CN101984956A

CN101984956A - pH敏感型两亲接枝聚膦腈在制备给药囊泡中的应用

Info

Publication number: CN101984956A
Application number: CN2010105307183A
Authority: CN
Inventors: 邱利焱; 郑程
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2010-11-03
Filing date: 2010-11-03
Publication date: 2011-03-16

Abstract

本发明公开了一种pH敏感型两亲接枝聚膦腈在制备pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡中的应用，该给药囊泡含有pH响应型两亲接枝聚膦腈和药物，以药物和pH响应型两亲接枝聚膦腈的总重量计，药物、pH响应型两亲接枝聚膦腈的重量百分含量分别为0.001％～30％、70％～99.999％；pH响应型两亲接枝聚膦腈是以聚膦腈链段为骨架并在磷原子上连接有第一接枝基团和第二接枝基团以及选择性连接有第三接枝基团的接枝聚合物。该给药囊泡能够装载水溶性药物、疏水性药物中的一种或两种，且药物释放具有pH响应性，能定点在肿瘤组织附近或肿瘤细胞内快速释放药物，具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的功能。

Description

pH敏感型两亲接枝聚膦腈在制备给药囊泡中的应用

技术领域

本发明涉及药物释放系统，具体涉及一种pH敏感型两亲接枝聚膦腈在制备pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡中的应用，该给药囊泡能装载疏水性药物或亲水性药物或同时装载疏水性和亲水性药物。

背景技术

在抗肿瘤治疗中同时使用多种药物进行治疗是常用手段，但是不同的药物很可能在溶解性质(亲疏水性)上有很大差异。目前临床及研究中常用的一些纳米药物载体都不具备同时大量装载两种或两种以上亲疏水性不同的药物的能力。例如，固体纳米粒多采用生物降解性高分子材料或高级脂肪酸制备，水溶性药物的装载性差，而且容易被富含内皮网状组织(如肝、脾)摄取，这类组织以外的肿瘤靶向性不理想。高分子胶束是指两亲性高分子在水中形成疏水内核和亲水外壳结构的自组装纳米粒，主要装载疏水性药物(如图11)。脂质体是由磷脂为基本骨架，利用磷脂分子在水中的定向排列，构成的具有类似生物膜结构的双分子层微小囊泡(如图12)。脂质体内含有亲水区，因此可以包裹水溶性药物，但对疏水药物的装载能力较差。另外，通常脂质体所用磷脂的分子量均在1kDa以下，由磷脂疏水端构成的疏水双层不稳定，容易导致脂质体在血液循环过程中药物的过早泄漏。并且由于受磷脂种类的限制，脂质体作为给药系统其各方面性质的可调性非常差。由于这些不足，尽管目前市场上已有抗肿瘤药物的脂质体产品，但总体研发速度非常缓慢。

肿瘤细胞多药耐药性(multidrug resistance，MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制完全不同的其他抗肿瘤药物产生交叉耐药性的现象。为了对抗MDR，理想的抗肿瘤药物载药体系应当能够定向的富集于肿瘤组织处并随即迅速地释放出所携带的药物从而克服MDR。脂质体和囊泡等纳米给药系统可以通过被动、主动或物理化学的作用机制实现肿瘤靶向给药，然而普通的纳米给药系统在释药行为上不具有特异性，药物载体虽然能够聚集在肿瘤部位，但包裹在载体内部的药物却往往不能及时释放出来，这使得治疗效果大打折扣。

近年来刺激响应型(Stimuli-responsive)聚合物材料正在吸引研究人员越来越多的目光(Jeong B，Gutowska A.Biotechnol.2002，20，305～311)，这类聚合物材料能够识别刺激信号，根据信号的强弱做出响应改变自身构象。其中，在肿瘤治疗研究领域最受关注的是能够响应环境pH值变化而改变溶解度的聚合物材料，这主要是基于以下原因：绝大部分肿瘤组织周围的环境pH值(6.15～7.4)都比正常组织周围的生理pH值(7.0～7.4)低(Vaupel P，Kallinowski F，Okunieff P.CANCER RESEARCH 1989，49，6449～6465)，而且细胞中的内涵体与溶酶体中pH值更低(5.0～6.5)。利用这些特征，如果能够设计合适的pH敏感聚合物作为抗癌药物载体，就有可能实现在肿瘤部位定点释放药物。目前国际上在药物控释和生物材料领域，一些比较知名的研究组在pH响应型聚合物研究中注意力都集中在聚弱碱类聚合物上。Gast，AP等人报导了以聚甲基丙烯酸-2-(N，N-二乙氨基)乙酯(PDEAEMA)为疏水链段的嵌段共聚物的合成及其囊泡结构的pH依赖性(Lee AS，Butun V，Vamvakaki M，Armes SP，Pople JA，Gast AP.Macromolecules 2002，35，8540～8551)；Langer，R小组发展了以μ-氨基酯为pH敏感链段的新型聚合物作为药物载体(Lynn DM，Langer R.J.Am.Chem.Soc.2000，122，10761～10768)；Bae领导的课题组则在聚组氨酸嵌段共聚物及其给药囊泡方面开展了广泛的研究工作(Lee ES，Na K，Bae YH.Nano Lett.，2005，5，325～329)。这些作为药物载体的pH敏感聚合物几乎均为嵌段共聚物，其合成主要采取活性聚合反应，条件苛刻而且往往需要使用相当剂量的重金属作为催化剂，这些问题使得它们的医疗应用受到很大的限制。

发明内容

本发明提供了一种pH敏感型两亲接枝聚膦腈在制备pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡中的应用，以pH敏感型两亲接枝聚膦腈为载体构建pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡，该给药囊泡能装载疏水性药物或亲水性药物或同时装载疏水和亲水性药物，并具有很好的靶向性和pH响应型药物释放性能。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡中含有pH响应型两亲接枝聚膦腈和药物，所述的药物为疏水性药物、亲水性药物中的一种或两种；

以药物和pH响应型两亲接枝聚膦腈的总重量计，药物的重量百分含量为0.001％～30％，pH响应型两亲接枝聚膦腈的重量百分含量为70％～99.999％；

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈是以式(1)所示结构的聚膦腈链段为骨架并在磷原子上连接有第一接枝基团和第二接枝基团以及选择性连接有第三接枝基团的接枝聚合物；

所述的第一接枝基团为

其中n＝20～200；所述的第二接枝基团为

所述的第三接枝基团为

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈中第一接枝基团的质量百分含量为40％～59％，第二接枝基团的质量百分含量为3％～54％，第三接枝基团的质量百分含量为0～50％。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈以具有生物降解性的聚膦腈链段为骨架，通过向聚膦腈主链上接枝第一接枝基团即亲水性聚合物链段、第二接枝基团即pH敏感基团和选择性接枝第三接枝基团即能够增强聚合物材料与药物亲和力的疏水基团，最终构成完整的pH敏感型两亲接枝聚膦腈。本发明选用的pH响应型两亲接枝聚膦腈中接枝有特定种类和特定含量的接枝基团，可以与疏水性药物、亲水性药物中的一种或两种构筑给药囊泡。pH响应型两亲接枝聚膦腈中第一接枝基团的含量越高聚合物的水溶性越好，第二接枝基团的含量越高聚合物的pH敏感性能越强，第三接枝基团的加入主要是根据需要提高囊泡与药物的亲和力。

为了达到更好的发明效果，优选：pH响应型两亲接枝聚膦腈中第一接枝基团的质量百分含量为40％～59％，第二接枝基团的质量百分含量为2％～45％，第三接枝基团的质量百分含量为0～44％。

为保证药物囊泡具有良好的载药量、控制释放、稳定性、冻干粉的再分散性及聚合物的及时降解性能，所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈的数均分子量优选为4000～100000，分子量分布优选为1.5～4.0。

所述的疏水性药物选用疏水性抗肿瘤药物、疏水性化疗药物、疏水性荧光标记化合物中的一种或多种；优选紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、柔红霉素、甲氨喋呤、丝裂霉素C、尼罗红等中的一种或多种；

所述的亲水性药物选用亲水性抗肿瘤药物、亲水性化疗药物、疏水性荧光标记化合物中的一种或多种；优选盐酸阿霉素、盐酸氯喹、葡聚糖-异硫氰酸荧光素(葡聚糖-FITC)、罗丹明B等中的一种或多种。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的粒径为10纳米～300纳米。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡可通过透析法制备，囊泡可以是以水分散液或冻干粉状态存在，可根据实际需要选择合适的形态。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的水分散液的制备方法，包括以下步骤：

将药物和pH响应型两亲接枝聚膦腈共同溶解在有机溶剂中，形成混合物的溶液，缓慢向其中加入纯水或pH值为7.0～7.4的缓冲盐溶液用于诱导囊泡形成，再用透析法除去有机溶剂，得到pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的水分散液。

所述的有机溶剂选用甲醇、丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺中的一种或多种。

所述的缓冲盐溶液选用本领域常用的缓冲盐溶液即可。

所述的混合物的溶液中pH响应型两亲接枝聚膦腈的浓度优选为1mg/ml～2g/ml。

所述的pH响应型聚膦腈给药囊泡的水分散液中pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的重量百分浓度优选为0.05％～50％，给药囊泡尺寸一般在10纳米～300纳米。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的溶液经冷冻干燥，制得pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡冻干粉。所述的冻干粉可自分散于水中，形成聚合物药物囊泡的水分散液，形成的水分散液中pH响应型两亲接枝聚膦腈给药囊泡的重量百分浓度可达0.05％～50％，给药囊泡尺寸一般在10纳米～300纳米。

所述的pH响应型两亲接枝聚膦腈的制备方法采用现有的接枝聚膦腈的制备方法，一般可参照申请号为CN201010118025.3的中国专利申请中记载的pH响应型两亲接枝聚膦腈的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)主链聚合：将氯代膦腈环状三聚体((PNCl₂)₃)在245℃～255℃开环聚合反应3小时～5小时，制得聚(二氯代膦腈)；

(2)接枝反应：将上述聚(二氯代膦腈)溶于四氢呋喃中，滴加含有接枝用化合物和三乙胺(TEA)的四氢呋喃(THF)溶液，反应至少8h后，过滤除去不溶物，滤液浓缩后用乙醚沉淀，真空干燥得到白色粉末状的聚合物，即pH响应型两亲接枝聚膦腈；

所述的接枝用化合物选用N，N-二异丙基乙二胺(DPA)以及端氨基聚乙二醇(NH₂-PEG)；或者，所述的接枝用化合物选用N，N-二异丙基乙二胺、4-氨基苯甲酸乙酯(EAB)以及端氨基聚乙二醇。

所述的端氨基聚乙二醇的结构式如下：

其中n＝20～200。

所述的端氨基聚乙二醇中聚乙二醇的数均分子量优选为350～5000，进一步优选1100～2000，特别优选2000。

由于三乙胺量过少会造成反应不完全，过多则导致聚合物沉淀，因此，接枝用化合物与三乙胺的摩尔比优选为1∶1。

四氢呋喃是溶解范围很大的有机溶剂，可溶解聚(二氯代膦腈)和各种接枝用化合物，作为反应体系的溶剂，其用量对接枝反应没有太大影响，因而不做具体限定。

本发明的接枝反应过程须在高度无水的环境中进行，反应温度没有特别的限定，例如常温或者室温均可，对于合成取代基位阻较大的聚合物，在合成反应过程中一般需要进行加热回流反应，更利于反应的进行。

根据预先设计的pH响应型两亲接枝聚膦腈上的取代基，所述的接枝化合物优选按照预定的顺序滴加。一般为了在聚(二氯代膦腈)上更加方便地接枝各种预先设计的取代基，可按照预加入取代基的位阻大小，先滴加位阻较大的取代基，再滴加位阻较小的取代基。

所述的白色粉末状的聚合物进行纯化处理，其纯化处理包括：将白色粉末状的聚合物在水中透析，以除去未反应的端氨基聚乙二醇，可采用透析袋进行透析，再经冷冻干燥收集产物。

以阿霉素为例，所述的含有阿霉素的pH响应型聚膦腈给药囊泡，优选，阿霉素重量为阿霉素和pH响应型两亲接枝聚膦腈的总重量的2％～30％，pH响应型两亲接枝聚膦腈中第一接枝基团的质量占聚合物总质量的40％～59％。

本发明具有如下优点：

1)给药囊泡能装载疏水性药物，或亲水性药物，或同时装载疏水性和亲水性药物；

2)上述制备的载药聚合物囊泡冻干粉适用注射给药，而且具有易于储存、运输、应用方便的优点，可根据病人的需要，采用含有不同成分的水进行分散。

3)该给药体系一个重要的特征是当药物载体到达肿瘤组织周围或被肿瘤细胞吞噬进入内涵体和溶酶体时，由于环境pH值降低，原本处于囊泡疏水内核处的pH响应性基团发生质子化，破坏了原有给药囊泡的稳定性从而导致包载的多种药物在短时间内大量释放出来。基于以上特点，该给药囊泡体系有望大幅度提高抗肿瘤药物的治疗效果、逆转肿瘤细胞多药耐药性并能够有效降低毒副作用。

4)由于pH响应型两亲接枝聚膦腈的降解特性和与药物的亲和力主要取决于其疏水取代基，因此，通过添加适当的疏水取代基就可以调节囊泡的降解特征和载药性能。同时，通过改变载药过程中的方法和参数可以比较容易的控制囊泡的载药量和粒径大小，从而可以较容易地满足不同药物和制剂的要求。

5)本发明给药囊泡的药物释放具有pH响应性，能定点地在肿瘤组织附近或肿瘤细胞内快速释放药物具有逆转肿瘤细胞多药耐药性的功能，同时该两亲性聚膦腈接枝共聚物的生物相容性好毒性极小，适合作为抗肿瘤药物靶向载体。

6)相对于现有的给药囊泡，本发明给药囊泡对亲水性药物和疏水性药物的载药量和包封率都很高。

附图说明

图1为本发明实施例1和实施例2中具有典型化学结构的pH响应型两亲接枝聚膦腈的核磁共振氢谱；

图2为本发明实施例1和实施例2中pH响应型两亲接枝聚膦腈的pH滴定曲线；

图3为不同聚合物形成的空白囊泡电镜照片，其中1为P1聚合物形成的空白囊泡，2代表P2聚合物形成的空白囊泡；

图4为图3中空白囊泡的放大电镜照片；

图5为实施例3制备的P1载阿霉素囊泡在pH＝7.4和pH＝5.5条件下的释放曲线；

图6为实施例4制备的P2载盐酸阿霉素囊泡在pH＝7.4和pH＝5.5条件下的释放曲线；

图7为实施例5制备的同时装载疏水性尼罗红和亲水性葡聚糖-FITC的囊泡的激光共聚焦荧光显微照片，其中1为尼罗红荧光通道的荧光显微照片，2为葡聚糖-FITC荧光通道的荧光显微照片，3为两者荧光通路叠加的荧光显微照片；

图8为实施例6制备的装载罗丹明B的P2囊泡的荧光显微照片，照片中短线比例尺代表10微米；

图9为实施例7制备的装载荧光素钠的P2囊泡的荧光显微照片，照片中短线比例尺代表10微米；

图10为本发明pH响应型两亲接枝聚膦腈空白囊泡的结构示意图；

图11为高分子胶束的结构示意图；

图12为脂质体的结构示意图。

具体实施方式

实施例1pH响应型两亲接枝聚膦腈合成方法

(1)以三氯化铝为催化剂制备聚(二氯代膦腈)

称取4g经升华纯化的氯代膦腈环状三聚体和0.2g无水三氯化铝到预先严格清洗干燥的聚合管中，抽真空并封管，聚合反应在250℃进行5h，待反应物的粘度几乎不变时，停止聚合并取出聚合管冷却。开封聚合管，加入适量干燥甲苯溶液溶解反应物。溶解后用石油醚沉淀，真空干燥得到白色弹性体，即聚(二氯代膦腈)。

(2)通过逐步亲核取代反应合成pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物

将1.0g上述制得的线形聚(二氯代膦腈)溶于20ml THF中作为反应体系，向其中缓慢滴加含有3.3g NH₂-PEG(分子量为2000)和2.3ml TEA的THF溶液50ml，滴加完后常温反应8h。然后再向其中滴加含有2.5g N，N-二异丙基乙二胺(DPA)和2.3ml TEA的THF溶液10ml。磁力搅拌下室温反应12h后过滤除去不溶物，滤液浓缩后用乙醚沉淀，真空干燥，得到微黄色粉末状的聚合物。

利用透析袋(其截留分子量(MWCO)＝14000)将所得聚合物在水中透析两天，以除去未反应的NH₂-PEG₂₀₀₀，并经冷冻干燥收集产物，得到pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P1。

该共聚物P1中第一接枝基团即端亚氨基聚乙二醇的质量百分含量为55％，第二接枝基团即N-[2-(N′，N′-二异丙氨基)乙基]氨基的质量百分含量为41％；该共聚物P1的数均分子量为10100，分子量分布2.0，pKa值为6.30。该共聚物P1的核磁谱图如图1所示，是以聚膦腈链段：

为骨架并在磷原子上连接有第一接枝基团和第二接枝基团的接枝聚合物，第一接枝基团为

其中n＝20～200；第二接枝基团为

实施例2pH响应型两亲接枝聚膦腈合成方法

(1)聚(二氯代膦腈)的制备同实施例1。

(2)除了依次向反应体系中缓慢滴加含有3.4g NH₂-PEG(分子量为2000)和0.23ml TEA的THF溶液50ml、含有0.35g N，N-二异丙基乙二胺(DPA)和0.3ml TEA的THF溶液10ml以及含有3.0g对氨基苯甲酸乙酯(EAB)和2.5ml TEA的THF溶液10毫升之外，其余操作均同实施例1中的步骤(2)，得到pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P2。

该共聚物P2中第一接枝基团即亲水段端氨基聚乙二醇的质量百分含量为48％，第二接枝基团即N-[2-(N′，N′-二异丙氨基)乙基]氨基的质量百分含量为5％，第三接枝基团即N-(苯甲酸乙酯基)-4-氨基的质量百分含量为41％；该共聚物P2的数均分子量为10000，分子量分布3.0。该共聚物P2的核磁谱图如图1所示，是以聚膦腈链段：

为骨架并在磷原子上连接有第一接枝基团、第二接枝基团和第三接枝基团的接枝聚合物，第一接枝基团为其中n＝20～200；第二接枝基团为

第三接枝基团为

实施例3给药囊泡的制备

(1)P1聚合物载药囊泡的制备和表征

将30mg实施例1制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P1与6mg阿霉素一起溶于5ml N，N-二甲基甲酰胺，在磁力搅拌下以0.3ml/min的速度向其中缓慢滴加纯水5ml，得到的溶液装入截留分子量14000Da的透析袋中在纯水中透析两天除去N，N-二甲基甲酰胺后用0.45μm滤膜过滤，得到清液即为pH响应型两亲接枝聚膦腈阿霉素给药囊泡(P1-DOX)的水分散液。

将上述水分散液冷冻干燥得pH响应型聚膦腈载阿霉素囊泡冻干粉。

用动态光散射法测定囊泡的粒径，所得到的药物囊泡的性质见表3。

(2)聚合物载药囊泡(P1-DOX)体外释放实验

称取上述制备的pH响应型聚膦腈载阿霉素囊泡冻干粉5mg，在透析袋中用10ml pH＝7.4或pH＝5.5的磷酸盐缓冲液溶解，然后置于20ml pH＝7.4或pH＝5.5磷酸盐缓冲液中进行体外释放实验，搅拌。隔一定时间取透析袋外的磷酸盐缓冲液，用紫外吸收光谱法分析其中药物含量，同时补充等量的新鲜磷酸盐缓冲液，结果如图5所示，可以看到在低pH值环境(pH＝5.5)中载药囊泡的释药速度大大提高。

(3)聚合物载药囊泡(P1-DOX)的细胞毒性

未载药的pH响应型两亲接枝聚膦腈P1囊泡(P1聚合物空白囊泡，其结构如图4和图10)的制备：将30mg实施例1制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P1溶于5ml N，N-二甲基甲酰胺，在磁力搅拌下以0.3ml/min的速度向其中缓慢滴加纯水5ml，得到的溶液装入截留分子量14000Da的透析袋中在纯水中透析两天后用0.45μm滤膜过滤，得到清液即为pH响应型两亲接枝聚膦腈空白囊泡的水分散液。将该水分散液冷冻干燥得pH响应型聚膦腈空白囊泡冻干粉。

本发明以乳腺癌耐药细胞(MCF7/ADR)为模型细胞，评价未载药的pH响应型两亲接枝聚膦腈P1囊泡(P1聚合物空白囊泡)及P1-DOX的细胞毒性。

具体方法为：以乳腺癌耐药细胞(MCF7/ADR细胞)为模型细胞，在96孔细胞培养板中，每孔加入100μl含1×10⁵个MCF7/ADR细胞的培养液，置于CO₂体积百分浓度为5％的空气中，37℃培养箱中培养24小时，待细胞完全贴壁后，细胞中加入不同浓度的P1聚合物空白囊泡溶液、P1-DOX的水分散液及游离阿霉素水溶液，以未经处理的空白细胞为对照，每孔设4复孔。正常RMPI16401640培养液继续培养24小时，每孔加入5mg/mL的3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)31.5μl，，37℃培养箱中培养4小时弃去上清液，每孔加入200μl二甲基亚砜溶液，用酶标仪测定吸光值，计算细胞抑制率。细胞抑制率计算公式如下：

细胞抑制率(％)＝(空白对照组吸光值-实验组吸光值)/空白对照组吸光值×100％

经测定，P1聚合物空白囊泡对二种细胞的细胞毒性非常小，在P1聚合物浓度为1mg/ml的条件下经48小时的作用后细胞的存活率依然在85％以上，细胞毒性为0级，具有良好的生物相容性。载药阿霉素聚合物囊泡(P1-DOX)的水分散液及游离阿霉素水溶液对MCF7/ADR细胞的IC₅₀见表1，结果表明载药阿霉素聚合物囊泡(P1-DOX)的水分散液可产生MCF7/ADR的阿霉素耐药逆转作用。

表1

实施例4给药囊泡的制备

(1)P2聚合物载药囊泡的制备和表征，除了采用实施例2制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P2以及装载的药物为盐酸阿霉素之外，其余操作同实施例3中的步骤(1)，所得到的药物囊泡的性质见表3。

(2)P2聚合物载药囊泡(P2-DOX)体外释放实验，操作同实施例3中的步骤(2)，结果如图6所示，可以看到在低pH值环境(pH＝5.5)中载药囊泡的释药速度大大提高。

(3)聚合物载药囊泡(P2-DOX)的细胞毒性

方法同实施例3中的步骤(3)。

经测定，P2聚合物空白囊泡对二种细胞的细胞毒性非常小，在P2聚合物浓度为1mg/ml的条件下经48小时的作用后细胞的存活率依然在100％以上，细胞毒性为0级，具有良好的生物相容性。载药阿霉素聚合物囊泡(P2-DOX)的水分散液及游离阿霉素水溶液对MCF7/ADR细胞的IC₅₀见表2，结果表明载药阿霉素聚合物囊泡的水分散液可产生MCF7/ADR的阿霉素耐药逆转作用。

表2

实施例5同时装载疏水性和亲水性药物的聚合物载药囊泡的制备

将30mg实施例1制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P1与2mg尼罗红以及2mg葡聚糖-FITC一起溶于5ml四氢呋喃，在磁力搅拌下以0.3ml/min的速度向其中缓慢滴加纯水3ml，得到的溶液装入截留分子量14000Da的透析袋中在纯水中透析两天后用0.45μm滤膜过滤，得到清液即为同时装载疏水性和亲水性药物的pH响应型两亲接枝聚膦腈囊泡(记作P1-F)的水分散液，该水分散液冷冻干燥得同时装载疏水性和亲水性药物的pH响应型聚膦腈囊泡冻干粉。用激光共聚焦显微镜可以观察到该囊泡同时拥有两种药物的荧光，且疏水药物尼罗红的荧光在囊泡内均匀分布，表明囊泡内部有均匀分布的疏水微区，如图7所示。所得到的药物囊泡P1-F的性质见表3。

实施例6装载亲水药物的囊泡的制备

装载亲水药物的P2聚合物载药囊泡的制备和表征，除了采用30mg实施例2制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P2以及药物为2mg亲水性的罗丹明B之外，其余操作同实施例5中的步骤，分别制得装载罗丹明B的pH响应型两亲接枝聚膦腈囊泡(记作P2-R)的水分散液和装载罗丹明B的pH响应型聚膦腈囊泡的冻干粉，所得到的药物囊泡P2-R的性质见表3。用激光共聚焦显微镜可以观察到该囊泡拥有药物罗丹明B的荧光，如图8所示。

实施例7装载亲水药物的囊泡的制备

装载亲水药物的P2聚合物载药囊泡的制备和表征，除了采用30mg实施例2制备的pH响应型两亲接枝聚膦腈共聚物P2以及药物为3mg亲水性的荧光素钠之外，其余操作同实施例5中的步骤，分别制得装载荧光素钠的pH响应型两亲接枝聚膦腈囊泡(记作P2-N)的水分散液和装载荧光素钠的pH响应型聚膦腈囊泡的冻干粉，所得到的药物囊泡的性质见表3。用激光共聚焦显微镜可以观察到该囊泡拥有药物荧光素钠的荧光，如图9所示。

表3不同聚合物制备的载药聚合物囊泡的性质

无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。此外，前面的优选具体实施方案应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。