CN101991588B - 一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于培育马氏珠母贝海水珍珠时使用的处理液以及培育海水珍珠的方法，该处理液将金霉素、聚乙烯吡咯烷酮、牛磺酸和维生素C等原料称量后，将上述原料溶解于重量含量0.7-1％海藻酸钠的生理盐水溶液得到，培育海水珍珠的过程是选择无病虫害的健康珠母切取小片贝和贝壳珠核，用处理液浸泡，再将小片贝和贝壳珠核植入珠母贝的育珠袋中，植核手术程序按现有常规手段，经20-25天休养期后，转入海区吊养，用该处理液培育的海水珍珠珠层厚、成活率高、优质珠率高，降低了育珠贝的死亡率和吐核率，大大提高了育珠贝休养期成活率与留核率和养殖生产的经济效益。

Description

一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液

技术领域

本发明涉及海水珍珠的培育技术领域，更具体地说是涉及一种育珠过程的具体方法，适用于培育马氏珠母贝(Pinctada martensii)海水珍珠时使用的处理液。

背景技术

马氏珠母贝(Pinctada martensii)是目前我国以及世界上用于培育海水珍珠的最主要珍珠贝种类，主要分布在南海及北部湾沿海，其培育的珍珠占海水珍珠总产量的90％以上。目前，海水养殖珍珠为有核珍珠，经外套膜植片法培育，即通过人工手术将珍珠贝(供体)外套膜组织分割成组织块即细胞小片，将其移植到受体珍珠贝(手术贝)的体内，并植入珠核。通常认为被移植的细胞小片的上皮细胞经移行、增殖、包裹珠核形成珍珠囊，之后，上皮细胞分泌珍珠质沉积在珠核表面形成有核珍珠。因此在海水珍珠培育过程中，育珠技术主要包括了育珠贝术前处理技术、细胞小片和珠核处理技术、育珠贝术后休养和精养技术等方面，而细胞小片和珠核处理技术，与珍珠质的分泌及珍珠质量直接相关。

为提高海水珍珠的质量和产量，日本较早开展了术前处理和小片处理等育珠技术研究，国内广大科研人员对育珠技术的相关研究也进行了有益的探索，在育珠贝术前处理技术方面着重进行了马氏珠母贝手术贝生理状态的调整，主要通过控制海水流量、饵料等抑制或促进贝的生殖腺发育；对术后休养方式(技术)也进行了大量的尝试；在细胞小片处理方面，公开文献也报道了一些这方面的技术，主要围绕提高细胞的活力和分泌机能，利用各类溶液处理小片进行研究，一般用抗生素配制的药液浸泡珠核以抗感染或用红外、紫外照射的活化处理方法，例如：

1.中国专利：一种珠核药物处理的方法，申请号：200810148947.1，申请日：2008.09.12，公开号：CN101356901，公开日：2009.02.04，申请人：海南大学，地址：海南省海口市人民路58号，发明人：石耀华；王爱民；顾志峰；王嫣，摘要：一种珠核药物处理的方法，它采用的技术方案是：选用高纯度的明胶、盐酸四环素、聚乙烯吡咯烷酮PVP和维生素C，以质量比计，分别按2-4％、5-8％、0.4-0.8％和0.2-0.4％的比例称取以上试剂，加除菌海水至1000毫升，置50℃水浴中搅拌，过夜溶解；在50-60℃恒温箱内将珠核(蚌或砗磲壳磨成圆形)加热至温度50-60℃，取出珠核，用喷漆器装上过夜溶解的上述溶液，喷涂珠核表面，同时不断翻动，以使喷涂药物层均匀、光滑和干燥；真空包装，运至珍珠养殖场，常规插核技术插入育珠贝，进行术后休养和吊养。

2.中国专利：一种处理外套膜小片提高海水珍珠质量的方法，申请号：200810148954.1，申请日：2008.09.12，公开号：CN101352154，公开日：2009.01.28，申请人：海南大学，地址：海南省海口市人民路58号，发明人：石耀华；王爱民；林智鹏；顾志峰；王嫣，摘要：该发明涉及一种处理外套膜小片提高海水珍珠质量的方法。其特征是：选择分离纯化的壳寡糖，用除菌海水配制成浓度为0.5-3％的溶液；从外套膜小片贝切取外套膜中具有较强分裂能力的外套膜无色素颗粒的外缘部分，浸泡外套膜小片5-10分钟后，或者相似浓度溶液涂抹后放置约10分钟，再切成长和宽均为4.5-5.5毫米的外套膜小片；将壳寡糖溶液处理的外套膜小片和珠核一起植入育珠母贝的育珠袋中，休养15天后，植入珠核和壳寡糖处理的外套膜小片的育珠贝转移至海水养殖水体中育珠。

3.中国专利：珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及培养基，申请号：200910113897.8，申请日：2009.03.02，公开号：CN101491229，公开日：2009.07.29，申请人：广西中医学院；林湧，地址：广西壮族自治区南宁市明秀东路179号，发明人：林江；林湧；邓家刚；王乃平；甘霖；王勤；单华；林海；林其溪；杨辉；戴铭；李中华；刘强；陈明伟；杨继峰，摘要：该发明公开了一种珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及其专用培养液，该培养基包括水解珍珠液、贝液、抗生素和海水，常规从珠母贝取材获得外套膜上皮组织，除去裙带部分，净化处理后切成约1mm³～2mm³大小的组织块，置于蛋白酶溶液中，消化后加入上述培养液中止消化。将经初步消化的组织块分别置于培养皿中或贴附于已涂抹贴壁物质的珠核上，通过该方法培养的珍珠贝外套膜组织生长状况良好，4h细胞从组织块中迁出，2d后有效地形成体外珍珠囊。该方法可以在插入珍珠核的珠贝中选取不同位置注入无核珍珠囊培养无核珍珠，成本低，成活率及成珠率高，对珠母贝损伤少。

以上公开文献利用了各类溶液处理小片，用抗生素配制的药液浸泡珠核以抗感染，虽然能够有效促进外套膜小片细胞的分裂，加快珍珠囊的形成，抑制手术细菌感染，育珠贝成活率、留核率和优珠率有了一定程度的提高，而在插核手术过程中如何促进上皮细胞分裂，增强细胞小片活力和分泌机能、促进伤口愈合等关键技术还是有所欠缺，本发明人经过了长期的研究，认为在细胞小片处理液的同时，筛选与之匹配的珠核处理液，是提高珍珠产量和质量的有效途径。

发明内容

本发明的目的是以提高珠核的生物亲和力降低吐核率所组合的细胞小片和珠核处理液，以及采用处理液进行育珠的方法。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，该处理液是将金霉素、聚乙烯吡咯烷酮、牛磺酸和维生素C的原料按重量比例为1∶1∶0.5∶0.5称量后，按照重量比1-5％的比例，将上述原料溶解于重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到。

以上所述的马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液可以用于培育海水珍珠，其方法如下：

(1)选择2龄，壳长7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色，外套膜厚度适中，边缘色素和白斑不多，无病虫害的健康马氏珠母切取小片贝，用1∶1海水稀释的处理液浸泡备用；

(2)选择直径4-8mm的健康马氏珠母贝用过滤海水清洗，用新鲜海水清洗并养殖备用；

(3)选择2龄，壳长7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色的马氏珠母贝壳，加工成2-8mm的圆粒作为珠核，核面光滑洁白，无裂纹或平头，用1∶1海水稀释的处理液浸处理液浸泡备用；

(4)取处理液中浸泡的外套膜小片和珠核，立刻植入马氏珠母贝的育珠袋中，植核手术程序按现有常规手段；

(5)施术贝经20-25天休养期后，转入海区吊养，常规管理，休养期每隔3～4天检查1次，育珠期平均2个月检查清理贝1次，记录相关数据，插核育珠6-8个月后各组随机抽样对珍珠品质进行检查收珠数。。

以上所述的马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液用于培育海水珍珠的方法，第(5)步记录相关数据是休养期和海区吊养中记录吐核数及死亡贝数、育珠期死亡贝数据，插核育珠6-8个月后各组随机抽样对珍珠品质进行检查收珠数，确定马氏珠母贝育珠精养技术，提高珍珠产量和质量。

上述马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，是以海水珍珠的成活率、成珠率、优质珠率等为基本参数，引入综合评价指数概念，量化育珠效果，用经预实验筛选出的具有良好的生物相容性的处理液，育珠效果优，可提高小片细胞的活性、珠核与小片的亲和力及降低手术贝伤口感染，提高育珠贝休养期成活率与留核率从而提高珍珠质量和产量。

上述处理液中，聚乙烯吡咯烷酮，Polyvinylpyrrolidone，分子式(Formula)：(C₆H₉NO)n，是由乙烯基砒咯烷酮聚合而得，具有吸湿性易流动的粉末，无臭或微臭，溶于水、碱、酸及极性有机溶剂，具有很强的膨胀性能和与多类物质的络合能力，具有成膜性和吸湿性，对细胞的生长有促进作用，医药上广泛用于片剂崩解剂、助流剂，可用用于护发用品和作啤酒、果酒、饮料酒的稳定剂。

牛磺酸(Taurine)又称α-氨基乙磺酸，最早由牛黄中分离出来，故得名。纯品为无色或白色斜状晶体，无臭，化学性质稳定，溶于乙醚等有机溶剂，是一种含硫的非蛋白氨基酸，在体内以游离状态存在，不参与体内蛋白的生物合成。

金霉素：又名氯四环素，英文名：Chlortetracycline(CTC)。化学名：6-甲基(二甲氨基)-3，6，10，12，12a-五羟基-1，11-二氧代-7-氯-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。本品属四环素类药物，主要抑制敏感微生物的蛋白质合成。金霉素预混料中的主要有效成分为金霉素钙盐，属四环素类药物。其抗菌谱广，对革兰阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、部分原虫等均可抑制。

海藻酸钠(C₆H₇O₈Na)n，主要由海藻酸的钠盐组成，最初是从海洋植物如海藻、海带中提取的一种天然多糖，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、粘性和安全性。海藻酸钠也用于悬浮液、凝胶和以脂肪和油类为基质的浓缩乳剂的生产中。海藻酸钠用于一些液体药物中，可增强粘性，改善固体的悬浮。

本发明的有益效果是：

与现有技术相比，本发明所述的处理液，是由增强细胞活性类、可以防止感染类和促进亲和、促细胞分裂，促进伤口愈合类之间配伍筛选出最优组合处理液。

用本发明的提供的处理液进行育珠的方法是以成活率、成珠率、优质珠率等为基本参数，引入综合评价指数概念，量化育珠效果，评价指标包括：优质珍珠数、测量计算珍珠层厚度、统计育珠成活率、成珠率、优质珠率，评价指数，利用实验室开展细胞小片和珠核处理技术的育珠试验，进一步优化、筛选出适宜海南马氏珠母贝(Pinctada martensii)育珠的小片处理液及与之匹配的珠核处理液，本发明能够有效改善珍珠的珠层，降低育珠贝的死亡率和吐核率，提高珍珠产量和养殖生产的经济效益，使用方法简单，易于操作，作用显著。

以海水珍珠的成活率、成珠率、优质珠率等为基本参数，引入综合评价指数概念，量化育珠效果，用经预实验筛选出的处理液的同时，对细胞小片和核进行处理，提高小片细胞的活性、珠核与小片的亲和力及降低手术贝伤口感染，提高育珠贝休养期成活率与留核率，从而提高珍珠质量和产量。

具体实施方式

实施例1

1、配制马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，

将100克金霉素、100克聚乙烯吡咯烷酮、50克牛磺酸和50克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。

2、育珠方法：选择2龄，壳长3-7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色，外套膜厚度适中，边缘色素和白斑不多，无病虫害的健康马氏珠母贝为专门供应外套膜细胞小片的小片贝，用1∶1海水稀释的处理液浸泡备用；选择正圆形，核面光滑洁白，无裂纹或平头，直径7mm的珠核用过滤海水清洗作为插核珠；选择2龄，壳长7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色的马氏珠母贝壳，加工成2-8mm的圆粒作为珠核，核面光滑洁白，无裂纹或平头，用1∶1海水稀释的处理液浸处理液浸泡备用；对同批2龄健康马氏珠母贝8个实验组和1个对照组共计5400只贝进行插核。实验组外套膜细胞小片常规制片后，用小片处理液浸泡15-20分钟。核按常规清洗后，插核时在核处理液中浸泡片刻或蘸液即可。对照组按目前常规方法处理即小片在1％红汞稀释液中浸泡染色处理，核按常规清洗后不做特殊处理。对照组与试验组除小片与核处理的溶液不同外，在植核手术程序、方法、插核人员及休养育珠管养等方面均相同。

施术贝经25天休养期后，转入海区吊养，常规管理，休养期每隔3～4天检查1次，育珠期平均2个月检查清理贝1次。并记录休养期(插核后25天)吐核数及死亡贝数、育珠期死亡贝数等。

插核育珠试验为期为8个月。8个月后各组随机抽样100只，剖贝取珠后对珍珠品质进行检查，记录收珠数。

实施例2

1、配制马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液

将150克金霉素、130克聚乙烯吡咯烷酮、30克牛磺酸和80克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。

将100克金霉素、100克聚乙烯吡咯烷酮、50克牛磺酸和50克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。

2、育珠方法：选择2龄，壳长6cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色，外套膜厚度适中，边缘色素和白斑不多，无病虫害的健康马氏珠母贝为专门供应外套膜细胞小片的小片贝，用1∶1海水稀释的处理液浸处理液浸泡备用；选择正圆形，核面光滑洁白，无裂纹或平头，直径5-8mm的珠核用过滤海水清洗作为插核珠；用1∶1海水稀释的处理液浸处理液浸泡备用；对同批2龄健康马氏珠母贝8个实验组和1个对照组共计6000只贝进行插核。

实验组外套膜细胞小片常规制片后，用小片处理液浸泡15-20分钟。核按常规清洗后，插核时在核处理液中浸泡片刻或蘸液即可。对照组按目前常规方法处理即小片在1％红汞稀释液中浸泡染色处理，核按常规清洗后不做特殊处理。对照组与试验组除小片与核处理的溶液不同外，在植核手术程序、方法、插核人员及休养育珠管养等方面均相同。

施术贝经25天休养期后，转入海区吊养，常规管理，休养期每隔3～4天检查1次，育珠期平均2个月检查清理贝1次。并记录休养期(插核后25天)吐核数及死亡贝数、育珠期死亡贝数等。

插核育珠试验为期为7个月。7个月后各组随机抽样100只，剖贝取珠后对珍珠品质进行检查，记录收珠数。

实施例3

1、配制马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，

将100克金霉素、150克聚乙烯吡咯烷酮、60克牛磺酸和80克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。

2、育珠方法：选择2龄，壳长3-7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色，外套膜厚度适中，边缘色素和白斑不多，无病虫害的健康马氏珠母贝为专门供应外套膜细胞小片的小片贝，用1∶1海水稀释的处理液浸泡备用；选择正圆形，核面光滑洁白，无裂纹或平头，直径7mm的珠核用过滤海水清洗作为插核珠；选择2龄，壳长7cm以上，贝壳内面珍珠层为银白色的马氏珠母贝壳，加工成2-8mm的圆粒作为珠核，核面光滑洁白，无裂纹或平头，用1∶1海水稀释的处理液浸处理液浸泡备用；对同批2龄健康马氏珠母贝8个实验组和1个对照组共计5400只贝进行插核。实验组外套膜细胞小片常规制片后，用小片处理液浸泡15-20分钟。核按常规清洗后，插核时在核处理液中浸泡片刻或蘸液即可。对照组按目前常规方法处理即小片在1％红汞稀释液中浸泡染色处理，核按常规清洗后不做特殊处理。对照组与试验组除小片与核处理的溶液不同外，在植核手术程序、方法、插核人员及休养育珠管养等方面均相同。

施术贝经25天休养期后，转入海区吊养，常规管理，休养期每隔3～4天检查1次，育珠期平均2个月检查清理贝1次。并记录休养期(插核后25天)吐核数及死亡贝数、育珠期死亡贝数等。

插核育珠试验为期为8个月。8个月后各组随机抽样100只，剖贝取珠后对珍珠品质进行检查，记录收珠数。

珍珠的评价：

评价指标包括：优质珍珠数、测量计算珍珠层厚度、统计育珠成活率、成珠率、优质珠率，评价指数。

优质珍珠指直径大于7.3mm、光滑、珍珠光泽强、无缺损、珍珠层厚0.3mm以上的珍珠。

珍珠层厚度＝(珍珠直径-珠核直径)/2

育珠成活率＝收珠时的活贝数/手术贝数；

成珠率＝开贝收珠数量/开贝数＝＝总收珠数量/收珠时的活贝数；

优质珠率＝优质珠数量/收珠数量；

对统计数据进行方差检测，p＜0.01为差异极显著。

拟定综合评价指数为优良珍珠数量占手术贝总数的比例，即

评价指数＝优良珍珠总数/手术贝总数

＝(优质珠总数+品质良好中等的珍珠总数)/手术贝总数

＝[(手术贝总数×成活率×成珠率×优质珠率)+(1/4收珠总数)]/手术贝总数

＝(手术贝总数×成活率×成珠率×优质珠率)/手术贝总数+

(1/4×手术贝总数×成活率×成珠率)/手术贝总数

＝(成活率×成珠率×优质珠率)+1/4×成活率×成珠率)

其中“1/4收珠数”为估算的品质中良的珍珠数量，依传统育珠的情况，开贝所收的珍珠，约1/2为优质珠，在剩余的一半珍珠中，品质中良的珍珠约占1/2的比例，即为收珠数的1/4。

经评价指标分析筛选认为：处理组手术贝休养期的吐核率与死亡率均显著低于对照组，表明处理液起到了增强组织相容性、促进伤口愈合、抗感染的作用。处理组育珠8个月的珠层厚度平均值可达0.5mm以上，与对照组0.3mm的珠层厚度差异极显著，表明处理液具有明显促进珍珠质分泌的作用。在8个处理组中筛选优化出育珠效果明显优于对照组的3个适宜匹配组。(6)引入综合评价指数，量化育珠效果，便于比较。

表1不同处理组珠层厚度比较

表2不同处理组插核育珠效果比较

Claims (3)

1.一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，其特征在于：该处理液是将100克金霉素、100克聚乙烯吡咯烷酮、50克牛磺酸和50克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到。

2.一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，其特征在于：该处理液是将150克金霉素、130克聚乙烯吡咯烷酮、30克牛磺酸和80克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。

3.一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液，其特征在于：该处理液是将100克金霉素、150克聚乙烯吡咯烷酮、60克牛磺酸和80克维生素C的原料，称量后，将这些原料溶解于1升重量含量0.5-1.0％海藻酸钠的生理盐水溶液得到处理液。