CN101966157B - 一种地西他滨缓释微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种地西他滨缓释微球，包括地西他滨以及载体材料，所述地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～80％，所述地西他滨缓释微球的粒径在10μm以下，所述地西他滨缓释微球的包封率在75％以上，本发明提供的地西他滨缓释微球具有较高的载药量、体内无突释现象、血药浓度平稳，且无药物释放停滞期，大大减少了临床给药频次，减小给药量，提高了患者的顺应性，降低了不良反应的危害程度。

Description

一种地西他滨缓释微球及其制备方法

技术领域

本发明属于医药制剂技术领域，具体的涉及一种抗肿瘤药物地西他滨缓释微球及其制备方法。

背景技术

骨髓增生异常综合征(MDS)是一种获得性干细胞疾病，可导致无效造血和外周血细胞减少，有发展为急性髓细胞性白血病(AML)的趋势。其病因不明，男女均可发病，男性多于女性，多见于60岁以上老年人，据估计，美国每年新诊断MDS患者7000～12000例。近年来发病率更是呈上升趋势。临床表现为造血细胞在质和量上出现不同程度的异常变化，如贫血，常伴有感染和(或)出血，部分(30％)可发展成为急性白血病。

MDS的治疗包括支持治疗、细胞因子治疗、化疗和骨髓移植等，大多数临床疗效欠佳，惟一能治愈MDS的方法是异基因造血干细胞移植，但对于大多数MDS的老年患者并不适用，而小剂量化疗对中高危患者则疗效低、复发率高。近年来发现MDS细胞的基因组DNA存在异常甲基化，研究表明50％以上的MDS患者存在抑癌基因如p15的高甲基化，可能采用DNA甲基化转移酶抑制剂进行治疗。

地西他滨(Decitabine，商品名Dacogen)是一种低甲基化试剂，2004年3月，SuperGen公司完成了Dacogen治疗MDS患者的III期临床试验，向FDA申请。MGI制药与SuperGen公司达成协议，拥有该产品在全世界的独占开发、生产和经销权。由于地西他滨具有独特的抑制甲基化转移酶的作用机制，分别于2006年4月和5月由欧洲EMEA和美国FDA批准上市，用于治疗原发性和继发性MDS。地西他滨凭借其直接作用于DNA的独特作用机理，被美国癌症综合网络指南推荐为MDS的优先用药。鉴于我国MDS的治疗现状，2008年9月国家食品药品监管局(SFDA)批准地西他滨免临床试验直接上市，该药成为2005年以来SFDA惟一免临床批准的药物。

地西他滨是一种DNA甲基转移酶抑制剂，为S期细胞周期特异性药物，可以降低DNA的甲基化，使关闭的肿瘤抑制基因重新开始转录。其对L1210的细胞毒作用可为胸苷所加强，这是因为胸苷可使本品掺入DNA的量增加，从而增加本品对DNA甲基化的抑制作用。

但地西他滨的不良反应，如白细胞、血小板减少，轻中度恶心、呕吐；大剂量可引起神经毒性，表现为嗜睡、失语、偏瘫等限制了其临床应用。为了降低其血液系统毒副作用，延缓其体内释放，减少临床给药频次，提高患者依从性，以生物相容且可降解的壳聚糖为载体材料，制备了可用于注射的地西他滨壳聚糖-海藻酸钠缓释微球。

2000年我国60岁以上老年人口总数已达到1.3亿，占总人口的10.6％，据预测到2025年，我国老年人口将增至2.84亿，占全国总人口的24.48％，进入老龄化高峰期。骨髓增生异常综合征(MDS)易发于60岁以上的老人，可以预测作为目前国内批准的唯一治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的药物——地西他滨将有广阔的市场前景。同时，利用各种先进制剂技术或化学修饰对地西他滨进行优化，使其临床疗效进一步提高也显得尤为必要。

药物控制释放技术是生物材料中发展最迅速、对人类健康贡献最大的领域之一。控制释放体系与普通剂型相比，能改善药物疗效，降低毒副作用，提高生物利用度，更容易被患者接受。药物控制释放一般采用暂时控制和分布控制两种方法。前者的目的是在较长时间内或治疗过程中的特定时间内释放药物，适用于给药后迅速代谢排出的药物。后者将药物靶向释放至体内精确的病灶部位，它适用于两种情况：其一，当药物的自然分布使药物分子到达敏感组织，引起剧烈副反应，从而影响进一步治疗时；其二，当药物的自然分布难以使药物分子到达发挥疗效位点时。

如今，缓释、控释、靶向等新的制剂技术正日新月异地发展起来。微型包囊与微型成球技术是近30年来应用与发展起来的药物新工艺、新技术，医用微球是随生物材料科学、临床医学及药物学的发展而逐渐兴起的一种医用生物材料制品。其作为抗肿瘤药物靶向制剂研究已有广泛报道。通过控制微球粒径大小，使药物浓集靶区，达到提高疗效，降低不康反应的目的。药物尤其是难溶性药物的粒径控制将直接影响微球粒径及其靶向性。

微球是药物和其他活性成分溶解或分散在高分子材料中经固化而形成的微小球状实体的固体骨架物，其直径大小不一，一般在1～300μm，甚至更大，属于基质型骨架微粒。微球从内到外成分都一样，没有包裹。

微球的给药方式有口服、皮下植入、肌注、静脉注射、腹腔注射、眼内、关节腔注射等。注射用微球直径极小，以便于能够通过注射器进行给药。注射用微球具有缓释、长效和靶向作用等优点，可以实现1个月甚至3个月乃至更长时间的一次给药，大大提升了病人用药的方便性，提高了依从性。靶向作用的特点则可以提高疗效，降低副作用。因此，注射用微球剂型也作为控释及靶向治疗的发展方向被各大国际医药巨头所重视。

1986年，法国益普生(Ipsen pharma Biotech)公司生产的促黄体生成激素释放激素(LHRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)是第一个上市的缓释多肽微球制剂，缓释可以达到1个月。之后，亮丙瑞林(leuprorelin)、那法瑞林(nafarelin)、重组人生长因子等缓释微球注射剂也纷纷上市。通过调节聚合物的种类、相对分子质量、晶型、共聚物中单体的摩尔比、微球粒径、微球表面状态及内部结构、药物的水溶性、药物含量等，达到药物的缓释或控释目的。

壳聚糖是甲壳素的主要衍生物，是甲壳素脱乙酰化后的直链多糖，由葡糖胺和N-乙酰基葡糖胺结构组成，是唯一的带正电荷的多糖材料。其来源丰富，广泛存在于甲壳纲动物虾、蟹及昆虫的甲壳和植物细胞壁中。具有无毒性、生物黏附性、生物相容性、生物可降解性及可被吸收等优点。壳聚糖是一种良好的药物释放载体，可以用做微囊、微球、纳米粒等。作为药物载体它可以控制药物释放、延长药物疗效、降低药物毒副作用，提高疏水性药物对细胞膜的通透性和药物的稳定性及改变给药途径，还可以大大加强制剂的靶向给药能力，是一种新型药物制剂辅料。采用壳聚糖制备微球，可控制药物的释放，改善易降解物质的生物利用度。同时。壳聚糖可与一定量的多价阴离子反应，形成壳聚糖分子的交联，这一性质可应用于壳聚糖微球的制备。

海藻酸盐是一种水溶性线形多糖，由β-D-甘露醇醛酸和α-L-古罗糖醛酸以1，4-交联后得的多糖，因结构中带有羧基，因此为带负电的材料。普遍存在于裼藻类中，可从海洋植物巨藻、海带、马尾藻等中提取。海藻胶包括水不溶必的海藻酸及各种水溶性和水不溶性的海藻酸盐，如海藻酸钠、海藻酸铵、海藻酸钙等。目前市售主要指海藻酸钠。

海藻酸钠，分子量32000～250000，不溶于乙醇、乙醚、氯仿和酸(PH＜5.4)，溶于水成黏稠状胶体。海藻酸盐无毒性，具有生物黏附性、生物相容性和生物可降解性。可用大多数多价阳离子反应交联。

海藻酸盐中的羧基可与壳聚糖的氨基通过正负电荷吸引形成聚电解质复合膜，以其作为药物载体具有生物相容性好、制备条件温和等优点。

用半合成或合成的高分子材料作为载体材料制备微球具有以下限制：(1)材料本身制备过程比较复杂，成本相对较高；(2)制备微球时加入的有机溶剂较多，不利于环保；(3)微球制备工艺相对复杂，对设备等要求较高；(4)疏水性强，亲水性能较差。

海藻酸钠和壳聚糖均为天然高分子多糖，具有很好的生物相容性和生物可降解性，在药物的控释、缓释、靶向以及智能释药系统中具有独特的优势，应用范围较泛。

目前，国内外已上市地西他滨只有普通冻干注射剂，规定贮藏温度25℃，说明本品稳定性不佳；药代动力学研究表明，地西他滨在人体内由于肝胞嘧啶脱氨酶的快速灭活，其半衰期为15～25min，半衰期较短，引起临床用量增加(约20000元/50mg/瓶)，给病人的医药费带来严重负担；本品不良反应有白细胞、血小板减少，轻中度恶心、呕吐等，其主要毒性为骨髓抑制。

发明内容

为克服现有技术中的不足，提高地西他滨稳定性，延长体内药效，同时降低毒副作用，本发明的目的在于提供一种以天然材料为载体的地西他滨缓释微球，该地西他滨缓释微球外观优良，粒径可控，包封率高。本发明的另一个目的在于提供一种制备所述地西他滨缓释微球的方法。

为解决上述技术问题，实现上述技术效果，本发明采用了以下技术方案：

一种地西他滨缓释微球，包括地西他滨以及载体材料，所述地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～80％。

优选的，所述地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～50％。

进一步的，所述地西他滨为地西他滨活性成分及其药学上可接受的盐，其盐形式包括但不限于盐酸盐、L-乳酸盐、乙酸盐、硝酸盐、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、抗坏血酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐、对氨基苯磺酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、半乳糖盐、葡萄糖酸盐、泛酸盐、海藻酸盐。

进一步的，所述载体材料为壳聚糖及其衍生物或海藻酸及其盐或壳聚糖及其衍生物和海藻酸及其盐的混合物。

进一步的，所述地西他滨缓释微球的粒径在10μm以下，所述地西他滨缓释微球的包封率在75％以上。

本法的地西他滨缓释微球可通过以下三种类似的制备方法制备而得：

制备方法一，包括以下步骤：

①将壳聚糖用醋酸溶解配制成壳聚糖溶液，然后加入地西他滨，搅拌使其分散均匀，用碱性溶液调节pH值后所得的溶液作为水相；

②配制含司盘-20和普朗尼克F₆₈的液体石蜡溶液作为油相；

③将水相滴加至油相中，制成W/O型乳剂；

④向所述W/O型乳剂中加入交联剂进行交联固化；

⑤对步骤④后的溶液用有机溶剂洗涤除去油相，然后再用交联剂洗涤试剂洗涤除去残留的交联剂；

⑥对步骤⑤后的溶液进行脱水，抽滤，所得产物进行无菌冷冻干燥后即为所述地西他滨缓释微球。

进一步的，所述交联剂为甲醛或戊二醛。

进一步的，所述交联剂洗涤试剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、注射用水中的一种或几种。

制备方法二，包括以下步骤：

①取海藻酸钠用注射用水溶解制成海藻酸钠溶液，然后加入地西他滨，搅拌使其分散均匀，用碱性溶液调节pH值后所得的溶液作为水相；

②取氯化钙，加注射用水制成氯化钙溶液，作为固化液；

③将所述固化液搅拌下缓慢滴加至所述水相中；

④对步骤③后的溶液进行抽滤，用有机溶剂或注射用水洗涤，所得产物进行无菌冷冻干燥后即为地西他滨缓释微球。

制备方法三，包括以下步骤：

①取海藻酸钠用注射用水溶解制成海藻酸钠溶液，然后加入地西他滨，搅拌使其分散均匀，用碱性溶液调节pH值后所得溶液作为水相；

②取氯化钙和壳聚糖，加注射用水制成分别含氯化钙和壳聚糖的混合溶液；

③将所述混合溶液搅拌下缓慢滴加至所述水相中；

④对步骤③后的溶液进行抽滤，用有机溶剂或注射用水洗涤，所得产物进行无菌冷冻干燥后即为地西他滨缓释微球。

由于上述方案的运用，本发明与现有技术相比具有以下优点和技术效果：

1、良好的生理相容性

本发明提供的地西他滨缓释微球良好的生理相容性取决于其载体材料和制备工艺。地西他滨缓释微球的载体材料为具有无毒性、生物黏附性、生物相容性、生物可降解性及可被吸收性的单一成分或其混合物。

2、提高药物的稳定性

地西他滨在人体内由于肝胞嘧啶脱氨酶的快速灭活，将其制成微球制剂后可保护药物免遭破坏，从而可延长药物半衰期，延长体内药效。

3、缓释功能

本发明提供的地西他滨缓释微球，通过天然载体材料在体内的缓慢降解释放药物，避免了药物突释现象，使药物在到达靶组织前损失较小，增强了疗效的同时降低了毒副作用。

4、降低了毒副作用

本发明提供的地西他滨缓释微球，其中的药物地西他滨均匀分散于载体材料中，一方面，借助天然载体与细胞组织的特殊亲和性，携带药物能被器官组织的网状内皮系统所内吞(吞噬，胞饮)或被细胞融合，使药物浓集于靶区逐步扩散释放出药物，提高药物的有效浓度，更好的发挥疗效，同时降低对非靶区细胞组织的毒副作用。另一方面，药物被分散于载体材料中，避免了药物与血管的直接接触，减轻了对血管的刺激性。

5、包封率较高

本发明提供的地西他滨缓释微球，其制备方法制得简单可行，所用试剂及材料均易得、价廉，且在提供的参数控制范围内制备地西他滨微球的具有较高的药物包封率，可达75％以上。

具体实施方式

一种地西他滨缓释微球，包括地西他滨以及载体材料，地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～80％，优选的地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～50％。

地西他滨包括地西他滨活性成分以及盐酸盐、L-乳酸盐、乙酸盐、硝酸盐、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、抗坏血酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐、对氨基苯磺酸盐、L-酒石酸盐、柠檬酸盐、半乳糖盐、葡萄糖酸盐、泛酸盐和海藻酸盐中的一种盐。。

载体材料为壳聚糖及其衍生物或海藻酸及其盐或壳聚糖及其衍生物和海藻酸及其盐的混合物。

地西他滨缓释微球的粒径在10μm以下，所述地西他滨缓释微球的包封率在75％以上。

实施例1：

一种地西他滨缓释微球，其制备的过程如下：

①将壳聚糖用1％～5％醋酸溶解配制成3.0％～10.0％(V/W)的溶液，加入0.15％～3％(V/W)的药物地西他滨，搅拌使其分散均匀，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值至5～7作为水相；

②配制含1.5％～3％(W/W)司盘-20、0.1％～0.2％(W/W)普朗尼克F₆₈的液体石蜡溶液作为油相；

③按水相：油相体积比1∶8～1∶10将水相滴加至油相中，15～25℃，1200～1500r/min条件下搅拌10～30分钟，制成W/O型乳剂；

④向所述W/O型乳剂中加入适宜交联剂进行交联固化1～3小时；

⑤用有机溶剂洗涤2～3次除去油相，用交联剂洗涤试剂洗涤除去残留交联剂；

⑦再用有机溶剂洗涤2～3次脱水，抽滤；

⑧所得产物进行无菌冷冻干燥后得地西他滨缓释微球。

所述交联剂包括但不限于：甲醛、戊二醛。

所述交联剂洗涤试剂包括但不限于：1％～3％亚硫酸氢钠、1％～3％焦亚硫酸钠、注射用水中的一种或几种。

所述有机溶剂包括但不限于：无水乙醚、石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷、无水乙醇。

实施例2：

一种地西他滨缓释微球，其制备的过程如下：

①取海藻酸钠用注射用水溶解制成1.0％～6.0％(W/V)的海藻酸钠溶液，加入0.15％～3％(V/W)的药物地西他滨，搅拌使其分散均匀，用适宜碱性溶液调节pH值至5～7作为水相；

②取氯化钙，加注射用水制成2.0％～4.0％(W/V)的氯化钙溶液，作为固化液；

③将固化液搅拌下缓慢滴加至水相中，15～25℃，1200～1500r/min条件下搅拌10～30分钟；

④抽滤，适宜有机溶剂或注射用水洗涤3～4次；

⑤所得产物进行无菌冷冻干燥后得地西他滨缓释微球。

实施例3：

一种地西他滨缓释微球，其制备的过程如下：

①取海藻酸钠用注射用水溶解制成1.0％～6.0％(W/V)的海藻酸钠溶液，加入0.15％～3％(V/W)的药物地西他滨，搅拌使其分散均匀，用适宜碱性溶液调节pH值至5～7作为水相；

②取氯化钙和壳聚糖，加注射用水制成分别含氯化钙2.0％～4.0％(W/V)、壳聚糖0.1％～0.3％(W/V)的溶液；

③将氯化钙和壳聚糖的混合溶液搅拌下缓慢滴加至水相中，15～25℃，1200～1500r/min条件下搅拌10～30分钟；

④抽滤，适宜有机溶剂或注射用水洗涤3～4次；

⑤所得产物进行无菌冷冻干燥后得地西他滨缓释微球。

上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种地西他滨缓释微球，包括地西他滨以及载体材料，其特征在于：所述地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～80％，所述载体材料为壳聚糖和海藻酸及其盐的混合物，所述地西他滨选自其盐酸盐、其L-乳酸盐、其乙酸盐、其硝酸盐、其硫酸盐、其碳酸盐、其磷酸盐、其抗坏血酸盐、其富马酸盐、其琥珀酸盐、其马来酸盐、其苯磺酸盐、其对氨基苯磺酸盐、其L-酒石酸盐、其柠檬酸盐、其半乳糖盐、其葡萄糖酸盐、其泛酸盐和其海藻酸盐中的一种盐。

2.根据权利要求1所述的地西他滨缓释微球，其特征在于：所述地西他滨与所述载体材料的重量百分比为1％～50％。

3.根据权利要求1所述的地西他滨缓释微球，其特征在于，所述地西他滨缓释微球的粒径在10μm以下，所述地西他滨缓释微球的包封率在75％以上。

4.一种根据权利要求1至3中任意一项所述的地西他滨缓释微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①取海藻酸钠用注射用水溶解制成海藻酸钠溶液，然后加入地西他滨，搅拌使其分散均匀，用碱性溶液调节pH值后所得溶液作为水相；

②取氯化钙和壳聚糖，加注射用水制成分别含氯化钙和壳聚糖的混合溶液；

③将所述混合溶液搅拌下缓慢滴加至所述水相中；

④对步骤③后的溶液进行抽滤，用有机溶剂或注射用水洗涤，所得产物进行无菌冷冻干燥后即为地西他滨缓释微球。