CN101961365A - 水飞蓟或水飞蓟宾用于治疗神经受损的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种水飞蓟(silymarin)或水飞蓟宾(silybin)在制备用于治疗神经损伤的药剂中的应用。

Description

水飞蓟或水飞蓟宾用于治疗神经受损的用途
技术领域
本发明涉及水飞蓟或水飞蓟宾用以治疗神经损伤的用途。
背景技术
水飞蓟是一种由乳蓟(milk thistle，Silybum marianum)分离的黄酮木脂素混合物，常用于治疗肝脏病症。其亦具有抗发炎、细胞保护、及抗致癌活性。水飞蓟宾是水飞蓟中的主要黄酮木脂素，且其已被发现具有上述的治疗效应。
脊髓损伤(SCI)是脊髓的损害，其会造成感觉及运动控制的丧失。其可能是由脊髓的疾病(如，弗利德来运动失调(Friedreich′s ataxia))或物理创伤(如，挫伤)而造成。
发明内容
本发明是基于非可预期地发现水飞蓟或水飞蓟宾具有神经保护活性并可改善脊髓损伤大鼠的功能恢复。
因此，本发明是关于一种治疗神经损伤(如，SCI)的方法，对需要该治疗的个体投与有效量的水飞蓟或水飞蓟宾。特定而言，可将水飞蓟或水飞蓟宾传输至损伤的神经区域。在一实施例中，可经由注射而进行鞘内投与。用于本发明方法的水飞蓟宾可为分离形式，亦即，由合成方法制备或由天然来源(如，水飞蓟)富集。分离的水飞蓟宾化合物是指含有以干重计至少40％该化合物的制备物。分离化合物的纯度可由，如，管柱层析、质谱、高效液相层析(HPLC)、NMR、或任何其它适当方法进行测量。
名辞“治疗”在本文中是指对具有神经损伤、该损伤的症状、或朝向该损伤的易感性的个体，以治愈、疗愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改良、或影响该损伤、该损伤的症状、或朝向该损伤的易感性的目的，施用或投与包括一或多种活性剂的组合物。“有效量”在本文中是指欲对该个体产生治疗效应所需的各种活性剂的量，其可能为单独使用或是结合一或多种其它活性剂。如本领域技术人员可知，根据投与的途径、赋形剂的选择、以及其它药剂的共同使用，有效量可各有不同。
本发明亦是关于一种以水飞蓟或水飞蓟宾增进由SCI(如，挫伤性SCI)复原的方法。
本发明亦包括水飞蓟或水飞蓟宾在制备用于治疗神经损伤的药剂中的应用。
本发明又包括水飞蓟或水飞蓟宾在制备用于增进由脊髓损伤复原的药剂中的应用。
本发明一或多个具体实例的细节示于下文的叙述。本发明的其它特征或优点将可由下文的附图及数个具体实例的详细叙述以及附呈的权利要求书而得悉。
附图说明
上述发明内容及以下具体实施方式与所附附图一并阅读将更增了解。为达阐明本发明的目的，附图中所示具体实例为目前较佳者。然而，应了解本发明并不限于所示的特定排列及结构。
在附图中：
图1显示水飞蓟及水飞蓟宾在大鼠脊髓神经细胞-胶质细胞培养物中对于LPS及红藻胺酸诱发性毒性的效应，其中(A)显示各个处理组中每1.5mm2的iNOS-阳性细胞数目(Con＝对照组；a：P＜0.05(LPS对对照组)；b：P＜0.05(LPS+SM对LPS))；(B)显示各处理组中iNOS及环氧合酶-2(COX-2)的西方点渍分析结果(Con＝对照组)；及(C)显示各处理组中释入培养基中的亚硝酸盐量(a：P＜0.05(处理组对对照组)；b：P＜0.05(SM/LPS或SB/LPS对LPS)；SM＝水飞蓟；SB＝水飞蓟宾)。
图2显示水飞蓟及水飞蓟宾在混合胶质细胞培养物中对于细胞增殖以及对于H2O2-诱发性自由基形成的效应，其中(A)显示各个处理组中每1.5mm2的BrdU-阳性细胞数目；及(B)显示水飞蓟(80μM)及水飞蓟宾(80μM)对于H2O2-诱发性自由基形成(ROS)的有效抑制。
图3显示水飞蓟在由(A)脊髓或(B)皮质所制备的神经细胞-胶质细胞培养物中对于H2O2-诱发性自由基形成的剂量反应性保护效应。
图4(A)显示水飞蓟(80μM)及水飞蓟宾(80μM)在脊髓神经细胞-胶质细胞培养物中对于H2O2-或t-BOOH-诱发性自由基形成的效应。图4(B)显示水飞蓟(80μM)及水飞蓟宾(80μM)在皮质神经细胞-胶质细胞培养物中对于H2O2-或t-BOOH-诱发性自由基形成的效应。图4(C)显示水飞蓟(80μM)在小胶质细胞培养物中对于H2O2-或t-BOOH-诱发性自由基形成的效应。(*相较于对应DMSO组的P＜0.05)
图5显示水飞蓟及水飞蓟宾在MTT分析中的结果。
图6显示鞘内投与水飞蓟在挫伤性SCI大鼠中的效应，以后肢功能的恢复说明(SM20＝50％PEG中的20μg/μl水飞蓟，6μl/大鼠；SM5＝50％PEG中的5μg/μl水飞蓟，6μl/大鼠；*由单因子ANOVA及Student-Newman-Keuls法的P＜0.05)。
图7显示大鼠脊髓中心的西方点渍分析结果，其指出水飞蓟(SM)可减少损伤脊髓中心的损伤诱发性ED1及环氧合酶-2(COX-2)表现。
图8显示在鞘内投与水飞蓟(120μg/大鼠)后不同时程时于损伤脊髓中的水飞蓟宾保留情形。
具体实施方式
本发明是关于使用水飞蓟或水飞蓟宾以治疗神经损伤或协助由此种损伤复原的用途。
在本文中，辞句“由SCI复原”是指罹患SCI病患的病理状况的改善及/或损伤脊髓的生理功能的恢复(至少部分)。举例而言，在用于本发明实施例的动物模型中，大鼠在脊髓T9-T10区域受到挫伤性的损伤。在此种情形下，由后肢运动缺陷的改善可证实SCI的复原。
水飞蓟是取自乳蓟(Silybum marianum Gaertn，亦称为Carduus marianus L)的种子及果实的标准萃取物，其含有黄酮木脂素水飞蓟宾(silybin，与silibinin同义)为其主要组成份。水飞蓟可由任何公知方法制备，参见例如以下文献所公开的技术：Barreto等人，由水飞蓟萃取营养药物-热水萃取法，Appl.Biochem Biotechnol.108：881-9，2003；Wallace等人，由水飞蓟萃取营养药物：第二部份：有机溶剂萃取法，Appl.Biotechnol.105-108：891-903，2003)；以及Wallace等人，由水飞蓟进行黄酮木脂素的批次溶剂萃取，Phyotchemical Analysis.16：7-16，2005。或者，水飞蓟可由供货商处购得，诸如，Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)。
水飞蓟宾(silybin，silibinin)或2，3-二氢-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-(羟甲基)-6-(3，5，7-三羟基-4-氧代苯并吡喃-2-基)苯并二恶烷，具有两种非镜像异构形式。该两种异构物皆可由天然来源分离或是可由合成方法制备。同样地，水飞蓟宾亦可由Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)及其它供货商处购得。
特定而言，为达成较佳效应，可将水飞蓟或水飞蓟宾直接投与至损伤的神经区域。在一具体实例中，水飞蓟或水飞蓟宾由鞘内投与，亦即，注射进入浸泡着脊髓及脑的脑脊髓液中。
为协助传输，可将水飞蓟或水飞蓟宾与适当的医药可接受性载体共同调配为医药组合物。在本文中，名辞“医药可接受性载体”是指与该组合物的活性成分相容，且较佳为可安定该活性成分，同时不会对该待治疗个体有害的载体。例示性的载体包括，但不限于，盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。
待投与至SCI区域的水飞蓟或水飞蓟宾的量可因诸多因素而有所不同，诸如，该个体的状况，以及该SCI的类型及严重性。在施用至罹患SCI的病患时，水飞蓟或水飞蓟宾的量应可达成所欲效应，亦即，修复损伤区域及/或至少部分增进该损伤脊髓的功能恢复。适当的量可由本领域技术人员在不须过度实验的情形下基于本公开内容及常规知识与技术判定。
本发明现将由下列的实例而进一步说明。此等实例是为说明的目的而提供，且不以任何方式被视为限制本发明的范围。
实施例
化学品
水飞蓟及水飞蓟宾购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，产品编号分别为S0292及S0417)。将水飞蓟或水飞蓟宾溶于二甲亚砜(DMSO)中，并以培养基新鲜稀释，以进行所有试管内的培养物实验。
液相层析梯度溶剂及试剂取自E.Merck(Darmstadt，Germany)。
除非另有明示，其它试剂购自Sigma-Aldrich。
混合神经细胞/胶质细胞培养物
如Hung等人(Mol.Brain Res.75(2000)：330-336)及Tsai等人(Ann.N.Y.Acad.Sci.1042(2005)：338-348)所述的方法，由怀孕第15天的Sprague-Dawley大鼠胚胎的皮质或脊柱区域，制备混合神经细胞-胶质细胞培养物。简言之，以木瓜蛋白酶/蛋白酶/脱氧核糖核酸酶I的混合物(0.1％：0.1％：0.03％)分离细胞，再将其以1-2x105个细胞/cm2的密度涂盘至经聚离胺酸涂覆的培养盘上。将细胞维持在添加10％胎牛血清(FBS)的杜氏改良伊氏培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)(DMEM)中。
混合胶质细胞培养物
如Tsai及Lee(Free Radical Biology&Medicine 24(1998)：705-713)所述的方法，由新生Sprague-Dawley大鼠的皮质或脊髓，制备混合胶质细胞培养物。简言之，使经研磨的皮质或脊髓通过尼龙布(80及10μm)，涂盘在75cm2培养瓶中，并将其维持在含有5.5mM葡萄糖及添加10％胎牛血清(FCS)的DMEM中。使细胞在5％CO2、95％空气的水饱和大气中于37℃进行培育。为使培养物不含污染细胞，在第10天，以180rpm隔夜震荡除去悬浮细胞以纯化培养物。将烧瓶中的培养物再次涂盘于多孔培养盘上。培养物显示针对胶质纤维酸性蛋白(GFAP)有90％以上的阳性染色。
小胶质细胞培养物
由大鼠混合胶质细胞培养物纯化出小胶质细胞培养物(Tzeng and Huang，J..Cell Biochem.90(2)(2003)：227-33)。简言之，在培养10至14天后，借着震荡烧瓶而分离漂浮细胞及轻微黏附的细胞。将所得的细胞悬浮液转移至多孔培养盘(Corning，USA)中，并使其在37℃下黏附。在30分钟后除去未黏附的细胞，分离出强力黏连形式的微胶质细胞。藉由离子钙结合性适应分子-1(IBA1，Wako Chemicals，Japan)或ED-1(Serotec，UK)的免疫染色，测定出微胶质细胞的纯度为大于96％。
动物
Sprague-Dawley(SD)大鼠取自国立阳明大学(NYU)或国家科学委员会的动物中心(台湾)。使用介于240-280g的间的成年雌性SD大鼠作为诱发性挫伤性SCI模型。动物的处理及实验流程皆经台北荣民总医院的动物实验委员会仔细审核通过。
脊髓挫伤
使用NYU落重装置(weight-drop device)诱发挫伤性SCI。麻醉成年雌性SD大鼠。在第九胸(T)椎位置进行背侧椎板切除术。由50mm高度落下10g短柱而损伤T9-T10脊髓的背侧表面。硬膜保持机械完整，而落重损伤造成了蛋形坏死区域的特征，在首尾方向延伸至数个脊髓节段(Grossman et al.，Exp Neurol.168(2)(2001)：283-9；Widenfalk et al.，JNeurosci.21(10)(2001)：3457-75)。
实施例1：水飞蓟不会影响脊髓神经细胞-胶质细胞培养物中的细胞类型
在种下细胞后第二天，使混合神经细胞/胶质细胞培养物与水飞蓟(40μM)共置培育3天。接着处理细胞以进行神经细胞、星形胶质细胞、或小胶质细胞标记的免疫组织化学分析。
将原代神经细胞-胶质细胞培养物涂盘至经聚离胺酸涂覆的培养盘上，并以4％多聚甲醛溶液固定20分钟。以0.2％Triton X-100透化细胞。接着以初级抗体染色细胞，包括抗-βIII微管蛋白(Covance MMS-435P)、抗-GFAP(Chemicon AB 5804)、及抗-ED1(Serotec MCA 341)抗体，再以其个别的荧光标记性次级抗体(Jackson ImmunoResearch Inc.)染色。βIII微管蛋白是一种神经元专一性标记，GFAP是星形胶质细胞标记、而ED1是小胶质细胞标记。以配备荧光镜片的荧光显微镜取得脊髓神经元或非神经元细胞的影像。以CCD相机拍摄神经元或免疫反应性细胞的影像。
根据该等结果(数据未显示)，水飞蓟并不会影响脊髓培养物中的神经元存活以及非神经元细胞的数目。
实施例2：水飞蓟可保护脊髓神经细胞-胶质细胞培养物对抗LPS及红藻胺酸诱发的毒性
在种下细胞后第二天，在有或无内毒素脂多醣(LPS，1.2μg/ml)或兴奋性神经毒素红藻胺酸(KA，150μM)的存在下，以水飞蓟(40μM)处理混合神经细胞-胶质细胞培养物2天。收集培养基以进行释出的硝酸盐/亚硝酸盐的分析，并收集细胞以进行免疫组织化学及西方点渍分析。
在多聚甲醛(paraformaldehyde)固定及Triton X-100透化后，使细胞与初级抗体抗-IL-1β(Chemicon)隔夜共置培育(4℃)，并接着在室温下与驴抗山羊488(Alexa)或驴抗小鼠cy3(Jackson Lab)共置培育90分钟。根据该等结果(数据未显示)，LPS或KA的处理在该等脊髓培养物中诱发IL-1β表现。
亦处理细胞，以进行可诱发性一氧化氮合成酶(iNOS)及环氧合酶-2(COX-2)表现的西方点渍分析。简言之，将等量的细胞裂解物蛋白加样至SDS-PAGE凝胶上并进行分离。根据标准流程进行电泳。在电泳后，将凝胶转移至PVDF膜上(Millipore，USA)，并在4℃下与对抗iNOS(BDtransduction，USA)或COX-2(Cayman)的抗体隔夜共置培育。将点渍膜与驴抗兔IgG HRP(辣根过氧化物酶)-缀合性次级抗体(Santa Cruz)或山羊抗小鼠IgG HRP-缀合性次级抗体(Santa Cruz)共置培育1小时，再使用超讯息化学冷光基质(Pierce，USA)进行HRP侦测。
NO的产生是以Griess反应试剂进行比色反应侦测培养基中的亚硝酸盐积累而予以分析。简言之，在LPS处理2天后，收集培养物上清液(150μl)，并与50μl的含有1％磺胺/0.1％萘基乙二胺二盐酸盐/2％磷酸的Griess反应试剂混合，再在室温下共置培育10分钟。在540nm测量吸收值。使用亚硝酸钠(NaNO2)作为标准物以计算二氧化氮(NO2)。
如图1(A)至(C)所示，LPS诱发COX-2及iNOS表现、iNOS-阳性细胞数目、以及一氧化氮(NO)释出的增加，以硝酸盐/亚硝酸盐含量表示。水飞蓟可有效降低LPS或KA的刺激。水飞蓟宾可显着降低LPS诱发的NO释出。
实施例3：水飞蓟及水飞蓟宾可抑制混合胶质细胞培养物的细胞增殖
5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)是一种在有丝分裂S期纳入遗传物质中的胸苷类似物，以其处理细胞，进行混合胶质细胞培养物增殖活性的研究。
将水飞蓟或水飞蓟宾(20-80μM)加入未汇合的胶状细胞中2天。在细胞固定前2小时，将5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU，10μM，其可由增殖细胞摄入)加入培养的细胞中。以4％多聚甲醛溶液固定(30分钟，室温)后，以2M HCl(10分钟，37℃)处理细胞以使其DNA变性。接着以PBS重复清洗细胞，直到pH值到达6.5或以上。接着以小鼠抗-BrdU(1∶100，Chemicon，Temecula，CA)及兔抗-GFAP(1∶300，Chemicon)抗体进一步进行重复处理(4℃，隔夜)，再与FITC-及罗丹明(rhodamine)-缀合性次级抗体(室温，90分钟)共置培育。在各孔随机选取7个区域，计数含有BrdU的细胞。计算出BrdU/总细胞的比例。
如图2(A)所示，水飞蓟及水飞蓟宾两者皆可有效降低胶质细胞的增殖(由BrdU(+)/GFAP(+)的比例表示)。
实施例4：水飞蓟及水飞蓟宾可减少脊髓星状胶质细胞、小胶质细胞、及神经细胞-胶质细胞培养物以及皮质神经细胞-胶质细胞培养物中的毒素诱发性自由基形成
抗氧化活性是神经保护剂的一种重要作用机制，因为自由基的伤害在各种不同物质的神经毒性效应以及诸如发炎、缺血及再灌注、动脉粥状硬化、及老化过程的致病机制中皆扮演重要角色。自由基的含量(氧化压力)可借由H2O2或第三丁基过氧化氢(t-BOOH)(参见图3(C)、图4(A-B)、及图5(A-C)中的“对照组”)的挑战在细胞中诱发。
在本实施例中，以各种不同的自由基产生物处理混合胶质细胞、小胶质细胞、或是混合神经细胞-胶质细胞培养物而诱发氧化压力，并以经改良而可使用荧光微试验盘视读器的DCF分析检验水飞蓟及水飞蓟宾的抗氧化活性。细胞内的活性氧分子(reactive oxygen species)(ROS)的形成是以非荧旋旋旋光性的2′，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCF-DA)侦测，其为用于侦测胞内氧化物生成的灵敏且广泛使用的探针。DCF-DA可自由进入细胞，并由胞内酯酶修饰成为亲水性(并因此“受困”)、即非荧旋旋旋光性的报导分子DCF。DCF的氧化会产生高度荧旋旋旋光性的DCF，其可由流式细胞计数或其它荧光侦测方法侦测。
为进行DCF分析，首先在培养物中加入无血清培养基中(DMEM+N2)的40μM DCF-DA(Molecular Probe D-399；Invitrogen，Carlsbad，CA)处理1小时。接着以含有毒素(包括H2O2(1mM用于神经元；3mM用于非神经元细胞)以及t-BOOH(0.75mM))的生长培养基置换该培养基处理2小时。在毒素处理起始后10分钟内，加入不同剂量(介于自20至160μM)的水飞蓟或水飞蓟宾。以荧光试验盘视读器，在485nm/538nm的激发/发射波长，测量所得的荧光DCF含量。
如图2(B)、图3(A)及(B)、及图4(A)至(C)所示，水飞蓟及水飞蓟宾两者皆为强力的抗氧化剂，因其在所有试验的培养物中，包括脊髓混合胶状细胞培养物(图2(B))、脊髓混合神经细胞-胶状细胞培养物(图3(A)；图4(A))、皮质混合神经细胞-胶状细胞培养物(图3(B)；图4(B))、以及脊髓小胶质细胞培养物(图4(C))，皆可显着降低H2O2-或t-BOOH-诱发性自由基形成。重要的是，介于自20μM至160μM)的水飞蓟可在脊髓或皮质混合神经细胞-胶状细胞培养物中有效减少H2O2-诱发性自由基(图3(A)及(B))。
使用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑)的还原程度，测量细胞存活或是测定活细胞的代谢活性。MTT可由存活细胞的粒线体酵素还原成为蓝色的甲暨(formazan)产物，其与代谢功能的完整性成正比(Edmondson et al.，J.Tiss.Cult.Meth.11(1998)：15-17)。为进行MTT分析，如上所述以毒素以及水飞蓟或水飞蓟宾处理该等培养物2小时。在处理后，由孔中除去培养基，并以添加葡萄糖(5mM)的PBS中的0.5mg/mL MTT置换。在37℃下共置培育2hrs后，除去此溶液，并以酸化的异丙醇溶解该等蓝色的甲暨晶体。以分光光度计在570nm测量该所得溶液的光学密度。
如图5所示，水飞蓟及水飞蓟宾可强效增进MTT的还原。MTT还原分析取决于代谢活性细胞将MTT四唑
Figure BSA00000207434200101
盐还原成为甲暨的能力。还原的吡啶核苷酸辅因子NADH与大部分的MTT还原作用有关。此种结果指出水飞蓟及水飞蓟宾的强抗氧化特性。
实施例5：水飞蓟的鞘内投与对于挫伤性SCI的效应
由于高浓度(纯)DMSO的直接注入可能会造成细胞毒性，因此使用替代性的较安全试剂聚乙二醇(PEG；MW 2000Da)溶解水飞蓟以进行鞘内注射(intrathecal injection)。PEG是一种亲水性的聚合物，已被证实为安全且对急性脊髓损伤具有神经保护作用(Shi and Borgens，J.Neurophysiol.81(1999)：2406-2414；Shi et al.，J.Neurotrauma 16(1999)：727-738；Shi and Borgens，J.Neurocytol.29(2000)：633-644)。以盐水制备PEG溶液(50％)。接着将水飞蓟以5至20mg/ml的浓度溶于PEG溶液中。在诱发挫伤性损伤的后30分钟内，将6μl含或不含水飞蓟的PEG由鞘内投与至损伤脊髓的中心。缝合皮肤，并如上所述在脊髓损伤后的第二天及每周监测后肢功能(BBB量表)。如图6所示，水飞蓟的鞘内注射(20μg/μl)可显着有助于SCI大鼠的功能恢复，而PEG(水飞蓟的载剂)则不具神经保护性。在损伤5周后，麻醉大鼠，并以4％多聚甲醛进行血管灌注。接着矢状切片脊髓(10μm厚)，并加以处理以使用抗神经丝蛋白(针对神经元)或抗-ED1(针对活化的小胶质细胞)进行免疫组织化学染色。根据该等结果(数据未示)，在经水飞蓟处理的脊髓中，其脊髓轴突(神经丝蛋白阳性)获得较佳的保存，并可见较低程度的小胶质细胞活化(ED-1)。
创伤性的脊髓损伤具有破坏性，并会起动一系列的细胞及分子事件，包括初级及次级的损伤级联。脊髓的损伤会引发发炎反应，该发炎反应一开始便会造成进一步的组织损伤。降低对于脊髓损伤的早期发炎反应，因此可能限制组织损伤的范围，并因此限制后续的失能。在损伤3天后牺牲有或无鞘内投与水飞蓟的SCI大鼠。快速取出脊髓的损伤中心，并以冰冷的萃取缓冲液(7M尿素、2M硫脲、4％CHAPS、40mM Tris缓冲液(pH7.5)及蛋白酶抑制剂(Roche 11836145001))予以均质化。使用Bradford法(Bio-Rad Protein Assay，Bio-Rad Laboratories)测量蛋白浓度。将等量的蛋白加样至8％SDS-PAGE凝胶上并进行分离。在转移后，以抗COX-2、抗ED-1、及抗肌动蛋白抗体探测所得的PVDF膜。与图6的结果相符，鞘内投与水飞蓟可在损伤3天后的损伤脊髓中，降低COX-2(一种促发炎酶)的表现，并抑制ED-1(+)小胶质细胞浸润，如图7所示。
鞘内水飞蓟的分布可能与全身性sc投与者不同。对SCI大鼠鞘内投与水飞蓟(120μg/6μl/大鼠)。在损伤1、2、7、及14天后，取出脊髓中心，并以5倍体积的50mM Tris-HCl(pH 7.4)予以均质化。以等体积的溶剂(丁醇∶甲醇，95∶5；v/v)进一步萃取组织均质物。离心后，收集所得的有机层，浓缩，再直接注射至具有UV侦测的HPLC装置中。图8显示脊髓中所达成的水飞蓟素接触时程(药物动力学)。水飞蓟素的分布仅限于损伤的脊髓中心。在注射2周后，仍保留约8μg/g组织的水飞蓟素。因此，水飞蓟素药物动力学的差异可能可说明鞘内水飞蓟素注射的有效结果。
本领域技术人员将可明了，可对上述的具体实例进行变化而不偏离其广泛的发明概念。因此，咸可明了，本发明并不限于所公开的特定具体实例，其是欲涵括由附呈的权利要求书所定义的本发明精神及范围中的修饰。

Claims (15)

1.一种水飞蓟(silymarin)或水飞蓟宾(silybin)在制备用于治疗神经损伤的药剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药剂是投与至损伤的神经区域。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述神经损伤是脊髓损伤(SCI)。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药剂是经鞘内投与。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征是所述药剂是经鞘内投与。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征是所述药剂是投与至损伤的神经区域。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征是所述SCI是挫伤性SCI。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征是所述药剂是经鞘内投与。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征是所述药剂是投与至损伤的神经区域。
10.一种水飞蓟(silymarin)或水飞蓟宾(silybin)在制备用于增进由脊髓损伤(SCI)复原的药剂中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征是所述药剂是经鞘内投与。
12.根据权利要求10所述的应用，其特征是所述药剂是投与至损伤的神经区域。
13.根据权利要求10所述的应用，其特征是所述SCI是挫伤性SCI。
14.根据权利要求12所述的应用，其特征是所述药剂是投与至脊髓的损伤区域。
15.根据权利要求13所述的应用，其特征是所述药剂是投与至脊髓的损伤区域。
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