CN101991663B - 赤芍总苷液体组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种赤芍总苷液体组合物及其制备方法，该赤芍总苷液体组合物包括赤芍总苷、络合剂和抗氧剂。该赤芍总苷液体组合能提高赤芍总苷液体组合物的稳定性，尤其是在高温下的稳定性。

Description

赤芍总苷液体组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种赤芍总苷液体组合物及其制备方法，属于医药技术领域，具体而言属于药物制剂技术领域。

背景技术

随着居民生活水平的提高、生活节奏的改变以及人口老龄化的发生，在我国，心脑血管疾病发病率愈见升高，死亡率已攀升为除肿瘤之外的居民第二大死因，且此类疾病复发率高，并发症也多，给治疗带来了极大的困难。

赤芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)或川赤芍(Paeonia veitchiiLynch)的干燥根，味苦，性微寒，归肝经，在临床上是用于治疗心脑血管疾病的常用中药，现收载于国家和局颁标准中的就有脑血栓片、脑心通胶囊、脑栓康复胶囊、消瘀康胶囊、益脑复健胶囊、偏瘫复原丸、回生再造丸、大活络丸等，对于治疗心脑血管疾病已有良好的应用基础。近年来，随着中药提取分离等技术的提高，人们对赤芍的化学成分及药理作用的研究也随之深入，大量研究表明：以芍药苷为主的赤芍总苷在心脑血管疾病，尤其是在脑血管方面有显著的药理活性，因此可以认为，赤芍在治疗脑血管疾病方面的药理作用的物质基础就是以芍药苷为主的赤芍总苷，芍药总苷的主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药花苷等单萜苷类化合物等，其中以芍药苷为主，芍药苷含量占70％以上。

现有技术表明，将赤芍总苷制备成液体组合物使用时，其稳定性尤其是在高温条件下的稳定性差。如有文献公开了温度及pH值对赤芍总苷稳定性的影响(姚仲青、朱虹、姚海峰，温度及pH对赤芍总苷稳定性的影响，时珍国医国药2006年第17卷第7期)，该研究发现，赤芍总苷在制成水溶液后在高温条件下不稳定，芍药苷在高于60℃的条件下即不稳定，因此由赤芍总苷制得的水溶液制剂，不宜以加热灭菌的常规方法灭菌。

另外有中国申请CN1443539(公开日2003.9.24)公开了一种治疗心脑血管病的赤芍总苷组合物及其制备方法，其中实施例4公开了赤芍总苷注射液的制备，但没有考察其稳定性。

对药物制剂，尤其是液体制剂而言，为了保证用药的安全性必须进行灭菌，常用的即是高温灭菌。如上所述，由于赤芍总苷水溶液稳定性较差，制备成溶液时在较高的灭菌要求(F0＞12)下很难保证产品的质量稳定，因此根据现有技术很难制备稳定地赤芍总苷液体组合物，阻碍了赤芍总苷治疗脑血管疾病方面的作用，限制了其在临床上的广泛应用。

发明内容

本发明解决的技术问题是提高赤芍总苷液体组合物的稳定性，尤其是在较高温度下的稳定性。

本发明的目的在于提供一种赤芍总苷液体组合物。

本发明的另一个目的在于提供赤芍总苷液体组合物的制备方法。

本发明的再一个目的在于提供赤芍总苷液体组合物的用途。

本发明的赤芍总苷液体组合物包括赤芍总苷、络合剂和抗氧剂。

其中所述的赤芍总苷为赤芍总苷提取物，可以由赤芍药材例如芍药或川赤芍使用常规的方法提取得到，例如中国发明专利申请CN1443539中公开的提取方法。赤芍总苷提取物中芍药苷的含量不低于45％，优选不低于60％，较优选不低于70％，更优选不低于80％，最优选不低于85％。

每100mL赤芍总苷液体组合物中赤芍总苷的用量为0.1g～1g，优选为0.2g～0.9g，更优选为0.3g～0.7g。

其中所述的络合剂优选乙二胺四乙酸、依地酸钙钠、依地酸二钠中的一种或一种以上的混合络合剂，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选依地酸钙钠、依地酸二钠或它们的混合络合剂，最优选依地酸钙钠。

每100mL赤芍总苷液体组合物中络合剂的用量为0.001g～0.1g，优选为0.005g～0.05g，更优选为0.01g～0.02g。

其中所述抗氧剂优选亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素C中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或它们的混合物，最优选亚硫酸氢钠。

每100mL赤芍总苷液体组合物中抗氧剂的用量为0.001g～0.1g，优选为0.005g～0.05g，更优选为0.01g～0.02g。

本发明的赤芍总苷液体组合物还可进一步包含pH调节剂、等渗调节剂等药学上可接受的其它赋形剂。

其中所述pH调节剂用于调节pH值，使赤芍总苷液体组合物的pH值为4～7，优选为5～6.5。所述pH调节剂的用量可以根据需要的pH值适当调整。

所述pH调节剂优选盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸三钠、邻苯二甲酸、乙酸、乙酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选柠檬酸、柠檬酸三钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠或一种以上的混合物，更优选柠檬酸、柠檬酸三钠或它们的混合物。

所述等渗调节剂优选氯化钠、甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇或葡萄糖等中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选氯化钠、葡萄糖或它们的混合物，最优选氯化钠。

每100mL赤芍总苷液体组合物中等渗调节剂的用量为0.001g～10g，优选为0.1～7，更优选为0.5～5。

上述的赤芍总苷液体组合物中，溶剂为水或乙醇，优选水，更优选注射用水。

本发明的赤芍总苷液体组合物最优选以下的液体组合物：

赤芍总苷            5.0g

络合剂              0.2g

抗氧剂              0.2g

pH调节剂            适量

等渗调节剂          50.0g

注射用水加至        1000ml。

或

赤芍总苷            5.0g

络合剂              0.1g

抗氧剂              0.1g

pH调节剂            适量

等渗调节剂          9.0g

注射用水加至        1000ml。

本发明的赤芍总苷液体组合物的制备方法可以是：取处方量的赤芍总苷、络合剂、抗氧剂，加适量溶剂搅拌使溶解，制备成赤芍总苷液体组合物。

以上的制备方法中，视需要，可加入处方量的pH调节剂和/或等渗调节剂。

一种优选的赤芍总苷液体组合物的制备方法是：取处方量的赤芍总苷、络合剂、抗氧剂、等渗调节剂，加适量溶剂搅拌使溶解，加pH调节剂适量调整pH至4～7，再补水至1000ml。

本发明的赤芍总苷液体组合物的用途在于用于制备治疗心脑血管疾病，特别是脑血管疾病的药物。

本发明的赤芍总苷液体组合物的另一个用途在于用于制备赤芍总苷的药物制剂。

本发明的目的还在于提供一种赤芍总苷的药物制剂，该制剂含有上述的本发明的赤芍总苷液体组合物或由本发明的赤芍总苷液体组合物制备得到。

其中所述的药物制剂可以是固体制剂，也可以是液体制剂，优选液体制剂。给药方式可以是口服给药也可以是注射给药，优选注射给药。

其中注射给药制剂可以是注射液或注射用无菌粉末，优选注射液。所述注射液的制备方法可以是将本发明的赤芍总苷液体组合物加入针用活性炭，搅拌均匀，于30℃～80℃保温10～60分钟，脱炭，经微孔滤膜过滤，至澄明，制备得到注射液。所述的无菌粉末可以由本发明的赤芍总苷液体组合物加入冻干赋形剂通过冻干制备得到。

本发明还提供了一种赤芍总苷注射液，该注射液含有赤芍总苷、络合剂、抗氧剂、pH调节剂和等渗调节剂。

其中所述的赤芍总苷为赤芍总苷提取物，可以由赤芍药材例如芍药或川赤芍使用常规的方法提取得到，例如中国发明专利申请CN1443539中公开的提取方法。该赤芍总苷提取物中芍药苷的含量不低于45％，优选不低于60％，较优选不低于70％，更优选不低于80％，最优选不低于85％。

每100mL赤芍总苷注射液中赤芍总苷的用量为0.1g～1g，优选为0.2g～0.9g，更优选为0.3g～0.7g。

其中所述的络合剂优选乙二胺四乙酸、依地酸钙钠、依地酸二钠中的一种或一种以上的混合络合剂，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选依地酸钙钠、依地酸二钠或它们的混合络合剂，最优选依地酸钙钠。

每100mL赤芍总苷注射液中络合剂的用量为0.001g～0.1g，优选为0.005g～0.05g，更优选为0.01g～0.02g。

其中所述抗氧剂优选亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素C中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠或它们的混合物，最优选亚硫酸氢钠。

每100mL赤芍总苷注射液中抗氧剂的用量为0.001g～0.1g，优选为0.005g～0.05g，更优选为0.01g～0.02g。

其中所述pH调节剂用于调节pH值，使赤芍总苷注射液的pH值为4～7，优选为5～6.5。所述pH调节剂的用量可以根据需要的pH值适当调整。

所述pH调节剂优选盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸三钠、邻苯二甲酸、乙酸、乙酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选柠檬酸、柠檬酸三钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠或一种以上的混合物，更优选柠檬酸、柠檬酸三钠或它们的混合物。

所述等渗调节剂优选氯化钠、甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇或葡萄糖等中的一种或一种以上的混合物，它们可以单独使用或一种以上以任何比例混合使用，更优选氯化钠、葡萄糖或它们的混合物，最优选氯化钠。

每100mL赤芍总苷注射液中等渗调节剂的用量为0.001g～10g，优选为0.1～7，更优选为0.5～5。

上述的赤芍总苷注射液中，溶剂为水或乙醇水溶液，优选水，更优选注射用水。

本发明的赤芍总苷注射液最优选以下的处方：

赤芍总苷          5.0g

络合剂            0.2g

抗氧剂            0.2g

pH调节剂          适量

等渗调节剂        50.0g

注射用水加至      1000ml。

或

赤芍总苷          5.0g

络合剂            0.1g

抗氧剂            0.1g

pH调节剂          适量

等渗调节剂        9.0g

注射用水水加至    1000ml。

本发明的赤芍总苷注射液的制备方法是：取处方量的赤芍总苷、络合剂、抗氧剂、等渗调节剂，加适量溶剂搅拌溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于30℃～80℃保温10～60分钟，脱炭，加pH调节剂调整pH至4～7，经微孔滤膜过滤，至澄明，制备而成。

制备注射液的过程还包括灌装，封口，高温灭菌，检验，包装的过程。

本发明的赤芍总苷液体组合物，通过加入络合剂、抗氧剂提高了赤芍总苷在溶液状态下的稳定性，特别是在较高温度下的稳定性。由于稳定性的提高，给药品的制造，储存等过程带来了便利和优势，进而对药品的质量控制带来了益处。例如，本发明的赤芍总苷液体组合物在制备成为注射液时即可用加热灭菌的常规方法灭菌，也能保证赤芍总苷注射液的质量，适宜工业化生产。

附图说明

图1是芍药苷标准曲线的图谱。

图2是本发明注射液高温灭菌前图谱。

图3是本发明注射液高温灭菌后图谱。

图4是参比注射液高温灭菌前图谱。

图5是参比注射液高温灭菌后图谱。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明进行更加详细的说明，但本发明并不局限于这些实施例。

赤芍总苷的制备：取赤芍药材，酌予碎断，加8倍量的水加热沸提3次，每次1.5小时。合并提取液，放冷，过滤。滤液上HPD-400大孔吸附树脂柱，加水充分洗脱至洗脱液为澄清且无还原糖反应后，加2倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液。将洗脱液于70℃减压浓缩至稠膏状后，70℃减压干燥，粉碎，即得赤芍总苷，性状为白色至微黄色粉末。

赤芍总苷的含量测定：

使用UV-2450型可见紫外分光光度计(日本岛津)采用紫外分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，以芍药苷为对照品，在波长229nm处测定。

芍药苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，纯度为99.5％。

结果，按干燥品计，测得制备的赤芍总苷提取物中赤芍总苷含量以芍药苷计为92％。

芍药苷的含量测定：

使用SHIMADZU LC-10Advp SPD-10Avp高效液相色谱仪、ShimadzuCLASS-VP V6.12 SP1工作站、采用标准曲线法测定。

色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：MetaChem Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：乙睛-水(20∶80)；

柱温：30℃；

流速：1ml/min；

检测波长：229nm；

理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000。

芍药苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，纯度为99.5％。

芍药苷标准曲线的制备：

取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液储备液。精密量取上述溶液2.0，3.0，5.0，7.0，8.0ml分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为每1ml含20.0，30.0，50.0，70.0，80.0μg的对照品溶液，分别吸取20μl，注入液相色谱仪，以对照品浓度(μg/ml)为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算得线性回归方程：Y＝27420X-11304，r＝0.9999，表明在赤芍总苷20～80μg/ml的浓度范围内有较好的线性关系，标准曲线见图1。

结果，按干燥品计，测得制备的赤芍总苷提取物中芍药苷含量为88％。

如无特别说明，本申请中赤芍总苷和芍药苷的含量均按上述方法测定。

在以下实施例中所出现的辅料及试剂等的来源与级别，所用的仪器型号和厂家如下：乙二胺四乙酸、依地酸二钠、依地酸钙钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、氯化钠、甘油、葡萄糖、木糖醇、柠檬酸、柠檬酸三钠、磷酸氢二钠、乙酸、乙酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠等辅料均为药用级别符合中华人民共和国药典2005年版二部的规定；注射用水本公司车间自制；针用活性炭购自福建安溪东南活性炭有限公司；酸度计采用上海雷磁仪器厂生产的雷磁PHS-3C型pH计。

实施例1

取赤芍总苷5g、依地酸钙钠0.1g、亚硫酸氢钠0.1g，加9g氯化钠及适量注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于40℃保温50分钟，脱炭，加柠檬酸和柠檬酸三钠适量调整pH至5.3，分别经0.45μm微孔滤膜和0.22μm微孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例2

取赤芍总苷3g、依地酸钙钠0.05g、焦亚硫酸钠0.05g，加5g甘露醇及适量注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于70℃保温30分钟，脱炭，加柠檬酸和磷酸氢二钠适量调整pH至6.5，经0.22μm微孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例3

取赤芍总苷7g、依地酸二钠0.5g、亚硫酸钠0.5g，加70g甘油及适量的注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于50℃保温40分钟，脱炭，加乙酸和乙酸钠适量调整pH至5.0，分别经0.65μm微孔滤膜和0.45μm微孔滤膜过滤，至澄明，灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例4

取赤芍总苷5g、依地酸二钠0.2g、硫代硫酸钠0.2g，加50g葡萄糖及适量注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于50℃保温20分钟，脱炭，加磷酸氢二钠和磷酸二氢钠适量调整pH至6，分别经0.45μm微孔滤膜和0.22μm微孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例5

取赤芍总苷2g、依地酸钙钠0.01g、焦亚硫酸钠0.01g、亚硫酸氢钠0.1g，加1g葡萄糖及适量注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于50℃保温80分钟，脱炭，加磷酸氢二钠和磷酸二氢钠适量调整pH至4，分别经0.65μm微孔滤膜和0.45μm微孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例6

取赤芍总苷9g、依地酸二钠1g、焦亚硫酸钠1g，加100g木糖醇及适量注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于60℃保温30分钟，脱炭，加氢氧化钠适量调整pH至7，经0.22μm微孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。

实施例7：

按照实施例1方法制备不同pH值的本发明的注射液，观察上述制备过程中溶液的澄明度，并进行记录、比较。结果见表1。

表1本发明注射液的pH的选择

pH值	3	4	5	5.2	5.5	6	6.5	7	7.5	9
											澄明度	++	+	-	-	-	-	-	+	++	++

++：表示溶液呈黄色且轻微浑浊，澄明度不佳

+：表示溶液呈微黄色，澄明度较好

-：表示溶液无色透明，澄明度良好

由以上结果可知，当溶液pH在4～7，尤其是5～6.5之间时，溶液的澄明度好，溶液状态稳定，适合制成稳定的注射液。

实施例8：稳定性对比试验：

按照实施例1的方法制备本发明的注射液，并在灌装、灭菌之前取样作为灭菌前的样品，在灭菌之后取样作为灭菌后的样品。

按照以下方法制备参比注射液：取处方量的赤芍总苷组合物5g，加适量的注射用水搅拌使溶解，补注射用水至1000ml，加入针用活性炭，搅拌均匀，于40℃保温50分钟，脱炭，加柠檬酸和柠檬酸三钠适量调整pH至5.3，分别经0.45μm微孔滤膜微0.22μm孔滤膜过滤，至澄明，充N₂灌装，封口，121℃灭菌15分钟，检验，包装，即得。在上述制备过程中同样在灌装、灭菌之前取样作为灭菌前的样品，在灭菌之后取样作为灭菌后的样品。

观察灭菌前后样品的外观，并测定pH、含量及图谱的变化，结果如下：

(1)外观及pH值的比较

表2两种注射液在高温灭菌前后的外观及pH值比较

由表2比较结果可见，本发明的注射液在高温灭菌后色泽及澄明度均符合要求，灭菌前后的pH值变化范围较小，有利于保持注射液质量的稳定。

(2)图谱的比较

供试品溶液的制备：分别精密量取本发明的注射液和参比注射液灭菌前后的样品1ml，置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：取各供试品溶液适量，使用高效液相色谱法，在229nm波长处测定。

结果见附图图2～图5。由图2和图3可知，本发明的注射液样品灭菌前后图谱变化不大，并未有其他物质出现。由图4和图5可知，参比注射液样品灭菌前后图谱有一定的差异，表现为t＝1.817及t＝8.267时出现可见的物质峰，推测为高温灭菌后产生的杂质。

由此可见，本发明的注射液稳定，在高温灭菌后没有出现其他杂质峰。而参比注射液样品对高温灭菌的稳定性差，在高温灭菌后出现杂质峰，注射剂质量稳定性不好。

(3)灭菌前后芍药苷含量的比较

测定法：使用标准曲线，由测得的峰面积求出测得的浓度，与原浓度相比得到芍药苷的相对含量，然后求出多次测量的平均相对含量。结果见表3。

表3两种注射液在高温灭菌前后的芍药苷平均相对含量比较

^**：表示本发明注射液灭菌后与灭菌前相比，芍药苷的平均相对含量没有显著差异(P＞0.05)。

^★★：表示参比注射液灭菌后与灭菌前相比，芍药苷的平均相对含量具有极其显著性差异(p＜0.01)。

^△△：表示灭菌后的参比注射液与本发明的灭菌后的注射液相比，芍药苷的平均相对含量具有极其显著性差异(p＜0.01)。

由表3可见，高温灭菌对本发明的注射液中芍药苷的含量影响不大，灭菌前后比较无显著性差异(P＞0.05)，含量没有明显变化，注射液稳定性好。参比注射液在灭菌前后芍药苷含量有显著性差异(P＜0.01)，含量下降明显，稳定性不好。

实施例9：本发明注射液加速试验稳定性考察

将按照本发明中实施例1制备的注射液制成市售制剂，于40℃±2℃，RH75％±5％条件下进行制剂的加速实验，并于试验期间的0、1、2、3、6个月末取样检测，结果见表4。

表4本发明注射液制剂加速试验稳定性考察结果

由加速稳定性考察结果可见，本发明的注射液在加速条件下6个月后稳定性良好。

Claims (3)

1.一种赤芍总苷液体组合物，其特征在于由赤芍总苷、络合剂、抗氧剂、pH调节剂、等渗调节剂和注射用水组成，所述的络合剂选自乙二胺四乙酸、依地酸钙钠和依地酸二钠中的一种或一种以上的混合络合剂，所述抗氧剂选自亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、硫脲和维生素C中的一种或一种以上的混合物，每100mL赤芍总苷液体组合物中赤芍总苷的用量为0.1g～1g，络合剂的用量为0.001g～0.1g，抗氧剂的用量为0.001g～0.1g，所述pH调节剂用于调节pH值，使赤芍总苷液体组合物的pH值为4～7，选自盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸三钠、邻苯二甲酸、乙酸、乙酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和磷酸二氢钾中的一种或一种以上的混合物；所述等渗调节剂选自氯化钠、甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇和葡萄糖等中的一种或一种以上的混合物，且每100mL赤芍总苷液体组合物中等渗调节剂的用量为0.001g～10g。

2.如权利要求1所述的赤芍总苷液体组合物，其特征在于具体如下：赤芍总苷5.0g，络合剂0.2g，抗氧剂0.2g，pH调节剂适量，等渗调节剂50.0g，注射用水加至1000ml；或赤芍总苷5.0g，络合剂0.1g，抗氧剂0.1g，pH调节剂适量，等渗调节剂9.0g，注射用水加至1000ml。

3.如权利要求1所述的赤芍总苷液体组合物，其特征在于：其为注射液。

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