CN101951885A - 制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及稳定的含水药物组合物，其包含具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体和药学上可接受的辅剂、稀释剂、载体或赋形剂，其中，所述组合物的pH为4-6。

Description

制剂
本发明涉及药物组合物，尤其是抗体的稳定含水药物组合物，所述抗体与氧化LDL结合，可用于治疗动脉粥样硬化。
动脉粥样硬化是一种偏向在具有生化风险因素(包括吸烟、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高血浆低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯、高纤维蛋白原血症和高血糖)的受试者中发生的多因素疾病。动脉粥样硬化是慢性病，其导致大动脉和中动脉的最内层(内膜)增厚。该疾病使血流量降低，并且可能在受影响的血管供给的器官中引起缺血和组织破坏。动脉粥样硬化损害在人体中发展数十年，引起诸如冠状动脉和脑部的缺血性和血栓栓塞性疾病以及心肌和脑梗塞的并发症。
动脉粥样硬化是包括急性心肌梗塞、中风和外周动脉疾病在内的心血管疾病的主要原因。心血管疾病是工业化国家发病和死亡的主要原因，并在新兴国家中稳步发展，其中冠状动脉粥样硬化为主要的基础病理。动脉粥样硬化的当前治疗在阻止疾病发展和并发症上并非完全有效。
脂蛋白，主要是LDL在血管的细胞外基质中的积聚引发了该疾病。这些LDL颗粒聚集并经氧化修饰。氧化的LDL是有毒的并引起血管损伤。在很多方面，动脉粥样硬化都代表了对包括炎症和纤维化在内的所述损伤的应答。
高血浆水平的胆固醇，特别是高水平的LDL通常被认为是动脉粥样硬化发展的驱动力，而高水平的高密度脂蛋白(HDL)阻碍了动脉粥样硬化的发展。HDL因此被称为好的胆固醇，而LDL被称为坏的胆固醇。简言之，LDL将胆固醇运送至组织而HDL从组织吸收胆固醇并将其运送到肝脏，并在肝脏被降解。正在开发降低LDL和提高HDL的治疗策略以用于动脉粥样硬化的治疗。
ApoB-100是LDL的蛋白组分，其是人血清中胆固醇的主要载体。LDL的氧化是其转变成导致动脉粥样化的颗粒的过程中的必要步骤，并且氧化修饰促成脂质条纹(最早的可视动脉粥样硬化损害)的最初形成。
与氧化的LDL结合的抗体的放射性标记形式也可以用于实验动物中动脉粥样硬化损害的放射免疫检测(Tsimikas et al，2000)。利用125I标记的抗-MDA赖氨酸表位抗体检测小鼠和兔子体内的斑块，发现所注射的抗体定位于主动脉中的斑块。
已经从被称为n-CoDeR
Figure BPA00001205055100021
的重组抗体片段文库中开发出了人抗体，这些抗体针对源自人ApoB-100的氧化肽(WO02/080954)。已经证明这些重组抗体以及针对其他氧化LDL表位的抗体在动物模型中显著抑制斑块形成并防止动脉粥样硬化损害的发展(Schiopu et al，2004；WO 2004/030607；US 6,716,410)。
接着，证明了在数星期的治疗后WO2004/030607中公开的与氧化ApoB-100结合的抗体，特别是IEI-E3、LDO-D4，、KTT-B8和2-D03主动导致在主动脉中原已存在的、已建立的动脉粥样硬化斑块的消退(WO 2007/025781)。这些抗体已经被建议用于晚期动脉粥样硬化的治疗，从而逆转疾病进程，降低斑块负荷，还被建议用于与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的治疗。因此，在西方世界，利用单克隆抗体疗法靶向氧化LDL是某些引起死亡的主要疾病的日益吸引人的治疗方式。
WO 2007/025781中引起原已存在的斑块消退的最有效抗体是抗体2D03。抗体2D03的VH和VL序列在WO 2004/030607的图3中给出，并且抗体2D03的CDR序列列于WO 2007/025781的表2中。正如本领域所熟知的，稳定的制剂简化药物的销售和储存，从而降低制药业和患者的花费(Lucas et al(2004)Pharmaceutical Technology，July 2004 Issue，pp：69-72)。本领域需要包含抗体2D03的适于治疗应用的稳定药物制剂。
在过去的几年里，生物技术的发展使得利用重组DNA技术生产用于药物应用的诸如抗体的各种蛋白质成为可能。由于蛋白质比传统的有机或无机药物更大且更复杂(即除了复杂的三维结构外还具有多个官能团)，此类蛋白质的稳定制剂具有特殊问题。对于蛋白质，例如抗体，为了保持生物学活性，制剂必须保持蛋白质氨基酸的至少核心序列的完好的构像完整性，并同时保护所述蛋白的官能团不被降解。蛋白质的降解途径可能涉及化学不稳定性(即涉及通过键的形成或裂解从而形成新的化学实体的蛋白质修饰的任何过程)或物理不稳定性(即蛋白质较高级结构的改变)。化学不稳定性可由脱酰氨基作用、外消旋化、水解、氧化、β消除或二硫化物交换而产生。物理不稳定性可由，例如变性、聚集、沉淀或吸附而产生。三种最常见的蛋白降解途径是蛋白质聚集、脱酰氨基作用和氧化(Cleland et al(1993)Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4)：307-377)。
已知有多种制剂增强了抗体组分的稳定性。例如，US 6,171,586描述的包含多羟基化合物和稳定抗体的表面活性剂且不包含氯化钠的制剂。
惊奇且出人意料的是，本发明人发现抗体2D03显示出与先前的n-CoDeR
Figure BPA00001205055100031
生成的抗体产品不同的溶解性特征。通常，含150mM NaCl的pH 7-7.5的10-20mM磷酸盐缓冲液形成n-CoDeR
Figure BPA00001205055100032
生成的抗体产品的稳定制剂。
与具有n-CoDeR
Figure BPA00001205055100033
骨架的其他抗体相比，本发明人发现2D03在高于6.0的pH值下聚集。由于低于4的PH值不适合用于静脉或皮下施予患者的组合物，本发明人确定了用于包含抗体2D03的组合物的窄pH窗口，其中，所述组合物具有有用的储存稳定期且适合静脉或皮下施予患者。
另外，当在低电导率(小于100mM NaCl当量)的溶液中通过2D03的超滤进行浓缩或缓冲液置换时，产生聚集。最初的研究表明，如果将pH保持在pH5.5并加入150mM NaCl，抗体2D03产物可以被浓缩至至少160mg/ml。
在最初的试验中，通过加入标准添加剂，例如聚山梨糖醇酯20、精氨酸、组氨酸、谷氨酸和甘露糖醇来提高2D03的稳定性的尝试并不十分有效。
因此，本发明的第一方面由此提供了含水药物组合物，其包含抗体2D03和药学上可接受的辅剂(adjuvant)、稀释剂、载体(carrier)或赋形剂(excipient)，其中，所述组合物的pH为4-6。
2D03是靶向氧化LDL的完整的人单克隆IgG1。编码抗体2D03的重链和轻链的多核苷酸序列在图1中给出，并被分别命名为SEQ ID No：1和SEQ ID No：2。抗体2D03的重链和轻链的氨基酸序列在图2中给出，并被分别命名为SEQ ID No：3和SEQ ID No：4。
因此，本发明的这个方面提供了含水药物组合物，其包含具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体2D03和药学上可接受的辅剂、稀释剂、载体或赋形剂的含水药物组合物，其中，所述组合物的pH为4-6。
可以利用本领域已知的用于产生抗体的任何技术制备所述药物组合物中的抗体。以下对产生重组抗体的示例性方法进行更详细的描述。
术语“药物组合物”是本领域熟知的，指能够使活性成分(即抗体2D03)的生物活性有效，且不含对要施予所述组合物的患者有毒的其他成分的形式的制剂。药学上可接受的辅剂、稀释剂、载体和赋形剂是能够合理地施予患者以提供有效剂量的所用活性成分的那些辅剂、稀释剂、载体和赋形剂，它们是本领域所熟知的。
可以对包含抗体的药物组合物的稳定性进行评价的方法有多种，其中一些在实施例2和3中进行了详述。例如，可以通过估计其纯度，例如通过体积排阻色谱，通过阳离子置换色谱和/或通过SDS-PAGE测定包含抗体的药物组合物的稳定性。另外或可选择地，可以通过其外观(通过眼睛或者通过410nm的光散射进行评价)测定包含抗体的药物组合物的稳定性。另外或可选择地，可以通过参考抗体2D03的活性，通常通过参考抗体2D03的抗原结合活性(例如与MDA-ApoB100结合的能力)测定所述药物组合物的稳定性。因此，“稳定的”药物组合物在本文中表示与没有经过所定义的储存(在指定的时间和指定的条件下)的抗体相比，在所定义的储存后，抗体保持至少50％的其与MDA-ApoB100结合的能力。更优选地，所述抗体保持至少60％，或至少70％、80％、90％或95％的其与MDA-ApoB100结合的能力。更优选地，在所定义的以下给出的指定时间和条件的储存后，所述抗体保持至少99％或100％的其与MDA-ApoB100结合的能力。
“稳定的药物抗体制剂”在本文中包含以下含义：在所定义的以下给出的指定时间和条件下的储存后，所述抗体制剂的纯度为完整单体抗体的至少90％，更优选为完整单体抗体的至少95％或更高，特别是完整单体抗体的96％或97％或98％或99％。优选地，利用如所附实施例所述的体积排阻色谱测定和/或测量储存后所述抗体制剂的纯度。
如本文所描述的，本发明该方面的药物组合物为稳定的药物组合物。通常，所述组合物在约2-8℃的储存温度下稳定至少4周。有利地，所述药物组合物在约2-8℃下稳定至少8周。更优选地，所述药物组合物在约2-8℃下稳定至少14周或更久。更优选地，所述药物组合物在约2-8℃下稳定至少12个月，便利地至少1.5年，且有利地至少3年。更有利地，所述药物组合物稳定至少4或5年。通常，在所述药物组合物冻融后，所述组合物是稳定的。
合适地，所述药物组合物在约24℃(例如，25℃)稳定至少4周，更优选至少8周或更久。如所附实施例所证明的，本发明的药物组合物可以在25℃稳定6个月。
在本发明的实施方案中，所述药物组合物的最小pH为4.1，或4.2，或4.3，或4.4，或4.5，或4.6，或4.7，或4.8，或pH 4.9，最大pH为6.0。
在另一个实施方案中，所述药物组合物的最大pH为5.9，或5.8，或5.7，或5.6，或5.5，或5.4，或5.3，或5.2，或5.1，最小pH为4。
在另一个实施方案中，所述药物组合物的最大pH为5.9，或5.8，或5.7，或5.6，或5.5，或5.4，或5.3，或5.2，或5.1，最小pH为4.5。
在一个实施方案中，所述药物组合物的pH为4.9-5.1，且更具体地，pH 为5.0。
在另一个实施方案中，所述药物组合物的pH为5-6，例如pH 5.0-5.9，pH 5-5.8，pH 5-5.7，或pH 5.0-5.6。在更具体的实施方案中，所述药物组合物的pH为5.4-5.6，且更具体地，pH为约5.5。
应理解，为了保持期望的pH，所述药物组合物包含缓冲液。本文所使用的“缓冲液”是指通过其酸-碱结合组分的作用阻止pH变化的缓冲溶液。本发明的缓冲液的pH范围为约4-约6，优选约4.5-约5.8，更优选约4.8-约5.6，最优选pH为5.0-5.6。将pH控制在该范围内的缓冲剂的实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡糖酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂。优选地，所述缓冲液不是磷酸盐缓冲液，尤其当需要冻-融稳定的制剂时。
根据，例如缓冲液和所述制剂的期望等张性(isotonicity)，所述缓冲液的浓度可以为约1mM-约50mM，合适地为约5mM-约40mM，且优选为约10mM-约30mM。
在优选的实施方案中，所述药物组合物包含乙酸盐缓冲剂。通常，所述乙酸盐以5-30mM存在，更优选为10-30mM。在更具体的实施方案中，所述乙酸盐以约20mM存在。
在一个实施方案中，所述药物组合物进一步包含氯化钠。氯化钠可以以约50mM-约200mM存在，合适地为约100mM-约200mM，优选为约150mM。
另外或者代替氯化钠，所述药物组合物可以进一步包含其他盐和/或氨基酸。
通常，所述抗体以10-200mg/ml，例如25-150mg/ml的浓度存在于所述药物组合物中。在具体的实施方案中，所述抗体以25±10mg/ml，120±20mg/ml，或约150±10mg/ml的浓度存在于所述药物组合物中。例如，所述抗体可以以10mg/ml或20mg/ml或30mg/ml或40mg/ml或50mg/ml或60mg/ml或70mg/ml或80mg/ml或90mg/ml或100mg/ml或110mg/ml或120mg/ml或130mg/ml或140mg/ml或150mg/ml或160mg/ml的浓度存在于所述药物组合物中。优选地，所述抗体以低于160mg/ml，例如低于100mg/ml或低于50mg/ml或低于25mg/ml的浓度存在于所述药物组合物中。
本发明的优选实施方案提供了稳定的含水药物组合物，其包含(每ml)：
15-160mg的以上所定义的抗体2D03；
8.77mg氯化钠；
2.35mg三水合乙酸钠；
0.16μl乙酸；
氢氧化钠适量(即最终pH)pH 5.5；和
水适量(即最终体积)1ml。
所述抗体可以以25±10mg/ml，120±20mg/ml，或约150±10mg/ml的浓度存在。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了稳定的含水药物组合物，其包含：
25mg/ml权利要求1中定义的抗体；
20mM乙酸钠；
150mM氯化钠；
氢氧化物适量(即最终pH)pH 5.5
纯度≥95％。
理解，所述药物组合物还可以包含防腐剂。“防腐剂”为能够包含在制剂中从而基本降低其中的细菌作用，例如由此有助于多用途制剂的产生的化合物。可能的防腐剂的实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六甲双铵、苯扎氯铵(烷基苯甲基二甲基氯化铵的混合物，其中烷基基团为长链化合物)和苯佐氯铵。其他类型的防腐剂包括芳香醇，例如苯酚、丁基和苄醇，对羟基苯甲酸烷酯类，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯，儿茶酚，间苯二酚，环己醇，3-戊醇和间甲酚。优选的防腐剂为苄醇。然而，可以理解，由于在实施例3中已经显示所述制剂无菌且不含细菌和真菌污染，因此可以不需要防腐剂。
理解，在某些实施方案中，所述药物组合物还可以包含多元醇。“多元醇”为具有多个羟基基团的物质，且包括糖类(还原或非还原糖类)、糖醇和糖酸。典型的多元醇的分子量低于约600kD(例如在约120kD-约400kD的范围内)。“还原糖”为含有能够还原金属离子或与蛋白质中的赖氨酸和其他氨基基团发生共价反应的半缩醛基团的物质，“非还原糖”为不具有还原糖的这些性质的物质。还原糖的实例为果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、山梨糖醇和甘油为糖醇的实例。在某些情况下，多元醇可以优选非还原糖，例如蔗糖和海藻糖。
还理解，在某些实施方案中，所述药物组合物还可以包含表面活性剂，其中一些表面活性剂是本领域熟知的。示例性表面活性剂包括泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。可添加的表面活性剂的量是降低抗体聚集和/或使制剂中微粒的形成最小化的量。例如，表面活性剂以约0.001％-约0.2％，优选约0.01％-约0.1％的量存在于所述制剂中。
在一个实施方案中，所述组合物不包含多元醇和/或表面活性剂。
在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物不包含选自聚山梨糖醇酯20、精氨酸、组氨酸、谷氨酸和甘露糖醇的添加剂。
在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其中所提供的所述抗体的纯度为95％或更高(例如，96％或97％或98％或99％或更高，例如100％)。
用于体内施予患者的所述药物组合物优选为无菌的。这很容易实现，例如通过滤过0.22μm的无菌滤器。
可以配制所述药物组合物用于皮下或静脉给药。在某些实施方案中，尤其当配制用于静脉给药时，优选所述药物组合物为等张的。“等张的”表示目的制剂具有基本与人血液相等的渗透压。等张制剂的渗透压通常为约250-350mOsm。可以利用，例如蒸汽压或冰冻型渗压计计算等张性。
在一个实施方案中，包含所述抗体的所述药物组合物不进行在先冷冻干燥。
制备抗体，例如具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体的方法是本领域熟知的。
简言之，为了重组产生抗体2D03，将编码其的多核苷酸(图1)插入到可复制的载体中进行表达。许多适合的表达载体可获得。载体元件通常包括信号序列、复制起点、一个或多个标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。
用于表达糖基化抗体的合适的宿主细胞源自多细胞生物体。虽然植物和昆虫细胞可以为合适的宿主细胞，但优选所述宿主细胞为脊椎动物细胞，而脊椎动物细胞在组织培养液中的增殖已经成为常规方法。有用的哺乳动物宿主细胞系的实例为COS-7、CV1、VERO-76、HEK293、BHK、CHO、TM4、HELA、MDCK、BRL 3A、W138、Hep G2、MMT、TRI、MRC5、NSO和FS4。
用产生抗体的表达载体转染宿主细胞，并将其培养在经过修饰从而适合诱导启动子、筛选转染子或扩增编码抗体序列的基因的常规营养培养基中。可以将用于产生抗体的宿主细胞在多种熟知且商业化的培养基中培养，如果需要，可以向所述培养基中补充激素和/或其他生长因子、盐、缓冲液、核苷酸、抗生素、微量元素和能源(例如葡萄糖)。还可以以本领域技术人员已知的适当浓度加入其他必需的补充物。培养条件，例如温度和pH等也都是本领域熟知的。
在使用重组技术时，可以在细胞周质间隙中以细胞内的方式产生抗体，或者直接分泌到培养基中。如果所述抗体在细胞内产生，作为第一步，通过例如离心或超滤除去微粒碎片(宿主细胞或者裂解细胞)。当所述抗体分泌到培养基中时，通常利用商业化的蛋白浓缩滤器，例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元对来自此类表达系统的上清液进行浓缩。可以在前述的任一步骤中加入蛋白酶抑制剂(例如PMSF)，从而抑制蛋白裂解，可以加入抗生素从而抑制外来污染物的生长。
可以利用，例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、渗析和亲和层析对由细胞制备的抗体组分进行纯化，其中亲和层析是优选的纯化技术。蛋白A作为亲和配体的适合性取决于所述抗体中存在的免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。可以利用蛋白A纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(Lindmark et al，(1983)J.Immunol.Meth.62：1-13)。亲和配体结合的基质最常为琼脂糖，但其他基质也可获得。在机械上稳定的基质(例如控孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯)允许的流速比利用琼脂糖的流速快，处理时间比利用琼脂糖的时间短。其他可用于蛋白纯化的技术包括在离子交换柱上进行分离、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅上的色谱、heparin SepharosetTM上的色谱、在阴离子或阳离子交换树脂(例如聚天冬氨酸柱)上的色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
优选地，所配制的抗体2D03是基本纯的，且期望地，基本为均一的(即不含污染蛋白)。“基本纯的”抗体制剂表示，基于组合物中的蛋白质总重量计，包含至少90重量％抗体的组合物，并且优选至少95重量％抗体的组合物。“基本均一的”抗体制剂表示，基于组合物中的蛋白质总重量计，包含至少99重量％抗体的组合物。
本发明第二方面提供了制品(article of manufacture)，其包括含本发明第一方面所定义的稳定的含水药物制剂的无菌容器。所述制品可以为单次使用的一次性注射器、瓶或小瓶等。所述容器可以由多种材料例如玻璃或塑料形成。示例性容器为3-20ml单次使用的玻璃小瓶。或者，所述容器可以为3-100ml的玻璃小瓶。所述容器容纳所述组合物，并且任选地上有标签，或者与之相连，所述容器可以显示使用说明。所述制品可以进一步包含从商业和用户角度需要的其他物质，包括其他缓冲液、稀释剂、滤器、针、注射器和具有使用说明书的包装说明书。
如在WO 2004/030607和WO 2007/025781中所描述的，抗体2D03具有防止动脉粥样硬化斑块并引起动脉粥样硬化斑块消退(regression)的双重能力。因此，本发明第三方面提供了治疗和/或预防和/或减少和/或对抗(combat)患者的动脉粥样硬化，或者与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施予治疗有效量的以上本发明第一方面定义的药物组合物。
在本发明中，抗体的“治疗有效量”指有效预防或治疗动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的量。
本发明包括2D03，即具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体在制备用于治疗和/或预防和/或减少和/或对抗患者的动脉粥样硬化，或者与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的本发明第一方面所定义的药物组合物中的应用。
本发明还包括用于治疗和/或预防和/或减少和/或对抗患者的动脉粥样硬化，或者与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的本发明第一方面所定义的药物组合物。
在一个实施方案中，所述药物组合物中的抗体减少了患者体内动脉粥样硬化斑块的形成，即减慢了动脉粥样硬化的发展，并优选减少或阻止了新动脉粥样硬化斑块的形成。
在另一个实施方案中，所述药物组合物中的抗体引起患者体内原已存在的(pre-existing)动脉粥样硬化斑块消退。
“动脉粥样硬化斑块的消退”包括降低动脉粥样硬化斑块的大小和/或量和/或程度的含义。通常，动脉粥样硬化斑块的消退导致斑块覆盖的动脉内表面面积降低。因此，“动脉粥样硬化斑块的消退”包括降低个体的整体斑块负荷，以及降低个体中的一些或所有动脉粥样硬化斑块的大小。动脉粥样硬化斑块的消退还引起血管腔的增加(即动脉管的有效横截面的增加)，从而导致血流的提高。
本领域技术人员熟知个体中动脉粥样硬化斑块大小和/或量和/或程度的测量方法，包括血管造影术、血管超声、计算机断层扫描和磁共振成像。
“减少大小和/或量和/或程度”包括约1-25％的减少，如约1％或2％或3％或4％或5％的减少，或更大的约6％或7％或8％或9％或10％的减少，或10-25％的减少。更优选更大的25-50％或50％-75％或更大的减少。
减少动脉粥样硬化斑块覆盖的动脉内表面面积包括约1-25％的减少，如约1％或2％或3％或4％或5％的减少，或更大的约6％或7％或8％或9％或10％的减少，或10-25％的减少。更优选更大的25-50％或50％-75％或更大的减少。
动脉管的有效截面积的增加包括约1-25％的增加，如约1％或2％或3％或4％或5％的增加，或更大的约6％或7％或8％或9％或10％的增加，或10-25％的增加的含义。更优选更大的25-50％或50％-75％或75％-100％的增加。最优选地，动脉管的有效截面积增加2或3或4或5或10倍或更多。明显，动脉管截面积的增加程度与由治疗前动脉粥样硬化损害引起的动脉阻塞水平有关。
待消退的动脉粥样硬化斑块通常在个体的大动脉中，但也可能存在于患者的其他动脉位点，例如股动脉、颈动脉和冠状动脉。
通常，待治疗的患者为哺乳动物，包括人、家养动物和农场动物，以及动物园动物、运动动物或宠物，例如狗、猫、马、牛、绵羊、猪、骆驼等。优选所述患者为人。
通常，所述患者为患有动脉粥样硬化的人患者。理解，由于所述药物组合物中存在的抗体引起原已存在的动脉粥样硬化斑块的大小减小(WO 2007/025781)，所述药物组合物尤其用于治疗患有晚期或严重动脉粥样硬化，以及与动脉粥样硬化相关的晚期或者严重形式的心血管疾病的患者。
所述患者可以为患有与动脉粥样硬化相关的心血管疾病或存在患有与动脉粥样硬化相关的心血管疾病风险的人患者。术语“与动脉粥样硬化相关的心血管疾病”包括指在医学上与动脉粥样硬化有关联，是动脉粥样硬化损害的结果的疾病。可以提及的与动脉粥样硬化相关的心血管疾病包括冠状动脉疾病、心肌梗塞和中风。
还理解，由于所述药物组合物中的抗体减少动脉粥样硬化斑块的形成并引起原已存在的动脉粥样硬化斑块的消退，因此所述药物组合物可用于降低由于存在动脉粥样硬化斑块而具有发展成为心血管疾病的风险的患者中的与动脉粥样硬化相关的心脑血管疾病的风险。具有与动脉粥样硬化相关的心脑血管疾病的风险的患者可以为具有可能引起心血管疾病或机能障碍或使血管疾病或机能障碍恶化的血液胆固醇水平的患者。
所述患者可以为由于多个风险因素(包括肥胖、吸烟、高血压、糖尿病和早发冠心病家族史)而具有发展成为冠心病的风险的患者；患有以非常高的血浆胆固醇和/或甘油三酯浓度为特征的家族病的患者；患有非继发于基础疾病(例如甲状腺机能减退、肾病综合症、肝病或酒精中毒)的高脂血症的患者；具有提高的LDL-胆固醇的患者；或进行饮食降血脂干预(补充治疗)的患者。
在本发明该方面的实施方案中，本发明可以包括测定个体中动脉粥样硬化斑块的大小和/或量和/或程度的在前步骤。可以进行该步骤从而评价个体是否需要减少其动脉粥样硬化斑块负荷的治疗，或者提供评价此治疗效果的基线测量，或者出于所述两种目的。理解，需要减少的动脉粥样硬化斑块负荷可能是由于整体斑块负荷的大小和/或程度。另外或者可选择地，这可能是由于斑块的性质，例如该斑块不稳定程度。
任选地，且通常，本发明还可以包括在施用所述药物组合物后测定患者动脉粥样硬化斑块的大小和/或量和/或程度的随后步骤，从而通过与治疗前测量的基线相比评价所述治疗的效果。
内科医生可以确定特定患者是否是预期可以从治疗获益的患者。
已经证明他汀类(3-羟基-3甲基戊二酰-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂)可以通过降低血浆胆固醇含量(并通过尚未阐述清楚的其他机制)有效预防急性心血管事件。与上述免疫治疗联合施予他汀可能是促进动脉粥样硬化斑块消退的有用治疗方式。
因此，本发明第四方面提供了包括以下组分的多组分试剂盒(kit of parts)：以上本发明第一方面定义的药物组合物，或者冻干的组合物，和他汀。合适且优选的他汀类选自阿托伐他汀、西伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。通常将他汀配制成用于口服给药。
所述各个组分以适合与其他组分联合给药的方式提供。“联合”包括所述组分可以适合同时或者组合施予患者的含义。然而，由于通常通过不同的途径施予所述组分，“联合”还包括在同一治疗方案中连续给药或单独给药的含义。
所述试剂盒进一步包含从商业和用户角度需要的其他物质，包括其他缓冲液、稀释剂、滤器、针、注射器和具有使用说明书的包装说明书。优选地，所选择的所述试剂盒中的所述两种组分具有协同作用。
本发明的第五方面包括治疗和/或预防和/或减少和/或对抗与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的方法，所述方法包括向个体施予以上本发明第一方面定义的药物组合物和他汀。
本发明包括用于组合治疗和/或预防和/或减少和/或对抗与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的本发明第一方面所定义的药物组合物和他汀。
优选地，所选择的两种给药方案具有协同作用。
合适且优选的他汀类包括阿托伐他汀、西伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。
本文引用的所有文献都通过引用整体并入本文。特别地，与抗体2D03有关的完整公开WO2004/030607和WO2007/025781都通过引用整体并入本文。
没有必要将本说明书中关于之前公开的文献的列表或讨论认作该文献是现有技术的一部分或者为公知常识。
以下参考实施例和附图对本发明进行更详细的描述。
图1：编码2D03重链(SEQ ID No：1)和轻链(SEQ ID No：2)的多核苷酸序列。
图2：由图1所述的多核苷酸编码的2D03重链(SEQ ID No：3)和轻链(SEQ ID No：4)的氨基酸序列。CDR用下划线标出。
实施例1：pH对稳定性的影响
在纯化方法的开发过程中，本发明人发现抗体2D03显示出与由之前n-CoDeR
Figure BPA00001205055100131
产生的产品不同的溶解性特征。通常，含150mM NaCl的10-20mM磷酸盐缓冲液(pH 7-7.5)形成n-CoDeR产生的抗体产品的稳定制剂。然而，抗体2D03在该制剂中并不稳定。因此，本发明人评价了pH和盐浓度对抗体2D03稳定性的影响。
结论：
●2D03抗体产品在pH高于6.0时聚集，但在低于该pH值时不聚集。
●当在低电导率(小于100mM NaCl当量，毫西门子)的溶液中通过超滤进行浓缩或缓冲液置换时，产生聚集，但在高于此的浓度时不产生聚集。
最初的研究表明，如果将pH保持在pH 5.5并加入150mM NaCl，抗体2D03产品能够被浓缩至至少160mg/ml。
实施例2：稳定性试验
摘要
该研究的目的是鉴定浓度高于100mg/ml的抗体2D03的稳定制剂。对抗体浓度在100-150mg/ml之间且pH为5.5的六种不同的制剂在5℃和24℃(加速研究)温育后的稳定性进行了研究。
背景
在实施例1中，本发明人发现抗体2D03显示出与之前n-CoDeR
Figure BPA00001205055100133
产生的抗体产品相比不同的溶解性特征。总之，该产品在pH高于6.0时产生聚集，并且如果在低电导率的溶液中通过超滤进行浓缩或缓冲液置换时产生聚集。基于这些发现，以下制剂稳定性研究限于pH 5.5的制剂，且在所有制剂中都加入150mM NaCl。
基于本发明人之前利用高浓度n-CoDeR产品制剂的经验，在多数测试制剂中都加入了聚山梨糖醇酯20，因为已经证明这样可以增强n-CoDeR
Figure BPA00001205055100135
抗体制剂的稳定性；根据在Golovanov et al(2004)J.Am.Chem.Soc.，126：8933-8939中报道的发现，在一种制剂中加入精氨酸和谷氨酸作为赋形剂；在一种测试制剂中加入甘露糖醇，因为已经证明其增强抗体制剂的稳定性；并且，对组氨酸进行了测试，因为其为具有适当缓冲范围的广泛适合的生物缓冲剂。
分析方法
使用以下方法对不同制剂中的抗体2D03的稳定性进行评价。在5℃和24℃储存0、4、8、14和18周后，对制剂I-VI均进行各种分析(浓度、外观、纯度、抗原结合活性、重量克分子渗透压浓度和定性评价)。
利用体积排阻色谱的纯度
利用TOSOH Bioscience的TSKgel 3000SWXL柱通过HPLC定性测定所述抗体的纯度。其是根据分子量对分子进行分离的体积排阻柱，并在10-500kDa之间产生最有效的分离。使用包含0.4M氯化钠的5mM磷酸钾流动相(pH7.2)，流速为1ml/分钟。在280nm进行UV检测，并将单体峰面积计算为占总峰面积的百分比。根据手动设置的参数进行自动积分。
利用A 280 的蛋白质浓度
根据蛋白质在280nm处的芳环吸收区的紫外吸收测定蛋白质含量。根据Lambert-Beers法则，280nm的吸收值与蛋白浓度成正比例。利用Ultrospec110 pro分光光度计测定该吸收值。利用含0.15M NaCl的10mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)对样品进行稀释以产生0.05-1.0AU。计算蛋白质浓度：
A＝εbc
A为吸收值，ε为消光系数(在此处为1.62)，c为用mg/ml表示的浓度，b为用厘米表示的比色皿路径长。
阳离子交换色谱
利用根据蛋白质整体电荷的不同对分子进行分离的阳离子交换色谱对抗体进行定性评价。使用A ProPac
Figure BPA00001205055100141
弱阳离子交换柱。该柱经过特别设计从而为pI＝3-10且MW＞10 000的蛋白质和糖蛋白提供高分辨力和高效分离。使用10mM乙酸钠(pH 5.0，流动相A)和含1M NaCl的10mM乙酸钠(pH 5.0，流动相B)，流速为1ml/分钟。使用线性梯度的0-75％流动相B 10分钟。通过在280nm的吸收值进行检测。
410nm的光散射
为了评估沉淀，利用Ultrospec 110pro分光光度计测量410nm的光散射。利用去离子水进行校正。
SDS-PAGE
根据厂商的说明书使用SDS-PAGE Phast系统TM。通过考马斯染色测定蛋白(Phastgel梯度8-25)。样品的上样浓度为约0.5mg/ml，每孔上样3-4μl。将Fermentas PageRuler Prestained Protein Ladder上样至每块凝胶的第一个孔。
抗原结合
利用MDA-ApoB100对微滴定板包被过夜。洗涤后，在室温下利用0.45％鱼胶封闭所述平板1小时。向包被并封闭的所述微滴定板中加入标准的2D03滴定液和测试样品，并在室温下温育2小时。洗涤后，加入P214兔抗人Ig-HRP结合物，并将平板在室温下再次温育1小时。利用OPD-底物(邻苯二胺盐酸盐，)使结合可视化，并利用1M HCl终止。在Versamax读数器上读取两个波长490nm(λ测试)和650nm(λ对照)的吸收值。通过SOFTmax Pro 4.0软件采集数据，并利用该数据计算具体抗体的浓度。抗原结合计算为通过ELISA法获得的具体浓度除以由总蛋白分析获得的值(通过A280测量的值)。
重量克分子渗透压浓度
利用Micro-Osmometer Typ 13/13DR确定定量重量克分子渗透压浓度。校正点为0和300mOsm/kg H2O。如果需要，利用Milli-Q H2O稀释样品，从而拟合校正间隔。
纯度
在稳定性测试时间结束时测定的制剂的纯度小于95％。
结果
制剂I
抗体2D03  136mg/ml
乙酸钠    20mM
NaCl      150mM
pH        5.5
结果
在5℃的稳定性：在14周保持稳定，到18周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在8周保持稳定，到14周丧失稳定性
制剂II
抗体2D03        136mg/ml
乙酸钠          20mM
NaCl            150mM
聚山梨糖醇酯20  0.1％(1.1mg/ml)
pH              5.5
结果
在5℃的稳定性：在4周保持稳定，到8周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
制剂III：
抗体2D03        136mg/ml
乙酸钠          20mM
NaCl            150mM
聚山梨糖醇酯20  0.1％(1.1mg/ml)
甘露糖醇        50mM
pH              5.5
结果
在5℃的稳定性：在8周保持稳定，到14周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在8周保持稳定，到14周丧失稳定性
制剂IV：
抗体2D03        136mg/ml
乙酸钠          20mM
NaCl            150mM
His-HCl         50mM
聚山梨糖醇酯20  0.1％(1.1mg/ml)
pH              5.5
结果
在5℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
制剂V：
抗体2D03             136mg/ml
乙酸钠               20mM
NaCl                 150mM
精氨酸               50mM
谷氨酸(glutamate)    50mM
聚山梨糖醇酯20       0.1％(1.1mg/ml)
pH                   5.5
结果
在5℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
制剂VI：
抗体2D03             151mg/ml
乙酸钠               20mM
NaCl                 150mM
His-HCl              50mM
聚山梨糖醇酯20       0.1％(1.1mg/ml)
pH                   5.5
结果
在5℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
在24℃的稳定性：在0周保持稳定，到4周丧失稳定性
结论
制剂I在5℃稳定至少14周，在加速研究中于24℃稳定至少8周，并且是所鉴定的最稳定的制剂。由于通过眼睛以及通过410nm光散射确定的沉淀的存在，认为该制剂于5℃时到18周不稳定，于24℃时到14周不稳定。
对于制剂I至VI，通过上述任一方法检测的任何制剂随时间其纯度、浓度、特征或活性没有显著差异。通过眼睛和410nm的光散射区分的沉淀确定所有制剂的不稳定性。
实施例3：浓缩的2D03溶液的制剂
摘要
在室温下，利用Pellicon滤器(进料压力：1.4-2.1bar，渗余物压力：0-0.7bar)通过过滤将含抗体2D03的本体溶液(37.3g，体积为1534.6ml，基于通过A280测定的蛋白浓度为24.3mg/ml)浓缩至终浓度为120±20mg/ml(实际浓度为133mg/ml)。浓缩后，将产物滤过0.22μm的无菌滤器，并在无菌的PETG瓶中于+2℃至+8℃储存。
利用以下描述的公认的QC方法评价所浓缩的抗体溶液的外观、蛋白浓度、pH、内毒素、纯度、等电子聚焦、生物负荷和抗原结合。
外观
通过视觉观察所述样品溶液的颗粒、澄清度和颜色。为了检查颗粒，将所述样品置于黑色和白色背景前进行检查。为了测定澄清度，根据欧洲药典2.2.1，将1ml所述样品移至玻璃试管中，与对照溶液比较，在黑色背景下检查乳光(opalescence)。如果所述样品的澄清度与水相同或者所述样品的乳光并不比对照悬浮液I显著，则认为所述样品是澄清的。如果所述样品不符合这些标准，将乳光水平记录为小于第一对照悬浮液(第一对照悬浮液比所述样品更乳白)，例如＜II或＜III。检查所述样品的颜色并在白色背景下与水进行比较。如果所述样品如同水一样为无色的，则将其记录为无色。否则，描述颜色浓淡。
验收标准：几乎不含颗粒。记录了乳光和颜色。
利用A 280 的蛋白浓度
按照实施例2的描述测定蛋白质浓度，只是使用Shimandzu UV-1601分光光度计。
验收标准：蛋白质浓度120±20mg/ml。
pH测量
利用Radiometer Analytical标准缓冲溶液在测量范围内对pH计(组合的pH电极，Radiometer-Copenhagen pHM-210)进行校正。然后测量样品的pH。
验收标准：pH 5.5±0.5。
内毒素，通过动态LAL
利用BioWhittaker的Kinetic-QCLTM试剂盒进行检测革兰氏阴性菌内毒素的定量动态测定。该测定基于酶促反应，其中，内毒素激活鲎变形细胞溶裂解物(LAL)中的酶原，该酶原进一步催化对硝基苯胺(pNA)的裂解，产生黄色。
利用不含内毒素的玻璃试管将样品和内毒素的标准滴定液稀释在鲎变形细胞溶解物(LAL)试剂水中。将100μl稀释物转移到不含热原质的96孔板中。向各样品稀释液中掺入(spike)已知量的内毒素。将平板在Versamax酶标仪(Versamax microplate reader)中于37℃预温育10分钟。将LAL/底物溶解在LAL试剂水中。温育后，向每孔加入100μl LAL/底物溶液。立即开始读数，每2.5分钟监测40个读数。反应在37℃下进行。在405nm读取吸收值。显现黄色所需的时间与所存在的内毒素的量成反比。通过SOFTmax Pro 4.0软件收集数据，并用此进行计算。利用所定义的国际单位IU/ml表示内毒素的量。接受产生50-150％掺入内毒素回收率的最低样品稀释。
验收标准：内毒素≤4.0IU/ml。
纯度(HPLC-SEC)
利用Beckman System Gold系统，使用TSK3000柱(TosoHaas)通过HPLC对抗体纯度进行定量。这是体积排阻柱，其根据分子的分子量对分子进行分离，并在10-500kDa之间产生最有效的分离。使用包含0.4M氯化钠的5mM磷酸钾(pH 7.2)流动相，流速为以1ml/分钟。注射体积为20μl。在280nm进行UV检测。利用手动设置的参数和软件32Karat Version 5.0自动计算积分的表面积。
验收标准：≥90面积％。记录主峰和≥0.5面积％的峰的保留时间和面积％。
纯度(SDS-PAGE)
通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳评价样品的纯度。将含蛋白质的样品在有和没有巯基乙醇的Tris-甘氨酸-SDS-溴酚蓝缓冲液中于95℃加热5分钟。将样品和分子量宽范围(BioRad)标准品上样至来自Novex的4-20％的预制胶上。利用Novex X-cell II Mini cell设备将凝胶在Tris-甘氨酸-SDS缓冲液中于125V电泳120分钟。利用GELCODE Blue染料通过染色使蛋白可视。利用BioRad GS-710光密度扫描仪对经染色的凝胶进行扫描，并计算相对纯度。使用Quantity-One软件(BioRad)评价结果。
验收标准：与对照相当，并且没有与大于10％的总蛋白对应的其他条带。
等电聚焦
利用IsoGel
Figure BPA00001205055100201
琼脂糖平板(pH范围为3-10)在Multiphor II电泳单元上进行等电聚焦。正极溶液为0.5M乙酸，负极溶液为1M氢氧化钠。将IEF宽pI校正试剂盒(Calibration kit Broad pI，Amersham Biosciences)用作标准(Marker)。样品在施用至凝胶上之前，通过1％甘氨酸的渗析使其脱盐。将温度设定为10℃，样品在1500V和150mA预聚焦。预聚焦后，将作用提高至25W，并进行聚焦～60分钟。利用考马斯染色检测蛋白，利用GS-710光密度扫描仪(BioRad)扫描凝胶。利用由标准蛋白的迁移距离和其pI值产生的校准曲线，由Quantity One软件计算样品的pI值。
针对2D03抗体对该方法进行优化，本发明的发明人发现最佳蛋白上样量为距离负极5cm处上样25μg。利用这些结果，一式三份对样品进行测定。测定pI值和条带数，结果记录为pI(最小)-pI(最大)和条带数。
验收标准：与对照相当。
生物负荷
取样后24小时内，将产物于32.5℃±2.5℃下在胰蛋白胨琼脂平板上培养以检测细菌，于22.5℃±2.5℃下在沙氏葡萄糖琼脂平板上培养以检测真菌。3天后，观察胰蛋白胨琼脂平板，并计数菌落，5天后，观察沙氏葡萄糖琼脂平板。
验收标准：没有细菌或真菌生长。
抗原结合
按照实施例2的描述，测定抗原结合。
验收标准：≥对照的50％。
结果
按照以下配制2D03浓缩溶液(每ml)
133mg抗体2D03；
8.77mg氯化钠；
2.35mg三水合乙酸钠；
0.16μl乙酸；
氢氧化钠适量(即最终pH)pH 5.5；和
水适量(即最终体积)1ml。
一式两份进行测试，2D03浓缩溶液满足以上试验的所有验收标准。
实施例4：2D03制剂的长期稳定性试验
进行长期稳定性试验以证明所述抗体制剂具有用于临床环境所需的足够的保存期。
含于20mM乙酸钠、150mM氯化钠(pH 5.5)中的25mg/ml 2D03抗体的抗体制剂在+5℃储存12个月。所述制剂的纯度高于95％。
稳定性试验和结果：
  试验   方法   验收标准   结果(12个月)
  蛋白浓度   A280的吸收值   25.0±5.0mg/ml   26.2
  pH   pH计   5.5±0.5   5.6
  纯度   HPLC-SEC   ≥95.0％   96.8
这些结果证明2D03抗体在该制剂中于+5℃足以稳定12个月，可以用于临床环境。
实施例5：2D03制剂的长期稳定性试验
将如实施例4的抗体制剂在+25℃储存6个月。
Figure BPA00001205055100221
这些结果证明2D03抗体在该制剂中于+25℃足以稳定6个月，从而可以用于临床环境。
Figure IPA00001205054500011
Figure IPA00001205054500021
Figure IPA00001205054500031

Claims (53)

1.含水药物组合物，其包含治疗有效量的具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体和药学上可接受的辅剂、稀释剂、载体或赋形剂，其中，所述组合物的pH为4-6。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为4.5或更高。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为4.9或更高。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为4.9-5.1。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH约为5。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为5-6。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为5-5.9。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH为5.4-5.6。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其中，所述组合物的pH约为5.5。
10.如权利要求1-9中任一项所述的药物组合物，其中，所提供的抗体纯度为95％或更高，例如纯度为96％或97％或98％或99％或更高，或纯度为100％。
11.如权利要求1-10中任一项所述的药物组合物，其中，所述抗体以10-200mg/ml的浓度存在。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其中，所述抗体以25-150mg/ml的浓度存在。
13.如权利要求11所述的药物组合物，其中，所述抗体以25±10mg/ml的浓度存在。
14.如权利要求11所述的药物组合物，其中，所述抗体以120±20mg/ml的浓度存在。
15.如权利要求11所述的药物组合物，其中，所述抗体以约150±10mg/ml的浓度存在。
16.如权利要求1-15中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物包含乙酸盐缓冲剂。
17.如权利要求16所述的药物组合物，其中，所述乙酸盐以5-30mM的浓度存在。
18.如权利要求17所述的药物组合物，其中，所述乙酸盐以10-30mM的浓度存在。
19.如权利要求18所述的药物组合物，其中，所述乙酸盐以约20mM的浓度存在。
20.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物包含氯化钠。
21.如权利要求20所述的药物组合物，其中，所述氯化钠以100mM-200mM的浓度存在，优选以约150mM的浓度存在。
22.药物组合物，其每ml包含：
15-160mg权利要求1中定义的抗体；
8.77mg氯化钠；
2.35mg三水合乙酸钠；
0.16μl乙酸；
氢氧化钠适量pH 5.5；和
水适量1ml。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其中，所述抗体以25±10mg/ml，120±20mg/ml，或者150±10mg/ml的浓度存在。
24.药物组合物，其包含：
25mg/ml权利要求1中定义的抗体；
20mM乙酸钠；
150mM氯化钠；
氢氧化钠适量pH 5.5。
25.如权利要求1-24中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物进一步包含防腐剂。
26.如权利要求25所述的药物组合物，其中，所述防腐剂为苄醇。
27.如权利要求1-26中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物被配制成用于皮下或静脉给药。
28.如权利要求1-27中任一项所述的药物组合物，其在2-8℃的温度下稳定至少14周。
29.如权利要求1-28中任一项所述的药物组合物，其在2-8℃的温度下稳定至少12个月。
30.如权利要求1-29中任一项所述的药物组合物，其在2-8℃的温度下稳定至少1.5年或至少3年。
31.如权利要求1-30中任一项所述的药物组合物，其在约24℃的温度下稳定至少8周。
32.如权利要求1-31中任一项所述的药物组合物，所述组合物在冻融之后是稳定的。
33.如权利要求1-32中任一项所述的药物组合物，其中，所述抗体不进行在先冷冻干燥。
34.制品，其包含容纳权利要求1-33中任一项所定义的稳定的含水药物制剂的无菌容器。
35.如权利要求34所述的制品，其为一次性注射器。
36.多组分试剂盒，其包含权利要求1-35中任一项所述的稳定的药物组合物和他汀。
37.如权利要求36所述的多组分试剂盒，其中，所述他汀被配制成用于口服给药。
38.如权利要求36或37所述的多组分试剂盒，其中，所述他汀选自阿托伐他汀、西伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀。
39.对抗患者的动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施予权利要求1-33中任一项定义的药物组合物。
40.如权利要求39所述的方法，其中，所述抗体减少了所述患者的动脉粥样硬化斑块的形成。
41.如权利要求39所述的方法，其中，所述抗体引起了所述患者的原已存在的动脉粥样硬化斑块的消退。
42.具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体在制备用于对抗患者的动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的权利要求1-33中任一项所定义的药物组合物中的应用。
43.如权利要求1-34中任一项所定义的药物组合物，其用于对抗患者的动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的心血管疾病。
44.如权利要求39-43中任一项所述的方法、应用或药物组合物，其中，所述患者为患有动脉粥样硬化的人患者。
45.如权利要求39-43中任一项所述的方法、应用或药物组合物，其中，所述患者为患有与动脉粥样硬化相关的心血管疾病或具有患与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的风险的人患者。
46.如权利要求39-43和45中任一项所述的方法、应用或药物组合物，其中，所述与动脉粥样硬化相关的心血管疾病选自冠状动脉疾病、心肌梗塞和中风。
47.对抗与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的方法，所述方法包括向所述个体施予权利要求1-33中任一项定义的药物组合物和他汀。
48.组合用于对抗与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的权利要求1-30中任一项所定义的药物组合物和他汀。
49.基本如本文参考说明书、图表和/或附图所描述的药物组合物。
50.基本如本文参考说明书、图表和/或附图所描述的制品。
51.对抗患者的动脉粥样硬化或与动脉粥样硬化相关的心血管疾病的方法，其基本如本文参考说明书、图表和/或附图所描述。
52.基本如本文参考说明书、图表和/或附图所描述的药物组合物。
53.具有SEQ ID No：3的重链氨基酸序列和SEQ ID No：4的轻链氨基酸序列的抗体在制备如本文参考说明书、图表和/或附图所描述的药物组合物中的应用。
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