CN101917855A

CN101917855A - 治疗香蕉树叶斑病的组合物和方法

Info

Publication number: CN101917855A
Application number: CN2008801236762A
Authority: CN
Inventors: 戈登·布莱克曼; 高塞尔·博埃尔斯; 埃里克·布雷奥
Original assignee: Total Raffinage Marketing SA
Current assignee: Total Marketing Services SA
Priority date: 2007-12-31
Filing date: 2008-12-29
Publication date: 2010-12-15
Anticipated expiration: 2028-12-29
Also published as: CO6311056A2; BRPI0821326A2; PT2348867E; ES2496978T3; HN2010001292A; CN101917855B; PA8810901A1; PL2348867T3; DK2348867T3; WO2009083585A2; EP2348867A2; CR11549A; WO2009083585A3; ECSP10010313A; EP2348867B1; EP2077075A1

Abstract

本发明涉及用于治疗隐原性植物疾病的组合物、应用所述组合物的方法及其应用。更具体而言，本发明涉及用于治疗香蕉树和大蕉黑色斑病的组合物，所述组合物包含位于矿物油中的针对所述病害的活性组分。本发明还涉及使用所述组合物中含有的矿物油作为载体来将所述活性组分运送至植物中以治疗植物和果实的隐原性疾病和/或酶。

Description

治疗香蕉树叶斑病的组合物和方法

技术领域

本发明涉及用于治疗植株的隐原性疾病(cryptogamic diseases)的组合物，并涉及用于治疗所述病害和将所述组合物预防性和治疗性地应用于隐原性疾病的方法。尤其是，本发明涉及香蕉植物和大蕉(plantains)的叶斑病的治疗。

背景技术

由子囊真菌香蕉黑条叶斑病菌(Mycosphaerella fijiensis)导致的香蕉植株的黑叶斑病或黑条叶斑病和由子囊真菌香蕉黄条叶斑病菌(Mycosphaerella musicola)导致的黄叶斑病是香蕉种植中最具破坏性的叶部病害。这些侵害降低光合作用，并且如果在开花与收获之间功能叶的数量不足，则香蕉串会在未采摘时过早成熟，使得生产者无法销售它们。

通过使用各种杀真菌剂可以控制这些病害。接触性杀真菌剂在其与真菌接触时发挥作用。系统性杀真菌剂要发挥作用则必须为植物所吸收。杀真菌剂的使用还使得可以在商业种植园中有效地对抗叶斑病，但是其对环境的影响却令人担忧。尽管在基于警报信号的控制情况下进行治疗可以基本减少治疗次数，但在世界上的所有产区(即，在拉丁美洲、加勒比地区、非洲和亚洲)，香蕉黑条叶斑病菌和香蕉黄条叶斑病菌的菌株都已经对这些产品的绝大多数产生了抗性。

这些系统性杀真菌剂通常与可以是烃化合物的佐剂组合应用，该混合物以乳液的形式通过喷洒在叶子上来应用。此处，烃化合物的问题在于，这些化合物不仅对于植物具有植物毒性，而且这些烃在允许足够的光通过以使机制或光合作用不受干扰的性质方面也存在问题。

香蕉黑条叶斑病菌作用的方法包括产生可降解植物细胞壁的酶，从而使组织降解。所述降解释放细胞内容物，这些细胞内容物充当微生物生长的基质，由此使得该病害蔓延。WO 03/073858公开了一种通过抑制所述污染微生物的细胞外酶而对抗植物病害的方法。该文献显示了硼(其为硼酸形式)在抑制细胞外降解酶方面的效力。不过，以相对不溶的粉末形式获得的所述组合物是以水溶液或悬浮液的形式应用的，所述水溶液或悬浮液喷洒在其所要浸入的植物上。但是这种水溶液或悬浮液却因此而不适于以溶液的形式在空中散布。此外，证明该组合物在有效浓度时对于一些植物(小胡瓜)具有植物毒性。这是因为，试验表明，为获得理想效果需要时可使用530g/ha的剂量(使用30g/l硼酸溶液)，而这些剂量对于该植物具有负面影响。最后，未证实其对黑叶斑病有效。

文献WO 2005/074687公开了一种通过应用多烯类抗生素、优选纳他霉素来治疗香蕉植物的病害的方法。将该抗生素置于水溶液中，然后喷洒在植物上，或者使植物浸浴在该溶液中。这种抗生素的反复应用表现出出现抗性的风险，因此对于生态系统是危险的。

由文献EP 0263702、EP 0263704和EP 0263706知道，可将金属络合物引入矿物油中，这些络合物在发动机润滑油或燃料油的组合物中起到分散添加剂的作用；但是，这些油具有过高的粘度，在100℃时为2.5cSt～12cSt，也就是说在40℃时远高于15cSt，并且性质上毒性太大，以致于不能用于本发明。

因此，对用于治疗植物的隐原性疾病、特别是叶斑病的组合物存在需求，所述组合物无论采用何种散布方法(通过飞机或地面喷洒系统)都应容易散布，不会使光合作用机制减弱，能够延长所述组合物活性成分作用的持续时间，不会产生抗性，在较低剂量下有效，并且对于使用者、植物或环境无毒。具体而言，对用于治疗植物的隐原性疾病的组合物存在需求，所述组合物能够表现出硼酸的效力，而不表现出其植物毒性作用。

发明内容

本发明的目的在于提供用于治疗香蕉植物的叶斑病的组合物，所述组合物不会使引起该病害的真菌发展出抗性。本发明还涉及治疗方法，和所述组合物在收获期前的植物叶子上的应用和在香蕉串的冠部的应用。“冠部”应理解为指将香蕉从香蕉串的茎干上分离下来后留下的瘢痕。

根据第一方面，本发明涉及一种可直接应用于植物的用于治疗植物的隐原性疾病的组合物，所述组合物优选适用于香蕉植物和大蕉的叶斑病，如黑叶斑病或黄叶斑病。

所述组合物包含下述组分在矿物油中的悬浮液，所述矿物油在40℃时粘度为7cSt～15cSt，所述组分有抵抗所述病害的活性，包括硼螯合物和/或硼络合物。粘度根据1996年8月的NF EN ISO 3104标准来测量。该标准规定了一种通过测量一定体积的产品在其自重的作用下通过玻璃毛细管粘度计时的流动时间和所述同一液体的动态粘度来确定不透明和透明液体石油产品的运动粘度的方法。这些测量在不同的温度下进行，并且测量结果以mm²/s或厘斯(centistoke，cSt)给出。

所述组合物优选包含0.1体积％～50体积％的活性组分。本发明的组合物能够构成可喷洒的浆液，当其沉积在叶子表面上时将会成膜。该膜因其适当的粘度而在所治疗的植物的表面保留足够长时间，使得其中存在的活性成分渗入植物。已经发现，即使矿物油自身不渗入植物，该膜也会促进这一渗透。另外，由于这一适当的粘度，所述膜不会构成使植物正常生长所必需的光合作用过程减弱的屏障。

本发明的矿物油可以是烃的混合物，所述烃来自通过蒸馏(ASTMD1160，10mmHg)获得的石油馏分，对于所述蒸馏而言，有10％～90％的油馏出时的温度范围低于或等于50℃，并且有50％的油馏出时的中间馏出点(middle distillation point)为170℃～240℃。ASTM D1160标准规定了在10mmHg的真空下蒸馏的方法，目的是确立具有代表性、重复性和再现性的石油烃混合物的蒸馏曲线。

本发明的优选的组合物可在该组合物中包含10体积％～25体积％的活性成分。该油将被选择为不含芳香烃衍生物，优选包含少于0.1重量％的芳香烃衍生物，这使本发明的这种组合物可根据各国实施的标准而用于所有类型的农业，包括生物农业。

优选的是，所述矿物油为包含超过50重量％的15～30个碳原子的链烷烃的烃混合物。更具体而言，其包含超过50重量％的包含19～26个碳原子的链烷烃。

术语“链烷烃”应被理解为指正链烷烃和异链烷烃。在优选的形式中，本发明的矿物油还包含超过20重量％的环烷烃。

在本发明的组合物中，对所述病害具有活性的组分优选以水或油中的悬浮液或者水溶液的形式包含选自由硼螯合物、硼络合物、EDTA、抗真菌酶、壳聚糖和4-FPBA(4-甲酰苯基硼酸)及其混合物组成的组中的一种或多种成分。

螯合物为金属离子(阳离子)与螯合剂(chelating agent或chelator)之间的稳定且非电离的环状有机金属络合物。螯合物不同于简单络合物之处在于，金属可以以螯形式通过至少两个配位键连接在螯合剂上。由于这些多重键，螯合物是特别稳定的络合物。螯合剂是形成相对不溶性配位化合物且包含至少两个官能团的有机反应物。这些基团中的各基团都能通过共用电子对而与阳离子键合。这些基团形成包含5或6个原子的环。

硼螯合物可以通过硼酸与螯合剂的螯合反应而获得，所述螯合剂选自EDTA、DTPA、EDDHA、HEDTA、EDDHMA、EDDCHA、次氮基三乙酸、多胺、多元醇及其混合物。在本发明的组合物中用于螯合硼的优选的螯合剂可以是：

-乙二胺四乙酸：EDTA(C₁₀H₁₆O₈N₂)

-二亚乙基三胺五乙酸：DTPA(C₁₄H₂₃O₁₀N₃)

-乙二胺二(邻羟基苯乙酸)：EDDHA(C₁₈H₂₀O₆N₂)

-2-羟基乙二胺三乙酸：HEDTA(C₁₀H₁₈O₇N₂)

-乙二胺二(邻羟基对甲基苯乙酸)：EDDHMA(C₂₀H₂₄N₂O₆)

-乙二胺二(5-羧基-2-羟基苯乙酸)：EDDCHA(C₂₀H₂₀O₁₀N₂)

-次氮基三乙酸(NTA)

-多胺

-优选指数n为5或6的多元醇(C_nH_2n+2O_n)，和

-这些化合物的混合物。

有利的是，螯合剂为多元醇，优选C₆或C₅多元醇，优选山梨糖醇、甘露醇、糠醇或其混合物。

组合物可以包含选自由蛋白酶、糖酶(例如α-淀粉酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶)和磷脂酶及其混合物组成的组的抗真菌酶。

组合物还可以包含壳聚糖(chitosan)，所述壳聚糖由无规分布的通过β-(1-4)连接的D-葡糖胺(脱乙酰化单元)和N-乙酰基-D-葡糖胺(乙酰化单元)构成。

壳聚糖可以通过甲壳质(chitin)的化学脱乙酰化(在碱性介质中)或酶促脱乙酰化而生产，所述甲壳质是外壳的甲壳(外骨骼)和真菌的壁的组分。特别是，优选的真菌为双孢蘑菇(Agaricus bisporus)。

硼络合物可以通过硼酸与络合剂的络合反应而获得，所述络合剂选自链烷醇胺、优选乙醇胺、甲醇胺、丙醇胺及其混合物。

链烷醇胺是通式为HO-{CH₂}_n-NH₂的化合物。在本发明中，使用的链烷醇胺优选乙醇胺(n＝2)或指数n为1～6的链烷醇胺。

有利的是，所述组合物包含0.05g/l～100g/l的硼。本申请人已经观察到，出乎意料的是，组合物中硼的这种浓度是有效的，但在有效剂量下不具有植物毒性。提供螯合或络合形式的硼可以使硼在植物中的稳定性更好、使活性成分更好地渗入植物并更好地在植物中输送。

优选的是，本发明的组合物还包含表面活性剂。表面活性剂可以选自如烷基酚乙氧基化物等非离子表面活性剂，例如辛基酚乙氧基化物，优选Triton X45。

根据另一个方面，本发明涉及本发明的组合物在植物的隐原性疾病(更具体而言为香蕉植物和大蕉的叶斑病)治疗中应用的方法。

本发明的所述方法包括将组合物喷洒在叶子上和/或果实上，或者将植物或其果实浸渍在该组合物中。

所述组合物可以通过空中或地面途径散布在收获前的植物上，也可以通过在植物或果实的对污染敏感的部分(例如在收获后的香蕉串的冠部)上喷洒或浸渍而散布。

另外，本发明的所述组合物和所述方法均可以用在传统农业中和生物农业中，所述矿物油不含芳香化合物(在组合物中少于0.1重量％)并表现出可接受的生态毒性。

为使所述散布操作成为可能，将对于具有抵抗所述病害的活性的组分与矿物油乳化从而获得组合物，这一动作在散布操作之前进行。

本发明的另一主题在于，使用本发明的所述组合物中存在的矿物油作为将活性组分和/或酶运送至植物中的载体，以治疗植物和果实的隐原性疾病。

因此，所使用的矿物油的特性，特别是其粘度及其低芳香烃含量，使其成为了治疗所述病害的决定性要素，因为所述矿物油促进了活性组分与染病植物之间接触时间的延长，不会渗入植物，并且不会通过形成屏障而限制植物生长所必需的光合作用现象。因此，矿物油选自下述烃的混合物，所述混合物在40℃时粘度为7cSt～15cSt，并优选为8cSt～10cSt，且包含超过50重量％的具有15～30个碳原子的链烷烃和低于0.1重量％的芳香烃。优选的矿物油为下述矿物油：其包含超过50重量％的具有19～26个碳原子的链烷烃，且环烷烃的水平保持大于或等于20重量％。

矿物油的得到良好平衡的粘度还意味着低挥发性。其表面张力解释了叶子上的油层的较高持久性。因此可以避免造成过量消耗杀真菌剂的洗涤现象。最佳接触时间是由于与窄蒸馏范围(小于50℃)相关的均匀蒸发。活性组分的迅速渗透得益于矿物油的高链烷烃含量。该矿物油的分子结构使得能够迅速溶解于保护叶子的角质膜中。

其功能特别在于，可以在目的物(顶梢(top shoot)和展开的叶子)上均匀分布，延长接触的持续时间和提高活性组分对叶子的渗入，使得可以施用时获得更好的分布，以及通过延长真菌的潜伏时间而减缓病害的扩散。所述油的低粘度有利于产品的施用。在叶子上可形成粘性膜，使得佐剂中存在的活性组分与真菌之间良好接触，同时防止产品被雨水或灌溉水洗脱。所述矿物油绝不会提供限制光合作用机制的屏障。

将参照附图及对优选实施方式的详细描述来讨论本发明的实施方式的其它方面和优点。

附图说明

图1是在关于香蕉黑条叶斑病菌生长的为期6天的试验最后陪替氏培养皿的照片。

图2表示在烧瓶中的水性培养基中的O₂消耗(单位：mg/l)，所述烧瓶含有接种有香蕉黑条叶斑病菌的溶液并且用本领域现有技术的组合物和几种本发明的组合物处理过。

图3表示在田间进行的四个试验的病害随时间的发展(DD)。

图4和图5分别表示在田间进行的相同的四个试验中随时间推移而出现斑点的幼叶(YLS)和染病的幼叶(YLA)。

图6是表示香蕉黑条叶斑病菌在四组陪替氏培养皿中生长的图，这四组陪替氏培养皿分别是仅陪替氏培养皿、只存在矿物油、只存在硼螯合物和最后存在本发明的组合物。

图7表示在烧瓶中的水性培养基中的O₂消耗(单位：mg/l)，所述烧瓶含有接种有香蕉黑条叶斑病菌的溶液并且用几种组合物处理过。

具体实施方式

实施例1

在实验室中进行第一组试验，以筛选可用于本应用的细胞外酶的抑制剂。在陪替氏培养皿中进行试验，目的是监测真菌香蕉黑条叶斑病菌的扩散。制备含有与180g/l链烷醇胺络合并与180g/l多元醇螯合的105g/l硼的组合物A和含有与360g/l乙醇胺络合的100g/l硼的组合物B。此外，制备由56％链烷烃和44％环烷烃构成的矿物油。根据1996年8月的NFEN ISO 3104标准测量，该矿物油具有在40℃时为8.7cSt的粘度，并且由通过蒸馏而获得的石油馏分构成，对于所述蒸馏而言，在10％～90％馏出时的温度范围为16℃，并且有50％的油馏出时的中间馏出点为197℃。

本发明的组合物1包含30体积％的组合物A和70体积％的矿物油。

本发明的组合物2包含30体积％的组合物B和70体积％的矿物油。

使用的多元醇优选为C₆或C₅多元醇，并且这些多元醇优选为山梨糖醇、甘露醇及其混合物。使用的多元醇例如是基于山梨糖醇的多元醇和基于甘露醇的多元醇的混合物。

试验在以下条件下进行。将10个菌丝体片段转移至含有10ml无菌蒸馏水的试管中，并涡旋1分钟，以使其破碎。取出1ml该悬浮液，将其均匀分散在含有V8培养基的陪替氏培养皿中。将该培养物保持在20℃～25℃的温度和12/12的光照周期。所述培养基如下制备：

·琼脂(20g/l)；

·V8蔬菜汁(100ml/l蔬菜汁)；

·CaCO₃(0.2g/l)；

·软化水(900ml)。

随后使用加热板使该培养基达到80℃，以溶解琼脂。冷却该培养基，然后根据需要使用氢氧化钠使其达到pH6。之后将培养基在120℃高压灭菌20分钟。培养基冷却后，向其中加入40mg/l链霉素和60mg/l青霉素。

准备15个培养皿。在加入生长培养基之前，向上述培养皿中的5个加入1体积％的本发明的组合物1，并向另外5个中加入1体积％的本发明的组合物2。将最后5个培养皿用作对照。之后，对各培养皿接种由一片琼脂承载的香蕉黑条叶斑病菌样品。在25℃、12/12光周期下视觉观察真菌的生长。

陪替氏培养皿的试验结果如图1中所示。6天后，在左侧，观察到五个对照陪替氏培养皿中的两个，在右侧，观察到各自加入组合物1和2的两个陪替氏培养皿。组合物1被加入图1右上方的培养皿中，组合物2被加入图1右下方的培养皿中。结果是清楚的。在含有抑制剂的培养皿中未观察到真菌的扩散，而在对照培养皿中，微生物在培养基上定殖。因此，本发明的两种组合物，即组合物1和组合物2各自的存在均阻止了香蕉黑条叶斑病菌在生长培养基中的生长。

实施例2

使用不具有琼脂的相同的生长培养基进行在液体培养基中的第二试验。将该培养基在高压灭菌器中灭菌，并且向处理的样品中分别加入1体积％的在实施例1中使用的本发明的组合物1或组合物2。通过向培养基中加入1体积％的组合物1和1g/l EDTA(组合物3)来制备第三处理物。将该培养基放入配置有电子测压装置(OxiTop EC100)的封闭的无菌烧瓶中。将两个烧瓶用于各处理，并将两个烧瓶用作对照，即不对它们进行处理。对所有烧瓶接种香蕉黑条叶斑病菌，并在25℃、12/12光周期下培养。测压装置可以测量烧瓶中的氧消耗。此氧消耗可能与微生物的生长直接相关。

在液体培养基中的试验结果如图2中所示，图2表示的是含有各种组合物的烧瓶中的O₂消耗(单位：mg/l)与时间(单位：小时)的关系。在该图中，对照试验(没有处理)以倾斜45°的方块表示。

图2表示的是下述组合物对于微生物生长的作用的对比试验：

方块：组合物1(1％)；

三角：组合物2(1％)；

十字叉：组合物3＝组合物1(1％)和EDTA(1g/l)。

在第一个100小时中，四个样品中的生长是相似的。在该时段之后，对照处理中香蕉黑条叶斑病菌的发展要快得多。因此，本发明的组合物的存在抑制了微生物在液体营养液中的生长。

实施例3

还在喀麦隆进行了田间试验。这些试验在0.5公顷的土地面积上进行了4个月，每项试验使用130棵香蕉植株。以10天的间隔进行治疗。所使用的香蕉植物的栽培种为Grande Naine(Cavendish，AAA)，该品种对于黑叶斑病极其敏感。该试验可以将本发明的组合物的作用与阴性对照(未治疗)和两种阳性对照(两种常规杀真菌剂)进行比较。使用接触性杀真菌剂Penncozeb 75DG(代森锰锌)(二硫代氨基甲酸盐)和系统性杀真菌剂Impulse 800EC(螺环菌胺)(螺环缩酮胺(spiroketalamines))作为阳性对照。

本发明的组合物4包含1体积％的实施例1的组合物A(即，含有与180g/l链烷醇胺络合并与180g/l多元醇螯合的105g/l硼的组合物)、98体积％的实施例1的矿物油和1体积％的Triton X45。矿物油是在实施例1和2中使用的矿物油。其具有在40℃时为8.7cSt的粘度。其由56％的链烷烃和44％的环烷烃组成。

所应用的治疗：

·T1：未治疗；

·T2：对照1：Penncozeb 75DG(代森锰锌)2kg/公顷(1.6kg a.m./公顷)+水(20l/公顷)；

·T3：本发明的组合物4；

·T4：对照2：Impulse 800EC(螺环菌胺)，0.4l/公顷(320g a.m./公顷)+矿物油(19.61/公顷)。

使用背负式喷雾器(Stih1或Solo喷雾器)以20l/公顷来应用治疗。总土地面积为0.5公顷，并且含有805棵香蕉植株，各治疗使用130棵香蕉植株。所述治疗不重复，并且对田间随机应用。每组中的10棵植株形成详细观察的对象。

对于所观察的香蕉植株，每周确定以下三个参数的值：

·病害发展，

·染病的幼叶，和

·有斑点的幼叶。

病害发展(DD)对应于感染水平，并且以叶子总数、“顶梢”高度和叶子的病害发展级别II、III和IV为基准。根据对叶子的观察进行计算，“叶子数”-“病害期”的关系给出了如下表所示的系数：

表1

病害发展(DD)由以下表达式给出：

DD＝SEV×FER

式中，SEV＝SB-CE，其中，CE为顶梢期(发展过程中的叶子)的校正，SB为所观察的各叶子的系数之和，并且

式中，FER为叶子发出节律(foliar emission rhythm)，即在通常为7天的两组观察之间所发出的叶子数(对10棵香蕉植株所进行的平均值)。

染病的幼叶(YLA)是表现为病害1期的幼叶，有斑点的幼叶(YLS)是表现为病害4、5或6期的幼叶。当田间的健康条件改善时，最后的这两个参数提高。

试验进行了4个月的时间。治疗以下述方式进行：

表2

治疗	两次治疗之间的天数
		1	0
2	11
		3	14
4	7
		5	14
6	8
		7	12
8	8
		9	9
10	5

在田间进行试验时，实验人员不控制试验条件，因此这些结果只能根据试验的实际条件(天气条件、病害压力)来解释。对于图3～图5中所表示的田间进行的这些试验而言，应用的四次治疗(T1～T4)的结果在直至第7周或者乃至第12周都非常相似。这是因为在此期间病害压力较低。该第一试验期中所收集的结果的平均值未显示治疗之间存在显著差异。然而，由于最初的数周的结果未显示任何趋势，甚至在第一个四周中显示了阴性对照(T1-未治疗)为最佳治疗，因此对这些结果的全面解释应小心。观察发现，病害压力从第12周开始升高，其时病害的传播变大。强病害压力流行的这一时期更能代表治疗的效果。然后可以观察到以下趋势：对于参数DD(图3)和参数YLA和YLS(图4和图5)，观察发现，与阴性对照(T1)相比，使用试验组合物治疗的植株显示出较低的病害传播。此外，与使用本发明的组合物4进行的治疗T3相关的曲线类似于与系统性杀真菌剂Impulse+矿物油(T4)相关的曲线，并且优于接触性杀真菌剂Penncozeb+水(T2)的曲线。本发明的组合物因此构成了已知产品的替代物，其具有已知产品的效果，但未表现出后者的缺点。

此分析在下面的表中更加清晰地显示。若在测试所覆盖的整个时期进行观察，则治疗之间的差异微不足道，并且，使用本发明的组合物4的治疗T3，其观察结果并不更好。但是，若观察的是试验的最后一个月中的结果，则会显示出差异，并且试验组合物的结果接近图3中的观察。在试验的整个期间进行的研究的三个参数(DD、YLA、YLS)的平均值如下表3中所示。

表3

治疗	DD	YLS	YLA
				T1-未治疗的对照	2410	6.1	3.1
T2-Penncozeb	1480	6.5	3.2
				T3-组合物4(发明)	1759	6.2	3.0
T4-Impulse	1269	7.0	3.3

在试验的最后一个月中进行的研究的同样三个参数的平均值如下表4中所示。在治疗的植株与未治疗的对照之间观察到显著差异。

表4

治疗	DD	YLS	YLA
				T1-未治疗的对照	4692	4.4	2.3
T2-Penncozeb	2992	5.7	2.7
				T3-组合物4(发明)	2235	6.4	2.6
T4-Impulse	1957	7.0	2.8

实验室试验清楚显示了使用本发明的制剂控制叶斑病的实用性和潜力。这是因为，这些试验显示了对致病生物香蕉黑条叶斑病菌的抑制。田间试验的结果显示了相对于阴性对照的效果和与常规杀真菌剂相似的结果。另外，关于本发明的制剂的试验在临近包括接种香蕉黑条叶斑病菌的其它试验的点进行。通过空气传染，所述接种会对使用本发明的组合物4治疗的区域产生更大的病害压力。

所进行的试验因此显示了一定程度的有效性。由于本发明的制剂以下述方式提供，即，其作为用以并入完整的控制程序中的可选择的(alternative)控制手段而非作为当前治疗的替代手段，因此可以充分利用这一有效性。其可促成新型方案，并降低常规杀真菌剂治疗的压力。此外，它与这些治疗相比表现出了显著的优点。这是因为，本发明的制剂通过作用于致病微生物所产生的细胞外酶而非作用于微生物本身，从而限制了病害的传播。该作用方法使其与通过杀死真菌而发挥作用的常规杀真菌剂有所区别。该方法的优点在于，其可以防止真菌对于所应用的治疗发展出抗性。所述抗性的发展是当前农作物所存在的一个重要问题，特别是对香蕉植物的种植具有很大的冲击。这是因为，香蕉黑条叶斑病菌实际上已经发展出了对市场上存在的所有系统性杀真菌剂的抗性。

此外，除与当前采用的技术相同的简单应用方法之外，本发明的制剂与常规治疗相比还表现出了其它重大优点：对于使用者和环境不存在毒性。该制剂无毒、无植物毒性、可生物降解并且不具有在环境中的存留性。尤其是，其可依照欧洲标准用于生物农业之中。相对于常规杀真菌剂，使用该制剂对植物的治疗对于使用者和环境都更安全得多。

实施例4

在本实施例中，进行两种试验，以显示香蕉黑条叶斑病菌的扩散；第一试验对暴露于空气中的陪替氏培养皿进行，第二试验在封闭的烧瓶中进行以测量密闭培养基中的氧消耗。

对于在陪替氏培养皿中进行的试验，制备如实施例1中所述的组合物A和矿物油。本发明的组合物5包含50体积％的组合物A和50体积％的矿物油。

第一种试验在实施例1中所述的条件下进行。准备8个试验用培养皿。在加入生长培养基之前，向其中2个培养皿中加入0.5体积％的本发明的组合物5，向其中另外2个培养皿中加入0.25体积％的组合物A，并向其中另外2个培养皿中加入0.25体积％的矿物油。最后2个培养皿用作对照，其中仅包含菌丝体悬浮液和生长培养基。在25℃、12/12光周期下监测真菌的生长。14天后，对各陪替氏培养皿的菌丝体发生点计数，并计算各处理的平均值。试验结果如图6中所示。

含有矿物油的培养皿表现出平均起来较高的菌丝体发生(87.5个发生点)，其与对照(91)相似。含有组合物A的培养皿表现出平均起来较低的发生(22)。最后，含有本发明的组合物5的培养皿表现出最低的菌丝体发生(4.5)。最后一个处理的抑制效果大于之前的处理的效果的总和，证明了组合物A与矿物油的混合物的协同效应。

在液体培养基中的第二种试验使用相同(但不具有琼脂)的生长培养基进行。将该培养基在高压灭菌器中灭菌并封装在配备有电子测压装置(OxiTop EC100)的无菌烧瓶中，每种处理用两个烧瓶。各处理与前述关于陪替氏培养皿的实验相同。组合物A和矿物油各自以0.75体积％的比例加入，本发明的组合物5以1.5体积％的比例加入。对所有烧瓶接种香蕉黑条叶斑病菌，并在25℃、12/12光周期下培养。测压装置可以测量烧瓶中的氧消耗。此消耗可能与微生物的生长直接相关。在液体培养基中的试验结果如图7中所示。

本发明的组合物5获得了对真菌生长的最显著的抑制。矿物油仅减缓了香蕉黑条叶斑病菌开始的生长，而组合物A引起了公认高的抑制且通过与所述油的混合而显著改善了这一抑制。

Claims

1.一种用于治疗植物的隐原性疾病的组合物，其特征在于，所述组合物包含活性组分在矿物油中的悬浮液，所述矿物油根据NF EN ISO3104标准测量的粘度在40℃时为7cst～15cst，所述活性组分包含硼螯合物和/或硼络合物。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.1体积％～50体积％的所述活性组分。

3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含10体积％～25体积％的所述活性组分。

4.如前述权利要求1～3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述矿物油为烃混合物，所述烃混合物来自通过蒸馏(ASTM D160，10mmHg)获得的石油馏分，对于所述蒸馏而言，有10％～90％的油馏出时的温度范围低于或等于50℃，并且有50％的油馏出时的中间馏出点为170℃～240℃。

5.如前述权利要求1～4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述矿物油为包含超过50重量％的具有15～30个碳原子的链烷烃和低于0.1重量％的芳香烃衍生物的烃混合物。

6.如前述权利要求1～5中任一项所述的组合物，其特征在于，所述矿物油包含超过50重量％的包含19～26个碳原子的链烷烃。

7.如前述权利要求1～6中任一项所述的组合物，其特征在于，所述矿物油包含超过20重量％的环烷烃。

8.如前述权利要求1～7中任一项所述的组合物，其特征在于，所述活性组分包含选自由硼螯合物、硼络合物、EDTA、抗真菌酶、壳聚糖、4-FPBA及其混合物组成的组的一种或多种成分。

9.如前述权利要求1～8中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含0.05g/l～100g/l的硼。

10.如权利要求8或9所述的组合物，其特征在于，所述硼螯合物能够通过硼酸与螯合剂的螯合反应而获得，所述螯合剂选自EDTA、DTPA、EDDHA、HEDTA、EDDHMA、EDDCHA、次氮基三乙酸、多胺、多元醇及其混合物。

11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述螯合剂为多元醇，优选C₆或C₅多元醇，优选山梨糖醇、甘露醇、糠醇及其混合物。

12.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述硼络合物能够通过硼酸与络合剂的络合反应而获得。

13.如权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述络合剂为链烷醇胺，优选选自乙醇胺、甲醇胺、丙醇胺及其混合物。

14.如权利要求8～13中任一项所述的组合物，其特征在于，所述抗真菌酶选自由蛋白酶、如α-淀粉酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶等糖酶和磷脂酶及其混合物组成的组。

15.如前述权利要求1～14中任一项所述的组合物，其特征在于，所述壳聚糖由无规分布的通过β-(1-4)连接的D-葡糖胺(脱乙酰化单元)和N-乙酰基-D-葡糖胺(乙酰化单元)构成。

16.如前述权利要求1～15中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含非离子表面活性剂。

17.如权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述非离子表面活性剂为辛基酚乙氧基化物。

18.一种在植物的隐原性疾病的治疗中对植株应用如前述权利要求1～17中任一项所述的组合物的方法。

19.如权利要求18所述的方法，所述方法治疗香蕉植物和大蕉的叶斑病。

20.如权利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述方法包括在叶子上和/或在果实上喷洒所述组合物，或将所述植物或其果实浸渍在所述组合物中。

21.如前述权利要求18～20中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括于收获期前通过空中或地面途径在所述植物上散布所述组合物。

22.如前述权利要求18～21中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括于收获后通过在所述植物或果实对污染敏感的部分上、更具体而言在香蕉串的冠部上喷洒或浸渍而散布所述组合物。

23.如前述权利要求18～22中任一项所述的方法，其特征在于，所述组合物通过加入表面活性剂使抵抗所述病害的活性组分与所述矿物油乳化而获得，这一动作在散布之前进行。

24.如前述权利要求1～17中任一项所述的组合物在生物农业中的应用。

25.如前述权利要求1～17中任一项所述的组合物的矿物油作为载体的应用，所述载体用于将所述活性组分运送至植物中以治疗植物和果实的隐原性疾病和/或运送酶。

26.如权利要求24和25中任一项所述的应用，其特征在于，所述矿物油为包含超过50重量％的具有15～30个碳原子的链烷烃的烃混合物。

27.如前述权利要求24～26中任一项所述的应用，其特征在于，所述矿物油包含少于0.1％的芳香烃。

28.如前述权利要求24～27中任一项所述的应用，其特征在于，所述矿物油包含超过50重量％的包含19～26个碳原子的链烷烃。

29.如前述权利要求24～28中任一项所述的应用，其特征在于，所述矿物油包含超过20重量％的环烷烃。