CN102002099B

CN102002099B - 高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN102002099B
Application number: CN2010105196227A
Authority: CN
Inventors: 蒯本科; 郭玉娟; 魏强; 梁宁菁
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2010-10-26
Filing date: 2010-10-26
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2030-10-26
Also published as: CN102002099A

Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，具体为一种高羊茅的叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的叶绿素降解代谢调控相关蛋白，来源于高羊茅，名称为FaNYE1,其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1的编码基因，是下列核苷酸序列之一：1）序列表中的SEQIDNO:1；2）编码序列表中SEQIDNO：2氨基酸序列的多核苷酸。本发明的基因可用于高羊茅叶绿素降解机制研究，并可用于植物滞绿性状改良。

Description

高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用，特别是涉及高羊茅的叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

叶绿素是光合作用中捕获光的主要成分，在植物生长发育后期、叶片衰老或果实成熟时，叶绿素被大规模降解。叶绿素降解对叶片衰老过程中蛋白质氮的循环再利用具有重要意义（Hörtensteiner S,Annu Rev Plant Biol, 57: 55-77,2006）；同时叶绿素降解是衰老叶肉细胞的一种解毒方式(Matile et al. Plant Physiology and Biochemistry, 27: 595-604， 1989; Matile et al. Plant Physiology, 112: 1403-1409, 1996)。最新的叶绿素降解途径为：叶绿素首先脱去镁离子，生成脱镁叶绿素（pheophytin），然后脱镁叶绿素在PPH（Pheophytin Pheophorbide Hydrolase）[Silvia Schelbert，et al. The Plant Cell,21: 767–785,2009]，又称CRN1（Co-regulated with NYE1）[Ren G,et al.Journal of Integrative Plant Biology,52(5):496-504,2010]的作用下被脱去植醇形成脱镁叶绿酸(Phaeophorbide a,Pheide)。脱镁叶绿酸是叶绿素降解中最后的绿色色素，它的卟啉大环在脱镁叶绿酸加氧酶(Pheophorbide a oxygenase, PaO) 和红色叶绿素降解物还原酶(red chlorophyll catabolite reductase, RCCR) 的作用下经过两步反应被氧化开环。由于卟啉环裂解与叶片色素(绿色) 丧失有关，因此这一步是叶片衰老时叶色黄化的关键步骤。该氧化过程的中间产物是红色叶绿素代谢产物（RCC），最终产物是原初荧光叶绿素降解产物（primer fluorescent Chl catabolite, pFCC），它是有荧光的四吡咯线性分子。然后pFCC被运出叶绿体，其C（82）位被羟基化并运送入液泡。在液泡里因为pH值偏酸性，修饰过的FCCs的D环和次甲基桥上发生非酶催化的异构，最后生成叶绿素最终代谢产物：非荧光叶绿素代谢产物（non- fluorescent Chl catabolite,NCCs）。叶绿素降解途径中的许多酶都已经被发现。

通过突变体（nye1-1）筛选和图位克隆，本实验室在国际上率先分离鉴定出了一个叶绿素降解代谢的关键调控基因AtNYE1（At4g22920,GenBank accession number :DQ437531）(Ren et al. Plant Physiol,2007, 144: 1429-1441.)。拟南芥滞绿突变体nye1-1，在黑暗处理6天后，还保持了50%的叶绿素含量，与此同时处理的野生型植株仅含有不到10%的叶绿素，然而在nye1-1中光合作用和衰老相关的过程均未受到明显影响，因此滞绿突变体nye1-1属于滞绿突变体类型中的C型即非功能性的滞绿突变体。过量表达AtNYE1可导致植株叶片黄化, 甚至出现白化苗。AtNYE1受各种衰老信号诱导，编码一个新的叶绿体蛋白。

NYE1在植物中高度保守，在其它植物物种也鉴定出了AtNYE1的同源基因，这些基因的突变体植株在衰老时均具有叶片或子叶滞绿的特征，统称为衰老诱导的叶绿体滞绿相关蛋白基因（Senescence-inducible chloroplast stay-green protein, SGR）。如草地羊茅（Festuca pratensis）sid/Bf993 (Armstead et al., New Phytologist , 172: 592-597,2006)，水稻（Oryza sativa）sgr (Jiang et al. Plant J , 52:197-209., 2007; Park et al. Plant Cell, 19: 1649-1664, 2007)，辣椒（Capsicum annuum）cl (Barry et al., Plant Physiology , 147: 179-187 2008)，豌豆（Pisum sativum）JI2775 (Armstead et al., Science, 315: 73-73 2007)，西红柿（Solanum lycopersicon）gf [(Barry et al., Plant Physiology , 147: 179-187 2008)]等。

高羊茅( Festuca arundinacea Schreb.) 为羊茅属植物,又叫苇状羊茅。其原产地为欧洲, 在我国黑龙江、北京、山东、江苏、湖南、江西等很多地方都已引种栽培(孙本信，北京：中国林业出版社，78-80,2001)。因其适口性好且成坪效果佳,成为倍受人们重视的著名牧草和草坪草（王新海，四川草原，5:60，2003）。高羊茅在畜牧业[彭泽，农业知识（科学养殖）,11:39，2004]、城市园林绿化、水土保持及体育等产业中都有举足轻重的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明所提供的高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白，是具有SEQ ID NO.2 氨基酸残基序列的蛋白质。

高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白的编码基因，是下列核苷酸之一

1）SEQ ID NO.1 所示的DNA序列。

2）编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的多核苷酸。

SEQ ID NO.1由1441个碱基组成，该基因的读码框为自5’端第329位至1162位碱基；SEQ ID NO.2由277个氨基酸残基组成。

本发明还包括含有本发明基因的表达载体和细胞系。

本发明还包括所述高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1的编码基因在高羊茅叶绿素降解分子机制中的应用。

本发明还包括所述高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白的编码基因在植物滞绿性状改良中的应用。

附图说明

图1为中间片断扩增产物凝胶电泳图谱。

图2为3’端扩增产物凝胶电泳图谱。

图3为5’端扩增产物凝胶电泳图谱。

图4为高羊茅叶绿素降解调控相关蛋白FaNYE1与其他物种叶绿素降解调控相关蛋白NYE1亲缘关系进化树分析。

图5为高羊茅叶绿素降解调控相关蛋白FaNYE1与其他物种叶绿素降解调控相关蛋白NYE1相似性分析。

图6为黑暗处理4天时，野生型和互补转基因植株离体叶片的表型。

图7为自然状态下生长45天时，野生型，滞绿突变体（nye1-1）,互补转基因植株的表型。

图8为自然状态下生长20天时，野生型和过表达转基因植株的表型。

具体实施方式

实施例1、高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白编码基因的获得。

1.1 RNA提取

取衰老的高羊茅叶片材料约0.1g。液氮充分研磨后，转移到1.5ml离心管，加入1ml

( invitrogen公司 )，混匀后，室温放置15分钟，加0.2ml氯仿:异戊醇（24:1），剧烈摇动15秒后室温放置5分钟，13000rpm, 4℃离心15分钟。取上清液并加入等体积异丙醇，小心混匀，室温放置15分钟，13000rpm，4℃离心15分钟。70％乙醇洗涤沉淀，室温干燥15分钟。溶解于适量的经0.1% DEPC处理过的ddH₂O水中，贮存于-80℃备用。

1.2 cDNA第一链合成和反转录PCR

采用上海申能博彩生物技术公司(SHBC)的cDNA第一链合成试剂盒，按照操作指南将总RNA反转录成cDNA。反应体系和反应条件分别为：2µg制备的总RNA，0.5µl Rnase inhibitor，加DEPC处理过的去离子水至8.5µl, 2µl的Oligo(dT)18 primer. 65℃,5min,室温放置10min， 13000rpm 简短离心5s。再依次加入4µl 5×First-Strand buffer，0.5µl RNase Inhibitor，2µl 100mM DTT, 2µl dNTP, 1µl MMLV Reverse Transcriptase。小心混匀；37℃反转录1小时，90℃5分钟；冰上冷却；13000rpm 短暂离心5秒钟，存放于-20℃待用。

1.3 RT-PCR扩增FaNYE1的中间片断

根据其他物种克隆得到的NYE1蛋白的保守序列，设计了两条同源兼并引物FaNYE1CF（5' TTTGGTCCGGCGATCTTCGA 3'）和FaNYE1CR：（5'TGAGAGGACCCCAGC ACTCGAC 3'）（SEQ ID NO.3）作为PCR反应的引物。PCR 反应体系为50µl，反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性40s，55℃ 复性40s，72℃延伸40s，循环38次。72℃充分延伸10min。将所得的PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离获得一段469bp的片断。回收并且通过TA克隆至TAKARA pMD19-T载体后，由上海英骏公司测序，获得FaNYE1的中间序列。

1.4 FaNYE1全长序列的获得。

1.4.1 FaNYE1 3’末端序列的扩增

FaNYE1的3’末端序列扩增使用Clontech公司的BD-SMARTTMRACE试剂盒。根据已经获得的保守序列设计了两个特异性引物进行巢式PCR反应。

FaNYE13’RACE F：5' TACTACATCTTCCGCAAGGAGCTACCCG 3'

FaNYE13’RACE NF：5' CCGTGGTTCTGAAGGCGTT 3' （SEQ ID NO.4）

反应条件分别为：

第一轮PCR反应：94℃预变性5min，94℃变性40s，60℃复性60s，72℃延伸90s，循环35次。72℃充分延伸10min。

第二轮PCR反应：94℃预变性5min，94℃变性40s，54℃复性60s，72℃延伸90s，循环40次。72℃充分延伸10min。

第二轮PCR反应结束后，1％电泳检测，获得778bp的片段，割胶回收并克隆至克隆载体进行测序，获得3’末端序列。

1.5 FaNYE1 5’末端序列的扩增

按照Takara 5’ FULL-RACE（Code：D6122）方法自行合成以下5个引物：

FaNYE1 5’末端P标记反转录引物：5' ATGGTGTGCGAGAC 3' （ SEQ ID NO.5）

1st PCR A1: 5' ACCTACACGCTCACCCACAG 3'

1st PCR S1: 5' TCGAGTTCTCCTCCTCCACC 3' （SEQ ID NO.6）

2nd PCR A2: 5' CTCACCCACAGCGACGTCA 3'

2nd PCR S2: 5' ACCCCCACGAACAGCACCT 3' （SEQ ID NO.7）

按照Takara 5’端 FULL-RACE（Code：D6122）方法，依次经过 cDNA第一链的合成，Hybrid RNA的分解，连接反应（单链cDNA环化或形成首尾连接物），以及两轮PCR 反应，再经琼脂糖凝胶电泳分离获得526bp的PCR片断。最后经割胶回收，克隆至克隆载体，测序，最终获得FaNYE1的5’末端序列。

第一轮PCR反应条件：94℃预变性5min，94℃变性40s，53℃复性60s，72℃延伸60s，循环35次。72℃充分延伸10min。

第二轮PCR反应条件：94℃预变性5min，94℃变性40s，55℃复性60s，72℃延伸60s，循环35次。72℃充分延伸10min。

根据已经获得的FaNYE1 3’和5’末端序列以及中间序列拼接获得了FaNYE1的全长序列。

实施例2：高羊茅叶绿素降解调控相关蛋白FaNYE1功能分析。

2.1序列比较分析

利用Genedoc软件分析了FaNYE1与其他物种的同源性。分析结果表明FaNYE1与其他物种的NYE1(SGR)蛋白具有极大的同源性，并且C端具有序列“C-X3-C-X-C2-F-P-X5-P”, 这一段序列在其他植物NYE1中均高度保守，如图6所示，图中加黑部分是一致性的氨基酸序列，框起来部分为C端保守序列。SbSGR (AAW82958), ZmSGR1 (NP_001105770), ZmSGR2 (NP_001105771), OsSGR (EAZ09856), HvSGR (AAW82955), AtNYE1 (NP_567673), AtNYE2 (ABD77556), LeSGR1 (AAY98500), GmSGR1 (AAW82959), PsSGR (BAF76352).

为了分析FaNYE1同其他物种NYE1蛋白的亲缘关系，用MEGA3.1软件建立了FaNYE1同其他物种NYE1蛋白的系统进化树。结果表明FaNYE1同大麦的亲缘关系最近。

2.2 FaNYE1功能分析。

2.2.1互补拟南芥nye1-1载体构建

利用引物AtNYE1PF和 AtNYE1PR扩增出拟南芥AtNYE1 的启动子，并克隆至pMD19-T vector(Takara)，测序无误之后。使用EcoR1和Sac1双酶切，回收纯化目的片断，并连接到经过同样两个酶酶切，纯化的pCHF3载体上。命名为PAtNYE1- pCHF3

AtNYE1PF：5' CTGGAATTCAAATCCCTACATA 3'

AtNYE1PR：5' CTCTGAGCTCTTGAAACCCA 3' （SEQ ID NO.8）

利用引物FaNYE1F 和FaNYE1R 扩增出FaNYE1的cDNA，并克隆pMD19-T vector(Takara)，测序无误之后。使用Sac1和BamH1双酶切，回收纯化目的片断，并连接到经过同样两个酶酶切，纯化的PAtNYE1- pCHF3载体上。

2.2.2农杆菌转化。

2.2.2.1 LBA4404农杆菌感受态细胞制备

1) 在含利福霉素40µg/ml, 链霉素100µg/ml 的YEB固体培养基上划线， 28℃培养48h-72h；

2) 挑单菌落到含利福霉素40µg/ml, 链霉素100µg/ml 的YEB液体培养基中28℃培养至OD₆₀₀0.5；

3) 冰上冷却菌液，5000rpm, 4℃ 10分钟收集菌体；

4) 1mm Hepes pH 7.0洗涤3次，再用10％甘油洗涤一次；

5) 悬浮菌体于3ml 10％甘油中，分装到1.5ml离心管中，每管40µl。

2.2.2农杆菌转化

1）200ng质粒DNA，加40µl农杆菌感受态细胞混匀后按以下条件进行电转化;

U 1.8 KV

R 200 W

C 25 µF

2）电击后添加800µl SOC液体培养基，28℃ 培养1h；

3) 4000rpm， 10分钟收集菌体，悬浮于200µl SOC中，涂在含100µg/ml壮观霉素，利福平40µg/ml, 链霉素100µg/ml YEB固体培养基上，28℃倒置培养48h-72h。

2.2.3农杆菌介导的拟南芥转化。

2.2.3.1 拟南芥基质培养:

基质组分：蛭石：黑土：珍珠岩 9 : 3 : 0.5

营养液组分：

。

基质浸透营养液后，将种子播于钵子中，用保鲜膜覆盖，置于4℃黑暗条件下，2天后转入（16h L/8h D）光照, 23℃条件下进行培养。拟南芥生长到抽苔开花即可供转化。

2.2.3.2农杆菌准备

1) 接种携带目的表达载体的农杆菌到含适量抗生素的YEB培养基中，28℃，220rpm摇菌培养至OD₆₀₀1.2。

2) 5000rpm, 4℃ 10分钟离心收集菌体。

3) 菌体重新悬浮于5％的蔗糖溶液中，并调至OD₆₀₀0.8。

4）加入Silwet L-77至终浓度为0.03%。

2.2.3.3拟南芥转化

取拟南芥材料，倒置浸泡地上部分于预备好的农杆菌溶液中，晃动约3秒，取出，放置到荫蔽条件下，保湿24h，转到正常条件培养。

2.2.3.4拟南芥转化子筛选

收集转化后拟南芥的种子。种子用0.01% HgCl₂ 表面灭菌8分钟，无菌水冲洗4次，悬浮在0.1 %的琼脂糖中，然后按每平板（直径15cm）2000粒种子（约40mg），铺在卡那霉素50µg/L, 1/2MS培养基上。将平板置于4℃黑暗冰箱中2天，转移到（16h L/8h D）光照, 23℃条件下进行培养。约10天左右可筛选出具卡那霉素抗性的转基因植株。将具抗性的植株转移到基质培养，并收获T₂代种子。

2.2.4 互补拟南芥nye1-1转基因植株表型鉴定

收获的T₃代纯合转基因植株种子经表面灭菌后铺在含50mg/L卡那霉素的MS培养基上，4℃黑暗冰箱中2天，转移到（16h L/8h D）光照, 23℃条件下培养。25天后取第六片叶片，放在铺有湿润滤纸的培养皿上，并用保鲜膜覆盖培养皿，在黑暗中培养4天。野生型及突变体（nye1-1）的第六片叶片作为对照。同时在正常生长状态下，观察互补转基因株系，野生型以及拟南芥滞绿突变体的表型。

2.2.5 过表达FaNYE1转基因植株表型鉴定

收获的T₁代转基因植株种子经表面灭菌后铺在含50mg/L卡那霉素的MS培养基上，4℃黑暗冰箱中2天，转移到（16h L/8h D）光照, 23℃条件下培养。在正常生长状态下观察转基因株系，野生型以及突变体（nye1-1）的表型。

<110> 复旦大学

<120> 高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白及其编码基因与应用

<130> 001

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1441

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 1

atcagtagcc acttggggaa caaacgacga atccaattga gctctccctt ttgccagtgc 60

cgcacgcaca cgcgattcca ccgatcaatc taccgctctc tcctgcagtc ttggggctac 120

tgcatctggt cgtggcttaa tttcttccgg ttgaggcgtg caagctacaa cgtgcccctt 180

gctcccctcc ggttaactag ccggcgaccc agcgcgatcg agctcatcct acctagttca 240

tagggttcct ttcttggcat ctggttccac ctagttttgg taagcctccg aggtgcaaag 300

cagagagcct gatcaaagga gggcagacat ggccactgcc gcttccacca tgtccctgct 360

cccgctctcc cagctcaagc agcttcagca gcagcgccgg tatggcggcg ccagctccgt 420

gctcgtgctc ggccggcgga agcgattcgt cgtgccgagg gcgcggctgt ttggtccggc 480

catcttcgag gcgtcgaagc tgaaggtgct gttcgtgggg gtggaggagg agaactcgaa 540

gcacccgggg aagctgccgc ggacctacac gctcacccac agcgacgtca cggcgcgcct 600

cacgctggcg gtctcgcaca ccatccacgc cgcgcagctg cagggctggt acaaccgcct 660

gcagcgggac gaggtggtgg cagagtggaa gaaggtgcgc ggggccatgt cgctgcacgt 720

ccactgccac atctccggcg gccacttcct cctcgacctc atcgcgccgc tgcgctacta 780

catcttccgc aaggagctac ccgtggttct gaaggcgttc gtgcacggcg acggcagcct 840

gttcagcagc cacccggagc tggaggaggc cacggtgtgg gtctacttcc actccaacct 900

cccgcgattc aaccgcgtcg agtgctgggg cccgctccac gacgccgccg cgccatacga 960

cgacgaattc gccgtcgacg ttccggccgc cgacaccttc atggccgctg aggagccgca 1020

gacgattccg ccggctagcg agtggccgcg gcggtgcgcc gggaagtgcg agtgctgctt 1080

cccgcccgag tgcctcatcc cctggccgca cgagcgcgac atggcgacag ccgccgatgc 1140

cggccagtcg ccgccccagt gatatggtca ggtccggaca tacactagcc gaattgttca 1200

gctcgcgcag gtaccaagta cacgggtcct caacgcagcg catgcagtgg cgccaagaac 1260

caaccatctg catgcactgc gctattcttt aattggtagc ttaattagct cagccctagc 1320

caatacacat actcctgcct acttaggtta gtcagctaat caacgccatg gatgtggtga 1380

tctagcattg tatactccat cttgtaaata gaattattag acagttggca aacacatcac 1440

t 1441

<210> 2

<211> 277

<212> PRT

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 2

Met Ala Thr Ala Ala Ser Thr Met Ser Leu Leu Pro Leu Ser Gln Leu

1 5 10 15

Lys Gln Leu Gln Gln Gln Arg Arg Tyr Gly Gly Ala Ser Ser Val Leu

20 25 30

Val Leu Gly Arg Arg Lys Arg Phe Val Val Pro Arg Ala Arg Leu Phe

35 40 45

Gly Pro Ala Ile Phe Glu Ala Ser Lys Leu Lys Val Leu Phe Val Gly

50 55 60

Val Glu Glu Glu Asn Ser Lys His Pro Gly Lys Leu Pro Arg Thr Tyr

65 70 75 80

Thr Leu Thr His Ser Asp Val Thr Ala Arg Leu Thr Leu Ala Val Ser

85 90 95

His Thr Ile His Ala Ala Gln Leu Gln Gly Trp Tyr Asn Arg Leu Gln

100 105 110

Arg Asp Glu Val Val Ala Glu Trp Lys Lys Val Arg Gly Ala Met Ser

115 120 125

Leu His Val His Cys His Ile Ser Gly Gly His Phe Leu Leu Asp Leu

130 135 140

Ile Ala Pro Leu Arg Tyr Tyr Ile Phe Arg Lys Glu Leu Pro Val Val

145 150 155 160

Leu Lys Ala Phe Val His Gly Asp Gly Ser Leu Phe Ser Ser His Pro

165 170 175

Glu Leu Glu Glu Ala Thr Val Trp Val Tyr Phe His Ser Asn Leu Pro

180 185 190

Arg Phe Asn Arg Val Glu Cys Trp Gly Pro Leu His Asp Ala Ala Ala

195 200 205

Pro Tyr Asp Asp Glu Phe Ala Val Asp Val Pro Ala Ala Asp Thr Phe

210 215 220

Met Ala Ala Glu Glu Pro Gln Thr Ile Pro Pro Ala Ser Glu Trp Pro

225 230 235 240

Arg Arg Cys Ala Gly Lys Cys Glu Cys Cys Phe Pro Pro Glu Cys Leu

245 250 255

Ile Pro Trp Pro His Glu Arg Asp Met Ala Thr Ala Ala Asp Ala Gly

260 265 270

Gln Ser Pro Pro Gln

275

<210> 3

<211> 42

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 3

tttggtccgg cgatcttcga tgagaggacc ccagcactcg ac 42

<210> 4

<211> 47

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 4

tactacatct tccgcaagga gctacccgcc gtggttctga aggcgtt 47

<210> 5

<211> 14

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 5

atggtgtgcg agac 14

<210> 6

<211> 40

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 6

acctacacgc tcacccacag tcgagttctc ctcctccacc 40

<210> 7

<211> 38

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 7

ctcacccaca gcgacgtcaa cccccacgaa cagcacct 38

<210> 8

<211> 42

<212> DNA

<213> 高羊茅（Festuca arundinacea）

<400> 8

ctggaattca aatccctaca tactctgagc tcttgaaacc ca 42

Claims

1.一种高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1，其特征在于为SEQ ID NO.2所示氨基酸残基序列的蛋白质。

2.高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1编码基因，其特征在于其DNA序列为SEQ ID NO.1 所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：该基因的编码框为自5’端第329位到第1162位碱基的DNA序列。

4.含有如权利要求2或3所述高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1的编码基因的表达载体。

5.含有如权利要求2或3所述高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白FaNYE1的编码基因的细胞系。

6.如权利要求2或3所述高羊茅叶绿素降解代谢调控相关蛋白的编码基因在植物滞绿性状改良中的应用。