CN101892178B - 苯系化合物兼性厌氧降解菌 - Google Patents
苯系化合物兼性厌氧降解菌 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101892178B CN101892178B CN2010101603031A CN201010160303A CN101892178B CN 101892178 B CN101892178 B CN 101892178B CN 2010101603031 A CN2010101603031 A CN 2010101603031A CN 201010160303 A CN201010160303 A CN 201010160303A CN 101892178 B CN101892178 B CN 101892178B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microbacterium
- positive
- facultative anaerobic
- benzene
- series compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于降解微生物技术领域。苯系化合物兼性厌氧降解菌，其特征是：它为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C CCTCC NO：M209284，已于2009年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M209284。菌落形态：浅黄色、圆形、半透明、边缘整齐、凹陷、表面光滑；细胞为直杆状，革兰氏染色阳性，不运动；主要生化特征：氧化酶阳性，接触酶阳性，利用葡萄糖、果糖、蔗糖，不利用麦芽糖，反硝化阳性，明胶水解阴性，兼性厌氧，在4℃～41℃生长。本发明能够在兼氧条件下降解苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯，它对浓度约为175.8mg/L的苯系化合物3d的降解率在25.9％至41.2％之间。
Description
技术领域
本发明属于降解微生物技术领域，也属于环境污染物生物处理技术领域，具体涉及一株苯系化合物兼性厌氧降解菌。
背景技术
苯系化合物是一类易挥发的芳香烃类化合物，包括苯、甲苯、乙苯、邻、间、对二甲苯等，除了存在于汽油燃料中，苯系化合物作为原材料还被广泛应用于橡胶、润滑剂、染料、洗涤剂、药品和农药的生产制造中(Romy Chakraborty，John D.Coates.2005.Hydroxylationand Carboxylation-Two Crucial Steps of Anaerobic Benzene Degradation by DechloromonasStrain RCB.Applied and environmental microbiology，Sept.2005，p.5427-5432)。苯系化合物在石油烃中含量不高然而却很受重视，是石油烃中水溶性最好的组分，沉积物-水弥散系数相对较低(Coleman，W.E.，J.W.Munch，R.P.Streicher，H.P.Ringhand，and F.C.Kopfler.1984.Identification and measurement of components in gasoline，kerosene，and no.2 fuel oil thatpartition into the aqueous phase after mixing.Arch.Environ.Contam.Toxicol.13：171-178.)，弱吸附于含水层物质，而且是可逆吸附，在地下水中易于迁移，构成了地下水中常见的有机污染物。其具有严重的致癌、致畸、致突变性，被许多国家列为优先控制污染物。
生物降解是苯系化合物自然衰减的重要机制，也是控制地下水中溶解的苯系化合物迁移的主要措施(Silvia A.Mancini，Ania C.Ulrich，Georges Lacrampe-Couloume，et al.2003.Carbonand Hydrogen Isotopic Fractionation during Anaerobic Biodegradation of Benzene.Applied andenvironmental microbiology，Jan.2003，p.191-198)。有分子氧存在的条件下，苯系化合物可以被生物降解。然而，地下水中溶解氧的快速消耗对微生物会产生大量的厌氧区，因此，在过去的二十年中许多研究都集中在苯系化合物的厌氧生物降解上，但厌氧降解机理仍然没有完全清楚。同时，厌氧苯系化合物生物降解面临着降解反应产能较低，降解不易进行彻底等问题。相比之下，兼性厌氧微生物降解苯系化合物技术更具实际意义。已有研究发现的苯系化合物降解菌主要有假单胞菌(Pseudomonas)、不动杆菌(Acinetobacter)、芽孢杆菌(Bacillus)、红球菌(Rhodococcus)、诺卡氏菌(Nocardia)、罗尔斯通氏菌(Ralstonia)、产碱杆菌(Alcaligenes)等。
发明内容
本发明的目的是提供一株苯系化合物兼性厌氧降解菌，它能够在兼氧条件下降解苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯。
本发明所提供的苯系化合物兼性厌氧降解菌，其特征是：它为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C CCTCC NO：M209284，已于2009年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号：CCTCC NO：M209284。
所述的施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的菌落形态：浅黄色、圆形、半透明、边缘整齐、凹陷、表面光滑；细胞为直杆状，革兰氏染色阳性，不运动；主要生化特征：氧化酶阳性，接触酶阳性，利用葡萄糖、果糖、蔗糖，不利用麦芽糖，反硝化阳性，明胶水解阴性，兼性厌氧，在4℃～41℃生长(不可以在60℃生长)。
所述的苯系化合物包括苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯中的任意一种或任意二种以上的混合，任意二种以上混合时为任意配比。
本发明从大庆油田某地区受原油污染的土壤中筛选分离得到一株新的施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C，它能够在兼氧条件下降解苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯，对环境适应性强，可以应用于受苯系化合物污染地下水的治理修复。为兼氧苯系化合物微生物降解机理的研究提供了重要基础，将在环境污染治理修复，特别是受苯系化合物污染地下水治理实践中发挥重要作用。
附图说明
图1为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的菌落形态图。
图2为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的PCR扩增琼脂糖电泳图(C：扩增产物，M：Marker)。
图3为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的苯系化合物72h降解性能柱状图。
图4a为pH对施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C生长的影响图。
图4b为温度对施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C生长的影响图。
图4c为含盐量对施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C生长的影响图。
具体实施方式
1一株苯系化合物兼性厌氧降解菌的筛选方法
1.1材料准备
1.1.1菌源
采集大庆油田油污区，表层以下5-10cm的土壤样品。
1.1.2培养基
无机盐分离培养基：0.42g·L-1NaNO3，0.27g·L-1NH4Cl，7.9g·L-1Na2HPO4·12H2O，1.5g·L-1KH2PO4，1.0g·L-1MgSO4·7H2O，1.0mL·L-1微量元素溶液(微量元素溶液的配比为：2.14g·L-1ZnCl2，2.5g·L-1MnCl2·4H2O，0.3g·L-1CoCl2·6H2O，0.2g·L-1CuCl2·2H2O，0.4g·L-1NaMoO4·2H2O，4.5g·L-1CaCl2·2H2O，2.9g·L-1FeCl3·6H2O，1.0g·L-1H3BO3，0.1g·L-1KI，1L去离子水)，0.472g·L-1丁二酸钠，1L蒸馏水，pH＝7.0。
琼脂培养基：1L无机盐分离培养基+20g·L-1琼脂。
LB培养基：1.0g·L-1酵母粉(YEAST EXTRACT)，2g·L-1蛋白胨(TRYPTONE)，2g·L-1NaCl，1L蒸馏水，pH＝7.0。
斜面培养基：1.0g·L-1酵母粉(YEASTEXTRACT)，2g·L-1蛋白胨(TRYPTONE)，2g·L-1NaCl，15g·L-1琼脂，1L蒸馏水，pH＝7.0。
以上培养基分别于121.5℃条件下蒸汽灭菌30mins后备用。
1.1.3实验仪器和设备
气相色谱仪：HP 6890N气相色谱(具FID检测器)；
色谱柱：HP-5毛细管柱30m×0.32mm×0.25μm；
SW-CJ-2FD超净工作台；
TGL-16A台式高速冷冻离心机；
CA-1型静音无油空气泵；
SHZ-82A气浴恒温振荡器；
LDZX-40SAI型立式自动电热压力蒸汽灭菌锅；
PHX型智能生化培养箱；
DHG-9423A型电热恒温鼓风干燥箱；
SHA-C型恒温水浴振荡器；
HH-4数显恒温水浴锅；
78-1磁力搅拌器；
海尔BCD-301W H冰箱；
Mastercycler ep gradient S银质梯度PCR仪；
UVP EC3600凝胶成像系统等。
1.2施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的分离
1.2.1菌株的驯化筛选
取5g土壤样品于50mL离心管中，用自来水洗涤，在8000r/min条件下离心5mins，共3次以去除腐殖酸。在100mL的摇瓶中加入50mL无机盐分离培养基，分析纯的苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各6.25μL，丁二酸钠23.6mg和离心洗涤的土样摇匀，用硅胶塞和Parafilm封口膜密封。在30℃、200r/min条件下振荡培养2-4天，视菌悬液的浑浊程度决定是否结束第一个周期的驯化培养。此后，取菌悬液200μL，丁二酸钠含量等梯度递减(按4个梯度，等梯度递减)，苯系化合物含量等梯度递增(按4个梯度，等梯度递减)，其他条件不变驯化培养。第四个周期时，50mL培养基中丁二酸钠含量为零，苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各50μL，得到驯化培养的菌悬液。驯化周期结束后，菌悬液中的降解菌群能够利用苯系化合物作为唯一碳源和能源。驯化条件如表1所示。
表1降解菌驯化实验条件
1.2.2菌株的分离纯化
在1.5mL灭菌的离心管中，加入驯化培养后的菌悬液50μL，无菌水1.0mL，等梯度稀释6个梯度。琼脂培养基灭菌冷却至40℃左右时，加入分析纯的苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各200μL，摇匀，快速倒平板，冷却得分离菌落用平板。将第五、第六个浓度梯度稀释的菌悬液20μL涂布平板上。将平板于30℃条件下，恒温培养3-5天。挑取长势好的一个菌落进行纯培养，得到纯培养后的菌落。
于18mm×180mm的试管中加入10mL无机盐分离培养基，加入苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各10μL，用接种环挑取纯培养后的菌落接种于其中，硅胶塞和Parafilm封口膜密封。于30℃、200r/min条件下振荡培养36小时，取菌悬液涂板，方法同上所述。纯培养2-3次，直至获得单一菌株，记为菌株HBSD-C[施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C]，观察记录平板上菌株生长状况、菌落特征。
将菌株HBSD-A(即纯化的菌种)划线接种于斜面培养基上，于4℃冰箱储存，每个月都用无机盐分离培养基和苯系化合物活化培养(即入10mL无机盐分离培养基，加入苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各10μL)、涂布平板再接种于斜面上以备后续试验用。为了长期保藏菌株HBSD-C，已于2009年11月27日将菌株HBSD-C送中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏。
2施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的鉴定
2.116S rDNA全序列测定
2.1.1细菌基因组DNA的提取(革兰氏阳性菌)
a)超净台内将分离得到的菌种HBSD-C接种于含10g·L-1葡萄糖的LB培养基(用无菌牙签蘸取)，5mL/tube×2，于37℃220rpm离心过夜。
b)超净台内将10mL菌液转移至50mL圆底离心管。4℃5000rpm离心20min。
c)弃上清，加入1.2mL 10mM Tris-Cl(三羟甲基氨基甲烷缓冲液)(PH8.0)/25％Sucrose，vortex悬浮，分装到2只1.5mL EP管(0.6mL/EP)。
d)加入10mg/mL溶菌酶(新鲜配制)，使终浓度为1mg/mL，混匀，37℃水浴10min。
e)加入200g·L-1SDS(十二烷基磺酸钠溶液)，使其终浓度为5g·L-1；加入蛋白酶K，使终浓度为100μg/mL，轻柔混匀。50℃水浴3h，期间不时颠倒混匀。
f)冷至室温，加入等体积酚/氯仿，充分颠倒混匀10min。
g)室温5000rpm离心15min，取上清。
h)重复步骤f)、步骤g)一次。
i)加入等体积氯仿，充分颠倒混匀10min。室温5000rpm离心15min，取上清。
j)两只EP合并，分至3只EP管(约0.4mL/EP)。
k)每EP管加入2体积预冷的无水乙醇和1/10体积的3M NaOAC(醋酸钠)(使其终浓度为0.3M)，-20℃沉淀2h或过夜。
l)0℃离心，最大转速(或5000rpm)，弃上清。
m)加入半管(约700μl)70％乙醇洗涤，4℃离心，最大转速(或5000rpm)，弃上清。
n)室温干燥。
o)溶于适量TE(PH7.4)(20～50μL)，加入10mg/mL RNase(RNA水解酶)，使终浓度为20μg/mL，37℃水浴2h。
p)重复酚/氯仿抽提，无水乙醇/3M NaOAC沉淀，70％乙醇洗涤。(步骤及方法同上)。
q)用适量3dH2O(灭菌三蒸水)溶解DNA沉淀。
r)-20℃保存。
2.1.216S rDNA基因的PCR扩增
a)PCR扩增引物：
P1：正向引物5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3’
P2：反向引物5’GGTTACCTTGTTACGACTT3’
b)反应体系：
在50μL反应体积中，加入1μL模板DNA(0.1μg)，0.5μL P1和P2(终浓度为0.5μM)，1μLdNTP(每种NTP0.2mM)，0.5μLTaq聚合酶(2U)和5μL 10×PCR缓冲液。PCR扩增条件为：94℃预变性5mins；在94℃变性30s，61-65℃退火30s，72℃延伸1min，循环30次；最后72℃终延伸10mins。将PCR产物以1％琼脂糖凝胶进行电泳检测。
2.1.316S rDNA全序列测定
PCR产物的纯化和测序由上海英骏生物技术有限公司完成，用Applied Biosystem 373ADNA测序仪进行测序。
本发明采用对16S rDNA全序列测定和分析的方法对细菌进行分子水平的鉴定。以细菌的核DNA为模板，以16S rDNA基因的PCR扩增的通用引物为引物，进行PCR扩增，得到长度为1420bp的扩增带(用1％琼脂糖凝胶电泳检测)，PCR产物经纯化后，测定其全序列。
序列如下：
<110>中国地质大学(武汉)
<120>苯系化合物兼性厌氧降解菌
<160>1420
<210>1
<211>1420bp
<212>DNA
<213>施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C
<400>1
1 TGGCCGCGTGCTTTACACATGCGAGTCGGACGGTGAAGCAGAGCTTGCTCTGTGGATCAG
61 TGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGCAATCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCGCTGGAA
121 ACGGCGTCTAATACCGGATACGAGCTGCGAAGGCATCTTCAGCAGCTGGAAAGAATTTCG
181 GTCAGGGATGAGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGTC
241 GACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACT
301 CCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCAACGC
361 CGCGTGAGGGACGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTAGCAGGGAAGAAGCGAAAGT
421 GACGGTACCTGCAGAAAAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAG
481 GGCGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCT
541 GCTGTGAAAACCCGAGGCTCAACCTCGGGCCTGCAGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCG
601 GTAGGGGAGATTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACC
661 GATGGCGAAGGCAGATCTCTGGGCCGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGGGTGGGGAGCA
721 AACAGGCTTAGATACCCTGGTAGTCCACCCCGTAAACGTTGGGAACTAGTTGTGGGGACC
781 ATTCCACGGTTTCCGTGACGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCG
841 CAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTA
901 ATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATATACGAGAACGGGCCAGAAAT
961 GGTCAACTCTTTGGACACTCGTAAACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTG
1021 AGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCTATGTTGCCAGCACGTAAT
1081 GGTGGGAACTCATGGGATACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAA
1141 TCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAAAGGGCTG
1201 CAATACCGTAAGGTGGAGCGAATCCCAAAAAGCCGGTCCCAGTTCGGATTGAGGTCTGCA
1261 ACTCGACCTCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATA
1321 CGTTCCGGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGTAAGTCGGTAACACCCGAAGCC
1381 GGTGGCCCAACCCTTCTGGAGGGAGCCGTCGAAGGTTGGA
根据降解菌HBSD-C的上述特性，将其鉴定为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)。
2.2菌落形态特征以及生理生化特性
2.2.1菌落形态特征
见图1。苯系化合物降解菌HBSD-C的菌落呈浅黄色、圆形、半透明、边缘整齐、凹陷、表面光滑。
2.2.2生理生化特征
生理生化性质的测定参照《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版的方法。见表2。
表2降解菌HBSD-C主要的生理生化特征
表中符号说明：“+”：90％以上的菌株为阳性，“-”：90％以上的菌株为阴性。
表2说明：细胞为直杆状，革兰氏染色阳性，不运动；主要生化特征：氧化酶阳性，接触酶阳性，利用葡萄糖、果糖、蔗糖，不利用麦芽糖，反硝化阳性，明胶水解阴性，兼性厌氧，在4℃～41℃生长(不可以在60℃生长)。
2.3施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C为新的菌株
测得的16S rDNA序列采用BLAST软件与国际GenBank数据库进行序列同源性比较，结果发现菌株与Microbacterium schleiferi(施氏微杆菌)的同源性高达99％以上。
综合菌株的生理生化以及分子鉴定结果，施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C为新的菌株(即一株苯系化合物兼性厌氧降解菌)。已于2009年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号：CCTCC NO：M209284。
3一株苯系化合物兼性厌氧降解菌的应用
3.1施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C对苯系化合物的降解性能
a)用接种环挑取斜面冷藏保存的少量施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C菌苔，接种于接种于含苯、甲苯、二甲苯和均三甲苯各10μL，无机盐分离培养基10mL的已灭菌30mL(Φ18*180mm)试管中，于30℃条件下恒温振荡活化培养36h后，得到活化培养的菌悬液；
b)将100mL摇瓶经灭菌冷却至常温后，在超净台内，加入50mL无机盐分离培养基，分析纯的苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯各10μL，活化培养的菌悬液50μL，硅胶塞和Parafilm封口膜密封。单一苯系化合物初始浓度约为175.8mg/L，同时设不接种的空白样；
c)将实验样和空白样于30℃恒温水浴振荡培养；
d)72h后，对培养后的实验样和培养后的空白样中四种苯系化合物的含量用顶空——气相色谱法进行测定。测试前，将样品在60℃、200r/min条件下平衡30mins。测试条件为HP6890N气相色谱仪，带FID，色谱柱为HP-530m×0.32mm×0.25μm毛细管柱，高纯氮气做载气。柱温：初始温度40℃，保持1min，以6℃/min的速度升温至80℃，保持4min；检测室温度：250℃；汽化室温度：220℃。取100μL顶空气体进样。
苯系化合物降解实验结果如表3和图3所示。
表3兼氧降解菌HBSD-C对苯系化合物72h的降解率
表3说明：一株苯系化合物兼性厌氧降解菌能够它能够在兼氧条件下降解苯、甲苯、二甲苯和均三甲苯，对环境适应性强。
3.2用施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C对受苯系化合物污染地下水的处理
采集大庆油田油污区受苯系化合物污染地下水500mL(即水样)，将水样于4℃条件下密封保存，2周内分析测试。经测定该受苯系化合物污染地下水中苯、甲苯、邻二甲苯和均三甲苯含量分别为12.546mg/L、4.152mg/L、7.213mg/L、5.976mg/L。
a)用接种环挑取斜面冷藏保存的少量施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C菌苔，接种于含苯、甲苯、二甲苯和均三甲苯各10μL，无机盐分离培养基10mL的已灭菌30mL(Φ18*180mm)试管中，于30℃条件下恒温振荡活化培养36h后，得到活化的菌悬液；
b)将100mL摇瓶经灭菌冷却至常温后，加入50mL受苯系化合物污染地下水，活化的菌悬液50μL，硅胶塞和Parafilm封口膜密封，得到实验水样；同时设不接种的空白水样；
c)将实验水样于30℃恒温水浴振荡培养；将空白样于30℃恒温水浴振荡培养。
d)72h后，对培养后的实验水样(得到降解后的地下水)和培养后的空白样中四种苯系化合物的含量用顶空——气相色谱法进行测定。测试前，将样品在60℃、200r/min条件下平衡30mins。测试条件同上所述。
苯系化合物降解效果如表4所示。
表4兼氧降解菌HBSD-C对苯系化合物72h的降解率
3.3施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C最适生长的基本条件实验
a)为了考察在不同温度、不同pH、不同含盐量条件下，菌株HBSD-C的生长情况，在其他实验条件相同的情况下，分别调节LB培养基的温度为4℃、15℃、25℃、40℃；pH为4、5、7、9；含盐量为1％、2％、3％、4％，每隔24小时测定培养液的光密度值OD600。实验结果如图4a至图4c。
b)从图4a可以看出，菌株HBSD-C在4℃环境中生长缓慢，而在15℃、25℃、40℃条件下的OD600值均较高，最适生长温度在25℃左右；从图4b可以看出，菌株在酸性环境中生长情况微弱，而在pH7～9的中性及弱碱性环境中均能较好的生长；从图4c可以看出，降解菌在1％、2％、3％、4％的盐度中均能生长，各种生长情况差异不大，适宜在1％～2％相对较低的盐度环境生长。
一株苯系化合物兼性厌氧降解菌的全序列
<110>中国地质大学(武汉)
<120>一株苯系化合物兼性厌氧降解菌
<160>1403
<210>1
<211>1403bp
<212>DNA
<213>松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)HBSD-A
<400>1
1 CCGGCTAGAATGCAGTCGAGCGAAGTACGAGTAGCTTGCTTCTCTGATGTTAGCGGCGGA
61 CGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTACCTATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGG
121 CTAATACCGGATAATATTTTGAACCGCATGGTTCAATAGTGAAAGACGGTTTCGGCTGTC
181 ACTTATAGATGGACCCGCGCCGTATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCGA
241 CGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGAC
301 TCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGGAGCAACG
361 CCGCGTGAGTGATGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAATTT
421 GTTAGTAACTGAACAAGTCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCC
481 AGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCG
541 CGTAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGG
601 AAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGC
661 GCAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGA
721 TGTGCGAAAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGA
781 TGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACT
841 CCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAA
901 GCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATC
961 CTTTGACCGCTCTAGAGATAGAGTCTTCCCCTTCGGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCAT
1021 GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTT
1081 AAGCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGGTTGACTGCCGGTGACAAACCGGAG
1141 GAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTAC
1201 AATGGATAATACAAAGGGCAGCGAATCCGCGAGGCCAAGCAAATCCCATAAAATTATTCT
1261 CAGTTCGGATTGTAGTCTGCAACTCGACTACATGAAGCTGGAATAGCTAGTAATCGTAGA
1321 TCAGCATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAG
1381 AGTTTGTAACACCCGAAGCCGGT
Claims (3)
1.苯系化合物兼性厌氧降解菌，其特征是：它为施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C，已于2009年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M209284。
2.根据权利要求1所述的苯系化合物兼性厌氧降解菌，其特征是：所述的施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的菌落形态：浅黄色、圆形、半透明、边缘整齐、凹陷、表面光滑；细胞为直杆状，革兰氏染色阳性，不运动；主要生化特征：氧化酶阳性，接触酶阳性，利用葡萄糖、果糖、蔗糖，不利用麦芽糖，反硝化阳性，明胶水解阴性，兼性厌氧，在4℃～41℃生长。
3.根据权利要求1所述的苯系化合物兼性厌氧降解菌，其特征是：所述的施氏微杆菌(Microbacterium schleiferi)HBSD-C的全序列如下：
1 TGGCCGCGTGCTTTACACATGCGAGTCGGACGGTGAAGCAGAGCTTGCTCTGTGGATCAG
61 TGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGCAATCTGCCCCTGACTCTGGGATAAGCGCTGGAA
121 ACGGCGTCTAATACCGGATACGAGCTGCGAAGGCATCTTCAGCAGCTGGAAAGAATTTCG
181 GTCAGGGATGAGCTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGTC
241 GACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACT
301 CCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCAACGC
361 CGCGTGAGGGACGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTAGCAGGGAAGAAGCGAAAGT
421 GACGGTACCTGCAGAAAAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAG
481 GGCGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCT
541 GCTGTGAAAACCCGAGGCTCAACCTCGGGCCTGCAGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCG
601 GTAGGGGAGATTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACC
661 GATGGCGAAGGCAGATCTCTGGGCCGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGGGTGGGGAGCA
721 AACAGGCTTAGATACCCTGGTAGTCCACCCCGTAAACGTTGGGAACTAGTTGTGGGGACC
781 ATTCCACGGTTTCCGTGACGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCG
841 CAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTA
901 ATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATATACGAGAACGGGCCAGAAAT
961 GGTCAACTCTTTGGACACTCGTAAACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTG
1021 AGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCTATGTTGCCAGCACGTAAT
1081 GGTGGGAACTCATGGGATACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAA
1141 TCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAAAGGGCTG
1201 CAATACCGTAAGGTGGAGCGAATCCCAAAAAGCCGGTCCCAGTTCGGATTGAGGTCTGCA
1261 ACTCGACCTCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATA
1321 CGTTCCGGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGTAAGTCGGTAACACCCGAAGCC
1381 GGTGGCCCAACCCTTCTGGAGGGAGCCGTCGAAGGTTGGA。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101603031A CN101892178B (zh) | 2010-04-23 | 2010-04-23 | 苯系化合物兼性厌氧降解菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101603031A CN101892178B (zh) | 2010-04-23 | 2010-04-23 | 苯系化合物兼性厌氧降解菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101892178A CN101892178A (zh) | 2010-11-24 |
| CN101892178B true CN101892178B (zh) | 2011-11-02 |
Family
ID=43101526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101603031A Expired - Fee Related CN101892178B (zh) | 2010-04-23 | 2010-04-23 | 苯系化合物兼性厌氧降解菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101892178B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104774785B (zh) * | 2015-03-15 | 2019-05-24 | 盐城工学院 | 一种油性漆废水降解菌及其筛选富集方法 |
| CN107416958A (zh) * | 2015-09-17 | 2017-12-01 | 温州泓呈祥科技有限公司 | 去除醇酸树脂车间废水中对二甲苯、邻二甲苯和间二甲苯的方法 |
| CN105084497A (zh) * | 2015-09-17 | 2015-11-25 | 温州泓呈祥科技有限公司 | 一种去除醇酸树脂车间废水中三甲苯的处理剂 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4843009A (en) * | 1986-05-23 | 1989-06-27 | General Electric Company | Pseudomonas putide capable of degrading PCBs |
| CN101153271A (zh) * | 2006-09-27 | 2008-04-02 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种修复有机污染水体的菌剂及其制备和使用方法 |
-
2010
- 2010-04-23 CN CN2010101603031A patent/CN101892178B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4843009A (en) * | 1986-05-23 | 1989-06-27 | General Electric Company | Pseudomonas putide capable of degrading PCBs |
| CN101153271A (zh) * | 2006-09-27 | 2008-04-02 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种修复有机污染水体的菌剂及其制备和使用方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101892178A (zh) | 2010-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102277312A (zh) | 一株低温降解多环芳烃菌株及其在石油烃污染场地地下水生物修复中的应用 | |
| CN106434470B (zh) | 一种多环芳烃降解菌及其应用 | |
| CN106635908B (zh) | 一种海洋石油降解菌、菌剂及其应用 | |
| CN106635909B (zh) | 一种原油降解混合菌、菌剂及其应用 | |
| CN106497810B (zh) | 一种嗜麦芽寡养单胞菌、含有该菌的菌剂及其应用和降解柴油的方法 | |
| CN104651280B (zh) | 一种石油降解菌p‑6及其应用 | |
| CN110283741A (zh) | 一株具有高效降解多环芳烃功能的玫瑰杆菌及其应用 | |
| CN111733098B (zh) | 一种芽孢杆菌在低温降解石油烃中的应用 | |
| CN110283755A (zh) | 一株土地戈登氏菌rl-jc02及其在降解有机污染物方面的应用 | |
| CN101892178B (zh) | 苯系化合物兼性厌氧降解菌 | |
| CN104789506B (zh) | 一株可降解盐环境中多环芳烃的海旋菌及其应用 | |
| CN105695360B (zh) | 一种菲降解菌Acinetobacter tandoii LJ-5及其应用 | |
| CN114540226B (zh) | 石油污染土壤中多环芳烃降解菌株ljb-25及其菌剂和应用 | |
| CN101935631B (zh) | 罗尔斯通氏菌株及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用 | |
| CN103881947A (zh) | 一株形成生物膜的缺陷短波单胞菌及其在含氰废水处理中的应用 | |
| CN105316269B (zh) | 一株耐受微氧和高盐环境的铜绿假单胞菌及其在降解石油中的应用 | |
| CN101891305B (zh) | 苯系化合物兼性厌氧降解菌的应用 | |
| CN101892179B (zh) | 一株苯系化合物兼性厌氧降解菌 | |
| CN101891301B (zh) | 一株苯系化合物兼性厌氧降解菌的应用 | |
| Sorkhoh et al. | Agarolytic bacteria with hydrocarbon-utilization potential in fouling material from the Arabian Gulf coast | |
| CN108676763A (zh) | 一种高耐锑卡氏变形杆菌dshn0704及其分离筛选方法和应用 | |
| CN110591972B (zh) | 一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用 | |
| CN106811426A (zh) | 用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌菌株、培养方法及应用 | |
| CN106434413B (zh) | 一种植生拉乌尔菌以及利用该菌降解土壤中芘的方法 | |
| CN110317745A (zh) | Ralstonia pickettii M1菌株及其在降解菲和联苯中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20111102 Termination date: 20170423 |