CN101970580A - 类红曲霉嗜氮酮色素的生产 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及从丝状真菌通过生物技术生产基于聚酮化合物的着色剂的领域，特别是从不产毒的和非致病性的真菌来源制备类红曲霉(Monascus-like)色素组合物的方法。本发明进一步涉及类红曲霉色素组合物作为食品和/或非食品以及含有该类红曲霉色素组合物的化妆品组合物中的着色剂的用途。

Description

类红曲霉嗜氮酮色素的生产 
发明的技术领域 
本发明涉及从丝状真菌通过生物技术生产基于聚酮化合物的着色剂的领域，特别是从无毒性和非致病性的真菌来源制备类红曲霉(Monascus-like)色素组合物的方法。本发明进一步涉及类红曲霉色素组合物作为食品和/或非食品以及化妆品组合物中的着色剂的用途。 
发明背景 
目前，欧盟已经批准了大约43种着色剂作为食品添加剂，而在美国批准了大约30种颜色添加剂用于食品使用，并且所列颜色添加剂中的几种源自通常通过物理和/或化学提取的天然来源。 
现有批准的天然食品着色剂大部分是植物来源的并且具有许多缺陷，如化学不稳定性和低水溶性。例如，甜菜苷、类胡萝卜素和叶绿素色素含有不稳定的氢，并因此容易因氧化而脱色，并因此对光、热和氧敏感。这些特征限制了这些颜色添加剂在添加了这些色素的食品的加工、存储和展示过程中的坚固性。通常从如果皮、种子或根这样的来源来提取天然产生的着色剂，这些来源常常不是全年都可以获得的。这意味着色料制造商依赖于色料提取原料的可获性和外部供应。 
真菌提供了天然色料的备选来源，因为它们可以全年生产。鉴于真菌色素非凡的多样性和以较高产量来生产的潜能(例如，通过代谢工程)，真菌可以是具有前景的着色剂来源，具有优于现有天然食品着色剂的改善的功能性，并在红色和黄色光谱中具有相似或附加的色调。 
之前主要从分类学的角度来研究真菌色素，并且对其应用于食品用途中的早期工作集中于类胡萝卜素。 
已经报道了许多真菌产生聚酮色素，但其中仅有少部分已经被开发作为可能的食品着色剂。这些中的一些包括由赫克氏青霉(Penicillium herquei)产生的黄-红化合物，深酒青霉(Penicillium atrovenetum)的蓝-绿和墨绿色素。 
红曲霉(Monascus)是霉菌的一个属，其成员产生红-黄聚酮色素，其包括六种主要的基于聚酮化合物的azaphilone发色团：红曲玉红素、红曲素、红曲玉红胺、红斑红素、红斑红曲胺和安卡红曲黄素。在该属的24个已知种中，含有红色素的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)是其中最重要的，因为在东亚，特别是中国和日本，其传统用途是作为某些发酵食品生产中的天然着色剂。例如，红曲霉属物种，即，红色红曲霉(Monascus ruber)和紫色红曲霉已经用于红色酒精饮料、红米和豆腐中。然而，红曲霉属物种所产生的色素的一个缺陷是共同产生桔霉素(的风险)，桔霉素是紫色红曲霉的有毒代谢产物。桔霉素的共同产生意味着使用红曲霉属物种作为用于食品用途的天然着色剂的生产者在欧盟和在美国是不被允许的。红曲霉属物种所产生的色素的另一个缺陷是它们对光特别不稳定。因此，已经进行了一些尝试来改善红曲霉色素的光稳定性，例如，通过在氨基酸的存在下培养红曲霉属菌株，如Jung等所述的(J.Agric.Food Chem.2005，53，7108-7114)。 
Mapari等(Curr.Opin.Biotechnol.2005，16，231-238)研究了真菌对于生产作为潜在的天然食品着色剂的水溶性色素的生物多样性。Mapari等(J.Agric.Food Chem.2006，54(19)，7027-7035)比较了18种不同的子囊真菌菌株与11种可购得的着色剂的颜色特征，并表明存在着红曲霉属以外的产色素的子囊真菌属，其产生相同的颜色。 
发明概述 
发明人已经发现了在一些青霉属菌株中产生了类红曲霉色素组合物，特别是： 
新产紫青霉(P.neopurpurogenum)(IBT 11181，CBS 238.95) 
新产紫青霉(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS 113154) 
新产紫青霉(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153) 
新产紫青霉(CBS 364.48，IBT 4529) 
新产紫青霉(NRRL 1748，IBT 3933) 
新产紫青霉(FRR 75，IBT 4454) 
刺孢青霉(P.aculeatum)(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185) 
假刺孢青霉(P.pseudoaculeatum)(IMI 133243，IBT 14129) 
P.rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256) 
P.rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254) 
嗜松青霉(P.pinophilum)(IMI 114993，IBT 3757) 
拟嗜松青霉(P.quasipinophilum)(ATCC 9644，IBT 13104) 
P.neominioluteum(CCRC 32646，IBT 18368) 
P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082) 
P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954) 
P.amestolkiae(IMI 147406，IBT 21723) 
P.monascum(WSF 3955，IBT 14065) 
1目前归类为产紫青霉(P.purpurogenum)；2目前归类为刺孢青霉(P.aculeatum)；3目前归类为嗜松青霉(P.pinophilum)；4目前归类为P.minioluteum；5应当给出新的命名。 
发明人进一步发现了这些菌株的一个优势，即它们是非致病性的，并且基本上不产毒，即，不产生桔霉素或其他已知的霉菌毒素。 
另一个优势在于由这些青霉属菌株产生的类红曲霉色素组合物与红曲霉色素相比具有增加的光稳定性。 
因此，在一个实施方案中，本发明提供了从上述这些非致病性的并且不产毒的菌株生产类红曲霉色素组合物的方法，其包括以下步骤：提供接种物，用接种物接种生长培养基，培养接种的生长培养基，收集生物量产物以及从生物量或生长培养基中分离类红曲霉色素组合 物。 
另一个优势是可以在食品和/或非食品自身中，如在发酵饮料、乳酪等的生产中产生类红曲霉色素组合物。 
因此，在另一个实施方案中，提供了使用至少一种上述菌株的类红曲霉色素组合物给食品和/或非食品着色的方法。 
类红曲霉色素组合物可以用于食品和/或非食品中，并且在另一个实施方案中，将分离的类红曲霉色素组合物用作用于食品和/或非食品的着色剂。 
在另一个实施方案中，提供了含有类红曲霉色素组合物的化妆品组合物。 
可以利用青霉属的一些菌株能够将类红曲霉色素分泌至胞外相中的事实，在液体培养物中以工业规模生产本发明的类红曲霉色素组合物，可以从胞外相中回收色素。因此，再一个实施方案提供了生产类红曲霉色素组合物的方法，其包括：提供液相生长培养基和固体支持物；产生包含使生长培养基和固体支持物结合的培养组合物，其中该固体支持物的至少一部分浸没在生长培养基中；用青霉属孢子的接种物接种该固体支持物或培养组合物；从(d)的产物中分离含有类红曲霉色素组合物的液相。任选地，将该固体支持物保留在半渗透性容器内。 
本发明进一步提供了适于大规模生产类红曲霉色素组合物的生物反应器，其包括用于容纳液体生长培养基的可关闭容器，其中该容器配备有用于混合的装置；用于容器通气的进口和出口；用于引入和除去生物材料的进口和出口；其特征在于该生物反应器配备有保留在容器内的固体支持物，所述固体支持物在置于容器中时能够至少部分浸没在液体生长培养基中。任选地，将该固体支持物保留在半渗透性容器内。 
附图简述 
图1：从新产紫青霉菌株智能筛选和鉴定红曲红胺的示意图。 
图2：桔霉素的300-700nm的UV色谱图和UV光谱(下图)，在红曲霉菌株的色素提取物中存在的桔霉素的总离子色谱图(上图)和高分辨率质谱。 
图3：红曲玉红素的400-700nm的UV-可见光色谱图和UV-可见光光谱(下图)，在YES培养基上的拟嗜松青霉(ATCC 9644，IBT 13104)的色素提取物中存在的红曲玉红素的总离子色谱图(上图)和高分辨率质谱。 
图4：一些代表性青霉属种的色素提取物与红色红曲霉(IBT 7904)的色素提取物和商业产品红曲霉红(Riken Vitamin Co.Ltd.，日本)相比的光稳定性。 
图5：示例性红曲霉和类红曲霉基于聚酮化合物的azaphilone色素的结构。 
图6A：通过限制技术使用用于真菌菌丝体的固体支持物的生产过程的图示。 
图6B：用于色素浓缩的微滤技术的说明。 
图7：用作用于真菌菌丝体的固体支持物的轻质膨胀粘土集料(LECA)。 
图8：含有通过实施例2中的限制技术培养的真菌产紫青霉(Penicillium purpurogenum)IBT 4529的烧瓶显示了色素生产。 
图9A-C：适于通过真菌微生物生产色素的生物反应器。 
图9D：在维持在25℃的水浴中的生物反应器中色素产量的按比例增加。 
图10A-B：可购得的红曲霉红和胭脂红酸的浓度校准曲线。 
图11：两种液体培养基中(实施例8)的碳源和氮源对产紫青霉IBT 11181的色素生产的影响。 
图12：用于产紫青霉IBT 11181的红-橙色素特定生产的培养基配制。 
图13：N-戊二酰基红曲玉红胺的总离子色谱图(A)和400-700nm的UV-可见光色谱图(B)、高分辨率质谱(A1)和UV-可见光光谱(B1)， 在如实施例9的对照培养基中的产紫青霉IBT 11181的部分纯化色素提取物中存在的N-戊二酰基红斑红曲胺的高分辨率质谱(A2)和UV-可见光质谱(B2)。 
图14：在如实施例10的N11培养基中的产紫青霉IBT 3645的部分纯化色素提取物中存在的N-戊二酰基红曲玉红胺的总离子色谱图(C)和400-700nm的UV-可见光色谱图(D)，高分辨率质谱(C1)和UV-可见光光谱(D1)。 
发明详述 
真菌提供了天然色彩的备选来源，因为它们可以全年生产。鉴于真菌色素特别的密度以及能以较高产量生产的潜能，例如，通过代谢工程，真菌将是有前景的着色剂来源，具有提高的优于现有天然食品着色剂的功能性，并在红色和黄色光谱中具有相似或另外的色调。 
本发明提供了适用于食品和非食品工业的基于聚酮化合物的azaphilone色素的新来源，及其生产方法。将这些色素归类为类红曲霉色素，因为它们含有azaphilone及其衍生物，其中的几种与红曲霉产生的色素相同(图5)。 
1.类红曲霉色素生产菌的筛选 
这种类红曲霉色素新来源的鉴定是基于筛选真菌群的产生适用于食品和非食品工业的类红曲霉色素的能力。该筛选方法聚焦于子囊真菌，因为来自该科的真菌包括适于在实验室和/或工业规模下生长的成员。 
在子囊菌中，选择青霉属的成员用于筛选，因为该属与红曲霉属关系较远，并因此是类红曲霉色素来源的潜在候选者。 
青霉属具有超过1000个成员，并且许多尚未得到描述。因此，需要一种筛选程序。以下说明了这种筛选程序： 
1.1筛选程序的概述 
1.基于化学分类学选择真菌、培养基和培养条件 
2.在选定的培养基上生长(培养)选定的真菌并在25℃下暗处培养7天。 
3.通过小规模提取方法从真菌培养物中提取色素。 
4.通过HPLC-DAD-MS进行真菌色素提取物的色谱分析。 
5.通过在内部和公开数据库中的检索，基于它们与已知代谢产物的UV/可见光光谱和质谱的相似性来鉴定代谢产物。 
去重复化可以用于测定菌株是否产生真菌毒素，并测定所产生的色素是否是类红曲霉的，即含有基于聚酮化合物的azaphilone着色剂。图1用图说明了用于筛选和鉴定作为潜在天然食品着色剂的真菌色素的程序。最初从培养物保藏中心，如位于微生物生物技术中心，DTU，Kgs.Lyngby，丹麦的IBT真菌培养物保藏中心，预先选择色素生产菌。选择是基于颜色的产生或分泌，并且使用小规模提取来制备用于分析的样品。使用分析性HPLC分析来鉴定有色的化合物。在图1中，中间的图描绘了三个HPLC色谱图(从上开始)：来自电喷雾负离子质谱的总离子色谱图(m/z 100-900)，显示了有色化合物的400-700nm的UV/可见光色谱图和同样显示了有色化合物的200-700nm的UV/可见光色谱图。色素(红曲玉红胺)的鉴定显示于右侧，其中将去质子化的分子离子[M-H]-的质量用于计算C23H27NO4的分子组成。将分子组成的信息结合UV/可见光光谱。与来自化合物最初描述的UV/可见光光谱数据的比较可以用于去重复化，等等。以下的文献描述了真菌毒素的去重复化。Jennessen等(J.Agric.Food Chem.2005，53，1833-1840)。 
描述真菌毒素桔霉素以及许多红曲霉色素的UV/可见光光谱和高分辨率质谱的数据在实施例5中有描述；名称为“LC-DAD-MS数据的分析”。 
所用的筛选方法使得可以鉴定产生类红曲霉色素的青霉属菌株，以及鉴定所培养的菌株不存在真菌毒素的产生。特别地，该筛选方法应当筛选真菌毒素桔霉素，因为它和一些红曲霉色素，如红曲素和红斑红曲素，属于同一生物源家族。 
1.2青霉属菌株产生的真菌毒素： 
在几乎全部的红曲霉色素中发现了桔霉素。然而，已知青霉属种产生其他真菌毒素，即，圆弧青霉属素、棒曲霉素、土青霉酸、2-甲基异冰片、赭曲霉素A、桔霉素、青霉酸、verrucosidin、青霉震颤素A、星形曲霉毒素、球二孢菌素、球毛壳甲素、communesin、环匹阿尼酸、疣孢青霉原、isochromantoxin、viriditoxin、霉酚酸、PR-毒素、黑麦酮酸、红青霉毒素、土震素、viridic acid、黄麦格霉素、紫黄素、紫黄质、红青霉毒素、细皱青霉素、藤黄醌茜素、制藤黄菌素、红醌茜菌素、大黄素、岛青霉毒素、杜克拉青霉素、rugulovasinA和B、细皱青霉素、刺孢青霉酸、环氯素和球二孢菌素。 
产生色素的许多青霉属种也产生真菌毒素。例如，疣孢青霉(P.verrucosum)，广泛分布于寒带的谷物中，产色素，但也产生两种强力毒素，即，赭曲毒素A和桔霉素。相似地，P.persicinum除了灰黄霉素(一种抗生素)以外，还产生大量的未知桃红色素，并且特别是真菌毒素chrysogine和异烟棒曲霉素C。此外，发现红色素生产菌红色青霉(P.rubrum)产生红青霉毒素。 
1.3致病株 
尽管发现马尔尼菲青霉(Penicillium marneffei)产生大量类红曲霉色素，但如Liyan等所报道的，马尔尼菲青霉是一种危险的病原体(Fifteen cases of penicilliosis in Guangdong，China(2000)(中国广东十五例青霉病)，Mycopathologia，158，151-155)，并因此不适于例如用于食品中。然而，通过所述筛选方法鉴定了几株类红曲霉色素生产株的青霉属，这些菌没有报道在人体内是入侵性的或致病的，并且也没有产生任何已知的真菌毒素。 
1.4选定的青霉属菌株所产色素的光稳定性： 
可以测试选定的产色素青霉属菌株所产类红曲霉色素的色素组成 的光稳定性，例如，在pH7的基于饮料的食品系统中。例如，可以通过与可购得的红曲霉色素相比较来证明稳定性，例如，使用实施例5中的程序。 
2.用于类红曲霉色素生产的青霉属菌株 
以下菌株可以产生类红曲霉基于聚酮化合物的azaphilone色素，而没有一同产生真菌毒素。此外，尚未得知它们是致病性的： 
新产紫青霉(P.neopurpurogenum)(IBT 11181，CBS 238.95) 
P.1neopurpurogenum(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS113154) 
P.1neopurpurogenum(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153) 
P.1neopurpurogenum(CBS 364.48，IBT 4529) 
P.1neopurpurogenum(NRRL 1748，IBT 3933) 
P.1neopurpurogenum(FRR 75，IBT 4454) 
刺孢青霉(P.aculeatum)(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185) 
P.2pseudoaculeatum(IMI 133243，IBT 14129) 
P.2rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256) 
P.2rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254) 
嗜松青霉(P.pinophilum)(IMI 114993，IBT 3757) 
P.3quasipinophilum(ATCC 9644，IBT 13104) 
P.4neominioluteum(CCRC 32646，IBT 18368) 
P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082) 
P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954) 
P.amestolkiae(IMI 147406，IBT 21723) 
P.5monascum(WSF 3955，IBT 14065) 
1目前归类为P.purpurogenum；2目前归类为刺孢青霉(P.aculeatum)；3目前归类为P.pinophilum；4目前归类为P.minioluteum；5应当给出新的命名。 
除了以上非致病性和非产毒性菌株的发现，还可以获得这些菌株中的一些来产生类红曲霉基于聚酮化合物的azaphilone色素，该色素的光稳定性比从在相同条件下生长的紫色红曲霉(IBT 7904)获得的红曲霉色素令人惊讶地高，并且甚至光稳定性比商业产品红曲霉红(Riken Vitamin Co.Ltd.，日本)的高。 
如上所述，所用的菌株已经保藏在几个不同的培养物保藏中心。可以从以下的一个或多个培养物保藏中心获得： 
IBT真菌培养物保藏中心，真菌学组，BioCentrum-DTU，丹麦科技大学；皇家荷兰生物科技研究所培养物保藏中心(Centraalbureauvoor Schimmelcultures)(CBS)；CABI Bioscience(IMI)；农业研究服务培养物保藏中心(NRRL)；FRR培养物保藏中心(FRR)；美国典型培养物保藏中心(ATCC)；培养物保藏和研究中心，食品工业研究&发展研究院，Hsinche，台湾(CCRC)；落基山真菌保藏中心(RMF)；威斯康星土壤真菌保藏中心(WSF)。 
选定的产类红曲霉色素的青霉属菌株适用于工业应用，例如，食品或非食品工业，因为它们可以是“通常认为是安全的”-GRAS菌株。 
3.产类红曲霉色素的方法 
以下举例说明了用于生产真菌以产生类红曲霉色素的一般方法： 
a)提供了液相生长培养基和固体支持物， 
b)产生含有混合了生长培养基和固体支持物的培养组合物，其中至少固体支持物浸没在生长培养基中， 
c)用青霉属孢子接种物接种固体支持物或培养组合物； 
d)培养(c)接种的培养组合物； 
e)从(d)的产物中分离含有类红曲霉色素组合物的液相， 
f)收集液相。 
可以通过纯化和/或浓缩步骤，如通过大小选择性半渗透性膜的过滤进一步分离液相中的一种或多种类红曲霉色素。任选地，可以从步 骤(d)产生的生物量中提取一种或多种类红曲霉色素。 
3.1青霉属菌株孢子接种物 
接种物优选含有1.2×105至3×105孢子/ml待接种的液体培养基。孢子源自能够产生一种或多种类红曲霉色素的青霉属菌株，该菌株是非致病性的并且不产生任何毒素(包括真菌毒素)，如以上部分(2)中举例说明的。 
3.2类红曲霉色素产生的生产/培养条件 
青霉属菌株，通常可以以多种方式培养，如通过浸没培养、固态发酵。使用可获得的栽培技术，青霉属菌株提供了比植物基着色剂(色素)产量高的色素(类红曲霉azaphililone色素)。此外，显示出青霉属菌株分泌大量胞外色素，与色素累积在红曲霉生物量内的红曲霉种相比，这有利于随后的提取和/或分离。 
青霉属菌株接种物的浸没培养和色素产生通常包括以下步骤：a)在合适的包括液相的最小限定培养基或复合培养基中培养；b)如果色素是外生的，通过离心或过滤分离步骤(a)的液相和固相，以从液相中除去生物量；c)任选地，通过酸沉淀接着离心来分离沉淀物，从液相中分离色素；d)将色素溶解于合适的溶剂中，如乙醇，并将溶剂蒸发来获得有色的粉末。此外，可以使用含水醇如乙醇提取生物量，以回收内生的或包裹在生物量中的色素。 
固态发酵可以使用各种淀粉基基质，如大米和/或leca坚果，作为可能的基质。例如，随后可以将大米磨碎以产生有色的粉末。固体基质可以包括基于琼脂的固相。 
在固态发酵或浸没培养中，通常将接种的生长培养基在25-30℃下暗处培养7-10天。然而，培养的时间和温度可以改变。 
3.4用于类红曲霉色素生产的生长培养基 
示例的生长培养基类型是酵母提取物蔗糖(YES)琼脂；麦芽提取 物琼脂(MEA)，马铃薯葡萄糖(PD)琼脂和Czapek-Dox酵母自溶产物(CYA)琼脂(Frisvad，J.C.；Thrane，U.Mycological media forfood-and indoor fungi.(用于食品和室内真菌的真菌学培养基)，见Introduction to Food-and Airborne Fungi(食品和空气传播真菌的介绍)，第6版；Samson，R.A.，Hoekstra，E.S.，Frisvad，J.C.，Filtenborg，O.，编辑；皇家荷兰生物科技研究所培养物保藏中心，乌得勒支，荷兰，2002；p378)。液体培养基如Czapek-Dox(CZ)肉汤也适于使用。可以改变培养基类型，以在青霉属菌株的培养中提供一个或多个优势，如例如较高的产量或不同的色调。例如，可以给生长培养基补充一种或多种氨基酸，如D-(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)，以产生氨基酸衍生的具有不同色调的类红曲霉基于聚酮化合物的azaphilone色素，并提高光稳定性。 
3.5类红曲霉色素组合物的收集和纯化 
根据培养方法，可以通过常规程序如从培养基中取出富含色素的培养基部分，作为所得到的生物量来收集色素，或通过研磨和/或提取生物量和有色基质来收集色素。 
可以通过水提结合过滤(包括超滤)从固体生长培养基中收集青霉属色素，过滤用以除去菌丝体和固体介质，然后作为水提物直接使用色素，或冻干用于稳定和存储。 
4.用于优化类红曲霉色素生产的参数 
在各种浸没培养条件下，在各种培养基中，分析产类红曲霉色素的青霉属菌株的色素生产，并且结果鉴定出促进色素产生超过生物量增加并且可以改变橙色至红色范围中色素色调的那些条件。 
4.1培养条件 
使用浸没培养条件对于将类红曲霉色素分泌至周围基质中的青霉 属菌株是优选的。这有助于从液体生长培养基中直接回收分泌的色素，避免从真菌生物量提取色素的需要。 
使用固体支持物，结合浸没培养条件，对于青霉属菌株的色素生产是优选的。可以将青霉属孢子接种于浸没培养基中(含有固体支持物)或预先接种于固体支持物上，然后将其浸入培养基中。看来固体支持物提供了用于青霉属生物量生长的表面，同时在色素生产中促进了次生代谢产物的形成。由于在培养过程中产生的青霉属生物量主要附着在固体支持物上，这很大程度上促进了在培养结束时从释放至发酵生长培养基中的分泌色素中分离出生物量。可以使用各种固体支持物，例如，轻质膨胀粘土集料(LECA)、木屑、pimp石猫砂吸附剂、飞灰轻质聚集物。 
通过将固体支持物保持在有限部分的培养基中来进一步提高通过固体支持物上的青霉属菌株浸没培养的色素生产。例如，可以通过将固体支持物引入半渗透性容器中来实现这，该容器适于浸没至用于色素生产的生长培养基中(实施例7)。从其孔隙足以允许生长培养基中的营养素和青霉属生物量分泌的色素自由移动的材料构建该容器。合适的材料是作为半渗透性膜的一种，在该意义下，即具有足以保留生物量和破碎细胞的孔径的材料，例如，其是从选自纸张、塑料、棉花、丝绸、羊毛或纤维素或金属线的材料制造的。可以从机织织物或毡纤维或上述材料的金属线构建膜。例如，膜可以是透析膜，其具有足以使生长培养基中的营养素和色素自由移动的孔径。该容器可以采取具有一个开口端的袋子的形式，该开口端用于引入固体支持物。 
将青霉属孢子接种于固体支持物上后，不能保持与固体支持物相连的青霉属生物量将保留在半渗透性容器中，而分泌的色素将从容器中扩散出来，进入周围的生长培养基中。在培养结束时，取出还有分泌色素的发酵培养基时，大部分累积的青霉属生物量以及细胞碎片都保留在半渗透性容器内。例如，通过降低膜阻塞，通过降低的生物量污染，来促进随后从收集的发酵培养基回收和浓缩分泌的色素。 
通过搅拌或振荡培养物来提高浸没培养过程中的色素产生(实施 例7)。还可以使用空气压力实现生长培养基的循环。 
4.2提高色素产生以超过生物量的定制生长培养基 
含有矿物盐和酵母提取物(例如，实施例8中的基础培养基)的基础生长培养基将支持产生类红曲霉色素的青霉属菌株的色素产生，只要生长培养基补充了低浓度的碳源和氮源。碳源的合适来源包括乳糖或淀粉，例如，马铃薯淀粉；而合适的氮源包括硝酸铵、玉米糖浆汁、大豆粉、酵母提取物。 
用于最大色素产生的碳源和氮源的优选浓度是实施例7中的生长培养基N1以及实施例8中的培养基N8和N9。 
4.3色素生产的方法 
用于通过青霉属菌株发酵生产色素的方法步骤包括(例如，图6A、B)：在固体支持物上的浸没培养；从保留在半渗透性容器(例如，茶叶袋滤纸)内的生物量中分离出含有分泌色素的发酵液；通过过滤(例如，微滤)以及任选的浓缩和/或干燥(例如，冻干)从发酵液中回收色素。 
5.适于色素生产的生物反应器 
提供了特别适于商业规模的通过固体支持物上的青霉属菌株浸没培养的色素生产的生物反应器，其中实施例11中说明了一个实施方案。生物反应器的特征包括用于微生物生长的生物反应器的基本必需特征，其包括需要能够灭菌的容器，包括至少一个可以以足以防止微生物污染的方式关闭的开口，并进一步提供用于引入或排出空气、液体(例如，营养素)或生物样品(例如，孢子接种物)或取出液体(例如，发酵液和/或有色的液体)或固体(例如，生物量和/或固体支持物)的进口和出口。可以给生物反应器进一步装备用于使生长培养基在反应器内循环的装置。这样的装置可以包括摇动装置、搅拌棒、可旋转叶片、通过用于在生长培养基表面下释放压缩空气的进口之一供 应的气压。 
生物反应器可以进一步装备有用于控制生物反应器内温度的装置。用于温度控制的合适装置包括围绕生物反应器的夹套或水浴，其能够用作热交换器，用以升高或降低生物反应器内的温度。 
为了色素生产的目的，将固体支持物引入生物反应器中。优选在金属罩上支持固体支持物，例如，盘管罩。在一个实施方案中，按照部分4.1中详述的，将固体支持物保留在半渗透性容器内。在优选的实施方案中，将固体支持物的附近，将压缩空气释放至生长培养基中，优选在半渗透性容器内，其中放置了固体支持物。 
6.色素组成和测定方法 
例如，可以通过HPLC色谱测定色素组成，使用UV/可见光二极管阵列和MS检测(参见，例如，图2和3)。色素组合物包括吸收390-530nm范围内的可见光的黄-橙-红色素。它们的特征在于不存在已知的真菌毒素，以及存在类红曲霉色素和/或其衍生物。 
红曲霉和类红曲霉色素是基于聚酮化合物的azaphilone色素，如：红曲玉红素、红曲素、红曲玉红胺、红斑红曲素、红斑红曲胺、红曲酮(monascusone)A、红曲酮B、安卡红曲黄素、xanthomonasinA、mitorubrinol、PP-V或其氨基酸衍生物。 
类红曲霉基于聚酮化合物的azaphilone色素可以是上述色素的衍生物，如，例如，氨基酸衍生物或高级同系物或低级同系物，例如，己基侧链替代辛基侧链，其中负责衍生物中颜色的azaphilone分子框架未改变。 
可以通过之前所述的去重复方法来证实真菌毒素的不存在和示例性类红曲霉色素的存在。 
一些色素进一步表征为比从相同条件下生长的紫色红曲霉(IBT7904)获得的红曲霉色素的光稳定性更高，甚至比商业产品：红曲霉红(Riken Vitamin Co.Ltd.，日本)的光稳定性更高。这可以按照所述的来进行测量。 
7.色素的用途 
色素可以用于几乎所有的有色色素的应用，例如，食品用途、非食品用途、化妆品组合物。 
本发明的色素可以用作食品着色剂，例如，焙烤制品、焙烤混合物、饮料和饮料基料、早餐谷物、乳酪、佐料和调味品、糖果和糖霜、脂肪和油、冷冻乳制甜点和混合物、明胶、布丁和馅料、肉汁和酱汁、奶制品、植物蛋白制品、经过加工的水果和果汁，以及点心。 
本发明的色素可以进一步用作非食品着色剂，例如，纺织品、棉花、羊毛的染色以及涂料、涂层、墨水和用于片剂(例如，药物片剂)、塑料和聚合物的着色剂。 
本发明的色素还可以用于化妆品中，例如，以游离的散粉或压实的粉末形式，用于流体无水油脂产品、用于身体和/或脸部的油、用于身体和/或脸部的润肤液或发用产品中。示例性用途如彩妆、染发剂或鞣革洗液。 
8.产生颜色的菌株的用途 
菌株自身可以用作待着色产品内的色素生产菌，如以下举例说明的。 
对于特定的乳酪，通常用真菌菌株接种凝乳来发酵特定霉菌种的生长，该菌株使乳酪产生颜色以及给乳酪给予独特的风味和质地。使用篓地青霉(Penicillium roqueforti)菌株形成了斯第尔顿奶酪或洛克福羊乳干酪，该菌株通常是无毒的并因此对于人食用是安全的。然而，由于在乳酪熟化或储存过程中的真菌酸败，可能真菌毒素(例如，黄曲霉毒素、酪青霉毒素C、棒曲霉素等)会累积。可以如上所述将产类红曲霉色素的青霉属菌株用于使乳酪着色，而没有产生真菌毒素的风险，并且菌株自身是非致病性的。 
除了乳酪，其他奶制品、焙烤制品、焙烤混合物、饮料和饮料基料也可以和所述的菌株一起使用，其中由于培养，菌株提供了色素的 颜色。 
实施例 
青霉属菌株 
使用的青霉属菌株为： 
新产紫青霉(IBT 11181，CBS 238.95) 
P.1neopurpurogenum(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS113154) 
P.1neopurpurogenum(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153) 
P.1neopurpurogenum(CBS 364.48，IBT 4529) 
P.1neopurpurogenum(NRRL 1748，IBT 3933) 
P.1neopurpurogenum(FRR 75，IBT 4454) 
刺孢青霉(P.aculeatum)(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185) 
P.2pseudoaculeatum(IMI 133243，IBT 14129) 
P.2rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256) 
P.2rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254) 
嗜松青霉(P.pinophilum)(IMI 114993，IBT 3757) 
P.3quasipinophilum(ATCC 9644，IBT 13104) 
P.4neominioluteum(CCRC 32646，IBT 18368) 
P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082) 
P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954) 
P.amestolkiae(IMI 147406，IBT 21723) 
P.5monascum(WSF 3955，IBT 14065) 
1目前归类为产紫青霉；2目前归类为刺孢青霉；3目前归类为嗜松青霉；4目前归类为P.minioluteum；5应当给出新的命名。 
所用的菌株已经保藏在几个不同的培养物保藏中心，从以上的保藏号可以清楚看出。可以从以下的一个或多个培养物保藏中心获得： 
IBT真菌培养物保藏中心，真菌学组，BioCentrum-DTU，丹麦科技大学；皇家荷兰生物科技研究所培养物保藏中心(Centraalbureauvoor Schimmelcultures)(CBS)；CABI Bioscience(IMI)；农业研究服务培养物保藏中心(NRRL)；FRR培养物保藏中心(FRR)；美国典型培养物保藏中心(ATCC)；培养物保藏和研究中心，食品工业研究&发展研究院，Hsinchu，台湾(CCRC)；落基山真菌保藏中心(RMF)；威斯康星土壤真菌保藏中心(WSF)。 
一般性生产 
为了制备接种物，通过涂布于CYA上，从硅胶存储或其他存储形式如冷冻塞等使菌株复壮。在25℃暗处培养7天后，检查纯度。通过将真菌分生孢子转移至含有0.1％琼脂的14ml螺帽小瓶中，从纯培养物制得分生孢子悬浮液。在用针接种至生产培养基上之前，分生孢子悬浮液应当具有高浊度。 
以在YES(酵母提取物2％；蔗糖15％；琼脂2％)和CYA(NaNO30.3％；K2HPO4 0.1％；KCl 0.05％；MgSO4·7H2O 0.05％；FeSO4·7H2O 0.001％；酵母提取物0.5％；蔗糖3％；琼脂2％)培养基上三点接种的形式接种每个菌株。将平板在25℃下暗处培养7天。 
将每个菌株在富含碳水化合物或淀粉的固体基础培养基上在25-30℃下培养7-10天，用以色素生产。可以通过常规程序如从培养基中取出富含色素的培养基部分，作为所得到的生物量来收集色素，或通过研磨生物量和有色基质来收集色素，然后冻干用以稳定和保存。 
可以通过水提结合过滤(包括超滤)从固体生长培养基中收集青霉属色素，过滤用以除去菌丝体和固体介质，然后作为水提物直接使用色素，或冻干用于稳定和存储。 
实施例1.真菌、培养基和培养条件的选择 
从Biocentrum-DTU，丹麦科技大学，Kgs.Lyngby，丹麦产生该研究中所用的所有真菌分离物。通过IBT编号列出真菌分离物。所有 真菌在四种不同的固体培养基中的任一种上培养，即酵母提取物蔗糖(YES)琼脂；麦芽提取物琼脂(MEA)、马铃薯葡萄糖(PD)琼脂和Czapek-Dox酵母自溶产物(CYA)琼脂(Frisvad，J.C.；Thrane，U.Mycological media for food-and indoor fungi.(用于食品和室内真菌的真菌学培养基)，见Introduction to Food-and AirborneFungi(食品和空气传播真菌的介绍)，第6版；Samson，R.A.，Hoekstra，E.S.，Frisvad，J.C.，Fitenborg，O.，编辑；皇家荷兰生物科技研究所培养物保藏中心，乌得勒支，荷兰，2002；p378)，或在培养基特定的组合中培养，在该培养基上发现了在红色至黄色光谱范围内产生了具有令人感兴趣的色调的最大色素。将培养物在25℃下暗处培养7天。 
将在固体培养基上外部产生了强烈着色的产色素真菌也在液体培养基中进行了生长，液体培养基为具有调节至6.5的最初pH至Czapek-Dox(CZ)肉汤。将培养物在25℃下暗处培养7天。在500ml带有挡板的锥形烧瓶中，在旋转振荡器上，150rpm，25℃下进行液体培养7天，烧瓶中含有100ml培养基(CZ)。 
实施例2.真菌色素的提取 
通过改进形式的Smedsgaard的微提取方法来进行提取(J.Chromatogr.A 1997，760，264-270)，其中在2ml小瓶中在两个步骤下对6mm塞进行提取30分钟，首先使用1ml含有0.5％蚁酸的乙酸乙酯来破开细胞壁并且提取相对非极性的代谢产物。然后将由此获得的提取物转移至新的2ml小瓶中并在真空下进行蒸发。基于我们表明了从特定产色素真菌的最大色素提取的初步结果，使用1ml甲醇或异丙醇进行第二次提取。因为色素的提取物化学性质在真菌与真菌之间是不同的，因此对于特定的菌株需要使用合适的溶剂。通过进行这，我们可以提取最大的色素。然而，将相同的溶剂系统用于提取不同培养基中培养的相同菌株。然后将第二次的提取物与来自上次提取的残余物一起加入小瓶中。然后在旋转真空浓缩仪(RVC；Christ Martin， Osterode，德国)中进行蒸发。将残余物重新溶解于400μl甲醇中，在超声波水浴中(Branson 2510，Kell-Strom，Wethersfield，USA)进行10分钟，通过0.45μm PTFE针筒过滤器(SRI，Eatontown，NJ，USA)过滤。将该提取物用于色谱分析。在液体培养基CZ的情况中，其中色素主要扩散于培养基中，按照Jung等所用的方法来获得颜色提取物(J.Agric.Food Chem.2003，51，1302-1306)。 
本发明中所用全部方法的图示显示于图1中。方法中所用的特定步骤和分析技术如下： 
实施例3.色素的分析 
3.1比色法：用纯水作为稀释剂在各自的最大吸收处调节过滤的发酵液中的色素吸光值，纯水获自Milli-Q系统(Millipore，Bedford，MA)，以便测量Beer-Lambert’s定律的线性度内的吸光度。然后考虑了稀释倍数，以根据测体积的生产吸光单位(AU)/100ml培养液来计算产量。使用分光光度计，通过在350-700nm范围内扫描提取物的吸收光谱来测定吸光最大值(Agilent HP 8453，Agilenttechnologies，Palo Alto，USA)。 
吸光值还用于测定色彩品质。在色素吸收最大处记录的吸光值是光谱的可见光范围中的两个特征性吸收峰，第一个大约在495nm处，另一个为407-420nm范围。使用两个吸光值的比例来测定色素的红色指数，即，较高的比例值表示较高的红色素比例。 
3.2来自发酵液的色素组合物的评价 
A.固相提取：将滤液接受通过混合模式的反相弱阴离子交换的净化，使用Strata-X-AW筒(60mg 1ml，Phenomenex，Torrence，CA，USA)。该筒用1.2ml甲醇调节并用1.2ml水平衡。(MilliQ水，18.2μ)。将用2％磷酸酸化的1.2ml样品(以1∶6的比例)装载于真空歧管中。然后用1.2ml水和1.2ml甲醇将该筒按序洗涤。用1.2ml甲醇中的2％NH4OH洗脱结合在筒的基质中的色素混合物。使用旋转真空浓 缩仪将由此获得的色素提取物蒸发至干。然后将其重新溶解于200μl的甲醇中并使其接受LC-HRMS分析。 
实施例4.色谱分析 
在带有光电二极管阵列检测仪(DAD)和50×2mm内径3μm，Luna C 18 II柱(Phenomenex，Torrance，CA)的Agilent HP 1100液相色谱(LC)系统上进行高分辨率LC-DAD-MS。将该LC系统结合LCT垂直飞行时间质谱仪(Waters-Micromass，Manchester，U.K.)，该质谱仪带有Z-喷雾点喷雾离子化(ESI)源和LockSpray探针，并通过MassLynx 4.0来控制。以正或负ESI模型来运行MS系统，使用开始于15％乙腈的水-乙腈梯度体系，其在20分钟内线性增加至100％，保持时间为5分钟，或开始于5％乙腈，持续2分钟，并在18分钟内增加至100％，并将其保持5分钟。用10mM甲酸铵和20mM蚁酸来缓冲水，用20mM蚁酸缓冲乙腈。将该设备调至分辨率＞7000(在一半的峰高)。该方法是非常确定的并且描述于Nielsen等(J.Agric.Food Chem2005，53，8190-8196)。 
通过使用保持在25℃的50mm×2mm内径，3μm，Luna PFP柱来进一步发展LC方法。注入3μl体积的样品并使用含有0.1％蚁酸的水和含有0.1％蚁酸的乙腈的梯度系统以0.2ml/分钟的流速洗脱。梯度开始于10％乙腈，并在12分钟内线性增加至60％，并在10分钟内进一步增加至80％，并在之后的5分钟内最终增加至100％，保持5分钟的时间。将此与固相提取联合使用，以分析滤过的发酵色素提取物。 
实施例5.LC-DAD-MS数据的分析 
从重建离子色谱的扫描函数以ESI+或ESI-检测本研究中涉及的代谢产物的存在，并且在背景扣除后获得了UV/可见光光谱。以下显示了这些化合物中的每一种的DAD-MS数据。 
安卡红曲黄素。以ESI+检测了安卡红曲黄素，为m/z 387.2004[M+H]+并通过加合物证实m/z 409.1803[M+H+Na]+和450.2213[M+H+Na+CH3CN]+。UV-可见光光谱为λ最大：232，283(较短的峰)和390。 
红曲素。以ESI+检测了红曲素，为m/z 359.1719[M+H]+并通过加合物证实m/z 397.1389[M+H+K]+和422.1926[M+H+Na+CH3CN]+。UV-可见光光谱为λ最大：230，288(较短的峰)和394。 
红斑红曲素。以ESI+检测了红斑红曲素，为m/z 355.4232[M+H]+并通过加合物证实m/z 418.3666[M+H+Na+CH3CN]+，片段m/z311.5018[M+H-CO2]+。UV-可见光光谱为λ最大：246，288和474。 
红斑红曲胺。以ESI+检测了红斑红曲胺，为m/z 354.4623[M+H]+并通过加合物证实376.4212[M+H+Na]+和417.3899[M+H+Na+CH3CN]+，片段310.5256[M+H-CO2]+。UV-可见光光谱为λ最大：306，414和524，在252具有突出部分。 
N-戊二酰基红斑红曲胺。检测了N-戊二酰基红斑红曲胺，为m/z484.20[M+H]+并通过加合物证实506.21[M+H+Na]+和547.22[M+H+Na+CH3CN]+。UV-可见光光谱为λ最大：250，274，430和522。 
桔霉素。以ESI+检测了标准桔霉素，为m/z 251.4779[M+H]+并通过加合物证实314.4398[M+H+Na+CH3CN]+，片段233.4918[M+H-H2O]+。UV光谱为λ最大：216，322，在242处具有突出部分。 
红曲玉红素。以ESI+检测了红曲玉红素，为m/z 383.4141[M+H]+并通过加合物证实405.3971[M+H+Na]+和446.3614[M+H+Na+CH3CN]+，片段339.5067[M+H-CO2]+。UV-可见光光谱为λ最大：248，288和478。 Xanthomonasin A。以ESI+检测了Xanthomonasin A，为m/z389.4427[M+H]+并通过加合物证实411.4379[M+H+Na]+和452.3948[M+H+Na+CH3CN]+，片段361.4615[M+H-H2O]+。UV-可见光光谱为λ最大：236，288(较短的)和392。 
PP-V。以ESI+检测了PP-V(红曲玉红胺的同系物，3-(9a-甲基-3-辛酰-2，9-二氧-2，7，9，9a-四氢化-糠酰[3，2-g]异喹啉-6-基)丙烯酸)，为m/z 412.3929[M+H]+并通过加合物证实434.3493[M+H+Na]+和475.3170[M+H+Na+CH3CN]+，片段368.4687[M+H-CO2]+。UV-可见光光谱为λ最大：302，420和52，在252处具有突出部分。 
红斑红曲胺的苏氨酸衍生物。以ESI+检测了红斑红曲胺的苏氨酸衍生物，为m/z 456.3559[M+H]+并通过加合物证实478.3064[M+H+Na]+和519.2740[M+H+Na+CH3CN]+。UV-可见光光谱为λ最大：204，282，424和524。 
N-戊二酰基红曲玉红胺。检测了N-戊二酰基红曲玉红胺，为m/z512.23[M+H]+，并通过加合物证实534.21[M+H+Na]+。UV-可见光光谱为λ最大：221(在272处具有突出部位)，420和504。 
在研究的色素提取物中未检测到红曲玉红胺。 
从重建离子色谱的第一次扫描函数以ESI+检测到PP-R(7-(2-羟乙基)-红曲玉红胺)的存在，为m/z 426.4288[M+H]+，并通过片段证实m/z 448.3817[M+H+Na]+和489.3471[M+H+Na+CH3CN]+。 
实施例6.类红曲霉色素的光稳定性。 
将三种代表性的真菌色素组合物加入斜颈烧瓶中的pH为7的基于 饮料的食品体系中，将烧瓶装满以避免氧化。使装满的烧瓶在25℃的光柜(Altas suntest XLS，氙灯)中接受光剂量。CIELAB(参见，例如，Mapari等，J.Agric.Food Chem.2006，54(19)，7027-7035)，并在光暴露之前以及直至测试样品差不多脱色的时间段中在比色仪(Minolta CT 310，Konica Minolta，Mahwah NJ)上测量坐标。在此之前，基于食品应用中通常所用的最佳值，将样品的L-值调节至特定的值(例如，对于红色着色剂，将L-值从75调节至78)。从CIELAB值，计算了ΔE值，该值是基于与L-值一起考虑的a*值和b*值的颜色损失的指示。光柜中的光强是168J/cm2。 
图4显示了由青霉属的3个物种(产紫青霉；刺孢青霉和P.minioluteum)产生的类红曲霉色素与可购得的红曲霉色素相比增强的光稳定性。 
实施例7.酵母提取物和浸没培养过程中的振荡提高了产紫青霉IBT 4529的色素产生 
根据图6A图示列出的方法，在酵母提取物补充的存在或不存在下，测量了产紫青霉IBT 4529的色素产生，菌株是在300ml有挡板的锥形培养瓶中，在含有100ml生长培养基的固体支持物上培养的(图8)。 
固体支持物：包括大约8-9克轻质膨胀粘土集料[LECA](图7)，保留在茶叶滤袋内，并通过高压蒸汽灭菌。 
生长培养基：在1％酵母提取物(YE)存在或不存在下，将具有以下组成的Czapeck-Dox(CZ)发酵肉汤用作培养基。 
  培养基成分   用量
  蔗糖   30g
  NaNO3   3g
  K2HPO4   1g
  MgSO4.7H2O   0.5g
  FeSO4.7H2O   0.01g
  KCl   0.5g
  蒸馏水   1000ml
  高压蒸汽灭菌前pH   5.5
将产紫青霉IBT 4529的孢子直接接种于茶滤袋内所含的LECA上，然后将其转移至含有以上生长培养基的烧瓶中。实验重复两份进行。将培养物在25℃下暗处培养，在静止或振荡(120rpm)条件下。在培养7天后，将含有大部分粘附于LECA的真菌生物量的茶滤袋从烧瓶中取出，并将剩余的发酵肉汤通过Whatman 1号滤纸过滤来除去残余的生物量并在其最大吸收处记录滤液的吸光值。 
表1 
Figure GPA00001088243400251
表1中所示的结果表明了振荡条件和1％酵母提取物的存在强烈地促进了产紫青霉IBT 4529的类红曲霉色素产生。 
实施例8.碳源和氮源的供应调节了产紫青霉IBT 11181的色素产生 
根据实施例7中限定的实验方案，在不同含量和/或比例的碳源和氮源的存在下，在振荡(120rpm)条件下，在25℃下暗处培养，来进行产紫青霉IBT 11181的色素产生。 
接种物：1.0×105孢子/ml产紫青霉IBT 11181。 
固体支持物：含有LECA的茶滤袋：总重：3.25±0.19g。 
生长培养基：基础培养基的组成如下： 
  培养基成分   用量
  酵母提取物   5g
  K2HPO4   1g
  MgSO4.7H2O   0.5g
  FeSO4.7H2O   0.01g
  KCl   0.5g
  蒸馏水   1000ml
  高压蒸汽灭菌前的pH   5.5
给基础培养基补充碳源，包括浓度范围为5-100g/L的马铃薯淀粉(PS)和浓度范围为10-150g/L的乳糖(L)；和氮源，包括各自浓度范围为3-30g/L的玉米浆(CSL)和硝酸铵(AN)，将其组合供应，使用用于筛选目的的Umetrics软件MODDE7测定，使用部分因子设计，并列于表2中。 
7天培养后，按照实施例7中所示的处理发酵液，并且滤液的吸光值如下所示。 
表2 
Figure GPA00001088243400261
表2(图11)中的结果表明碳源和/或氮源的浓度的操控导致红色色调的定量增加或降低(OD495/OD407值与红色调的增加正相关)。培养基中对应于N1的碳与氮的比例偏向色素产生超过生物量，而较低浓度范围的碳源和氮源(如N1中)促进了红色素产生。在外部生长培养基组合物中的培养(未显示)，其中碳源和/或氮源的浓度高于N1，导致色素较少(如N2中)或没有色素。 
实施例9.用于产紫青霉IBT 11181菌株的红-橙色素的定向产生的培养基配方 
根据实施例7中所示的实验方案进行产紫青霉IBT 11181的色素生产，在振荡(120rpm)条件下，25℃，暗处培养10天，以下将进一步详述。 
接种物：3×105孢子/ml产紫青霉IBT 11181 
固体支持物：装有LECA的茶滤袋 
生长培养基：实施例8中所述的基础培养基的组成。 
给基础培养基补充碳源，包括浓度范围为0.5-2.75g/L的马铃薯淀粉(PS)和浓度范围为0.1-3g/L的乳糖(L)；和氮源，包括各自浓度范围为3-30g/L的玉米浆(CSL)和硝酸铵(AN)，将其组合供应，使用基于二次设计的简化中心复合序贯(CCF)(Unmetrics)测定。 
表3 
Figure GPA00001088243400271
(CZ培养基加0.5％酵母提取物) 
表3(图12)中的结果表明在培养基N11上获得了最大的色素产生，非常接近的是培养基N10。所产生的色素的色调在N10和N11培养基中几乎相同，因为它们具有相似的OD490/OD420比例。还可以通过改变碳源和/或氮源的组合来产生不同红-橙色调的色素，如从提高或降低的OD490/OD420比例可以看出(表3中的N6、N7和N8)。将马铃薯淀粉浓度从0.5g/L提高至5g/L而其他成分相同时，N4培养基与N 3培养基相比，红色素产量增加。比较N5和N7，在培养基N7中，CSL的浓度从0.1提高至3g/L，而保持其他成分未改变，导致较高的色素产量并产生了具有相对更多红色色调的色素。这意味着碳源和/或氮源的操控可以用于产生定向的着色剂。 
实施例10.N11生长培养基对于产紫青霉菌株IBT 3645的色素产生也是定向的。 
根据实施例9所示的实验方案，进行Penicillium purpurogenumIBT 3645的色素产生，在振荡条件下(120rpm)，25℃，暗处培养10天，使用两个生物重复，并且以下将进一步详述。 
接种物：3×105孢子/ml产紫青霉IBT 3645 
(对应于IMI 90178，IBT 4428和CBS 113154) 
生长培养基：如实施例11中给出的含有补充了C/N源的基础培养基的N11。 
表4 
Figure GPA00001088243400281
表4清楚地表明了产紫青霉菌株IBT 3645在N11培养基中产生了 2-2.4倍高的色素产量(如通过在两个最大吸收处的吸光值测量的)。 
实施例11.适于通过产类红曲霉色素的青霉属菌株产生色素的生物反应器 
如图9A-C中所示，生物反应器特别适于从青霉属菌株按比例增加地产生色素，并且适用于图6A和B中所示的生产方法中。 
生物反应器是设计来容纳固体支持物如LECA的可关闭容器，并且进一步提供了混合设计。在本发明的实施例中，容器是2-L加盖的瓶子，工作体积为1.4L(图9A和B)，或是1-L加盖的瓶子，工作体积是0.6L(图9C和D)，进一步装备了用于混合的装置。通过通气装置来提供混合，通气装置包括位于容器内的管子，其中管的一端连接能够在压力下提供无菌空气的进气口。容器进一步装备有出气口，连接管子的另一端，使空气从容器中排出。管子可以包括形成螺旋环的一段。在本发明的实施例中，将置于容器内的固体支持物(LECA)保留在通气装置的螺旋环内。将环内的LECA固体支持物再保留在茶滤袋内，将其放在通气装置的螺旋环之上。 
测试1-L生物反应器的色素生产。将生长培养基和生物反应器的部件分开灭菌。在超净台中的无菌条件下将培养基加入生物反应器中。使用接种口进行接种。发酵条件如下： 
接种物：3×105孢子/ml产紫青霉IBT 11181 
固体支持物：保留在螺旋和茶滤袋中的LECA。 
生长培养基：来自实施例8的N1培养基(0.6L体积) 
如图5D所示，在维持于25℃的水浴中，在静止条件下，将生物反应器容器培养14天。提供无菌空气(1vvm)以实现混合并使生长培养基营养素转移至茶滤袋中和转移出茶滤袋。 
发酵后，从容器中取出茶滤袋和固体支持物，滗出发酵液并通过Whatman 1号滤纸过滤。通过在振荡器上，室温，120rpm，用70％乙醇洗涤过夜收集粘附在滤纸上的生物量和/或LECA上的色素。记录了滤过的发酵液以及乙醇提取物的吸光值。 
表3 
Figure GPA00001088243400301
将滤过的发酵液中存在的色素的体积产量与作为标准品的可购得的红曲霉红着色剂(Riken Vitamin Co.Ltd.，日本)和胭脂红酸(Chr.Hansen A/S，丹麦)相比较(参见图10A和10B)。在490nm对红曲霉红和480nm对胭脂红酸的吸光值的外推表明就红曲霉红当量而言，产量滴定度为0.6g/L，就胭脂红当量而言，产量滴定度为3.16g/L。注意到根据本发明从青霉属菌株产生色素的方法优于已知方法的相当经济的改进，已知方法需要多如14000只(产胭脂红)昆虫来产生100g天然食品着色剂胭脂红(Mapari等，Curr.Opin.Biotechnol.，16：231-238)。 
实施例12.由青霉属菌株产生的类红曲霉色素组合物中单独色素的鉴定 
根据本发明的方法，在实施例9中的对照培养基中，由产紫青霉IBT 11181产生的类红曲霉色素鉴定为水溶性色素：N-戊二酰基红曲玉红胺(B1)和N-戊二酰基红斑红曲胺(图13(B2))。相似地，根据本发明的方法，在实施例10的N11培养基中由产紫青霉IBT 3645产生的类红曲霉色素鉴定为水溶性色素：N-戊二酰基红曲玉红胺(图14(D1))。 
通过总离子色谱(A)，400-700nm处的UV-可见光色谱(B)、高分辨率质谱(A1)和UV-可见光光谱来检测和鉴定存在于部分纯化的发酵培养基的色素提取物中的这些色素。 
实施例13.乳酪的着色方法 
用一种或多种上述的青霉属菌株接种乳酪培养基，使其在25℃下连续生长7天，伴随混合物的搅拌和通气。应当将该混合物进一步加工成乳酪。熟化后，收集乳酪并加工成有色的乳酪。 

Claims (25)

1.生产类红曲霉色素组合物的方法，包括：
g)提供液相生长培养基和固体支持物，
h)产生培养组合物，包括合并生长培养基和固体支持物，其中至少部分固体支持物浸没在生长培养基中，
i)用青霉属孢子的接种物接种固体支持物或培养组合物；
j)培养(c)的接种的培养组合物；
k)从(d)的产物中分离含有类红曲霉色素组合物的液相。
2.权利要求1的方法，其中将所述固体支持物保留在半渗透性容器中。
3.权利要求1或2的方法，其中所述固体支持物选自轻质膨胀粘土集料(LECA)、木屑、猫砂、粉煤灰集料(LWA)和pimp石。
4.权利要求2或3的方法，其中所述半渗透性容器从选自纸张、丝绸、羊毛、塑料、金属线和纤维素的材料制造。
5.权利要求1-4任一项的方法，其中在培养过程中使所述液相生长培养基循环。
6.权利要求1-5任一项的方法，其中将所述接种物接种于所述固体支持物上。
7.权利要求1-6任一项的方法，其中青霉属孢子源自以下菌株中的至少一种：新产紫青霉(P.neopurpurogenum)(IBT 11181，CBS238.95)、新产紫青霉(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS 113154)、新产紫青霉(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153)、新产紫青霉(CBS364.48，IBT 4529)、新产紫青霉(NRRL 1748，IBT 3933)、新产紫青霉(FRR 75，IBT 4454)、刺孢青霉(P.aculeatum)(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185)、假刺孢青霉(P.pseudo-acleatum)(IMI133243，IBT 14129)、P.rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256)、P.rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254)、嗜松青霉(P.pinophilum)(IMI 114993，IBT 3757)、拟嗜松青霉(P.quasipinophilum)(ATCC 9644，IBT 13104)、P.neominioluteum(CCRC 32646，IBT 18368)、P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082)、P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954)、P.amestolkiae(IMI 147406，IBT 21723)、P.monascum(WSF 3955，IBT 14065)。
8.权利要求1-6任一项的方法，其中所述色素是红曲玉红素且所述青霉属孢子源自嗜松青霉(Penicillium pinophilum)IBT 13104。
9.根据权利要求1-9任一项的方法制备的类红曲霉色素组合物。
10.生产类红曲霉色素组合物的方法，包括：
a)提供接种物；
b)用接种物接种生长培养基；
c)培养b)的接种的生长培养基；
d)收集c)的生物量产物；和
e)从所述生物量或所述生长培养基中分离类红曲霉色素组合物，
其中所述接种物选自以下菌株中的至少一种：新产紫青霉(IBT11181，CBS 238.95)、新产紫青霉(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS 113154)、新产紫青霉(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153)、新产紫青霉(CBS 364.48，IBT 4529)、新产紫青霉(NRRL 1748，IBT 3933)、新产紫青霉(FRR 75，IBT4454)、刺孢青霉(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185)、假刺孢青霉(IMI 133243，IBT 14129)、P.rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256)、P.rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254)、嗜松青霉(P.pinophilum)(IMI 114993，IBT 3757)、拟嗜松青霉(ATCC 9644，IBT 13104)、P.neominioluteum(CCRC 32646，IBT 18368)、P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082)、P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954)、P.amestolkiae(IMI 147406，IBT 21723)、P.monascum(WSF 3955，IBT 14065)。
11.根据权利要求10的方法，其中给所述生长培养基补充一种或多种氨基酸。
12.根据权利要求10或11的方法制备的类红曲霉色素组合物。
13.使用类红曲霉色素组合物给食品和/或非食品着色的方法，包括：
a)提供接种物；
b)用所述接种物接种生长培养基；
c)培养b)的接种的生长培养基；和
d)收集c)的着色的食品和/或非食品；
其中所述接种物选自以下菌株中的至少一种：新产紫青霉(IBT11181，CBS 238.95)、新产紫青霉(IMI 90178，IBT 4428，IBT 3645，CBS 113154)、新产紫青霉(NRRL 1136，IBT 3458，CBS 113153)、新产紫青霉(CBS 364.48，IBT 4529)、新产紫青霉(NRRL 1748，IBT 3933)、新产紫青霉(FRR 75，IBT 4454)、刺孢青霉(FRR 2129，IBT 14259，IBT 4185)、假刺孢青霉(IMI 133243，IBT 14129)、P.rubroaculeatum(FRR 2005，IBT 14256)、P.rubroaculeatum(FRR 1664，IBT 14254)、嗜松青霉(IMI 114993，IBT 3757)、拟嗜松青霉(ATCC 9644，IBT 13104)、P.neominioluteum(CCRC32646，IBT 18368)、P.punicae(RMF 81.01，IBT 23082)、P.synnemafuniculosum(NRRL 2119，IBT 3954)、P.amestolkiae(IMI147406，IBT 21723)、P.monascum(WSF 3955，IBT 14065)。
14.根据权利要求13的方法，其中所述食品是以下的一种：焙烤制品、焙烤混合物、饮料和饮料基料、乳酪和奶制品。
15.根据权利要求9或12的类红曲霉色素组合物作为用于食品和/或非食品的着色剂的用途。
16.根据权利要求15的用途，其中所述食品是以下的一种：焙烤制品、焙烤混合物、饮料和饮料基料、早餐谷物、乳酪、佐料和调味品、糖果和糖霜、脂肪和油、冷冻乳制甜点和混合物、明胶、布丁和馅料、肉汁和酱汁、奶制品、植物蛋白制品、经过加工的水果和果汁，以及点心食品。
17.根据权利要求16的用途，其中所述非食品是以下的一种：纺织品、棉花、羊毛、丝绸、皮革、纸张、油漆、聚合物、塑料、墨水、片剂。
18.含有根据权利要求9或12的类红曲霉色素组合物的化妆品组合物。
19.根据权利要求9的化妆品组合物，其形式为游离的散粉或压实粉、流体无水油脂产品、用于身体和/或脸部的油、用于身体和/或脸部的护肤液或发用产品。
20.根据权利要求9或10的化妆品组合物，其是彩妆组合物。
21.适于生产类红曲霉色素组合物的生物反应器，包括接收液体生长培养基的可关闭容器，其中该容器配备有用于混合的装置；用于容器通气的进口和出口；用于引入和除去生物材料的进口和出口；其特征在于该生物反应器配备有保留在容器内的固体支持物，所述固体支持物当置于容器中时能够至少部分浸没在液体生长培养基中。
22.权利要求21的生物反应器，其中将所述固体支持物保留在半渗透性容器中。
23.权利要求22的生物反应器，其中所述半渗透性容器从选自纸张、丝绸、羊毛、塑料和纤维素的半渗透性材料制得。
24.权利要求21-23任一项的生物反应器，其中所述固体支持物选自轻质膨胀粘土集料(LECA)、木屑、猫砂、粉煤灰集料(LWA)和pimp石。
25.所述生物反应器被设计用于容纳固体支持物如LECA的，并进一步向其提供混合设计。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106554353A (zh) * 2016-09-30 2017-04-05 浙江大学 具有brd4蛋白抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN110914443A (zh) * 2017-05-08 2020-03-24 丹麦技术大学 在深玫色篮状菌中生产嗜氮酮的方法
CN113166555A (zh) * 2018-11-08 2021-07-23 丹麦科技大学 一类新型曲霉属色素

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012022765A1 (en) 2010-08-19 2012-02-23 Technical University Of Denmark Production of monascus-like pigments
CN102702785A (zh) * 2012-01-18 2012-10-03 天津天康源生物技术有限公司 复配红曲红色素、其制备方法及其应用
CN104892622B (zh) * 2015-06-05 2017-08-29 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 嗜氮酮类化合物及其制备方法和用途
CN109371053B (zh) * 2018-12-24 2021-08-06 江西科技师范大学 一种红曲色素产生菌株构建方法
CN111088171B (zh) * 2020-01-14 2021-03-16 北京工商大学 一种可双向调节紫红曲霉中红曲色素合成量的发酵方法
US20230279233A1 (en) * 2020-07-06 2023-09-07 Chromologics Aps Atrorosins as food colors
CN111944840A (zh) * 2020-08-12 2020-11-17 南京农业大学 木霉菌Azaphilones类次级代谢产物的应用
CN112300243B (zh) * 2020-09-27 2022-03-25 浙江大学 一种环肽化合物及其制备方法和应用
TW202338080A (zh) * 2022-02-24 2023-10-01 德商菌絲科技有限公司 有色真菌菌絲體之生產

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4929452A (en) * 1987-09-30 1990-05-29 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method for rapidly fermenting alcoholic beverages
JPH03254686A (ja) * 1990-03-06 1991-11-13 Japan Steel Works Ltd:The 色素の抽出方法
US5075234A (en) * 1988-11-02 1991-12-24 Josefino Tunac Fermentor/bioreactor systems having high aeration capacity
CN1291237A (zh) * 1998-03-30 2001-04-11 爱德华·萨尔达里扬 草酸青霉亚美尼亚变种的菌株及其应用
WO2006028263A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-16 Canon Kabushiki Kaisha Erasable ink, method of erasing image including the same, and method of recycling recording medium using the erasing method

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2094004A (en) * 1935-10-28 1937-09-28 Drake Lewis Driver Apparatus for diffusion and mixing fluids and solids
FR1053367A (fr) * 1951-04-04 1954-02-02 Aschaffenburger Zellstoffwerke Procédé pour colorer des denrées alimentaires et friandises ou des objets venant en contact avec ces denrées ou ces produits, tels que des matières d'emballage par exemple
US3017951A (en) * 1958-07-31 1962-01-23 Sulphite Products Corp Transfer of gases into and from liquid media
DE1084437B (de) * 1958-12-15 1960-06-30 Boehringer Sohn Ingelheim Verfahren zur Gewinnung eines roten Farbstoffes aus Penicillium purpurogenum
US3647632A (en) * 1968-04-11 1972-03-07 Little Inc A Apparatus for cell culture
JPS5413513B2 (zh) * 1973-01-11 1979-05-31
RU2046107C1 (ru) * 1992-02-25 1995-10-20 Николай Валерьевич Перцов Установка для очистки цианидсодержащих сточных вод
WO2000037665A1 (en) * 1998-12-22 2000-06-29 The University Of Georgia Research Foundation Method and system for the continuous synthesis of natural products using immobilized fungal spores
GB2348876A (en) * 1999-04-13 2000-10-18 In Seop Jin Disposal of organic waste by bacterial decomposition
US6979308B1 (en) * 1999-06-03 2005-12-27 University Of North Carolina At Chapel Hill Bioreactor design and process for engineering tissue from cells
AU7825700A (en) * 1999-07-28 2001-02-13 Alltech, Inc. Device for surface culture fermentation
CZ20002950A3 (cs) * 2000-08-10 2001-12-12 Eduard Dr. Sardaryan Prostředek s profylaktickým protinádorovým účinkem
WO2005016826A2 (en) * 2003-08-18 2005-02-24 Zenon Environmental Inc. Supported biofilm apparatus and process
US20080032396A1 (en) * 2006-08-02 2008-02-07 Becton, Dickinson And Company Bioreactor and Method

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4929452A (en) * 1987-09-30 1990-05-29 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method for rapidly fermenting alcoholic beverages
US5075234A (en) * 1988-11-02 1991-12-24 Josefino Tunac Fermentor/bioreactor systems having high aeration capacity
JPH03254686A (ja) * 1990-03-06 1991-11-13 Japan Steel Works Ltd:The 色素の抽出方法
CN1291237A (zh) * 1998-03-30 2001-04-11 爱德华·萨尔达里扬 草酸青霉亚美尼亚变种的菌株及其应用
WO2006028263A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-16 Canon Kabushiki Kaisha Erasable ink, method of erasing image including the same, and method of recycling recording medium using the erasing method

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106554353A (zh) * 2016-09-30 2017-04-05 浙江大学 具有brd4蛋白抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN106554353B (zh) * 2016-09-30 2018-12-18 浙江大学 具有brd4蛋白抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN110914443A (zh) * 2017-05-08 2020-03-24 丹麦技术大学 在深玫色篮状菌中生产嗜氮酮的方法
CN110914443B (zh) * 2017-05-08 2023-07-14 克劳莫洛吉克斯有限公司 在深玫色篮状菌中生产嗜氮酮的方法
CN113166555A (zh) * 2018-11-08 2021-07-23 丹麦科技大学 一类新型曲霉属色素

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