有本发明脂质体的脂质体制剂。优选，制剂还含有浓度至少0.1mM的二阶阳离子。本发明人已经发现，二阶阳离子的存在(预先暴露于二阶阳离子)稳定了制剂的脂质体，导致生物学活性化合物从脂质体中的渗漏降低。然而，经验表明，二阶阳离子的浓度不应超过10mM，更优选不超过5mM，因为这样的浓度会导致脂质体的聚集和不希望的高粘度。更优选，二价阳离子的浓度不大于1mM，最优选二价阳离子的浓度为0.1mM-1mM(图3)。优选的二价阳离子是钙。
在一个优选的实施方案中，二价阳离子选自镁(Mg2+)、铁(Fe2+)、钙(Ca2+)、铍(Be2+)、镁(Mg2+)、锶(Sr2+)、钡(Ba2+)和镭(Ra2+)。
已经测试了多种二价阳离子(数据未显示)，最佳的效果是Ca2+，因此Ca2+被优选用于制剂。
另外，根据经验，Ca2+的平衡离子在一些情况下是重要的。因此，在一个实施方案中，平衡离子选自大阴离子，例如有机盐，优选选自葡糖酸根、丙酸根或者乳酸根。更优选平衡离子是葡糖酸根。
二价阳离子可分布在脂质体内部、脂质体外部或者既在脂质体内部又在脂质体外部。因此，二价阳离子可存在于水合溶液中和/或存在于净化、悬浮和/或储存脂质体制剂的溶液中。在一个优选的实施方案中，二价阳离子分布在脂质体的外部，而不是在脂质体的内部。在这个实施方案中，二价阳离子可在脂质体形成以后加入。
所用的钙盐浓度取决于特定的脂质体制剂和药物。经常需要一定浓度的诸如CaCl2或者NaCl的盐来稳定脂质体。然而，在一些盐诸如例如NaCl存在下奥沙利铂是不稳定的，而顺铂在磷酸盐存在下或在纯水中是不稳定的。因此，选择的盐的种类和其浓度将对囊泡形成特性产生重要影响，因此，根据要被包封的药物，必须选择不同的盐和不同的盐浓度用于制备脂质体制剂。
优选，脂质体制剂的多分散性指数(PDI)不超过0.2，更优选为0.10或更低。在该范围的PDI值表示在制剂中较窄的颗粒尺寸分布。
脂质体制剂的保存
在一优选的实施方案中，脂质体制剂还含有冷冻和/或溶解保护剂。
在脂质体的存储期间，磷脂可能水解。防止脂质体制剂中磷脂分解的一个简单方法是冷冻或者冻干。
然而，冷冻可能导致脂质体制剂的渗漏，导致被包封药物的释放。为了避免或降低冷冻后从脂质体制剂的渗漏，可能必须加入冷冻保护剂。因此，在一些实施方案中，本发明涉及还含有冷冻保护剂的脂质体制剂。可用作冷冻保护剂的试剂的例子非限制性地可以是二糖，例如蔗糖、麦芽糖和/或海藻糖。这类试剂可以不同的浓度使用，取决于制备和所选择的试剂以便得到等渗溶液。
脂质体还可以冻干、储存和重构，从而保持其内部成分的本质部分。脂质体脱水通常要求在脂质体双分子层的内外接触面均使用溶解保护剂，例如二糖(蔗糖、麦芽糖或者海藻糖)。该亲水化合物通常被认为预防了脂质在脂质体制剂中的重排，从而在干燥过程和后来的重建过程中保持尺寸和含量。对于这样的干燥保护剂，适合的特性是其具有保持了脂质体双层成分的分子间空隙的立体化学特性。
脂质体制剂的制备方法
本发明的第三个方面是制备脂质体制剂的方法，包括步骤
a)在有机溶剂中溶解所选择的脂质制备脂质混合物，
b)将步骤a)的产物用含水的水合溶剂水合从而形成脂质体，
c)在加入含水的水合溶剂之前，或在加入含水的水合溶剂之后，除去步骤a)的有机溶剂。
优选，在加入水合溶剂之前除去有机溶剂。
所述方法还包括高剪切混合以减小脂质体的尺寸。
所述方法还可包括将步骤c)制备的脂质体挤出过滤器的步骤，以制备特定平均尺寸的脂质体。
所述方法还可包括超声处理脂质体制剂的步骤，以制备具有特定尺寸的脂质体。
优选，脂质体是如本发明第一个方面所述的脂质体。
脂质体可通过将药物溶解在用于制备脂质体的有机溶剂中或水合溶剂中来加载至少一种治疗剂。
另选地，可离子化的治疗剂可加载到脂质体中：首先形成脂质体，例如通过pH梯度确立跨越最外脂质体层的电化学电位，然后向在脂质体外的含水介质加入可离子化的治疗剂。
在一个优选的实施方案中，水合溶剂含有二价阳离子，其浓度至少0.1mM，更优选其浓度为0.1mM-5mM，最优选为0.1mM-1mM。优选二价阳离子是Ca2+。在另一个实施方案中，水合溶剂不含二价阳离子。在该实施方案中，优选如下所述地将外部水相转换为含有二价阳离子的另一个外部水相。
在另一个实施方案中，所述方法还包括改变制剂外部水相的步骤。最初，水相含水合溶剂。外部水相可通过离心、超滤、透析或类似方法改变以制备含有在外部水相特定成分溶液中的脂质体的脂质体制剂。优选，生物学活性化合物(治疗剂)仅存在于脂质体内部或附着于脂质体，而不是溶液中的游离化合物。优选药物在脂质体中的包封＞70％，更优选＞95％，最优选＞99％。药物包封率是被包封的药物和制剂中药物总量之比。
在一个优选的实施方案中，外部水相被转换为另一种含有二价阳离子的外部水相，二价阳离子的浓度至少0.1mM，更优选其浓度为0.1mM-5mM，最优选为0.1mM-1mM。优选二价阳离子是Ca2+。
本发明人已经发现，当暴露于钙时，脂质体开始泄漏包封的化合物。此外，脂质体凝缩为较小粒径。然而，在最初渗漏之后，脂质体暴露于Ca2+显示了降低的渗漏，如在细胞介质中的培养所示(例如McCoy介质；图3)。因为最初的渗漏，通常进行透析和/或离心，将脂质体与泄漏的物质分离。也可以进行过滤。
在第二个方面的一个优选实施方案中，脂质体制剂用第三个方面所述的方法制备。
药剂
本发明的第五个方面是第一个方面的脂质体或第二个方面的脂质体制剂作为药物的应用。
本发明的第六个方面是第一个方面的脂质体或第二个方面的脂质体制剂用于治疗PLA2活性增加的病症的应用。这样的病症例如是癌症和炎性疾病。
实施例
实施例1：脂质体包封的顺铂和脂质体包封的奥沙利铂的制备
脂质体包封的顺铂和脂质体包封的奥沙利铂是脂质体-药物制剂，其中药物顺铂或者奥沙利铂被包封在脂质体的水性隔室中。脂质体药物制剂由在脂质混合物中包封的药物构成，所述脂质混合物由5mol％mPEG2000-二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)、25mol％二硬脂酰基磷脂酰甘油(DSPG)和70mol％二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)制成。用于制备每种制剂的特定方法如下所述。
脂质体包封的顺铂
磷脂溶于9∶1(v/v)氯仿/甲醇。然后在65摄氏度热水浴中，在氮气气流下，蒸发溶解的脂质混合物的溶剂直至目测干燥。样品进一步在真空下干燥过夜。
将含有顺铂的水合液体(氯化钠和葡萄糖酸钙的溶液，都具不同浓度)在65-70摄氏度加入到干燥的脂质混合物中以制备多层囊泡(MLV)。脂质悬浮液在65-70摄氏度保持至少30分钟以便确保完全水合。在此期间，每5分钟涡流脂质悬浮液。在65摄氏度的MLV超声处理5分钟，然后在65-70摄氏度从100nm孔径尺寸的聚碳酸酯过滤器挤出，制备大单层脂质体(LUV)。然后将LUV转移到透析盒(MWCO：10kDa)以便除去未包封的顺铂。
脂质体包封的奥沙利铂
磷脂溶于9∶1(v/v)氯仿/甲醇。然后在65摄氏度热水浴中，在氮气气流下，蒸发溶解的脂质混合物直至目测干燥。样品进一步在真空下干燥过夜。
含奥沙利铂的水合缓冲液(具有不同浓度钙盐的10％蔗糖溶液)加入到干燥的脂质混合物用于制备多层囊泡(MLV)。脂质悬浮液在65-70摄氏度保持至少30分钟以便确保完全水合。在此期间，每5分钟涡流脂质悬浮液。在65-70摄氏度的MLV超声处理5分钟，然后在65-70摄氏度从100nm孔径尺寸的聚碳酸酯过滤器挤出，制备大单层脂质体(LUV)。然后将LUV转移到透析盒(MWCO：10kDa)以便除去未包封的奥沙利铂。
平衡样品，然后采用离心过滤的分离步骤，估算相对于脂质体包封的顺铂或者脂质体包封的奥沙利铂，脂质体外部Pt含量。使用ICP-MS测定Pt含量。
表1：改变葡萄糖酸钙含量，在脂质体顺铂制剂中的顺铂含量。
葡萄糖酸钙(mM) 顺铂含量(mg/ml)
0 1.10
0.10 0.49
1.00 0.77
表2：改变葡萄糖酸钙含量，在脂质体奥沙利铂制剂中奥沙利铂的含量。
葡萄糖酸钙(mM) 奥沙利铂含量(mg/ml)
0 0.40
0.01 0.45
0.10 0.82
1.00 1.24
5.00 1.01
实施例2：奥沙利铂在水合溶液中的稳定性
将奥沙利铂溶于含10％蔗糖和1mM葡萄糖酸钙(10毫克/ml)的水合溶液。加入蔗糖，得到大约相当于生理盐分浓度的同渗容摩。然后用UV测量在水合溶液中奥沙利铂的稳定性。在室温储存期间不断取样。测量的样品浓度为0.1毫克/ml奥沙利铂。为了跟踪奥沙利铂的稳定性，从200-350nm进行扫描(图1)并在储存期间比较在254nm的吸光率(图2)。在254nm吸光率的较大变化通常与奥沙利铂分解有关，其可通过在含有氢氧化物和/或氯化物离子的溶液中溶解奥沙利铂容易地观察到。也试验了数种常规的缓冲成分，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、乙醇胺，然而观察到它们在254nm的吸光率降低(数据未显示)。溶于含1mM葡萄糖酸钙的10％蔗糖溶液中的奥沙利铂显示，在室温下储存至少35天期间几乎没有分解。
实施例3：脂质体包封的奥沙利铂的稳定性
这样进行脂质体包封的奥沙利铂制剂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的稳定性的研究：测量从在37摄氏度在细胞介质中储存的制剂中铂物质的被动渗漏(McCoy；图5A)。在t＝0和t＝24小时取样。在加入到细胞介质立即测定的在外部水相中的铂含量和在37摄氏度培养24小时后测定的铂含量之间的差异作为自脂质体的渗漏来报告。
包封率的确定：
1.50μl脂质体制剂在McCoy中稀释到总体积5ml。
2.容纳稀释的制剂的试管在37摄氏度储存24小时。
3.将2ml稀释的样品(0小时和24小时)加载到Millipore centricon YM-30离心超滤机，其在15摄氏度和2500g旋转20分钟。
4.收集200μl滤液，用McCoy稀释到总体积2ml。
5.将200μl上述经稀释样品进一步稀释到总体积2ml。
6.样品的Pt含量用ICP-MS测定。在McCoy Media中准备标准曲线。
该细胞介质用于之后脂质体包封的奥沙利铂在HT-29结肠癌细胞上的细胞毒素作用的评价。在细胞介质中储存时从脂质体的渗漏增加，导致非特异的细胞毒性。制剂在未进行sPLA2水解时，应具有最小的细胞毒性。研究了在脂质体包封的奥沙利铂制剂中，葡萄糖酸钙的不同浓度(0-5mM)稳定脂质体的能力(图5)。
清楚地证明，用直到5mM的增加的葡萄糖酸钙浓度制备的制剂增加了在McCoy介质中脂质体包封的奥沙利铂的稳定性，理由是从脂质体的渗漏减少了(图3)。最初的包封度(在加入细胞介质后立即测量)也随着葡萄糖酸钙浓度的增加而增加。为了考察是否从葡萄糖酸钙在脂质体制剂上的稳定作用与钙或者葡糖酸盐有关，进一步试验了含有钙或葡糖酸盐的其他化合物能否稳定脂质体包封的奥沙利铂制剂。如下表所证明的，显然其它钙化合物也能稳定脂质体制剂，而葡糖酸钠不能。与葡萄糖酸钙相比，乳酸钙和丙酸钙对制剂具有相似的稳定作用。这些结果建议，钙决定着对脂质体制剂的稳定作用。
表3：不同盐的测试
此外，研究了葡萄糖酸钙仅在内部或外部存在对脂质体制剂的影响。如下表所示，非常明显，仅在内部含有钙的脂质体制剂由在稳定脂质体奥沙利铂制剂方面不是很好。证明仅在外部存在钙对稳定脂质体制剂非常好。
表4：葡萄糖酸钙的位置的测试
实施例4：抗癌剂醚脂质
醚磷脂被用于在含有10％蔗糖和1mM葡萄糖酸钙的溶液中制备在脂质混合物中包封的奥沙利铂的脂质体制剂(25mol％ 1-O-十八基-2-十八酰基-sn-甘油基3-磷酸甘油(1-O-DSPG)、70mol％1-O-十八基-2-十八酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(1-O-DSPC)和5mol％二-十八酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)2000](DSPE-PEG2000))。
在McCoy介质中在37摄氏度存储24小时后，仅观察到4％的奥沙利铂渗漏。
实施例5：脂质体包封的奥沙利铂的细胞毒性。
在结肠癌细胞(HT-29)中评价脂质体包封的奥沙利铂的细胞毒素活性(图5)。HT-29细胞系不具有分泌PLA2的能力。游离的奥沙利铂用作参照。HT-29细胞用奥沙利铂或者脂质体包封的奥沙利铂在PLA2存在或不存在下处理6小时。将例如来自眼泪的外源PLA2加入，显示已经发生了奥沙利铂的完全释放。对于稳定的脂质体制剂，HT-29不会被其存在而影响。为了从脂质体释放奥沙利铂，需要存在PLA2源。然而，尽管不存在PLA2对于不稳定的脂质体制剂也可能发生渗漏，并且因此影响HT-29细胞。显然，当制剂中葡萄糖酸钙浓度增加时，从脂质体的渗漏降低。结果与体外稳定性研究非常相关(图3B)，可以看出，通过增加葡萄糖酸钙的浓度可以降低从脂质体的渗漏。
实施例6：含葡萄糖酸钙的脂质体顺铂制剂的稳定性
目标：
研究在McCoy介质中含有葡萄糖酸钙的脂质体顺铂制剂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的稳定性。目的是要发现在McCoy介质中渗漏最少的制剂。
方案：
将脂质体制剂(50μl)与4950μl McCoy介质混合，在37摄氏度培养24小时。在t＝0和t＝24小时取样。采用不同的葡萄糖酸钙浓度制备顺铂制剂。
包封度：
1.50μl脂质体制剂在McCoy中稀释5ml。
2.含有稀释的制剂的试管在37摄氏度储存24小时。
3.将2ml稀释的样品(0小时和24小时)加载到Millipore centricon YM-30离心超滤机，其在15摄氏度和2500g旋转20分钟。
4.收集200μl滤液，用McCoy稀释到总体积2ml。
5.将上述200μl经稀释样品进一步稀释到总体积2ml。
6.样品的Pt含量用ICP-MS测定。在McCoy Media中准备标准曲线。
结果：
含有100μM和1mM葡萄糖酸钙的脂质体包封的顺铂制剂与之前不使用葡萄糖酸钙制备的制剂所观察到的相比渗漏程度降低。
该细胞介质用于之后评价脂质体包封的顺铂在HT-29结肠癌细胞上的细胞毒素作用(图4和图6)。
显然，当制剂中葡萄糖酸钙浓度增加时，从脂质体的渗漏降低。结果与体外稳定性研究非常相关(图3A)，可以看出，通过增加葡萄糖酸钙的浓度可以降低从脂质体的渗漏。
实施例7：钙对脂质体包封的奥沙利铂制剂的作用
目标：研究用葡萄糖酸钙溶液添加或稀释脂质体包封的奥沙利铂制剂的作用。
不使用钙来制备脂质体包封的奥沙利铂制剂(10％蔗糖，在内部和外部)。脂质体包封的奥沙利铂制剂在不同浓度的钙中稀释(脂质浓度维持在0.84mM)。平衡样品24小时，测量包封率(DOE；％)和颗粒尺寸。
在10％蔗糖中制备脂质体(70/25/5mol％，PC/PG/PE-PEG)悬浮液，其含有0.5mol％1，2-二棕榈酰-磷脂酰乙醇胺并在头基以共价键连接7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基荧光探针(NBD-PE)(Fluka，Buchs，Switzerland)。在465纳米激发NBD探针分子，在535纳米使用SLM DMX-1000荧光分光计观察发射波长的峰。将0.1mM新制备的脂质悬浮液的等分2.5ml置于恒温下(25摄氏度)的比色杯中，平衡5分钟，再将不可逆的连二亚硫酸盐猝灭剂加入到外水相。在比色杯中用磁力搅拌棒迅速混合样品。在加入30μl新制备的连二亚硫酸钠(1MNa2S2O4在1M Trizma缓冲储存液中)后监测荧光强度随时间的衰减。在300秒后，加入30μl的10mM葡萄糖酸钙。随后在脂质体制剂中加入10μl 10％TritonX-100在数秒内完全猝灭NBD-PE荧光。
结果
表1.在不同浓度葡萄糖酸钙中储存(24小时，室温)的脂质体奥沙利铂制剂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的粒度分析。脂质含量维持在0.84mM。
表2.在不同浓度葡萄糖酸钙中储存(24小时，室温)的脂质体包封的奥沙利铂制剂(70/25/5mol％DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000)的Pt分析。脂质含量维持在0.84mM。
Ca2+浓度[μM] 外部[ppm]  总量[ppm] 渗漏(％)
0  1.41  61.06  2.32
1  1.42  64.87  2.19
5  1.59  62.41  2.55
10  1.90  62.20  3.06
50  7.60  61.83  12.29
100  12.73  100.49  12.67
500  22.41  68.89  32.53
1000  21.67  67.89  31.91
5000  22.03  67.67  32.55
观察到在钙浓度不同的溶液中储存时脂质体颗粒尺寸减小(图7)。随着外部钙的增加，从制剂的渗漏增加(图8)。在含有已经被猝灭的NBD-PE探针的制剂中加入钙，没有进一步导致猝灭(图9)。结果指出，钙的加入不导致暂时的渗透。这些数据指出，钙凝缩了脂质体膜，这导致颗粒尺寸减小并释放药物。
实施例8：Ca2+对脂质体奥沙利铂制剂的作用，部分I
目标：
研究在含有DSPC、DSPG和DSPE-PEG2000的不同脂质体制剂的外部水相仅含有钙对颗粒尺寸、总Pt、DOE和稳定性的影响。为了追踪在Ca2+和奥沙利铂之间与膜的可能的交互作用，对不同的制剂进行DSC。
方案：
制备五种不同的奥沙利铂脂质体制剂，内部无钙。在脂质体制剂中DSPG和DSPC含量变化如下：
1.80∶15∶5mol％PC/PG/PE-PEG
2.70∶25∶5mol％PC/PG/PE-PEG
3.60∶35∶5mol％PC/PG/PE-PEG
4.50∶45∶5mol％PC/PG/PE-PEG
5.40∶55∶5mol％PC/PG/PE-PEG
4ml脂质体包封的奥沙利铂在75摄氏度用超声处理(1min/ml)，然后冷却，以便沉淀过量的奥沙利铂。将上清液转入透析室(MWCO：10kDa)，相对于10％蔗糖溶液透析。在各个室加入1.75ml。透析的样品分成两部分，一部分进一步在盛有10％蔗糖溶液的烧杯透析，另一部分在盛有含1mM葡萄糖酸钙的10％蔗糖溶液的烧杯中透析。
●在超声处理以及每个透析步骤之后测定颗粒尺寸。
●比较脂质体制剂(+/-葡萄糖酸钙)的差示热分析图。
●对于脂质体制剂，监测在第一和第二透析步骤期间的渗漏。
●在McCoy介质(24小时，37摄氏度)中测定脂质体奥沙利铂制剂的稳定性。
结果
参见图10-22。
粒度分析(尺寸以纳米表示)
  ％PG   超声处理后   第一渗析步骤(-钙)   第二渗析步骤(-钙)   第二渗析步骤(+钙)
  15   100.2±1.6   98.5±1.5   102.8±1.5   94.8±1.4
  25   97.4±0.6   98.5±0.5   112.6±1.3   94.8±0.5
  35   105.7±0.7   112.6±1.7   122.5±0.8   103.5±1.1
  45   80.8±0.9   87.7±0.5   98.3±0.6   80.5±0.8
  55   82.5±0.5   89.0±0.6   104.4±1.9   81.4±1.3
Pt分析
第一透析步骤(-钙)
  ％PG   外部(ppm)   DOE(％)   总量(ppm)  离子计数率(Pt195/P31)
  15   25.24   96.3   674.1  10.55
  25   31.673   96.6   941.9  12.18
  35   39.472   96.6   1178.1  14.54
  45   54.115   94.2   927.4  11.07
  55   43.60   95.1   898.0  10.93
第二透析步骤(-钙)
  ％PG   外部(ppm)   DOE(％)   总量(ppm)   离子计数率(Pt195/P31)
  15   16.046   97.6   680   10.46
  25   21.027   97.1   733   11.52
  35   24.574   97.0   815   13.58
  45   24.478   95.0   485   10.85
  55   28.71   96.1   743   11.06
第二透析步骤(+钙)
  ％PG   外部(ppm)   DOE(％)   总量(ppm)   离子计数率(Pt195/P31)
  15   9.919   98.0   495   8.49
  25   14.137   97.3   517   7.18
  35   11.258   98.1   599   7.91
  45   18.464   94.3   324   4.45
  55   17.036   94.0   285   4.09
在McCoy细胞介质中的稳定性
在透析溶液中不含钙
  ％PG  外部t＝0(ppm)  DOEt＝0(％)  外部t＝24h(ppm)   DOEt＝24h(％)  总量(ppm)
  15  95.5  84.70  149.3   76.08  624.2
  25  214.7  27.37  166.3   43.74  295.7
  35  184.1  55.77  271.6   34.74  416.2
  45  168.3  58.73  242.0   40.65  407.7
  55  320.5  47.51  356.2   41.65  610.5
在透析溶液中含钙
  ％PG  外部t＝0(ppm)   DOEt＝0(％)   外部t＝24h(ppm)   DOEt＝24h(％)   总量(ppm)
  15  2.8   99.44   13.2   97.36   498.8
  25  2.5   99.35   12.1   96.80   377.2
  35  6.4   98.07   13.4   95.94   330.9
  45  9.8   96.33   46.7   82.68   268.0
  55  19.3   90.73   23.0   88.95   207.6
讨论：
制备了在内部不含钙、在外部含或不含钙的制剂。
在仅含有蔗糖的溶液中，通过将PG含量提高直到45％PG，观察到颗粒尺寸增加(图10)。与此相反，通过在外部加入1mM葡萄糖酸钙，观察到颗粒尺寸减小(图11)。观察到具有上述最高PG含量的制剂在不含Ca2+时颗粒尺寸变化最大(图11+12)。
如果在两个透析步骤中透析溶液是10％蔗糖，事实上在第一和第二透析之间没有奥沙利铂损失(基于离子计数率(ion count ratio)(Pt195/P31))。比较含钙的制剂的图14的Pt/P水平，观察到在第一和第二透析步骤之间存在降低。如果在透析期间存在钙，观察到相对于在10％蔗糖溶液透析的制剂存在奥沙利铂损失。在制剂中PG含量增加，则观察到奥沙利铂减少。
对于PG含量较低的制剂，当透析相同时间时，DOE(％)通常较高数量。
将颗粒尺寸对总Pt浓度(图17)作图，发现似乎存在相互关系。随着颗粒尺寸的增加，不考虑到脂质成分(改变DSPC和DSPG含量)，观察到较高的Pt含量。
在含有葡萄糖酸钙的溶液中透析的脂质体在McCoy介质中稳定，而在10％蔗糖中透析的制剂奥沙利铂在暴露于McCoy介质时渗漏很多(图18)。
35％PG的脂质体包封的奥沙利铂制剂的DSC扫描显示，不可能重复在没有钙存在时制剂的扫描图(图19)。对于新的扫描，转变温度连续地增加。当钙在脂质外部存在时，对于每次新的扫描，转变温度保持恒定(图21)。此外，PG含量较高，则转变温度增加(图20)。
对于脂质体包封的奥沙利铂制剂，转变温度在60-70摄氏度范围内。因此，推荐挤压温度保持在70摄氏度。
实施例9：Ca2+对脂质体奥沙利铂制剂的作用，部分II
目的：
研究在含有DSPC、DSPG和DSPE-PEG2000的不同脂质体制剂的内部和外部都具有钙对颗粒尺寸、总Pt、DOE和稳定性的影响。为了追踪在Ca2+和奥沙利铂之间与膜的可能的交互作用，将DSC用于不同的制剂。
方案：
制备四种不同的奥沙利铂脂质体制剂，在内部有葡萄糖酸钙。在脂质体制剂中DSPC和DSPG含量变化如下：
6.70∶25∶5mol％PC/PG/PE-PEG
7.60∶35∶5mol％PC/PG/PE-PEG
8.50∶45∶5mol％PC/PG/PE-PEG
9.40∶55∶5mol％PC/PG/PE-PEG
4ml脂质体包封的奥沙利铂在75摄氏度用超声处理(1min/ml)，然后冷却，以便沉淀过量的奥沙利铂。上清液转入透析室(MWCO 3500)，相对于含有1mM葡萄糖酸钙的10％蔗糖溶液透析。每个室加入3ml。在24小时后，将透析室转入盛有10％蔗糖和1mM葡萄糖酸钙的新烧杯中。
●在超声处理以及每个透析步骤之后测定颗粒尺寸。
●比较脂质体制剂的差示热分析图。
●对于脂质体制剂，监测在第一和第二透析步骤期间的渗漏。
●在McCoy介质(24小时，37摄氏度)测定脂质体奥沙利铂制剂的稳定性。
结果
参见图23-25。
粒度分析(尺寸以纳米表示)
  ％PG   超声处理后   第一渗析步骤(+钙)   第二渗析步骤(+钙)
  25   102.8±1.18   95.5±0.81   96.2±0.91
  35   143.1±3.78   123.9±1.52   127.7±0.70
  45   95.5±0.48   87.5±0.49   89.9±0.75
  55   93.9±0.99   93.9±0.50   99.9±0.62
Pt分析
第一透析
  ％PG   外部(ppm)   DOE(％)   总量(ppm)   离子计数率(Pt195/P31)
  25   3.5002   91.6   418.549   11.06
  35   3.2822   96.8   1010.823   13.95
  45   4.8387   88.6   423.221   6.40
  55   4.957   84.6   322.473   6.19
第二透析
  ％PG   外部(ppm)  DOE(％)   总量(ppm)   离子计数率(Pt195/P31)
  25   5.499  99.3   762.9   8.49
  35   7.103  99.5   1346.8   13.84
  45   8.057  98.5   526.62   6.36
  55   16.29  97.2   579.596   5.98
在透析液中的Pt
  ％PG  第一渗析(ppm)   第二渗析(ppm)
  25  34.63   0.45
  35  30.2   0.46
  45  37.6   0.64
  55  39.1   0.9
McCoy稳定性
  ％DSPG   外部t＝0(ppm)   DOEt＝0(％)   外部t＝24h(ppm)  DOEt＝24h(％) 总量(ppm)
  25   16.02   98.4   13.02   97.1 442.1
  35   8.39   99.1   16.70   98.4 1024.2
  45   9.23   97.8   16.56   95.6 377.6
  55   16.02   94.9   23.25   92.7 316.4
一般性结论：
制备了在内部和外部均含钙的制剂。
在第一个透析步骤后，对于所有制剂，脂质体颗粒尺寸减小。从第一到第二透析步骤，观察到颗粒尺寸增加。表面上，在脂质成分和颗粒尺寸改变之间没有相互关系。
对于制备的所有制剂，当在内部包括葡萄糖酸钙时，观察到较高的Pt/P-比例。
35％DSPG的脂质体包封的奥沙利铂制剂的DSC扫描显示，每次新扫描的转变温度保持恒定(图24)。此外，PG含量较高，转变温度似乎增加(图25)。
对于DSPG含量较低的制剂，当透析相同时间时，DOE(％)通常较高。

Claims (23)

1.sPLA2可水解的脂质体，含有
●为25％-45％(mol/mol)的阴离子脂质，所述阴离子脂质是磷脂酰甘油
●小于1％(mol/mol)的胆固醇和
●选自小分子抗肿瘤剂、抗生素、抗真菌剂和抗炎剂的治疗剂，
-其中，脂质体进一步包含不带电荷的磷脂，其选自磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，和
-其中，脂质体已经暴露于浓度0.1mM-1mM的二价阳离子。
2.权利要求1的脂质体，含有亲水聚合物，所述亲水聚合物选自聚(乙二醇)、聚(N-丙烯酰吗啉)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(2-甲基-2-噁唑啉)、聚(乙烯醇)、羟基丙基甲基纤维素、聚(环氧乙烷)、聚(D-葡糖胺)、聚(氨基酸)、聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)和其共聚物。
3.权利要求2的脂质体，其中聚合物是聚(乙二醇)，分子量为100Da至10kDa。
4.权利要求2的脂质体，其中聚合物连接磷脂酰乙醇胺的头基。
5.权利要求4所述的脂质体，其中聚合物连接的脂质的量为2.5％-7.5％(mol/mol)。
6.权利要求1-5任一项所述的脂质体，不含胆固醇。
7.权利要求1-5任一项的脂质体，其中脂质的烷基链是C18饱和链。
8.权利要求1-5任一项所述的脂质体，其中治疗剂选自蒽环霉素衍生物、顺铂、奥沙利铂、卡铂、多柔比星、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、依昔舒林、顺式-视黄酸、舒林酸硫化物、甲氨喋呤、博来霉素和长春新碱的小分子抗肿瘤剂。
9.权利要求1-5任一项的脂质体，其中治疗剂是奥沙利铂或者顺铂。
10.权利要求1-5任一项的脂质体，其中脂质体是单层大囊泡。
11.权利要求1-5任一项的脂质体，其中脂质体直径为80-120纳米。
12.权利要求1-5任一项的脂质体，其中脂质体中脂质的至少一种是sPLA2的底物。
13.权利要求1-5任一项的脂质体，其中二价阳离子是Ca2+。
14.脂质体制剂，含有根据权利要求1-13任一项的脂质体和0.1mM-1mM的二价阳离子。
15.权利要求14的脂质体制剂，其中二价阳离子是Ca2+。
16.权利要求14-15任一项的脂质体制剂，其中多分散性指数是0.20或者更低。
17.一种用于制备权利要求14-16任一项的脂质体制剂的方法，包括如下步骤：
a.在有机溶剂中溶解所选择的脂质，制备脂质混合物，
b.将步骤a)的产物用含水的水合溶剂水合从而形成脂质体，
c.在加入含水的水合溶剂之前，或在加入含水的水合溶剂之后，除去步骤a)的有机溶剂。
18.权利要求17的方法，其中在加入水合溶剂之前除去有机溶剂。
19.权利要求17-18任一项的方法，进一步包括超声处理脂质体制剂的步骤，以制备具有特定尺寸的脂质体。
20.权利要求17-18任一项的方法，其中水合溶剂含有浓度为0.1mM-1mM的二价阳离子。
21.权利要求20的方法，其中二价阳离子是Ca2+。
22.权利要求17-18任一项的方法，进一步包括将外部水相改变为另一含有浓度0.1mM-1mM二价阳离子的外部水相的步骤。
23.权利要求22的方法，其中二价阳离子是Ca2+。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110522728A (zh) * 2019-10-11 2019-12-03 上海市同仁医院 一种介孔二氧化硅纳米递药系统、制备方法及其应用

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2123258A1 (en) 2008-05-23 2009-11-25 Liplasome Pharma A/S Liposomes for drug delivery
DK177532B1 (en) * 2009-09-17 2013-09-08 Bio Bedst Aps Medical use of sPLA2 hydrolysable liposomes
DK177529B1 (en) * 2009-10-23 2013-09-08 Bio Bedst Aps Liposomes with improved storage stability
WO2011098578A2 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Bioneer A/S Liposome system for ocular administration
EP2717856B1 (en) * 2011-05-10 2016-11-23 The Penn State Research Foundation Ceramide anionic liposome compositions
CN102579350B (zh) * 2012-03-02 2013-04-24 海南灵康制药有限公司 右旋布洛芬脂质体固体制剂
SG11201501010QA (en) 2012-08-10 2015-04-29 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Stable oxaliplatin-encapsulating liposome aqueous dispersion and method for stabilizing same
MA37931A1 (fr) * 2012-08-13 2016-07-29 Teni Boulikas Procédés améliorés permettant de traiter un cancer avec une toxicité rénale réduite
CN103169659A (zh) * 2012-11-23 2013-06-26 杭州师范大学 一种奥沙利铂长循环脂质体及其应用
ES2774549T3 (es) * 2013-03-13 2020-07-21 Bioasis Technologies Inc Fragmentos de P97 y usos de los mismos
US20140271923A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Christopher Brian Reid Compositions & formulations for preventing and treating chronic diseases that cluster in patients such as cardiovascular disease, diabetes, obesity, polycystic ovary syndrome, hyperlipidemia and hypertension, as well as for preventing and treating other diseases and conditions
KR101683635B1 (ko) * 2014-12-29 2016-12-09 가천대학교 산학협력단 락테이트 금속염을 포함하는 암 치료용 약학 조성물
CN104758250B (zh) * 2015-03-04 2021-06-01 王海龙 一种紫杉醇脂质体及其制备方法和用途
EP3308779B1 (en) * 2015-06-10 2019-08-07 Teikyo University Theranostic bubble preparation (tb), and method for using same
US9725769B1 (en) 2016-10-07 2017-08-08 Oncology Venture ApS Methods for predicting drug responsiveness in cancer patients
AU2017258901A1 (en) 2016-12-30 2018-07-19 Allarity Therapeutics Europe ApS Methods for predicting drug responsiveness in cancer patients
US11357743B2 (en) 2017-04-19 2022-06-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Ketamine and propofol admixture
AU2019210204B2 (en) 2018-01-18 2024-05-16 EndoProtech, Inc. Treating microvascular dysfunction
AU2019200325A1 (en) * 2018-01-31 2019-08-15 Liplasome Pharma Aps Methods for treating cancer and predicting drug responsiveness in cancer patients
WO2021262892A1 (en) * 2020-06-23 2021-12-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of using a pla2-responsive drug delivery system

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101252912A (zh) * 2005-09-01 2008-08-27 诺瓦提斯公司 脂质体组合物

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3993754A (en) * 1974-10-09 1976-11-23 The United States Of America As Represented By The United States Energy Research And Development Administration Liposome-encapsulated actinomycin for cancer chemotherapy
US4880635B1 (en) 1984-08-08 1996-07-02 Liposome Company Dehydrated liposomes
US4963362A (en) 1987-08-07 1990-10-16 Regents Of The University Of Minnesota Freeze-dried liposome mixture containing cyclosporin
AU633078B2 (en) * 1989-04-04 1993-01-21 Alcon Laboratories, Inc. The use of liposomes for the delivery of therapeutic agents to wounds, cuts and abrasions
US5227170A (en) * 1989-06-22 1993-07-13 Vestar, Inc. Encapsulation process
US6027726A (en) 1994-09-30 2000-02-22 Inex Phamaceuticals Corp. Glycosylated protein-liposome conjugates and methods for their preparation
US5858397A (en) 1995-10-11 1999-01-12 University Of British Columbia Liposomal formulations of mitoxantrone
DE69730218D1 (de) * 1996-04-11 2004-09-16 Univ British Columbia Fusogene liposomen
US6120751A (en) * 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
WO1999030686A1 (en) 1997-12-12 1999-06-24 Inex Pharmaceuticals Corp. Cationic drugs encapsulated in anionic liposomes
US6911306B1 (en) 1999-10-18 2005-06-28 Emory University TMS1 compositions and methods of use
US6593308B2 (en) * 1999-12-03 2003-07-15 The Regents Of The University Of California Targeted drug delivery with a hyaluronan ligand
WO2001058910A2 (en) 2000-02-10 2001-08-16 Liplasome Pharma A/S Lipid-based drug delivery systems
EP1839670A3 (en) * 2001-02-21 2009-11-11 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Modified Annexin Proteins and their use against thrombosis
US20030026831A1 (en) * 2001-04-20 2003-02-06 Aparna Lakkaraju Anionic liposomes for delivery of bioactive agents
CA2383259A1 (en) 2002-04-23 2003-10-23 Celator Technologies Inc. Synergistic compositions
EP1448165B1 (en) * 2001-11-13 2007-09-19 Celator Pharmaceuticals, Inc. Lipid carrier compositions and methods for improved drug retention
AU2002340669A1 (en) 2001-11-13 2003-05-26 Celator Technologies, Inc. Lipid carrier compositions with enhanced blood stability
US7273620B1 (en) 2002-05-20 2007-09-25 University Of British Columbia Triggered release of liposomal drugs following mixing of cationic and anionic liposomes
US20040018525A1 (en) 2002-05-21 2004-01-29 Bayer Aktiengesellschaft Methods and compositions for the prediction, diagnosis, prognosis, prevention and treatment of malignant neoplasma
US20040022842A1 (en) * 2002-06-03 2004-02-05 Mebiopharm Co., Ltd. Liposome preparations containing oxaliplatin
DE60335469D1 (de) 2002-07-02 2011-02-03 Univ Texas Radioaktiv markierte verbindungen und liposome und ihre herstellungs- und anwendungsverfahren
WO2004087105A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-14 Celator Pharmaceuticals, Inc. Combination formulations of platinum agents and fluoropyrimidines
US20040203069A1 (en) * 2003-04-10 2004-10-14 Chris Reutelingsperger Method for determining and/or isolating lipid-binding compounds
CA2524478A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-18 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Lipid platinum complexes and methods of use thereof
EP1643971A2 (en) * 2003-05-22 2006-04-12 Neopharm, Inc. Liposomal formulations comprising a combination of two or more active agents
WO2005000272A1 (en) * 2003-06-04 2005-01-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Long-circulating liposomal compositions
US20060019256A1 (en) 2003-06-09 2006-01-26 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
EP1547674A1 (en) 2003-12-23 2005-06-29 MediGene Oncology GmbH Method for producing colloidal nanoparticles
WO2005078139A2 (en) 2004-02-09 2005-08-25 Thomas Jefferson University DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CANCERS WITH MicroRNA LOCATED IN OR NEAR CANCER-ASSOCIATED CHROMOSOMAL FEATURES
KR101462819B1 (ko) 2004-05-03 2014-11-21 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
JPWO2006025411A1 (ja) 2004-08-31 2008-05-08 アステラス製薬株式会社 細胞内薬物送達改善リポソーム
ATE418966T1 (de) 2004-11-03 2009-01-15 Liplasome Pharma As Arzneimittelabgabesysteme auf lipidbasis mit unnatürlichen phospholipase-a2-abbaubaren lipid- derivaten und ihre therapeutische verwendung
AU2006306108B2 (en) 2005-10-25 2012-10-04 Celator Pharmaceuticals, Inc. Fixed ratio drug combination treatments for solid tumors
US20070148194A1 (en) * 2005-11-29 2007-06-28 Amiji Mansoor M Novel nanoemulsion formulations
EP2487258B1 (en) 2006-01-05 2014-10-01 The Ohio State University Research Foundation MicroRNA-based methods for the diagnosis of colon, pancreas and stomach cancer
GR20060100144A (el) * 2006-03-03 2007-10-17 Θεραπεια του καρκινου με χρηση οξαλιπλατινης εγκλεισμενης μεσα σε λιποσωματα και απο κοινου εγκλεισμος στο λιποσωμιακο μοριο περισσοτερων απο ενος φαρμακευτικου παρασκευασματος h gene
WO2007123691A2 (en) * 2006-03-30 2007-11-01 The Research Foundation Of State University Of New York Method for treating blood coagulation disorders
CN101557801B (zh) * 2006-07-14 2013-10-30 Fmc生物聚合物联合股份有限公司 含有低分子量藻酸盐的水凝胶和从其制备的生物构建物
US20080069778A1 (en) * 2006-09-20 2008-03-20 Imarx Therapeutics, Inc. Polymer-encapsulated microspheres
US20090162425A1 (en) 2007-09-19 2009-06-25 University Of Tennessee Research Foundation Methods and compositions for inhibiting undesirable cellular proliferation by targeted liposome delivery of active agents
EP2123258A1 (en) 2008-05-23 2009-11-25 Liplasome Pharma A/S Liposomes for drug delivery
DK177532B1 (en) 2009-09-17 2013-09-08 Bio Bedst Aps Medical use of sPLA2 hydrolysable liposomes
DK177529B1 (en) 2009-10-23 2013-09-08 Bio Bedst Aps Liposomes with improved storage stability
WO2011098578A2 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Bioneer A/S Liposome system for ocular administration
AU2017258901A1 (en) 2016-12-30 2018-07-19 Allarity Therapeutics Europe ApS Methods for predicting drug responsiveness in cancer patients

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101252912A (zh) * 2005-09-01 2008-08-27 诺瓦提斯公司 脂质体组合物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110522728A (zh) * 2019-10-11 2019-12-03 上海市同仁医院 一种介孔二氧化硅纳米递药系统、制备方法及其应用
CN110522728B (zh) * 2019-10-11 2022-03-15 上海市同仁医院 一种介孔二氧化硅纳米递药系统、制备方法及其应用

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Publication number Publication date
AU2009248673B2 (en) 2014-08-21
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