CN101940128A - 一种食药用真菌液体种子的培养方法 - Google Patents

一种食药用真菌液体种子的培养方法 Download PDF

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闫培生
朱国振
高秀君
董静
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Harbin Institute of Technology Weihai
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Abstract

本发明涉及一种食药用真菌液体种子的培养方法，首先，向装有100mL特定配方的液体培养基的250mL三角瓶中，接入10块直径为10毫米的平板菌种，在20-30℃下静止预培养1-2天后，再于20-30℃和120转/分钟下恒温摇床继续培养至8-10天，即可培养获得优良液体种子。本发明培养的液体种子的菌丝球个数和菌丝体生物量均显著增加，分别比在对照配方和培养方法下提高7-14倍和2-4倍，而且种子处于对数生长期，生活力强，是优良的液体种子。本发明可用于各种食药用真菌三角瓶液体种子的培养，以及自动发酵罐生产液体种子。培养的液体种子不仅可用于液体发酵，也可用于固体发酵，以及蘑菇栽培中。

Description

一种食药用真菌液体种子的培养方法
技术领域：
本发明涉及发酵工程领域，具体的说是一种食药用真菌液体种子的培养方法。
背景技术：
液体种子是药用真菌液体发酵的基础，是决定液体发酵成败和效果好坏的关键因素之一，优良的种子不仅能使液体发酵过程中菌丝体产量和多糖产量显著增加，而且能够缩短发酵时间，提高发酵设备的利用率；液体种子也是药用真菌固体发酵和蘑菇栽培中的优良种子，可以显著提高发菌速度，缩短发菌期，提早蘑菇收获时间和提高蘑菇产量。
以往液体种子生产中，多以菌丝体产量或菌丝球个数为单一考察对象，没有同时考察两者的生产技术；对培养基配方的选择也是从少数几种配方中筛选，没有通过数学模型进行优化，获得最佳培养基配方；对培养方法也缺少创新性。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种生活力强、菌丝体产量和菌丝球个数均显著增加的液体种子的培养方法。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：提供一种通过均匀设计数学模型优化出的培养基配方，结合静止预培养方法，培养优良液体种子。其包括如下步骤：
(1)选用的培养基配方(克/升)为葡萄糖15-35，马铃薯100-200，酵母膏15-17.5，牛肉膏12.5-17.5。制作固体培养基时，在上述配方中加入20克琼脂。
(2)从保藏的食药用真菌菌种中，无菌操作接种到平板固体培养基上，在20-30℃下恒温培养5-10天；
(3)用直径为10毫米打孔器从上述平板菌种边缘生长旺盛处打孔，取菌种10块，接种于装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中；
(4)在20-30℃下静止预培养1-2天；
(5)转入摇床中，于20-30℃和120转/分钟恒温摇床继续培养至8-10天，即可获得优良液体种子。
本发明方法所用的培养基配方与其它液体种子培养中的配方显著不同在于第一是同时以菌丝球个数和菌丝体产量两个指标为优化指标获得的，避免了单一筛选指标的缺陷；第二是经过均匀设计数学模型优化获得的配方，更科学合理；第三配方中的营养物质丰富与搭配合理，不仅为种子生长提供了充足的营养，而且为其创造了适宜的生长环境。
本发明方法与其它液体种子培养方法的另一个显著不同在于静止预培养1-2天，可显著促进菌丝体的萌发，增加生长点，从而获得菌丝球个数和菌丝体产量均显著增加、菌种生活力强的优良液体种子。
本发明生产的液体种子的菌丝球个数和菌丝体产量分别比对照培养基配方和培养方法提高7-14倍和2-4倍，而且种子处于对数旺盛生长期，生活力强。
本发明生产的液体种子不仅可用于工业化液体发酵，也可用于固体发酵，以及蘑菇栽培中。用于液体发酵生产菌丝体则可使菌丝体产量达到15.4-19.2克/升，比对照提高2.6-3.2倍。本发明适合于生产真菌优良液体种子。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种食药用真菌液体种子的培养方法，其所用培养基配方(克/升)为葡萄糖15，马铃薯100，酵母膏15，牛肉膏12.5，首先从保藏的菌种中，无菌操作接种到平板固体培养基上，在20℃下恒温培养8天；然后用直径为10毫米打孔器从上述平板菌种边缘生长旺盛处打孔，取菌种10块，接种于装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中；在20℃下静止预培养1天；最后转入摇床中，于20℃和120转/分钟恒温摇床培养10天，即可获得优良液体种子。本发明生产的液体种子中，菌丝体产量为7.4克/升，菌丝球个数为122.8个/毫升，分别比对照培养方法提高2.8倍和7.8倍，而且，菌种处于对数旺盛生长期，非常适合于作为液体种子用于大规模液体发酵或固体发酵。
实施例2
一种食药用真菌液体种子的培养方法，其所用培养基配方(克/升)为葡萄糖25，马铃薯150，酵母膏15，牛肉膏15，首先从保藏的菌种中，无菌操作接种到平板固体培养基上，在30℃下恒温培养5天；然后用直径为10毫米打孔器从上述平板菌种边缘生长旺盛处打孔，取菌种10块，接种于装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中；在30℃下静止预培养1天；最后转入摇床中，于30℃和120转/分钟恒温摇床培养8天，即可获得优良液体种子。本发明生产的液体种子中，菌丝体产量为8.3克/升，菌丝球个数为192.5个/毫升，分别比对照培养方法提高3.2倍和12.2倍，而且，菌种处于对数旺盛生长期，非常适合于作为液体种子用于大规模液体发酵或固体发酵。
实施例3
一种食药用真菌液体种子的培养方法，其所用培养基配方(克/升)为葡萄糖35，马铃薯200，酵母膏17.5，牛肉膏17.5，首先从保藏的菌种中，无菌操作接种到平板固体培养基上，在25℃下恒温培养8天；然后用直径为10毫米打孔器从上述平板菌种边缘生长旺盛处打孔，取菌种10块，接种于装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中；在25℃下静止预培养2天；最后转入摇床中，于25℃和120转/分钟恒温摇床培养9天，即可获得优良液体种子。本发明生产的液体种子中，菌丝体产量为8.8克/升，菌丝球个数为206.3个/毫升，分别比对照培养方法提高3.4倍和13.1倍，而且，菌种处于对数旺盛生长期，非常适合于作为液体种子用于大规模液体发酵或固体发酵。

Claims (3)

1.一种食药用真菌液体种子的培养方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)选用的培养基配方(克/升)为葡萄糖15-35，马铃薯100-200，酵母膏15-17.5，牛肉膏12.5-17.5；
(2)从保藏的食药用真菌菌种中，无菌操作接种到平板固体培养基上，在20-30℃下恒温培养5-10天；
(3)用直径为10毫米打孔器从上述平板菌种边缘生长旺盛处打孔，取菌种10块，接种于装有100mL液体培养基的250mL三角瓶中；
(4)在20-30℃下静止预培养1-2天；
(5)转入摇床中，于20-30℃和120转/分钟恒温摇床继续培养至8-10天，即可获得优良液体种子。
2.根据权利要求1所述的食药用真菌液体种子培养方法，其特征在于所用的培养基为固体，其组成配方(克/升)为葡萄糖15-35，马铃薯100-200，酵母膏15-17.5，牛肉膏12.5-17.5，琼脂20克。
3.根据权利要求1所述的液体种子培养方法，其特征在于所述的方法也适用于自动发酵罐发酵生产液体种子。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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