CN101945865A

CN101945865A - 用于治疗自身免疫性疾病的1,2,4-二唑化合物

Info

Publication number: CN101945865A
Application number: CN2008801273545A
Authority: CN
Inventors: 杰格·P·希尔; 托马斯·D·海特曼; 戴维·N·赫斯特; 克里斯托弗·N·约翰逊; 约翰·斯基德莫尔; 伊恩·D·沃尔
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2007-12-21
Filing date: 2008-12-19
Publication date: 2011-01-12
Also published as: CO6290674A2; DOP2010000193A; WO2009080730A1; CR11576A; NZ585995A; BRPI0821696A2; CA2710055A1; EP2220077A1; IL206277A0; EA017669B1; JP2011506572A; GB0725102D0; US20100273770A1; AU2008339993A1; MA31923B1; UA101348C2; KR20100108567A; EA201070783A1; ZA201003965B

Abstract

本发明涉及新的式(I)的二唑衍生物或其药学上可接受的盐。式(I)化合物以及它们的药学上可接受的盐用于治疗由S1P1受体介导的病症或疾病。特别地，式(I)化合物以及它们的药学上可接受的盐用于治疗多发性硬化、自身免疫性疾病、慢性炎性病症、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管生成有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病。

Description

用于治疗自身免疫性疾病的1，2，4-二唑化合物

本发明涉及具有药理学活性的新的

二唑衍生物，它们的制备方法，含有它们的药物组合物以及它们在治疗各种疾病中的用途。

鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是一种由鞘氨醇激酶磷酸化鞘氨醇而形成的生物活性类脂介体，并且发现其在血液中浓度较高。许多类型细胞都生产并分泌S1P，包括如血小板和肥大细胞等那些造血起源的细胞(Okamoto等，1998JBiol Chem 273(42)：27104；Sanchez和Hla 2004，J Cell Biochem 92：913)。其生物作用较广，包括对细胞增殖、分化、运动性、血管化的调节以及对炎症细胞和血小板的活化(Pyne和Pyne 2000，Biochem J.349：385)。目前记载有五种亚型的S1P响应受体，S1P1(Edg-1)、S1P2(Edg-5)、S1P3(Edg-3)、S1P4(Edg-6)和S1P5(Edg-8)，它们形成了受体的G-蛋白质偶联的内皮分化基因家族的一部分(Chun，等，2002 Pharmacological Reviews 54：265，Sanchez and Hla2004J Cellular Biochemistry，92：913)。该5种受体显示不同的mRNA表达，其中S1P1-3被广泛表达，S1P4被表达在淋巴组织和造血组织上，S1P5主要表达在脑中并较低程度地表达在脾脏中。它们通过G蛋白质的不同亚类发出信号，以促成各种生物响应(Kluk和Hla，2002Biochem et Biophysica Acta1582：72，Sanchez和Hla 2004，J Cellular Biochem 92：913)。

提出的S1P1受体的作用包括运输淋巴细胞、诱导/抑制细胞因子，和对内皮细胞的作用(Rosen和Goetzl，2005 Nat Rev Immunol.5：560)。S1P1受体的激动剂已经被用于许多自身免疫和移植的动物模型中，包括MS的试验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型，以减少诱导疾病的严重性(Brinkman等2003 JBC 277：21453；Fujino等2003 J Pharmacol Exp Ther 305：70；Webb等2004 J Neuroimmunol 153：108；Rausch等2004 J Magn Reson Imaging20：16)。报导认为这种活性通过S1P1激动剂对淋巴细胞经淋巴系统的循环的作用而介导。用S1P1激动剂进行治疗产生了第二淋巴样器官如淋巴结内部淋巴细胞的隔离(sequestration)，包括动物模型中的可逆外周淋巴细胞生成(Chiba等1998，J Immunology 160：5037，Forrest等2004J Pharmacol ExpTher 309：758；Sanna等2004 JBC 279：13839)。关于激动剂，已公开的数据表明化合物治疗诱导了S1P1受体从细胞表面因内化的损失(Graler和Goetzl2004FASEB J 18：551；Matloubian等2004 Nature 427：355；Jo等2005 ChemBiol 12：703)，以及这种S1P1受体在免疫细胞上的减少有助于减少T细胞从淋巴结运动回到血流。

S1P1基因缺失导致了胚胎致死现象。检查S1P1受体在淋巴细胞迁移和运输中的作用的实验已经包括标记的S1P1缺失的T细胞向辐射后的野生型小鼠的过继转移。这些细胞显示从第二淋巴样器官的流出减少(Matloubian等2004 Nature 427：355)。

S1P1还被认为具有内皮细胞连接调节的作用(Allende等人2003102：3665，Blood Singelton等人2005 FASEB J 19：1646)。关于该内皮作用，已经报导了S1P1激动剂对孤立的淋巴结有作用，而孤立淋巴结可能对免疫病变有调节作用。S 1P1激动剂造成了淋巴窦的内皮间质“门”的关闭，而所述淋巴窦的内皮间质“门”排空(drain)淋巴结并防止淋巴细胞流出(Wei wtal 2005，Nat.Immunology 6：1228)。

免疫抑制化合物FTY720(JP11080026-A)已经显示减少动物和人体内的循环淋巴细胞，在免疫病变的动物模型中具有疾病调节活性，并且降低了在缓解复发(relapsing remitting)的多发性硬化症中的缓解速率(Brinkman等2002 JBC 277：21453，Mandala等2002 Science 296：346，Fujino等2003 JPharmacology and Experimental Therapeutics 305：45658，Brinkman等2004American J Transplantation 4：1019，Webb等2004 J Neuroimmunology 153：108，Morris等2005 EurJ Immunol 35：3570，Chiba 2005 Pharmacology andTherapeutics 108：308，Kahan等2003，Transplantation 76：1079，Kappos等2006New Eng J Medicine 335：1124)。该化合物是一种前药，其在体内由鞘氨醇激酶磷酸化得到对S1P1、S1P3、S1P4和S1P5受体具有激动剂活性的分子。临床研究表明用FTY720治疗在治疗的头24小时内导致心动过缓(Kappos等2006New Eng J Medicine 335：1124)。根据许多基于细胞的实验和动物实验，认为该心动过缓是因为对S1P3受体的激动作用。这些实验包括使用不同于野生型小鼠的S1P3敲除动物，其在给药FTY720和使用S1P1选择性化合物后并没有显示出心动过缓。(Hale等2004Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters 14：3501，Sanna等2004JBC 279：13839，Koyrakh等2005 American JTransplantation 5：529)。

因此，需要相对于S1P3，对S1P1受体具有选择性的激动剂化合物，可能预期会显示出减小诱导心动过缓的趋势。

下列专利申请描述了作为S1P1激动剂的

二唑衍生物：WO03/105771、WO05/058848、WO06/047195、WO06/100633、WO06/115188、WO06/131336、WO07/024922和WO07/116866。

下列专利申请描述了作为S1P受体激动剂的四氢异喹啉基-

二唑衍生物：WO06/064757、WO06/001463、WO04/113330。

WO08/064377描述了具有S1P1受体活性的苯并环庚基类似物。

现已发现一类新结构的化合物，其提供了S1P1受体的激动剂。

因此，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

A为苯基或5或6-元杂芳环；

R₁为至多两个取代基，所述取代基独立地选自：卤素、C_(1-3)烷氧基、C_(1-3)氟代烷基、氰基、任选取代的苯基、C_(1-3)氟代烷氧基、C_(1-6)烷基和C_(3-6)环烷基；

R₂为氢、卤素或C_(1-4)烷基；

B为选自下列基团的7元饱和环：

R₃为氢或任选被氧取代的C_(1-3)烷基；

R₄为(CH₂)_1-3CONH₂、(CH₂)_1-3OH、CO₂H或(CH₂)_1-3CO₂H。

在本发明的一个实施方案中，

A为苯基；和/或

R₁为至多两个取代基，所述取代基独立地选自：氯和异丙氧基；和/或

R₂为氢；和/或

B为(a)或(b)；和/或

R₃为氢；和/或

R₄为(CH₂)₂CONH₂、(CH₂)_1-3OH、CO₂H或(CH₂)₂CO₂H。

在本发明的一个实施方案中，

A为苯基或吡啶基；

R₁为至多两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、氰基和异丙氧基；

R₂为氢；

B为(a)或(b)；

R₃为氢；

R₄为(CH₂)₂CONH₂、(CH₂)_1-3OH、CO₂H或(CH₂)_1-3CO₂H。

在一个实施方案中，A为苯基或吡啶基。在另一个实施方案中，A为苯基。在另一个实施方案中，A为3，4-二取代的苯基。

在一个实施方案中，R₁为两个取代基，其中一个为C_(1-3)烷氧基，另一个选自卤素或氰基。在另一个实施方案中，R₁为两个取代基，其中一个为异丙氧基，且另一个选自氯或氰基。在另一个实施方案中，R₁为两个取代基，其选自氯、异丙氧基和氰基。在另一个实施方案中，R₁为氯和异丙氧基。在另一个实施方案中，当A为苯基时，R₁为在3-位上的氯和在4-位上的异丙氧基，或者当A为吡啶基时，R₁为在5-位上的氯和在6-位上的异丙氧基。在另一个实施方案中，R₁为异丙氧基和氰基。在另一个实施方案中，当A为苯基时，R₁为在3-位上的氰基和在4-位上的异丙氧基，或者当A为吡啶基时，R₁为在5-位上的氯和在6-位上的异丙氧基。

在一个实施方案中，B为(a)或(b)。在另一个实施方案中，B为(b)。

在一个实施方案中，R₂为氢。

在一个实施方案中，R₃为氢。

在一个实施方案中，R₄为(CH₂)₂CONH₂、(CH₂)_1-3OH、CO₂H或(CH₂)_1-3CO₂H。在另一个实施方案中，R₄为(CH₂)_1-3CO₂H。

术语“烷基”作为基团或基团(如烷氧基或羟基烷基)的一部分，是指所有异构形式的直链或支链烷基。术语“C_(1-6)烷基”是指如上定义的烷基，其含有至少1个且至多6个碳原子。这样的烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。这样的烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。

合适的C_(3-6)环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

本文中所用的术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，且术语“卤”是指卤素：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。

术语“杂芳基”表示包含一个或多个选自O、N或S的杂原子的不饱和环。5或6元杂芳环的实例包括吡咯基、三唑基、噻二唑基、四唑基、咪唑基、吡唑基、异噻唑基、噻唑基、异

唑基、

唑基、

二唑基、呋咱基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和三嗪基。

在某些式(I)化合物中，取决于取代基的性质，存在手性碳原子，并因此式(I)化合物可以立体异构体存在。本发明延伸至式(I)化合物的所有旋光异构体如立体异构体形式，包括对映异构体、非对映异构体及其混合物如外消旋体。不同的立体异构体形式可利用常规的方法彼此之间分离或拆分得到，或任何指定的异构体可利用常规立体选择性或不对称合成得到。

本文中的某些化合物可以不同的互变异构体形式存在，并且应该理解本发明包括所有这些互变异构体形式。

应该理解本发明的某些化合物不但含有酸性基团而且含有碱性基团，因此在某些pH值它们可以两性离子形式存在。

本发明合适的化合物为：

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酰胺

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酸

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]-1-丙醇

[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-基]甲醇

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-3-甲酸

[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸

[9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基]乙酸

[9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸

4-[9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基]丁酸

4-[9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丁酸

4-[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丁酸

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-基]丙酸

或其药学上可接受的盐。

式(I)化合物的药学上可接受的衍生物包括式(I)化合物的任何药学上可接受的盐、酯、或这些酯的盐，当将其给予接受者时能(直接或间接地)提供式(I)化合物或其活性代谢物或残余物。

式(I)化合物可形成盐。应当理解，对于在药物中使用，式(I)化合物的盐应该是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐是本领域的技术人员显而易见的，并包括在J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中所述的那些盐，例如与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸；以及与有机酸例如琥珀酸、马来酸、乙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸形成的酸加成盐。某些式(I)化合物可与一或多当量的酸形成酸加成盐。本发明在其范围内包括所有可能的化学计量的和非化学计量的形式。盐还可以由药学上可接受的碱包括无机碱和有机碱制备。衍生自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括衍生自下述碱的盐：伯胺、仲胺以及叔胺；取代的胺包括天然存在的取代的胺；和环胺。具体的药学上可接受的有机碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙基胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、三(羟基甲基)氨基甲烷(TRIS，氨基丁三醇)等。盐还可以由碱性离子交换树脂例如多胺树脂形成。当本发明的化合物为碱性的时候，盐可由药学上可接受的酸包括无机酸和有机酸制备。所述的酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、乙二磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、半乳糖二酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。

药学上可接受的盐可通过与合适的酸或酸衍生物反应而常规地制备。与碱形成的药学上可接受的盐可通过与合适的无机碱或有机碱反应而常规地制备。

式(I)化合物可以以结晶或非结晶形式制备，如果为结晶的话，则可以任选为水合的或溶剂化的。本发明范围包括化学计量的水合物或溶剂化物以及含有可变量的水和/或溶剂的化合物。

式(I)化合物的所有盐、溶剂化物、水合物、络合物、多晶型物、前药、放射标记的衍生物、立体异构体和旋光异构体均包括在本发明的范围内。

在另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法。

本发明化合物对于S1P1受体的效能和功效可以通过如本文所述的在人克隆的受体上进行的GTPγS试验测定。使用本文所述的功能试验也已经证明式(I)化合物对于S1P1受体具有激动活性。

因此，式(I)化合物及它们药学上可接受的盐用于治疗由S1P1受体介导的病症或疾病。特别是，式(I)化合物及它们药学上可接受的盐用于治疗多发性硬化症、自身免疫性疾病、慢性炎性疾病、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤(solid tumours)和肿瘤转移、与血管生成有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病(后文中称作“本发明的疾病”)。

因此，式(I)化合物及它们药学上可接受的盐用于治疗红斑狼疮。

因此，式(I)化合物及它们药学上可接受的盐用于治疗牛皮癣。

因此，式(I)化合物及它们药学上可接受的盐用于治疗多发性硬化症。

应当理解本文中所用的″治疗″包括预防以及确定症状的减轻。

因此，本发明还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其为用作特别是治疗由S1P1受体所介导的病症或疾病的治疗物质。特别是，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其为用作治疗多发性硬化症、自身免疫性疾病、慢性炎性疾病、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管生成有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病的治疗物质。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐为用作治疗红斑狼疮的治疗物质。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐为用作治疗牛皮癣的治疗物质。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐为用作治疗多发性硬化症的治疗物质。

本发明还提供了治疗哺乳动物包括人中可由S1P1受体所介导的病症或疾病的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。特别地，本发明提供了治疗多发性硬化症、自身免疫性疾病、慢性炎性疾病、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管生成有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明提供了治疗红斑狼疮的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明提供了治疗牛皮癣的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明提供了治疗多发性硬化症的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由S1P1受体所介导的病症或疾病的药物中的用途。

特别地，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗多发性硬化症、自身免疫性疾病、慢性炎性疾病、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管生成有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病的药物。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗红斑狼疮的药物。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗牛皮癣的药物。

式(I)化合物及它们药学上可接受的盐，其用于制备用于治疗多发性硬化症的药物。

为了在治疗中使用式(I)化合物及其药学上可接受的盐，通常根据标准的制药方法将它们配制成药物组合物。本发明还提供了药物组合物，其包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一方面，本发明提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或赋形剂相混合。

本发明的药物组合物可以合适地通过在环境温度下以及大气压力下混合制备，通常适合于口服、肠胃外或直肠给药，并且可以以片剂、胶囊、口服液体制剂、粉剂、粒剂、锭剂、可重新配制粉末(reconstitutable powders)、可注射或可输注的溶液或悬浮液或栓剂的形式存在。通常优选口服给药的组合物。

对于口服给药的片剂和胶囊可为单位剂型，并且可含有常规赋形剂，如粘合剂(如预胶化的玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或羟基丙基甲基纤维素)；填充剂(如乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙)；压片润滑剂(如硬脂酸镁，滑石或二氧化硅)；崩解剂(如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；和可接受的润湿剂(如月桂基硫酸钠)。片剂可通过通常的药物实践中熟知的方法进行包衣。

口服液体制剂可以以例如含水或含油悬浮液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式存在，或者可以以干产品的形式存在，这种干产品在使用前用水或其它合适的载体(vehicle)重新配制(reconstitution)。这些液体制剂可以含有常规添加剂例如助悬剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)，乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)，非水载体(其可以包括食用油如杏仁油，油酯，乙醇或分馏植物油(fractionated vegetable oils))，防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)，以及如果需要的话，该制剂还可以含有常规调味剂(flavouring)或着色剂、缓冲性盐和甜味剂。口服给药制剂可适当地配制成活性化合物的控释释放剂型。

对于肠胃外给药，使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及无菌载体配制成液体单位剂量形式。注射用制剂可以使用本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物以及无菌载体，任选地加入防腐剂，例如装在安瓿或多剂量容器中以单位剂型存在。组合物可以采取在油性或水性载体中的混悬液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制试剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。另一方面，活性成分可以是粉末形式，在使用前用合适的载体，如无菌无热原水来配制。根据所用的载体及浓度，可将所述化合物悬浮或溶解在所述载体中。在配制溶液的过程中，为了用于注射可将所述化合物溶解和过滤灭菌，随后填充到合适的小瓶(vial)或安瓿中，然后密封。有利地，将助剂例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶于载体中。为了提高稳定性，可将组合物填充到小瓶中后，将其冷冻并在真空下除去水。除了将所述化合物悬浮在载体中而不是溶于载体中，并且不能通过过滤灭菌外，以基本上相同的方式配制肠胃外悬浮液。在将化合物悬浮于无菌载体中之前，可通过暴露于环氧乙烷中来对所述化合物进行灭菌。有利地，将表面活性剂或润湿剂加入到所述组合物中，以便促进化合物的均匀分布。

洗剂可用水性或油性基质配制，洗剂一般还包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。滴剂可以用水性或非水性基质配制，还包含一种或多种分散剂、稳定剂、增溶剂或助悬剂。它们还可含有防腐剂。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐还可以制成直肠组合物的形式，如栓剂或者保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐还可被配制成长效制剂(depotpreparation)。这些长效制剂可以通过植入(implantation)方式(例如皮下或者肌内)或者通过肌肉注射方式给药。因此，例如本发明的化合物可以用合适的聚合物或者疏水性材料(例如作为在可接受油中的乳液)或离子交换树脂，或以微溶性衍生物例如微溶性盐制成制剂。

对于鼻内给药，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成通过合适的计量或单一剂量装置给药的溶液，或者用适合的载体配制成粉末混合物，利用适合的递药装置给药。因而，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成口服、口含、肠胃外、局部(包括眼和鼻)、长效或直肠给药剂型或者被配制成适合于借助吸入或吹入(通过口或鼻)给药的剂型。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成用于局部给药的软膏剂、霜剂、凝胶剂、洗剂、阴道栓剂、气雾剂或滴剂(例如眼、耳或鼻滴剂)。软膏剂和霜剂例如可以用水性或油性基质加以配制，其中加入适合的增稠剂和/或胶凝剂。眼部给药用软膏剂可以使用经过灭菌的组分、按无菌方式加以制备。

根据给药方法，所述组合物可含有0.1％～99重量％，优选地含有10～60重量％的活性物质。用于治疗前述疾病的化合物的剂量可按常规的方式随疾病的严重程度、患者的体重以及其他类似的因素而改变。但是，作为一般性的指导，合适的单位剂量可为0.05～1000mg，1.0～500mg或1.0～200mg；并且所述的单位剂量可以每天多于一次给药，例如每天两次或三次给药。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以组合制剂(combinationpreparations)、以与其他的活性成分组合的形式使用。例如，本发明化合物可与环孢霉素A、甲氨喋呤、类固醇、雷帕霉素、促炎细胞因子抑制剂、免疫调节剂包括生物制剂或其他治疗上有效的化合物组合使用。

本发明也包括同位素标记的化合物，其与在式I和下面中所述的那些化合物相同，但实际上一个或多个原子被具有不同于自然界中通常存在的原子量或质量数的原子量或质量数的原子所替换。可掺入到本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、碘和氯的同位素，如³H、¹¹C、¹⁴C、¹⁸F、¹²³I和¹²⁵I。

含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物及所述化合物的药学上可接受的盐在本发明的范围内。本发明同位素标记的化合物(例如掺入放射性同位素如³H、¹⁴C的化合物)可用于药物和/或底物组织分布试验。氚代，即³H，以及碳-14，即，¹⁴C，同位素是特别优选的，由于它们易于制备以及检测。¹¹C和¹⁸F同位素尤其可用于PET(正电子发射断层扫描术)，且¹²⁵I同位素特别用于SPECT(单光子发射计算机化断层显象)，它们都用于脑成像。此外，用较重的同位素(如氘，即²H)进行取代能够提供某些治疗优点，因为它们有更好的代谢稳定性，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求，且因此在一些情况下较重的同位素是优选的。同位素标记的本发明的式(I)化合物及下述化合物一般可通过实施在下述方案和/或在实施例中公开的方法，利用易得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来进行制备。

在另一个方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案1中，其中B为

其中R₁、R₂和A如上式(I)中所定义，侧链R₄位于1位，n为1-3，R₂为氢或C_(1-4)烷基，R₃为氢，R为烷基(例如乙基)，hal为氯、溴或碘，且P、P₁为保护基。

方案1

可市售购得的(如Fluorochem)式(i)化合物，可以通过如下方法转化为例如其中P₁为保护基如苄基的式(ii)化合物：在碱如碳酸钾存在的条件下，在合适的溶剂如DMF中，使用烷基化试剂如溴化苄处理。式(ii)化合物可以通过在合适的溶剂如乙醇中，在升温如80℃下，使用合适的碱如氢氧化钠水溶液水解转化为式(iii)化合物。式(iii)化合物可以通过如下常规方法转化为式(iv)化合物：例如使用合适的酰胺偶联试剂如氯甲酸乙酯处理，然后与氨在低温如-10℃下，在合适的溶剂如THF中反应。式(iv)化合物可以通过使用合适的还原剂如氢化铝锂，在低温如低于15℃下，在溶剂如THF中，然后升高温度至如80℃处理转化为式(v)化合物。式(v)化合物可以通过在碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用合适的酰卤(vi)处理转化为式(vii)化合物。酰化试剂(vi)典型地市售购得或可使用标准方法制备。式(vii)化合物可以通过如下方法转化为式(viii)化合物：例如在溶剂如乙腈中，在升高的温度如回流下，使用三氯氧磷处理，然后在合适的溶剂如甲醇中，使用合适的还原剂如硼氢化钠还原，硼氢化钠需在低温如0℃下加入然后升温至室温。式(viii)化合物可以通过如下方法转化为其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的保护的式(ix)衍生物：例如在碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷(DCM)中，使用焦碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。其中P₁表示保护基如苄基的式(ix)化合物可以通过使用合适的催化剂如钯氢解脱除保护基得到式(x)化合物，式(x)化合物可以通过使用合适的碱如吡啶，使用合适的试剂如三氟甲磺酸酐处理转化为式(xi)化合物。式(xi)化合物可以通过在催化剂如四(三苯基膦)合钯(0)存在下，在合适的溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中，在升高的温度如80℃下，使用合适的氰基来源化合物如氰化锌处理转化为式(xii)化合物。式(xii)化合物可以通过在溶剂如甲醇或乙醇中，在升高的温度如60℃下，使用盐酸羟胺和合适的碱如碳酸氢钠处理转化为式(xiii)化合物。式(xiii)化合物可以通过在碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如DMF中，使用式(xv)的酰氯处理转化为式(xvi)化合物。将上述反应混合物典型地在室温下搅拌一段时间，然后在升高的温度如120℃下搅拌。式(xv)的酰氯可市售购得或可通过常规方法由相应的酸(xiv)制得。或者，式(xiii)化合物可以通过在合适的酰胺偶联试剂如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)、1-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，在合适的溶剂如DMF中，使用式(xiv)的羧酸处理转化为式(xvi)化合物。上述反应典型地在升高的温度例如50-80℃下进行。典型地，在加入式(xiii)化合物前，将酸(xiv)、EDAC和HOBt在室温下搅拌一段时间。式(xvi)化合物可以通过在醇性溶剂如乙醇或甲醇中，使用碱如氢氧化钠水溶液处理转化为式(xvii)化合物。其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的式(xvii)化合物，可以通过使用合适的酸典型地为三氟乙酸或盐酸处理转化为某些式(I)化合物。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案2中，其中B为

其中R₁、R₂和A如上式(I)中所定义，侧链R₄位于苯并氧氮杂

环的5位，R₃为氢，R₄为(CH₂)₂CO₂H，R为烷基(例如甲基)，且P为保护基。

方案2

可市售购得(如Aldrich)的式(xviii)化合物，可以通过在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用Wittig试剂(xix)如(乙氧基羰基亚甲基)三苯基膦处理转化为式(xx)化合物。式(xx)化合物可以通过使用合适的N-保护的(如Boc)乙醇胺(xxi)处理转化为式(xxii)化合物，该反应在Mitsunobu反应的条件下，使用偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和三苯基膦，在合适的溶剂如THF中进行。其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的式(xxii)化合物，可以通过使用酸典型地为三氟乙酸或盐酸处理转化为式(xxiii)化合物。式(xxiii)化合物可以通过在合适的溶剂如THF中，使用合适的试剂如1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)处理转化为式(xxiv)化合物。式(xxiv)化合物可以通过如下方法转化为其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的合适的N-保护的式(xxv)衍生物：例如在碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷(DCM)中，使用焦碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。式(xxv)化合物可以通过在催化剂如四(三苯基膦)合钯(0)存在下，在合适的溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中，在升高的温度如80℃下，使用合适的氰基来源化合物如氰化锌处理转化为式(xxvi)化合物。式(xxvi)化合物可以按照方案1中将(xii)转化为(xiii)的方法，通过使用盐酸羟胺处理转化为式(xxvii)化合物。式(xxvii)化合物可以按照方案1中所述的用于将(xiii)转化为(xvi)的方法，使用式(xv)酰氯处理转化为式(xxviii)化合物。式(xxviii)化合物可以通过在醇溶剂如乙醇或甲醇中，使用碱如氢氧化钠水溶液处理转化为式(xxix)化合物。其中P为BOC的式(xxix)化合物可以通过使用酸典型地为三氟乙酸或盐酸处理(如方案1所述)转化为某些式(I)化合物。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案3中，其中B为

其中R₁、R₂和A如式(I)中所定义，侧链R₄位于苯并氧氮杂

环的5位，R₃为氢，R₄为(CH₂)₃CO₂H，R为烷基(例如甲基)，且P为保护基。

方案3

其中R₂为氢、R为烷基(如乙基)且P为保护基(如BOC)的式(xxx)化合物可以使用合适的还原剂如硼氢化锂，在合适的溶剂如甲醇中转化为式(xxxi)化合物。式(xxxi)化合物可以通过使用合适的方法如Swern氧化方法，氧化为式(xxxii)化合物。式(xxxii)化合物可以通过如下方法转化为式(xxxiii)化合物：例如在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用Wittig试剂(xix)如(乙氧基羰基亚甲基)三苯基膦处理。式(xxxiii)化合物可以通过使用合适的催化剂如钯，氢化为式(xxxiv)化合物。式(xxxiv)化合物可以通过方案2中所述的用于将式(xxvi)转化为某些式(I)化合物的方法转化为式(xxxv)化合物。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案4中，其中B为

其中R₁、R₂和A如式(I)中所定义，侧链R₄位于苯并氧氮杂

环的5位并为(CH₂)₂CO₂H，R₃为氢，R为烷基(例如甲基)，且P为保护基。

方案4

式(xxxii)化合物可以通过如下方法转化为式(xxxvi)化合物：例如在合适的碱如二异丙基氨基化锂(LDA)存在下，在合适的溶剂如THF中，使用合适的试剂如(甲氧基甲基)二苯基氧膦(xxxv)处理，然后任选地加入碱如氢化钠。式(xxxvi)化合物可以通过在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用合适的方法如氯代铬酸吡啶

(PCC)氧化为式(xxxvii)化合物。式(xxxvii)化合物可以通过使用方案2中所述的用于将式(xxvi)化合物转化为某些式(I)化合物的方法转化为式(I)化合物。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案5中，其中B为

其中R₁、R₂和A如式(I)中所定义，侧链R₄位于苯并氧氮杂

环的3位并为(CH₂)₂CO₂H，R₃为氢，R为烷基(例如甲基)，且P为保护基。

方案5

可市售购得(如Aldrich，其中R＝Me)的式(xxxviii)化合物可以通过如下方法转化为式(xL)化合物：在Mitsunobu反应条件下，使用例如偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和三苯基膦，在合适的溶剂如甲苯中，使用其中P为合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的式(xxxix)化合物(其可以使用如Journal ofOrganic Chemistry(1987)，52(12)，2361-4所述方法制备)处理。其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的式(xL)化合物可以通过在合适的溶剂如甲醇中，使用酸典型地为4-甲基苯磺酸处理转化为式(xLi)化合物。式(xLi)化合物可以通过如下方法转化为式(xLii)化合物：例如在合适的碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如甲苯中，在室温下然后加热回流下，使用合适的酸如三氟乙酸处理。式(xLii)化合物可以通过在合适的溶剂如THF中，在合适的温度如回流下，使用合适的还原剂如硼烷-THF络合物处理转化为式(xLiii)化合物。式(xLiii)化合物可以通过如下方法转化为其中P表示合适的保护基如叔丁氧羰基(BOC)的保护的式(xLiv)衍生物：例如在碱如三乙胺存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷(DCM)中，使用焦碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯处理。式(xLiv)化合物可以通过在催化剂如四(三苯基膦)合钯(0)存在下，在合适的溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中，在升高的温度如80℃下，使用合适的氰基来源化合物如氰化锌处理转化为式(xLv)化合物。式(xLv)化合物可以通过在溶剂如甲醇或乙醇中，在升高的温度如60℃下，使用盐酸羟胺和合适的碱如碳酸氢钠处理转化为式(xLvi)化合物。

式(xLvi)化合物可以通过使用方案1中所述的用于将式(xiii)化合物转化为式(xvi)化合物的方法用式(xv)酰氯处理转化为式(xLvii)化合物。式(xLvii)化合物可以通过在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用合适的氧化剂如Dess-Martin氧化剂氧化转化为式(xLviii)化合物。式(xLviii)化合物可以通过如下方法转化为式(xLix)化合物：例如在合适的溶剂如二氯甲烷中，使用Wittig试剂(xix)如(乙氧基羰基亚甲基)三苯基膦处理。式(xLix)化合物可以通过在合适的溶剂如乙醇中，使用合适的催化剂如钯氢化转化为式(L)化合物。式(L)化合物可以通过在醇溶剂如乙醇或甲醇中，使用碱如氢氧化钠水溶液处理转化为式(Li)化合物。其中例如P为BOC的式(Li)化合物可以按照方案1中所述的方法，通过使用酸典型地为三氟乙酸或盐酸处理转化为某些式(I)化合物。

一种可以用于制备式(I)化合物的途径示于方案6，其中B为

其中R₁、R₂和A如上式(I)中所定义，侧链R₄位于苯并氧氮杂

环的3位并为CO₂H，R₃为氢，且P为保护基。

方案6

式(xLvii)化合物可以通过在合适的溶剂如丙酮中，使用合适的氧化剂如三氧化铬的硫酸溶液氧化为式(Lii)化合物。其中例如P为BOC的式(Lii)化合物可以通过合适的酸典型地为三氟乙酸或盐酸处理转化为某些式(I)化合物。

在本说明书中所引用的所有出版物，包括但不局限于专利和专利申请，在此将它们引入作为参考，就像每个单独的出版物具体地和单独地在此被充分阐述地引用作为参考。

下面的制备例和实施例举例说明了本发明化合物的制备。

缩写：

g- 克

mg- 毫克

ml- 毫升

μl- 微升

MeCN- 乙腈

MeOH- 甲醇

EtOH- 乙醇

Et₂O- 乙醚

EtOAc- 乙酸乙酯

DCM- 二氯甲烷

DIAD- 偶氮二甲酸二异丙酯

DME- 1，2-双(甲氧基)乙烷

DMF- N，N-二甲基甲酰胺

DMSO- 二甲基亚砜

EDAC- N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐

EDC- N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐

EDCl- N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐

HOBT/HOBt- 羟基苯并三唑

IPA- 异丙醇

NCS- N-氯琥珀酰亚胺

PyBOP- 苯并三唑-1-基-氧基三(吡咯烷基)

六氟磷酸盐

THF- 四氢呋喃

dba- 二亚苄基丙酮

RT- 室温

℃- 摄氏度

M- 摩尔浓度

H- 质子

s- 单峰

d- 二重峰

t- 三重峰

q- 四重峰

MHz- 兆赫兹

MeOD- 氘代甲醇

LCMS- 液相色谱-质谱联用法

LC/MS- 液相色谱-质谱联用法

MS- 质谱

ES- 电喷雾

MH⁺- 质量离子(mass ion)+H⁺

MDAP- 质量检测的自动制备液相色谱法(Mass DirectedAutomated Preparative liquid chromatography)

sat.- 饱和的

一般的化学部分

下述方法用于说明的目的，制备实施例的中间体可不必由所述的具体物料制备。

制备例1

3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酸苯甲基酯

将3-(3-羟基苯基)丙酸(Fluorochem，12.46g，75mmol)、碳酸钾(31.1g，225mmol)和苄基溴(18.7ml，158mmol)在DMF(120ml)中的混合物于65℃搅拌16小时。将该混合物冷却至室温，用乙醚(200mL)和水(400mL)稀释，并将水相用乙醚(100mL)再次萃取。将合并的有机物用水(3x100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，得到几乎无色的油状物(26.5g)，将其不需纯化而使用。¹H NMR(CDCl₃)δ2.68(2H，t)，2.94(2H，t)，5.01(2H，s)，5.11(2H，s)，6.78-6.82(3H，m)，7.17-7.43(11H，m).

制备例2

3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酸

将3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酸苯甲基酯(26.5g，76mmol)和2M氢氧化钠水溶液(115ml，229mmol)在乙醇(250ml)中的混合物在60℃下搅拌30分钟，然后蒸发乙醇。将残余物用水(200mL)稀释，并用乙醚(2x150mL)萃取。将水相用2M的HCl水溶液酸化，并用乙醚(250ml和100ml)萃取，然后将合并的乙醚萃取液干燥(硫酸镁)，并蒸发，得到白色固体(19.6g)。m/z(ES-)255[M-H]^-。

制备例3

3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酰胺

在-10℃下，将氯甲酸乙酯(8.08ml，84mmol)滴加到3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酸(19.6g，76mmol)和三乙胺(11.7ml，84mmol)的THF(250ml)溶液中，生成白色悬浮液。将该混合物于-10℃搅拌15分钟，然后以一批加入氨水(120ml，1830mmol)，并用2小时的时间温热至室温。将THF蒸除，并将含水悬浮液用DCM(200ml和2x50mL)萃取。将合并的有机物干燥(硫酸镁)，蒸发，悬浮于乙醚中，并过滤出来，得到白色固体(16.2g)。m/z(ES+)256[M+H]⁺。

制备例4

(3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙基)胺

在氩气下，在冰浴冷却下，用15分钟的时间，将3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙酰胺(16.13g，63.2mmol)的THF(350ml)溶液加入到搅拌下的LiAlH₄溶液(1M的THF溶液，126ml，126mmol)中。然后将该混合物于65℃搅拌2小时，随后冷却至0℃，并通过小心地加入水(4.8mL)、15％氢氧化钠水溶液(4.8mL)和水(14.4ml)(所有都在冰冷却下)来终止。将该混合物过滤，蒸发，再溶于DCM(200mL)中，然后用水(100mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，得到蜡状固体。将其在乙酸乙酯(200mL)和2M氢氧化钠水溶液(150mL)之间分配，然后过滤，并分离。将有机相干燥(硫酸镁)并蒸发，得到无色油状物(14.1g)。m/z(ES+)242[M+H]⁺。

制备例5

4-氧代-4-[(3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙基)氨基]丁酸甲酯

将4-氯-4-氧代丁酸甲酯(1.58g，10.5mmol)滴加到搅拌下的(3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙基)胺(2.41g，9.99mmol)和三乙胺(1.53ml，11.0mmol)的DCM(30ml)溶液中，同时冰浴冷却。将该混合物搅拌30分钟，然后用2M的盐酸水溶液(30mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶1)纯化，得到树胶状物，将其刮擦(scratching)来结晶(1.91g)。m/z(ES+)356[M+H]⁺。

制备例6

3-{7-[(苯基甲基)氧基]-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-1-基}丙酸甲酯

在氩气下，将4-氧代-4-[(3-{3-[(苯基甲基)氧基]苯基}丙基)氨基]丁酸甲酯(10.4g，29.3mmol)和磷酰氯(8.95ml，96mmol)的MeCN(250ml)溶液在回流下搅拌2.5小时，然后冷却并蒸发。将残余物溶于甲醇(150mL)中，冷却至0℃，然后用25分钟的时间分批加入硼氢化钠(7.65g，202mmol)，并将混合物静置16小时。加入水(600ml)，然后将混合物用DCM(200ml和2x75mL)萃取。将合并的有机物干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(3％甲醇的DCM溶液，然后10％甲醇的DCM溶液)纯化，得到粘稠的淡褐色树胶状物(4.2g，LCMS：62％纯)。其不需进一步纯化用于制备例7。m/z(ES+)340[M+H]⁺。

制备例7

1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-7-[(苯基甲基)氧基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将BOC-酐(3.16ml，13.6mmol)加入到3-{7-[(苯基甲基)氧基]-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-1-基}丙酸甲酯(4.2g，12.4mmol)和三乙胺(2.07ml，14.9mmol)的DCM(50mL)溶液中，并在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水(50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶4)纯化两次，得到无色树胶状物(1.81g)。LCMS：剩余4％的杂质。将其不需进一步纯化用于制备例8。m/z(ES+)440[M+H]⁺。

制备例8

7-羟基-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在50℃下，在连续的气流下将1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-7-[(苯基甲基)氧基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.088g，0.200mmol)的甲醇(4ml)溶液氢化。蒸发得到无色树胶状物(55mg)。m/z(ES+)350[M+H]⁺。

制备例9

1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-7-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将三氟甲磺酸酐(0.041ml，0.240mmol)加入到7-羟基-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.070g，0.200mmol)的吡啶(2mL)溶液中，并在室温下搅拌30分钟，加入乙醚(40mL)，然后将混合物用2M的HCl水溶液(20mL)、水(20mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，得到浅黄色树胶状物质(95mg)。m/z(ES+)482[M+H]⁺。

制备例10

7-氰基-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-7-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.8g，3.74mmol)、氰化锌(0.878g，7.48mmol)和四(三苯基膦)合钯(0.864g，0.748mmol)在DMF(15ml)中的混合物于90℃搅拌18小时，然后冷却至室温，并用水/乙酸乙酯(每个60ml)稀释。将有机层用水(3x20mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶3)纯化，得到无色树胶状物(608mg)。m/z(ES+)359[M+H]⁺。

制备例11

7-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将7-氰基-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.072g，0.201mmol)、羟基胺盐酸盐(0.028g，0.402mmol)和碳酸氢钠(0.067g，0.804mmol)在乙醇(4ml)中的混合物于60℃搅拌3小时，然后在室温下静置64小时。加入乙酸乙酯(40ml)，并将混合物用水(50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，得到无色树胶状物(80mg，LCMS：81％纯)。m/z(ES+)392[M+H]⁺。

制备例12

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将7-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.57g，1.46mmol)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(Paragos Product，0.344g，1.60mmol)，EDC(0.307g，1.60mmol)和HOBt(0.245g，1.60mmol)在DMF(8ml)中的混合物在室温下搅拌20分钟，然后于120℃加热3小时。将该反应冷却至室温，并用乙酸乙酯/水(每个80ml)稀释。将有机相用饱和的碳酸氢钠水溶液和水(3x 20mL)洗涤，然后干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶3)纯化，得到白色泡沫状物质(515mg)。m/z(ES+)570[M+H]⁺。

制备例13

3-(7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-2-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂-1-基)丙酸

将2M氢氧化钠水溶液(0.5ml，1.0mmol)加入到7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.090g，0.16mmol)的乙醇(4mL)溶液中，并在室温下搅拌17小时。将该混合物蒸发，并将残余物在水和乙醚之间分配，然后用2M的HCl水溶液酸化。将有机相干燥(硫酸镁)并蒸发，得到白色泡沫状物质(86mg)。m/z(ES+)556[M+H]⁺。

制备例14

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酸甲酯

将三氟乙酸(1ml，12.98mmol)加入到7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.10g，0.175mmol)的DCM(1mL)溶液中，并在室温下搅拌30分钟。将该溶液蒸发，再溶于乙醚(30mL)中，用1M碳酸钾水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发，得到无色树胶状物(71mg)。m/z(ES+)470[M+H]⁺。

制备例15

4-[({4-溴-2-[(甲氧基)羰基]苯基}氧基)甲基]-2，2-二甲基-1，3-

唑烷-3-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将DIAD(6.40ml，32.9mmol)加入到4-(羟基甲基)-2，2-二甲基-1，3-唑烷-3-甲酸1，1-二甲基乙基酯(6.92g，29.9mmol)、5-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(6.91g，29.9mmol)和三苯基膦(8.63g，32.9mmol)的甲苯(70ml)溶液中，然后将混合物于80℃搅拌18小时。将该溶液冷却，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶9)纯化，得到无色油状物(7.56g)。m/z(ES+)344和346(1∶1，[M+H-100]⁺)。

制备例16

5-溴-2-{[2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-3-羟基丙基]氧基}苯甲酸甲酯

向4-[({4-溴-2-[(甲氧基)羰基]苯基}氧基)甲基]-2，2-二甲基-1，3-

唑烷-3-甲酸1，1-二甲基乙基酯(7.54g，17.0mmol)的甲醇(100ml)溶液中加入对甲苯磺酸(0.10g，0.53mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。将该溶液蒸发至干，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，2∶3)纯化，得到无色粘稠的油状物(5.55g)。m/z(ES+)404和406(1∶1，[M+H]⁺)。

制备例17

7-溴-3-(羟基甲基)-3，4-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-5(2H)-酮

将5-溴-2-{[2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-3-羟基丙基]氧基}苯甲酸甲酯(5.52g，13.7mmol)溶于DCM(15mL)和TFA(15ml，195mmol)中，并在室温下搅拌1小时。将该溶液蒸发，然后将残余物再溶于甲苯(60mL)和三乙胺(8ml，57.4mmol)中，随后在回流下加热2小时。将该混合物蒸发至干，再溶于乙酸乙酯(100mL)中，用水(20mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发。将残余物溶于2M氨的甲醇溶液(50mL)中，并在室温下搅拌5天。蒸发，并通过快速色谱法(3.5％甲醇的DCM溶液)纯化，得到白色固体(2.71g)。m/z(ES+)272和274(1∶1，[M+H]⁺)。

制备例18

(7-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-基)甲醇

将1M硼烷-THF络合物的THF溶液(26.0ml，26.0mmol)加入到7-溴-3-(羟基甲基)-3，4-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-5(2H)-酮(2.36g，8.67mmol)在THF(5mL)中的悬浮液中，并将混合物在回流下加热5小时，然后冷却至室温。加入5M的HCl水溶液(50ml)，并将混合物在回流下加热1小时，然后冷却至室温。蒸发，并将残余的溶剂与乙醇(100ml)共沸蒸馏，剩下残余物，将其再溶于乙醇(100mL)和三乙胺(20mL)中，然后再次浓缩。通过快速色谱法(5％甲醇的DCM溶液)纯化，得到粗产物，将其在乙酸乙酯(300mL)和水(100mL)之间分配。将该混合物用2M氢氧化钠水溶液碱化，然后将有机物干燥(硫酸镁)，并蒸发，得到白色固体(1.93g)。m/z(ES+)258和260(1∶1，[M+H]⁺)。

制备例19

7-溴-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将(7-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-3-基)甲醇(1.93g，7.48mmol)和BOC-酐(2.08ml，8.97mmol)在THF(30mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)中的混合物在室温下搅拌2小时。将该混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(50mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，2∶3)纯化，得到白色固体(2.36g)。m/z(ES+)258和260(1∶1，[M+H-100]⁺)。

制备例20

7-氰基-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将7-溴-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.05g，5.72mmol)、氰化锌(1.34g，11.5mmol)和四(三苯基膦)合钯(0.992g，0.858mmol)在DMF(20ml)中的混合物于80℃搅拌3小时。将该混合物冷却，用乙酸乙酯/水(每个150ml)稀释，并将各层分离。将有机相用水(3x30mL)洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶1)纯化，得到白色固体(1.43g)。m/z(ES+)205[M+H-100]⁺。

制备例21

7-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将7-氰基-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.43g，4.70mmol)、羟基胺盐酸盐(0.653g，9.40mmol)和碳酸氢钠(1.974g，23.5mmol)在乙醇(20ml)中的混合物于50℃搅拌15小时。然后冷却，并用乙酸乙酯/水(每个100ml)稀释，将水层再次用乙酸乙酯(50mL)萃取，然后将合并的有机物干燥(硫酸镁)并蒸发，得到白色泡沫状物质(1.60g)。m/z(ES+)338[M+H]⁺。

制备例22

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将7-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.59g，4.71mmol)、3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(Paragos Product，1.012g，4.71mmol)、HOBt(0.794g，5.18mmol)和EDC(0.994g，5.18mmol)在DMF(20ml)中的混合物在室温下搅拌30分钟，然后于100℃加热5小时。将该混合物冷却，用乙酸乙酯(150ml)稀释，然后用水(100mL)、饱和的碳酸氢钠水溶液和水(3x50mL)洗涤。蒸发，然后通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，45∶55)纯化，得到白色固体(673mg)。m/z(ES+)516[M+H]⁺。

制备例23

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-甲酸

将Jones试剂[由三氧化铬(0.213g，2.13mmol)和硫酸(184μl，3.45mmol)制备，用水调成0.8ml]加入到冰冷却下的7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.103g，0.2mmol)的丙酮(4mL)溶液中，并将生成的混合物在冰中搅拌2小时。加入IPA(0.5ml)，随后加入水(20mL)和乙酸乙酯(40mL)。将有机相干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶1，然后1％乙酸的乙酸乙酯溶液/异己烷，1∶1)纯化，得到白色固体(72mg)。m/z(ES+)530[M+H]⁺。

制备例24

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-甲酰基-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将Dess-Martin氧化剂(Dess-Martin periodinane)(0.127g，0.300mmol)加入到7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.155g，0.30mmol)的DCM(5ml)溶液中，并将生成的混合物在室温下搅拌1小时。加入DCM(30ml)，然后将混合物用硫代硫酸钠(3g)在饱和的碳酸氢钠水溶液(20mL)中的溶液洗涤。将有机相干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，2∶3)纯化，得到树胶状物质，将其用乙醚研磨，得到白色固体(136mg)。m/z(ES+)513[M⁺].

制备例25

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-[(1E)-3-(乙氧基)-3-氧代-1-丙烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氩气下，将7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-甲酰基-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.136g，0.265mmol)和(三苯基-15-膦)乙酸乙酯(ethyl(triphenyl-15-phosphanylidene)acetate)(0.101g，0.291mmol)在THF(4ml)中的混合物在40℃下搅拌1小时。蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶4)纯化，得到无色树胶状物(109mg)。m/z(ES+)584[M+H]⁺。

制备例26

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-[3-(乙氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.109g，0.187mmol)的乙醇(20ml)溶液用10％Pd/C(0.030g，0.282mmol，50％水)氢化45分钟。然后过滤，蒸发，并通过快速色谱法(乙酸乙酯/异己烷，1∶4)纯化，得到无色树胶状物(59mg)。m/z(ES+)586[M+H]⁺。

制备例27

3-(7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-3-基)丙酸

将2M氢氧化钠水溶液(1.0ml，2.0mmol)加入到7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-3-[3-(乙氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.059g，0.101mmol)的乙醇(4mL)溶液中，并在室温下搅拌2小时。将该混合物蒸发，然后在水和乙酸乙酯(每个25ml)之间分配，并用2M的HCl水溶液酸化。将有机相干燥(硫酸镁)并蒸发，得到无色树胶状物(55mg)。m/z(ES-)556[M-H]^-.

制备例28

(2E)-3-(3-溴-2-羟基苯基)-2-丙烯酸乙酯

在室温下，向3-溴-2-羟基苯甲醛(WO9606822；1.005g，5.0mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入(乙氧基羰基亚甲基)三苯基膦(Aldrich；2.09g，6.0mmol)。将该反应在室温下搅拌3小时，然后蒸发溶剂。将残余物通过色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到白色固体的标题化合物(1.2g)。MS(ES)C₁₁H₁₁BrO₃计算值(requires)270，272；实测值(found)271，273[M+H]⁺。

制备例29

(2E)-3-(3-溴-2-{[2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基]氧基}苯基)-2-丙烯酸乙酯

在0℃下，向(2E)-3-(3-溴-2-羟基苯基)-2-丙烯酸乙酯(制备例28)(870mg，3.21mmol)、(2-羟基乙基)氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(Aldrich；517mg，3.21mmol)和三苯基膦(926mg，3.53mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙基酯(714mg，3.53mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂，并将残余物溶于乙酸乙酯中，然后用盐水洗涤两次。将有机相干燥，并蒸发。通过色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到产物，为无色油状物(1.23g)。MS(ES)C₁₈H₂₄BrNO₅计算值413，415；实测值414，416[M+H]⁺。

制备例30

(2E)-3-{2-[(2-氨基乙基)氧基]-3-溴苯基}-2-丙烯酸乙酯三氟乙酸盐

在冰浴中，向(2E)-3-(3-溴-2-{[2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基]氧基}苯基)-2-丙烯酸乙酯(制备例29)(0.207g，0.5mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中缓慢地加入三氟乙酸(1mL)。1小时后，将反应混合物浓缩至干，并将残余物与乙醚共沸。将残余物真空干燥，得到粗产物，为油状物(0.214g)。MS(ES)C₁₃H₁₆BrNO₃计算值313，315；实测值314，316[M+H]⁺。

制备例31

(9-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基)乙酸乙酯

在室温下，在氮气下，向(2E)-3-{2-[(2-氨基乙基)氧基]-3-溴苯基}-2-丙烯酸乙酯(制备例30)(1.4g，4.46mmol)的四氢呋喃(40ml)溶液中加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.678g，4.46mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，并将残余物通过色谱法纯化，使用0-2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色油状物(1.31g)。

MS(ES)C₁₃H₁₆BrNO₃计算值313，315；实测值314，316[M+H]⁺。

制备例32

9-溴-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在0℃下，向(9-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基)乙酸乙酯(制备例31)(12.3g，39.2mmol)的四氢呋喃(200ml)溶液中加入三乙胺(4.77g，47.1mmol)，然后加入焦碳酸二叔丁基酯(9.42g，43.2mmol)。2分钟后，除去冰浴，并将反应混合物在室温下静置过周末。蒸发溶剂，并将残余物通过色谱法纯化，使用3-15％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到产物，为无色油状物(15.7g)。MS(ES)C₁₈H₂₄BrNO₅计算值413，415；实测值：414，416[M+H]⁺。

制备例33

9-氰基-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-溴-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例32)(1.02g，2.47mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(7ml)溶液在真空下除气15分钟，然后加入氰化锌(348mg，2.98mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(285mg，0.247mmol)，并在氮气下将生成的黄色混合物于100℃搅拌5小时。将冷却的混合物过滤，并用DMF洗涤。将滤液蒸发，并将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，并将有机相干燥，并蒸发。通过快速色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色固体(760mg)。MS(ES)C₁₉H₂₄N₂O₅计算值360；实测值361[M+H]⁺。

制备例34

5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-9-[-(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-氰基-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例33)(1.08g，3.0mmol)、羟基胺盐酸盐(521mg，7.5mmol)和碳酸氢钠(630mg，7.5mmol)在乙醇(15ml)中的混合物回流5小时。将反应混合物冷却至室温，通过′celite′过滤，并蒸发溶剂。将残余物通过色谱法纯化，使用0-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色泡沫状物质(0.968g)。MS(ES)C₁₉H₂₇N₃O₆计算值393；实测值394[M+H]⁺。

制备例35

9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氮气下，向5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例34)(826mg，2.09mmol)和三乙胺(255mg，2.52mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(21ml)溶液中加入3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(制备例41)(401mg，2.09mmol)。将该混合物在室温下搅拌10分钟，然后于120℃搅拌20分钟。20分钟后，再加入三乙胺(51mg.0.504mmol)和3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(80.2mg，0.418mmol)，并将混合物于120℃搅拌6小时。将该混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物溶于乙酸乙酯中，并将该溶液用2N氢氧化钠、然后用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为泡沫状物质(740mg)。MS(ES)C₂₉H₃₄ ³⁵ClN₃O₇计算值571；实测值572[M+H]⁺。

制备例36

(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基)乙酸钠盐

将9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例35)(120mg，0.21mmol)、乙醇(1mL)和2M氢氧化钠(2ml)的混合物于60℃搅拌1小时。将反应混合物冷却，并蒸发溶剂。将残余物悬浮于水(2mL)中，并用乙酸乙酯(2x2mL)萃取。将合并的萃取液干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，为无色固体(90mg)。

MS(ES)C₂₇H₃₀ClN₃O₇计算值543；实测值544[M+H]⁺。

制备例37

9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

i)将草酰氯(152mg，105μl，1.2mmol)加入到搅拌下的3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(WO2001002355；205mg，1mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液中，随后加入N，N-二甲基甲酰胺(1滴，催化剂)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后将溶剂蒸发，并将残余物真空干燥30分钟。

ii)将粗的酰基氯(步骤i)(1mmol)的乙腈(5ml)溶液滴加到搅拌下的5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例34)(393mg，1mmol)和三乙胺(121mg，167μl，1.2mmol)的乙腈(5mL)溶液中，并将混合物在室温下搅拌1小时，然后加热回流72小时。将反应混合物冷却，并蒸发溶剂。将残余物通过色谱法纯化，使用15-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色油状物(180mg)。

MS(ES)C₃₀H₃₄N₄O₇计算值562；实测值563[M+H]⁺。

制备例38

(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基)乙酸

将9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例37)(170mg，0.30mmol)、2M氢氧化钠(2mL)和乙醇(4ml)的混合物于60℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并将乙醇蒸发。将残余物用水(5mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取。将合并的萃取液干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物在高真空下干燥，得到标题化合物，为无色泡沫状物质(150mg)。MS(ES)C₂₈H₃₀N₄O₇计算值534；实测值535[M+H]⁺。

制备例39

9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

i)将草酰氯(152mg，105μl，1.2mmol)加入到搅拌下的5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(WO9702244；215mg，1mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液中，随后加入DMF(1滴，催化剂)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物真空干燥30分钟。

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例34)(393mg，1mmol)和三乙胺(121mg，167μl，1.2mmol)的乙腈(5mL)溶液中，并将混合物在室温下搅拌1小时，然后加热回流72小时。将反应混合物冷却，并蒸发溶剂，并将残余物通过色谱法纯化。使用15-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为浅黄色油状物(180mg)。

MS(ES)C₂₈H₃₃ ³⁵ClN₄O₇计算值572；实测值573[M+H]⁺。

制备例40

(9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

-5-基)乙酸

将9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例39)(170mg，0.30mmol)、2M氢氧化钠(5mL)和乙醇(8ml)的混合物于60℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并将乙醇蒸发。将残余物用水(10mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取。将合并的萃取液干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物在高真空下干燥，得到标题化合物，为无色泡沫状物质(150mg)。MS(ES)C₂₆H₂₉ ³⁵ClN₄O₇计算值544；实测值545[M+H]⁺。

制备例41

3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯

向圆底烧瓶中装入3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(Paragos ProductList，10.2g，47.5mmol)、二氯甲烷(158mL)和草酰氯(8.29ml，95mmol)。将反应混合物在冰/水浴中冷却至0℃，随后加入N，N-二甲基甲酰胺(0.158mL)。将该溶液温热至环境温度过夜。蒸发溶剂得到标题化合物，为米色固体(11.4g)。δH(CDCl3，400MHz)：1.44(6H，d)，4.73(1H，七重峰)，6.98(1H，d)，8.0(1H，dd)，7.98(1H，d).

制备例42

9-氰基-5-(2-羟基乙基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

向9-氰基-5-[2-(乙氧基)-2-氧代乙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例33)(282mg，0.78mmol)的乙醇(5ml)溶液中加入2.0M硼氢化锂的THF溶液(0.587ml，1.17mmol)。在室温下搅拌1小时后，加入乙醚(5ml)。30分钟后，加入2.0M硼氢化锂的THF溶液(0.500ml，1.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3天。将悬浮液溶于甲醇(40mL)中，并于0℃用2M盐酸终止。蒸发大部分的溶剂。将残余物用乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。将有机相干燥，并蒸发，得到标题化合物(224mg)。MS(ES)C₁₇H₂₂N₂O₄计算值318；实测值319[M+H]⁺。

制备例43

9-氰基-5-[(2E)-4-(乙氧基)-4-氧代-2-丁烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在氮气下，于-78℃，用5分钟的时间，向草酰氯(777mg，0.54ml，6.12mmol)的二氯甲烷(25ml)溶液中加入二甲基亚砜(552mg，0.50ml，7.07mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液。10分钟后，加入9-氰基-5-(2-羟基乙基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例42)(1.50g，4.71mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。将反应混合物于-78℃搅拌70分钟，然后用2分钟的时间滴加三乙胺(1.43g，1.97ml，14.1mmol)。将该混合物温热至室温。40分钟后，加入(三苯基膦(triphenylphosphorylidene))乙酸乙酯(1.97g，5.65mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物在乙酸乙酯和盐水之间分配。分离有机相，干燥，并蒸发。通过色谱法纯化，使用0-50％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色油状物。(1.76g)。MS(ES)C₂₁H₂₆N₂O₅计算值386；实测值387[M+H]⁺。

制备例44

9-氰基-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-氰基-5-[(2E)-4-(乙氧基)-4-氧代-2-丁烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例43)(780mg，2.02mmol)和10％钯/碳、50％水浆(430mg)在乙醇(30ml)中的混合物在氢气气氛下搅拌90分钟。将反应混合物通过‘celite’过滤，并将滤液蒸发，得到标题化合物(680mg)。MS(ES)C₂₁H₂₈N₂O₅计算值388；实测值389[M+H]⁺。

制备例45

5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-氰基-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例44)(750mg，1.93mmol)、羟基胺盐酸盐(335mg，4.83mmol)和碳酸氢钠(405mg，4.83mmol)在乙醇(10ml)中的混合物于70℃搅拌24小时。将反应混合物冷却，并通过‘celite’过滤。将滤液蒸发，得到无色树胶状物(814mg)，其不需进一步纯化用于制备例46。MS(ES)C₂₁H₃₁N₃O₆计算值421；实测值422[M+H]⁺。

制备例46

9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将草酰氯(152mg，105μl，1.20mmol)加入到搅拌下的3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(Paragos Product List，215mg，1.00mmol)的无水二氯甲烷(10ml)溶液中，随后加入DMF(1滴)，将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后将溶剂蒸发，并将残余物真空干燥30分钟。将粗的酰基氯(1.00mmol)的乙腈(5ml)溶液滴加到搅拌下的5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例45)(270mg，0.64mmol)和三乙胺(121mg，167μl，1.2mmol)的乙腈(5mL)溶液中，并在室温下搅拌1小时。将反应混合物加热回流72小时，然后冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用15-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物(70mg)。MS(ES)C₃₁H₃₈ ³⁵ClN₃O₇计算值599；实测值600[M+H]⁺。

制备例47

9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将草酰氯(152mg，105μl，1.20mmol)加入到搅拌下的3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(WO2001002355；205mg，1.00mmol)的无水二氯甲烷(10ml)溶液中，随后加入DMF(1滴)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物真空干燥30分钟。将粗的酰基氯(1.00mmol)的乙腈(5ml)溶液滴加到搅拌下的5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例45)(270mg，0.64mmol)和三乙胺(121mg，167μl，1.20mmol)的乙腈(5mL)溶液中，并在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物加热回流72小时，然后冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用15-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物(120mg)。MS(ES)C₃₂H₃₈N₄O₇计算值590；实测值591[M+H]⁺。

制备例48

9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将草酰氯(152mg，105μl，1.20mmol)加入到搅拌下的5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(WO9702244；215mg，1.00mmol)的无水二氯甲烷(10ml)溶液中，随后加入DMF(1滴)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物真空干燥30分钟。将粗的酰基氯(1.00mmol)的乙腈(5ml)溶液滴加到搅拌下的5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例45)(270mg，0.64mmol)和三乙胺(121mg，167μl，1.20mmol)的溶液乙腈(5mL)中，并在室温下搅拌1小时。将反应混合物加热回流72小时，然后冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用15-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物，将其静置固化(147mg)。.MS(ES)C₃₀H₃₇ ³⁵ClN₄O₇计算值600；实测值601[M+H]⁺。

制备例49

4-(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)丁酸

将9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例47)(120mg，0.20mmol)、2M氢氧化钠(2mL)和乙醇(2ml)的混合物于50℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物用水(10mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取，并将合并的有机物干燥，并蒸发。将残余物用异己烷/乙醚的混合物研磨，得到固体的标题化合物(80mg)。MS(ES)C₃₀H₃₄N₄O₇计算值562；实测值563[M+H]⁺。

制备例50

4-(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基)丁酸

将9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例46)(70mg，0.12mmol)、2M氢氧化钠(2mL)和乙醇(2ml)的混合物于50℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物用水(10mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取，并将合并的有机物干燥，并蒸发。将残余物用异己烷/乙醚的混合物研磨，得到固体的标题化合物(63mg)。MS(ES)C₂₉H₃₄ ³⁵ClN₃O₇计算值571；实测值572[M+H]⁺。

制备例51

4-(9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

-5-基)丁酸

将9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-二唑-3-基)-5-[4-(乙氧基)-4-氧代丁基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例48)(145mg，0.24mmol)、2M氢氧化钠(2mL)和乙醇(2ml)的混合物于50℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物用水(10mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该混合物用乙酸乙酯(3x5mL)萃取，并将合并的有机物干燥，并蒸发。将残余物用异己烷研磨，得到固体的标题化合物(l47mg)。MS(ES)C₂₈H₃₃ ³⁵ClN₄O₇计算值572；实测值573[M+H]⁺。

制备例52

9-氰基-5-(2-氧代乙基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在-78℃下，将二甲基亚砜(0.504g，6.45mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液滴加到草酰氯(710mg，5.59mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。15分钟后，用5分钟的时间加入9-氰基-5-(2-羟基乙基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例42)(1.37g，4.30mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液，并将混合物于-78℃搅拌1小时，然后加入三乙胺(1.31g，12.91mmol)，并将混合物再搅拌5分钟。用45分钟的时间，将该混合物温热至室温。蒸发溶剂，并将残余物在水和乙酸乙酯之间分配。将有机萃取液用盐水洗涤，并干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，得到粗的标题化合物，为浅黄色油状物。将其在随后的步骤中以粗物质使用。

C₁₇H₂₀N₂O₄计算值316；实测值317[M+H]⁺。

制备例53

1∶1的9-氰基-5-[(2Z)-3-(甲氧基)-2-丙烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯和9-氰基-5-[(2E)-3-(甲氧基)-2-丙烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在0℃下在氮气下，将二异丙基氨基化锂(LDA)(0.5M的THF溶液；5.16mmol)滴加到甲氧基甲基二苯基氧化膦(1.376g，5.59mmol)的无水THF(20ml)溶液中。将该混合物于0℃搅拌10分钟，随后冷却至-78℃。然后滴加9-氰基-5-(2-氧代乙基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例52)(1.36g，4.30mmol)的THF(10ml)溶液。将该混合物搅拌5分钟，除去冰浴，并用40分钟的时间将该混合物温热至室温。加入饱和的氯化铵，并将反应混合物用乙醚萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发，得到浅黄色泡沫状物质。将该物质溶于THF(30ml)中，然后分批加入氢化钠(60％；430mg，4.30mmol)，并将混合物搅拌过夜。于0℃加入甲醇(3ml)，并将混合物在氯化铵和乙醚之间分配。将有机萃取液用盐水洗涤，并干燥(MgSO₄)。蒸发溶剂，并将残余物通过色谱法纯化，使用5-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到标题化合物的1∶1混合物，为无色油状物(624mg)。MS(ES)C₁₉H₂₄N₂O₄计算值344；实测值345[M+H]⁺。

制备例54

9-氰基-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

在室温下，将1∶1的9-氰基-5-[(2Z)-3-(甲氧基)-2-丙烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯和9-氰基-5-[(2E)-3-(甲氧基)-2-丙烯-1-基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例53)(625mg，1.81mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物快速加入到氯铬酸吡啶

(PCC；782mg，3.63mmol)的二氯甲烷(10ml)悬浮液中。将该混合物搅拌过夜，然后加入另外的PCC(782mg，3.63mmol)。将反应混合物再搅拌24小时，然后加入另外的PCC(782mg，3.63mmol)，并将混合物再搅拌24小时。将该混合物通过过滤，用二氯甲烷洗涤。蒸发溶剂，并将残余物通过色谱法纯化，使用5-25％乙酸乙酯的环己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物(364mg)。MS(ES)C₁₉H₂₄N₂O₅计算值360；实测值361[M+H]⁺。

制备例55

9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-氰基-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例54)(360mg，1.00mmol)、羟基胺盐酸盐(174mg，2.50mmol)和碳酸氢钠(210mg，2.50mmol)在甲醇(10ml)中的混合物加热回流24小时。加入另一批的羟基胺盐酸盐(70mg，1.00mmol)和碳酸氢钠(84mg，l.00mmol)后，并继续回流24小时。将反应混合物冷却，并通过

过滤。蒸发溶剂，得到标题化合物，为无色固体(393mg)，其不需进一步纯化而使用。MS(ES)C₁₉H₂₇N₃O₆计算值393；实测值394[M+H]⁺。

制备例56

9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

将9-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例55)(197mg，0.50mmol)的乙腈(5ml)溶液缓慢地加入到搅拌下的3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(制备例41)(117mg，0.50mmol)和三乙胺(61mg，84μl，0.60mmol)的乙腈(5mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后加热回流48小时。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为黄色油状物(29mg)。MS(ES)C₂₉H₃₄ ³⁵ClN₃O₇计算值571；实测值572[M+H]⁺。

制备例57

9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-5-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例55)(197mg，0.50mmol)的乙腈(5ml)溶液缓慢地加入到搅拌下的3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(使用制备例37中所述的方法制备)(112mg，0.5mmol)和三乙胺(61mg，84μl，0.6mmol)的乙腈(5mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后加热回流48小时。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过色谱法纯化，使用20％乙酸乙酯的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为黄色油状物(41mg)。MS(ES)C₃₀H₃₄N₄O₇计算值562；实测值563[M+H]⁺。

制备例58

3-(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)丙酸

将9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例56)(29mg，0.05mmol)、2M氢氧化钠(2ml)和乙醇(2ml)的混合物于60℃搅拌2小时。将反应混合物冷却，并将乙醇蒸发。将残余物用水(5mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该溶液用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。将合并的有机物干燥，并蒸发，得到褐色的标题化合物(24mg)，将其不需进一步纯化而使用。MS(ES)C₂₈H₃₂ ³⁵ClN₃O₇计算值557；实测值558[M+H]⁺。

制备例59

3-(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基)丙酸

将9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(制备例57)(41mg，0.07mmol)、2M氢氧化钠(2ml)和乙醇(2ml)的混合物于60℃搅拌2小时。将反应混合物冷却，并将乙醇蒸发。将残余物用水(5mL)稀释，并用冰醋酸酸化。将该溶液用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。将合并的有机物干燥，并蒸发，得到标题化合物，为黄色树胶状物质(36mg)，其不需进一步纯化而使用。MS(ES)C₂₉H₃₂N₄O₇计算值548；实测值549[M+H]⁺。

实施例1

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酰胺

将7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-1-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-1，3，4，5-四氢-2H-2-苯并氮杂-2-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.050g，0.088mmol)在7M氨的甲醇溶液(5ml)中的溶液在室温下搅拌7天。将该混合物蒸发，再溶于DCM(1mL)和三氟乙酸(1.000ml，13mmol)中，然后在室温下搅拌30分钟。将该混合物蒸发，然后通过MDAP纯化。将含产物的级分蒸发至～10ml，用2M氢氧化钠水溶液碱化，并用乙酸乙酯(30mL)萃取。将有机物干燥(硫酸镁)，蒸发，并将残余物用乙醚研磨，得到白色固体(18mg)。m/z(ES+)455[M+H]⁺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.45(6H，d)，1.65(1H，m)，1.82(1H，m)，2.17(1H，m)，2.28(1H，m)，2.47-2.55(2H，m)，3.07-3.13(3H，m)，3.36(1H，m)，3.95(1H，m)，4.72(1H，m)，5.3(1H，br s)，6.1(1H，br s)，7.06(1H，d)，7.32(1H，d)，7.92-7.94(2H，m)，8.06(1H，dd)，8.24(1H，d).

实施例2

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酸盐酸盐

将3-(7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基)丙酸(0.086g，0.155mmol)溶于三氟乙酸(1.0ml，13.0mmol)和DCM(1mL)的溶液中，并在室温下搅拌30分钟，然后蒸发至干。通过MDAP纯化，得到残余物，将其再溶于DCM(5ml)中，随后加入1M HCl的乙醚溶液(1ml)。将该混合物蒸发，然后悬浮于乙醚中，并过滤，得到白色固体(21mg)。m/z(ES+)456[M+H]⁺。¹H NMR(d₄-MeOD)δ1.42(6H，d)，2.06(2H，m)，2.39(1H，m)，2.48(2H，m)，2.55(1H，m)，3.24(2H，m)，3.46(1H，m)，3.49(1H，m)，4.74(1H，m)，4.84(1H，m)，7.32(1H，d)，7.56(1H，d)，8.07-8.13(3H，m)，8.21(1H，d).

实施例3

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]-1-丙醇盐酸盐

将1M氢化铝锂的THF溶液(0.149ml，0.149mmol)加入到3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1H-2-苯并氮杂

-1-基]丙酸甲酯(0.07g，0.149mmol)的THF(3mL)溶液中，并将生成的混合物在室温下搅拌30分钟，加入2M氢氧化钠水溶液(10ml)，然后将混合物萃取到乙酸乙酯(20mL)中，并将有机相干燥(硫酸镁)，蒸发，并通过MDAP纯化。合并所需的级分，蒸发，与乙醇(20mL)共沸，并将残余物再溶于DCM(4mL)中。加入1M HCl的乙醚溶液(1ml)，然后将混合物蒸发，并用乙醚研磨，得到白色固体(31mg)。m/z(ES+)442[M+H]⁺。¹H NMR(d₄-MeOD)δ1.42(6H，d)，1.55-1.75(2H，m)，2.06(2H，m)，2.19(1H，m)，2.39(1H，m)，3.24(2H，m)，3.45-3.55(2H，m)，3.57(2H，m)，4.68(1H，m)，4.85(1H，m)，7.32(1H，d)，7.59(1H，d)，8.07-8.13(3H，m)，8.21(1H，d).

实施例4

[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-基]甲醇盐酸盐

将7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-3-(羟基甲基)-2，3-二氢-1，4-苯并氧氮杂-4(5H)-甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.024g，0.047mmol)溶于4M HCl的二

烷溶液(1.0ml，4.0mmol)中，并在室温下搅拌1小时。将该混合物蒸发，并将残余物用乙醚研磨，得到白色固体(20mg)。m/z(ES+)416[M+H]⁺。¹H NMR(d₆-DMSO)δ1.36(6H，d)，3.70-3.75(3H，m)，4.07(1H，m)，4.46-4.57(3H，m)，4.89(1H，m)，5.52(1H，m)，7.28(1H，d)，7.46(1H，d)，8.05(1H，dd)，8.11(1H，dd)，8.19(2H，m)，9.66(2H，br s).

实施例5

7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-甲酸盐酸盐

向7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-甲酸(0.069g，0.13mmol)的1，4-二烷(1ml)溶液中加入4M HCl的二

烷溶液(4.0ml，16.0mmol)，并将生成的溶液在室温下搅拌1.5小时。将该混合物蒸发至干，并用乙醚研磨，得到白色固体(39mg)。m/z(ES+)430[M+H]⁺。¹H NMR(d₆-DMSO)δ1.37(6H，d)，4.39-4.56(4H，m)，4.65(1H，m)，4.89(1H，m)，7.24(1H，d)，7.45(1H，d)，8.02(1H，dd)，8.11(1H，dd)，8.14(1H，d)，8.18(1H，d).

实施例6

3-[7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-3-基]丙酸盐酸盐

将3-(7-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-3-基)丙酸(0.101g，0.181mmol)溶于4M HCl的二烷溶液(3.0ml，12.0mmol)中，并在室温下搅拌1小时，期间生成固体。将其过滤，然后用二

烷和乙醚洗涤，得到白色固体(55mg)。m/z(ES+)458[M+H]⁺。¹H NMR(d₄-MeOD)δ1.42(6H，d)，2.00(2H，m)，2.61(2H，m)，3.86(1H，m)，4.02(1H，m)，4.55(2H，s)，4.59(1H，m)4.84(1H，m)，7.30(2H，m)，8.11(1H，dd)，8.15(1H，dd)，8.20(2H，m).

实施例7

[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸盐酸盐

将4.0M氯化氢的二

烷溶液(2ml)加入到(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)乙酸钠盐(制备例36)(90mg，0.17mmol)的二

烷(1mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入乙醚(10ml)，并将该混合物搅拌10分钟。将沉淀物滤出，用乙醚洗涤，并干燥，得到标题化合物，为无色固体(70mg)。δH(400MHz，d₆DMSO)1.37(6H，d)，3.1-3.7(4H，m)(包括水峰)，4.16-4.27(1H，m)，4.34-4.45(1H，m)，4.89(1H，m)，4.97-5.03(1H，m)，7.35-7.41(1H，dd)，7.46(1H，d)，7.61(1H，d)，7.96(1H，d)，8.11(1H，d)，8.18(1H，s)，10.00(2H，br s)，12.80(1H，br s).MS(ES)C₂₂H₂₂ ³⁵ClN₃O₅计算值443；实测值444[M+H]⁺。

实施例8

[9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基]乙酸.

将4.0M氯化氢的二

烷溶液(2ml，8mmol)加入到搅拌下的(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)乙酸(制备例38)(150mg，0.28mmol)的无水二

烷(2ml)溶液中，并将该混合物在室温下搅拌4小时。加入乙醚(10ml)，得到无色固体。将该固体滤出，并用乙醚洗涤，然后通过MDAP纯化，得到产物，为无色固体(78mg)。δH(400MHz，d₆DMSO)1.39(6H，d)，2.66-2.74(1H，m)，2.77-2.86(1H，m)，2.98-3.04(1H，m)，3.94(1H，m)，4.09-4.15(1H，m)，4.40-4.47(1H，m)，4.98(1H，m)，7.26(1H，dd)，7.44(1H，d)，7.56(1H，d)，7.80(1H，d)，8.40(1H，m)，8.51(1H，m).MS(ES)C₂₃H₂₂N₄O₅计算值434；实测值435[M+H]⁺。

实施例9

[9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸

将4.0M氯化氢的二烷溶液(2ml，8mmol)加入到搅拌下的(9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基)乙酸(制备例40)(250mg，0.46mmol)的无水二烷(2mL)溶液中，并在室温下搅拌4小时。加入乙醚(10ml)，得到无色固体，将其滤出，并用乙醚洗涤。将该固体通过MDAP纯化，得到标题化合物，为无色固体(169mg)。δH(400MHz，d₆DMSO)1.39(6H，d)，2.66-2.73(1H，m)，2.77-2.85(1H，m)，3.07-3.14(1H，m)，3.93-4.00(1H，m)，4.08-4.16(1H，m)，4.40-4.06(1H，m)，5.45(1H，m)，7.26(1H，dd)，7.44(1H，m)，7.80(1H，m)，8.54(1H，d)，8.93(1H，d).MS(ES)C₂₁H₂₁ ³⁵ClN₄O₅计算值444；实测值445[M+H]⁺。

实施例10

4-[9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丁酸盐酸盐

将4M HCl的二

烷溶液(1ml)加入到搅拌下的4-(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基)丁酸(制备例49)(80mg，0.14mmol)的二

烷(2mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的4M HCl的二烷溶液(1ml)，并将该混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将无水的乙醚(2ml)加入到残余物中，并将混合物搅拌30分钟。轻轻倒出上清液，并将无水乙醚(2ml)加入到残余物中。搅拌30分钟后，将该固体滤出，得到标题化合物，为无色固体(37mg)

δH(400MHz，d₆DMSO)1.20-1.30(1H，m)，1.39(6H，d)，1.50-1.60(1H，m)，2.00-2.15(2H，m)，2.30(2H，t)，3.35-3.45(1H，m)3.60-3.75(1H，m)，4.00-4.10(1H，m)，4.45-4.55(1H，m)，4.65-4.70(1H，m)，4.95-5.05(1H，m)，7.35(1H，dd)，7.55(1H，d)，7.70(1H，d)，7.95(1H，d)，8.45(1H，m)，8.50(1H，m)，9.50-9.80(2H，br m)，12.1(1H，br s).MS(ES)C₂₅H₂₆N₄O₅计算值462；实测值463[M+H]⁺。

实施例11

4-[9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丁酸盐酸盐

将4M HCl的二

烷溶液(1ml)加入到搅拌下的4-(9-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-

-5-基)丁酸(制备例51)(100mg，0.17mmol)的二

烷(2mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的4MHCl的二

烷溶液(1ml)，并将混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将无水乙醚(2ml)加入到该残余物中，并将混合物搅拌30分钟。轻轻倒出上清液，并将无水乙醚(2ml)加入到残余物中。搅拌30分钟后，将该固体滤出，得到标题化合物，为无色固体(21mg)。δH(400MHz，d₆DMSO)1.20-1.30(1H，m)，1.40(6H，d)，1.50-1.60(1H，m)，1.95-2.05(2H，m)，2.30(2H，t)，3.35-3.45(1H，m)3.60-3.72(1H，m)，4.00-4.10(1H，m)，4.48-4.56(1H，m)，4.65-4.70(1H，m)，5.40-5.50(1H，m)，7.40(1H，dd)，7.68-7.72(1H，m)，7.94-7.99(1H，m)，8.55(1H，d)，8.94(1H，d)，9.40-9.80(2H，br m)，12.1(1H，br s).MS(ES)C₂₃H₂₅ ³⁵ClN₄O₅计算值472；实测值473[M+H]⁺。

实施例12

4-[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丁酸盐酸盐.

将4M HCl的二

烷溶液(1ml)加入到搅拌下的4-(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)丁酸(制备例50)(60mg，0.10mmol)的二

烷(2ml)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。加入另外的4M HCl的二

烷溶液(1ml)，并在室温下继续搅拌1小时。蒸发溶剂，并将无水乙醚(2ml)加入到该残余物中，并将混合物搅拌30分钟。轻轻倒出上清液，并将无水乙醚(2ml)加入到残余物中。搅拌30分钟后，将该固体滤出，得到标题化合物，为无色固体(9mg)。δH(400MHz，d₄MeOH)1.42(6H，d)，1.43-1.55(1H，m)，1.65-1.75(1H，m)，2.10-2.20(1H，m)，2.25-2.35(1H，m)，2.40(2H，t)，3.50-3.60(1H，m)3.80-3.92(1H，m)，4.10-4.20(1H，m)，4.55-4.64(1H，m)，4.68-4.77(1H，m)，4.80-4.90(1H，m)(被H₂O部分遮蔽)，7.32(1H，d)，7.38-7.44(1H，dd)，7.62-7.68(1H，m)，8.07-8.14(2H，m)，8.20(1H，s).MS(ES)C₂₄H₂₆ ³⁵ClN₄O₅计算值471；实测值472[M+H]⁺。

实施例13

3-[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丙酸，甲酸盐

将4M HCl的二烷溶液(1ml)加入到3-(9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

-5-基)丙酸(制备例58)(25mg，0.04mmol)的无水二烷(1mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物用乙醚研磨，得到树胶状物质，将其通过MDAP纯化，得到标题化合物，为无色玻璃状物质(8mg)。

δH(400MHz，d₄MeOH)1.42(6H，d)，2.30-2.52(4H，m)，3.52-3.59(1H，m)，3.76-3.84(1H，m)，4.18-4.27(1H，m)，4.42-4.50(1H，m)，4.69-4.75(1H，m)，4.80-4.87(1H，m)，7.31(1H，d)，7.38-7.43(1H，dd)，7.58(1H，d)，8.05-8.13(2H，m)，8.19-8.21(2H，m).MS(ES)C₂₃H₂₄ ³⁵ClN₃O₇计算值457；实测值458[M+H]⁺。

实施例14

3-[9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]丙酸，甲酸盐

将4M HCl的二烷溶液(1ml)加入到3-(9-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂-5-基)丙酸(制备例59)(40mg，0.07mmol)的无水二烷(1mL)溶液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂，并将残余物用乙醚研磨，随后通过MDAP纯化，得到标题化合物，为无色玻璃状物质(13mg)。

δH(400MHz，d₄MeOH)1.45(6H，d)，2.30-2.42(3H，m)，2.47-2.55(1H，m)，3.52-3.58(1H，m)，3.80-3.88(1H，m)，4.16-4.25(1H，m)，4.47-4.55(1H，m)，4.71-4.78(1H，m)，4.92-5.00(1H，m(部分被溶剂遮蔽))，7.38-7.46(2H，m)，7.57-7.61(1H.m)，8.07-8.11(1H，m)，8.15-8.20(1H，br s)，8.39-8.44(1H，m)，8.46(1H，s).MS(ES)C₂₄H₂₄N₄O₅计算值448；实测值449[M+H]⁺。

实施例15

[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-二唑-3-基)-4-甲基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸

将[9-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-

二唑-3-基)-4-甲基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并氧氮杂

-5-基]乙酸乙酯(制备例61)(75mg，0.15mmol)、乙醇(0.5mL)和2M氢氧化钠(1ml)的混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂，并将残余物用水(5mL)稀释，并用乙醚(2mL)洗涤。将水相用冰醋酸中和，并用乙酸乙酯(2x3mL)萃取。将合并的有机萃取液干燥，并蒸发。将残余物溶于乙酸乙酯(1mL)中，并用1M氯化氢的乙醚溶液(1mL)处理。蒸发溶剂，并将残余物用乙醚研磨，得到标题化合物，为无色固体(40mg)

δH(400MHz，d₆DMSO)1.37(6H，d)，2.78(3H，br.s)，2.91-4.09(4H，m)(包括水峰)，4.29(1H，t)，4.49(1H，d)，4.89(1H，spt)，4.98(1H，br.s)，7.39(1H，t)，7.45(1H，d)，7.66(1H，d)，8.00(1H，d)，8.11(1H，d)，8.18(1H，s)，11.94(1H，br s)，12.38(1H，br s).MS(ES)C₂₃H₂₄ ³⁵ClN₃O₅计算值457；实测值458[M+H]⁺。

S1P1 GTPγS试验的膜的制备

所有膜制备的步骤都在4℃下进行。稳定表达人S1P1受体的大鼠肝癌细胞或稳定表达人S 1P3受体的大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL)生长至80％汇合，然后收集至10ml的磷酸盐缓冲液(PBS)中，并在1200rpm下离心5分钟。除去上清液后，将沉淀物(pellet)重悬浮，并在玻璃韦林氏(Waring)搅切器内在200ml的缓冲液(50mM HEPES，1mM亮肽酶素，25μg/ml杆菌肽，1mM EDTA，1mM PMSF，2μM胃蛋白酶抑制剂A)中通过两个15秒的破裂(burst)将细胞均质化。在第一次破裂后，将搅切器浸在冰中5分钟，且在最后一次破裂后，将搅切器浸在冰中10-40分钟以消散泡沫。然后将该物质在500g下旋转20分钟，并将上清液在48,000g下旋转36分钟。将沉淀物重悬于与上述相同，但不含有PMSF和胃蛋白酶抑制剂A的缓冲液中。然后将该物质强制通过0.6mm针头，制成所需的体积，(通常为初始细胞沉淀物体积的4倍)，等分试样，并在-80℃下冷冻保藏。

S1P1 GTPγS试验的另一种膜的制备

所有步骤都在4℃下进行。在玻璃韦林氏搅切器内在200ml的缓冲液(50mM HEPES，1mM亮肽酶素，25μg/ml杆菌肽，1mM EDTA，1mM PMSF，2μM胃蛋白酶抑制剂A)中通过两个15秒的破裂(burst)将细胞均质化。在第一次破裂后将搅切器浸入冰中5分钟，并在最终的破裂后，将搅切器浸在冰中10-40分钟以消散泡沫。然后将该物质在500g下旋转20分钟，将上清液在48000g下旋转36分钟。将沉淀物重悬于与上述一样但是不含PMSF和胃蛋白酶抑制剂A的缓冲液中。然后将该物质强制通过0.6mm的针头，得到所需体积(通常为初始细胞沉淀物体积的4倍)，等分试样并于-80℃冷冻储存。

S1P1 GTPγS试验

将人S1P1大鼠肝癌膜(1.5μg/孔)粘附于试验缓冲液(HEPES 20mM，MgCl₂10mM，NaCl 100mM，使用KOH 5M调节pH为7.4，还加入GDP 10μMFAC(最终试验浓度)和皂苷90μg/ml FAC)中的麦胚凝集素(WGA)涂覆的闪烁迫近测定(SPA)珠上(0.125mg/孔)。

于冰上预偶联30分钟后，将珠与膜悬浮液分加至白色Greiner聚丙烯LV384孔板中(5μl/孔)，其中含有0.1μl的化合物。然后将用试验缓冲液制成的5μg/孔的[³⁵S]-GTPγS(0.5nM最终放射性配体浓度)加至激动剂板上。然后在1000rpm下离心最终的试验混合物(cocktail)(10.1μl)5分钟，立即在Viewlux读出器上读数。

将所有的测试化合物以10mM的浓度溶于DMSO中，并使用四倍(1 in 4)稀释步骤用100％DMSO制备，得到11点的剂量反应曲线。将稀释液转移至测定板上，确保DMSO浓度对于所有试验在整个板上是恒定的。

所有数据都对各板上16个高和16个低对照孔的平均值标准化。然后应用四参数曲线拟合。

S1p1 GTPγS试验的另一方法

将表达S₁P₁的RH7777膜(1.5μg/孔)通过23G针头来均质化。然后将它们粘附于试验缓冲液(HEPES 20mM，MgCl₂ 10mM，NaCl 100mM，使用KOH 5M调节pH为7.4)中的WGA-涂覆的SPA珠上(0.125mg/孔)。还加入GDP 10μM FAC和皂苷90μg/ml FAC。

于冰上预偶联30分钟后，将珠与膜悬浮液分加至白色Greiner聚丙烯LV 384孔板中(5μl/孔)，其中含有0.1μl的化合物。然后将用试验缓冲液制成的5μg/孔的[³⁵S]-GTPγS(对于S₁P₁，最终放射性配体浓度为0.5nM；对于S₁P₃，最终放射性配体浓度为0.3nM)加至板上。然后将最终的试验混合物(cocktail)(10.1μl)密封，在离心机上旋转，然后在Viewlux仪器上直接读数。

本发明的实施例化合物的pEC50＞5。实施例4-7和9-14的化合物的pEC50＞7。实施例6和12-14化合物的pEC50＞8。

S1P3

将来自大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3)的S1P3膜(1.5μg/孔)粘附于试验缓冲液(HEPES 20mM，MgCl₂3mM，NaCl 100mM，使用KOH 5M调节pH为7.4，还加入GDP 10μM FAC和皂苷90μg/ml FAC)中的WGA-涂覆的SPA珠上(0.125mg/孔)。

于冰上预偶联30分钟后，将珠与膜悬浮液分加至白色Greiner聚丙烯LV384孔板中(5μl/孔)，其中含有0.1μl的化合物。然后将用试验缓冲液制成的5μg/孔的[³⁵S]-GTPγS(0.5nM的最终放射性配体浓度)加至激动剂板上。在1000rpm下离心最终的试验混合物(10.1μl)5分钟，然后立即在Viewlux读出器上读数。

将所有的测试化合物以10mM的浓度溶于DMSO中，并使用四倍(1 in 4)稀释步骤在100％DMSO中制备，得到11点的剂量反应曲线。将稀释液转移至测定板上，确保DMSO浓度对于所有试验在整个板上是恒定的。

S1P3 GTPγS试验的另一方法

将表达S₁P₃的RBL膜(1.5μg/孔)通过23G针头来均质化。然后将它们粘附于试验缓冲液(HEPES 20mM，MgCl₂10mM，NaCl 100mM，使用KOH5M调节pH为7.4)中的WGA-涂覆的SPA珠上(0.125mg/孔)。还加入GDP 10μM FAC和皂苷90μg/ml FAC

于冰上预偶联30分钟后，将珠与膜悬浮液分加至白色Greiner聚丙烯LV384孔板中(5μl/孔)，其中含有0.1μl的化合物。然后将用试验缓冲液制成的5μg/孔的[³⁵S]-GTPγS(对于S₁P₁，最终放射性配体浓度为0.5nM；对于S₁P₃，最终放射性配体浓度为0.3nM)加至板上。然后将最终的试验混合物(10.1μl)密封，在离心机上旋转，然后在Viewlux仪器上直接读数。

实施例化合物具有pEC50＜7，很多化合物具有pEC50＜6。实施例1-3、7-10和12-13的化合物具有pEC50＜5。