CN101890009B - 一种新型抗肿瘤细胞化合物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新型抗肿瘤细胞耐药的化合物(B1)的新用途，即应用此化合物使得Bcl-2高表达的肿瘤细胞的作用不受Bcl-2抗凋亡蛋白高表达的影响，而且该化合物对Bcl-2高表达的肿瘤细胞的杀伤能力与其亲本肿瘤细胞基本一致，具有较低毒性，因此具有很好的临床应用前景。

Description

一种新型抗肿瘤细胞化合物的用途

技术领域

本发明涉及萘酰亚胺类化合物的用途，尤其涉及抗肿瘤细胞化合物B1化合物用以耐药的作用。

背景技术

化疗是治疗肿瘤的主要手段之一，肿瘤细胞产生的多药耐药已成为当前影响肿瘤化学治疗疗效的主要障碍，有关资料统计，90％以上肿瘤患者死因或多或少都与耐药有关。近年来，细胞凋亡与多药耐药及肿瘤细胞的抗药性的关系日益受到人们的关注，研究发现抑制凋亡与耐药的形成存在一定的关系。细胞凋亡过程受到许多癌基因调控，如p53基因及Bcl-2家族等。Bcl-2基因为一抑制细胞凋亡的原癌基因，同时也是一种耐药基因。当Bcl-2蛋白过度表达时，可引起细胞不死亡或病死率下降的抗凋亡作用，从而对抗药物的治疗作用，使化疗药物失去效果。即Bcl-2导致耐药主要是通过抑制肿瘤细胞的凋亡途径而完成。促凋亡基因中Bax功能与Bcl-2相反，当Bax增加时自身可形成同源二聚体，致使细胞凋亡加速，肿瘤细胞对化疗药物敏感性增强。当Bcl-2表达增加，Bax同源二聚体解离，形成Bcl-2/Bax异源二聚体，抑制了Bax-Bax同源二聚体的细胞凋亡作用，从而肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性。临床上遇到这种情况通常是以更换治疗方案为对策(如间断用药，替换用药，联合用药等)，但因为多数患者是多药耐药，所以更换方案后往往效果亦不佳，最终导致化疗失败。因此寻找低毒有效的抗肿瘤细胞耐药的化合物是提高化疗疗效的一个重要方法。

萘酰亚胺类化合物B1，是一种新型的DNA嵌入剂。该化合物已被报道能通过激发p53基因的信号通路诱导肿瘤细胞周期阻滞及凋亡，达到抗肿瘤的目的。但是，化合物B1在抗肿瘤细胞耐药方面的应用，还未见报道。

发明内容

为了解决上述肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性的问题，本发明的目的是提供了萘酰亚胺类化合物B1的一种新用途，即克服Bcl-2高表达引起的多药耐药的作用。

本发明所采用的化合物B1是由实验室化学合成，结构式如下所示：

上述化合物B1用以抗肿瘤细胞耐药性。

进一步，所述耐药性为Bcl-2高表达的肿瘤细胞所产生的耐药性。

进一步，所述的耐药肿瘤为良性肿瘤或恶性肿瘤。

进一步，所述肿瘤为：恶性黑色素瘤，或恶性淋巴瘤，或消化器官的肿瘤，或肺癌，或乳癌，或睾丸癌，或卵巢癌，或子宫癌，或前列腺癌，或上颚癌，或舌癌，或口腔癌，或咽喉癌，或甲状腺癌，或脑部肿瘤，或骨肉瘤，或白血病，或神经系统肿瘤，或膀胱肿瘤，或皮肤癌，或皮肤附属器官癌，或皮肤转移癌。

进一步，所述消化器官的肿瘤为：胃癌，或肠癌，或肝癌，或胆囊癌，或胆道癌，或胰腺癌。

进一步，该化合物B1用以制备具有抗肿瘤细胞耐药性的抗肿瘤药物。

进一步，所述药物的制剂形式包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。

且该种萘酰亚胺类化合物B1低毒，适合于人和哺乳类动物经口和非经口给药。

且该种萘酰亚胺类化合物B1的剂型无特定的限制，可作为经口给药的散剂，丸剂，片剂，胶囊剂等固型制剂，也可作为非经口给药的外用剂，软膏，贴敷剂，注射剂。

且该种萘酰亚胺类化合物B1，通常能与不影响药理学作用的辅助料配合制成经口和非经口给药的制剂。

且该种萘酰亚胺类化合物B1，可经水溶剂(如蒸留水)，水溶性制剂(如生理盐水)脂溶剂(如胡麻油)等的溶剂用常规法调制。

且该种萘酰亚胺类化合物B1，通常能与药理学上允许的添加成分(稀释剂，着色剂，安定剂，界面活性剂，助溶剂，缓冲剂，矫味剂，香料，保存剂，糖衣剂)相组合，用于经口和非经口剂型。

且该种萘酰亚胺类化合物B1，在剂型上通常能与药理学上允许的稀释成分和成型成分相组合，用于经口和非经口剂型。

且该种萘酰亚胺类化合物B1经口剂型，是指片剂，丸剂，颗粒剂，散剂和胶囊。非经口剂是指静脉注射剂，肌肉注射剂和皮下注射剂，浴剂，直肠，肛门和阴道给药。

本发明所述的萘酰亚胺类化合物B1抗肿瘤细胞耐药的作用的有益效果如下：(1)具有临床应用前景，萘酰亚胺类化合物B1可杀伤Bcl-2高表达的肿瘤细胞，其药效不受常规耐药机理影响，对HL60/Bcl-2细胞的杀伤能力与HL60细胞基本一致。(2)该化合物具有较低的毒性，因此具有较好的临床肿瘤化疗、尤其是抗临床肿瘤多药耐药的应用前景。

附图说明

图1是萘酰亚胺类化合物B1对肿瘤细胞形态的影响。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例做进一步的说明。

为进一步了解本发明，下面结合具体实施例作进一步说明。

实施例1萘酰亚胺类化合物B1能克服Bcl-2高表达引起的肿瘤细胞耐药

实验材料：

HL60细胞株购自中国科学研究院细胞所。质粒pSFFV-neo，pSFFV-neo Bcl-2购自美国Addgene公司。真核转染pSFFV-neo Bcl-2质粒，G418筛选得到HL60的Bcl-2高表达株。萘酰亚胺类化合物B1由实验室合成。噻唑蓝(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT)购自Sigma公司。

对照组、载体组的处理作下说明：

对照组：细胞加入RPMI 1640培养液

实验方法：

(1)先将对数生长期细胞2×10⁵cell/ml接种于96孔培养板，每孔0.1ml，培养6小时。

(2)实验组加入含浓度范围在0-5μM的药物的RPMI 1640培养液，对照组则用等体积的培养液，每组设3个以上的平行孔，置37℃，5％CO₂及饱和湿度的培养箱培养48h。

(3)培养结束后，吸弃上清，然后每孔加入100μl的含5mg/ml的MTT，37℃继续培养4小时。

(4)小心吸弃上清，每孔加入100μl的DMSO溶解甲臜，振荡10min，待MTT还原产物完全溶解，在酶标议上用波长为570nm，参比波长为630nm测定光密度(OD)值，计算细胞的生长抑制率。

(5)数据处理：

实验结果：

药物作用48小时，萘酰亚胺类化合物B1对HL60/Bcl-2和HL60细胞株的IC50非常接近，说明该化合物能克服由Bcl-2高表达引起的肿瘤细胞耐药。

表1萘酰亚胺类化合物B1对HL60、HL60/vector、HL60/Bcl-2的IC50

实施例2萘酰亚胺类化合物B1诱导肿瘤细胞形态的改变

实验材料：

Hoechst33258购自上海美季生物技术有限公司。

实验方法：

(1)对数生长期细胞2×10⁵个/ml接种于24孔板，立刻加药，对照组加等量体积的RPMI1640培养液。

(2)处理36小时后离心，倒去上层RPMI 1640培养基，用PBS洗2次，离心去上清(1500rpm，5min)。

(3)加固定液(甲醇∶乙酸＝3∶1)，4℃固定10min。

(4)Hoechst 33258(5μl/ml)染色，5min。

(5)356nm紫外激发，荧光显微镜下观察并照相。

实验结果：

HL60细胞及HL60/Bcl-2细胞经0.3μMB1作用48小时后，Hoechst染色，细胞呈现核染色质浓缩、核碎裂以及出现凋亡小体等典型的细胞凋亡特征(图1)。对照组和载体组细胞均无形态学变化，所发荧光较均匀(图1)。

实施例3萘酰亚胺类化合物B1诱导HL60及HL60/Bcl-2细胞凋亡

实验材料：

Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒购自上海美季生物技术有限公司。

实验方法：

(1)1×10⁶个细胞用0.3μMB1处理48小时；

(2)1000g(约1000-2000rpm)离心5min，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞；

(3)重悬的细胞，1000g离心5min，弃上清，加入195μl Annexin V-FITC结合液(1X)轻轻重悬细胞；

(4)加入5μl Annexin V-FITC，轻轻混匀；

(5)室温(20-25℃)避光孵育10min，可以使用铝箔进行避光；

(6)1000g离心5min，弃上清，加入190μl Annexin V-FITC结合液(1X)轻轻重悬细胞；

(7)加入10μl碘化丙啶染色液，轻轻混匀，冰浴避光放置；

(8)随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光，激发波长Ex＝488nm；发射波长Em＝530nm

实验结果：

如表2所示，0.3gM B1分别作用HL60、HL60/vector和HL60/Bcl-2细胞48小时后，其凋亡率均达到50％以上。

表2萘酰亚胺类化合物B1处理HL60、HL60/vector、HL60/Bcl-2后的凋亡率

以上实例说明：萘酰亚胺类化合物B1能够克服Bcl-2高表达引起的多药耐药，且对HL60/Bcl-2细胞的杀伤能力与HL60细胞基本一致。

Claims (2)

1.一种新型抗肿瘤细胞化合物的用途，该抗肿瘤细胞化合物B1结构式如下

其特征在于：该化合物B1用以制备具有抗肿瘤细胞耐药性的抗肿瘤药物。

2.如权利要求6的新型抗肿瘤细胞化合物的用途，其特征在于，所述药物的制剂形式包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。