CN107929290A - 一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用，所述纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素。本发明提供的纳米药物能够在水溶液中很好的分散，在病变部位能够更快更多的释放出有效的药物分子，实现靶向性的目的；并且细胞实验表明，相对比单独用药而言，本发明提供的纳米药物可以被癌细胞更多的摄入来达到高效作用的目的。

Description

一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法 和应用
技术领域
本发明属于药物领域，涉及一种纳米药物及其制备方法和应用，尤其涉及一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用。
背景技术
癌症现在依然是全球最严重的疾病之一，在过去的几十年里，癌症治疗取得了巨大的进步，在这些治疗方案里，利用化疗药物进行术后化疗已经成为大多数癌症治疗的主要策略。不幸的是，化疗药物在治疗的过程中表现出了一定的局限性，如非特异性分布、生物利用度低以及对正常组织的毒性大等。
为了保留化疗药物的高效抗癌活性，同时减少其对机体其他部位的毒副作用，通常将化疗药物与纳米载药递送系统联合使用。这些纳米载体辅助药物递送系统建立了一种新型的癌症治疗方法，并在近年来取得了巨大的成就。然而，纳米载体辅助药物递送系统仍然有其不可避免的缺点；例如，化疗药物的载药率并不理想，普遍低于10％(w/w)，导致为了达到药效，需要注射大量的纳米载体，使病人的顺应性降低，同时大多数载体不但没有直接的治疗效果，还会导致生物体产生额外的短期或长期毒性；此外，一些载体与特殊的细胞表面受体产生相互作用而引起不良的免疫反应，影响治疗效果。
雷公藤红素是一个天然来源的三萜类化合物，是传统中药雷公藤经过分离纯化得到的单体之一，具有多重药理活性，不仅能够抑制免疫反应和炎症，近些年来还发现其具有良好的抗肿瘤活性，可以引起肿瘤细胞的周期阻滞、凋亡和抑制侵袭，对白血病、多发性骨髓瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、肾癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌、胶质瘤和乳腺癌都有明确的杀伤作用；但由于雷公藤红素的疏水性，导致药物生物利用度低，造成了其在应用上的局限性。
盐酸阿霉素是常用的肿瘤化疗药物之一，被广泛应用于乳腺癌、肝癌和白血病等恶性肿瘤的治疗。盐酸阿霉素的抑瘤机制包括DNA插入，脂质过氧化反应，抑制拓扑异构酶等。由于其严重的心肾毒副作用和多重耐药性限制了盐酸阿霉素的临床应用。目前需要研发一种新的纳米药物解决上述技术问题。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种纳米药物及其制备方法和应用，具体提供了一种雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供了一种纳米药物，所述纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素。
本发明提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，雷公藤红素和盐酸阿霉素相互作用形成稳定的纳米颗粒，能够在水溶液中很好的分散，在病变部位能够更快更多的释放出有效的药物分子，实现靶向性特点；并且细胞实验表明，相对比单独用药而言，本发明提供的纳米药物可以被癌细胞更多的摄入来达到高效作用的目的；本发明提供的纳米药物能够降低雷公藤红素和阿霉素分别的用量，达到降低药物对正常组织的毒性的目的，同时达到高效抗瘤的治疗目的。
在本发明中，所述纳米药物的粒径为5-500nm，优选90-250nm；所述5-500nm可以是5nm、10nm、50nm、90nm、100nm、250nm、400nm、500nm等。
优选地，所述纳米药物的水合粒径为100-500nm，例如100nm、200nm、300nm、400nm、500nm等。
在本发明中，纳米药物的粒径指的是纳米药物干燥之后呈粉末状下的药物粒径，一般在透射电子显微镜下测得的粒子粒径为纳米药物的粒径；而纳米药物的水合粒径指的是纳米药物分散在水中形成的水合物的粒径，一般用动态光散射测得的粒径为水合粒径；无论是粒径还是水合粒径，在本发明中，均指的平均粒径。
第二方面，本发明提供了如上所述的纳米药物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将雷公藤红素溶于有机溶剂中，得到溶液A；
(2)将盐酸阿霉素溶于去离子水中，得到溶液B；
(3)将步骤(1)得到的溶液A注入去离子水中，搅拌得到溶液C；
(4)将步骤(2)得到的溶液B加入到步骤(3)得到的溶液C中混合得到溶液D，搅拌，得到所述纳米药物，即雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物。
本发明通过沉淀法制备得到纳米尺度的药物，不需要与药物载体联用，解决了需要注射大量纳米载体的问题，进而避免了载体材料会造成生物毒性和免疫原性的问题；并且本发明利用沉淀法制备纳米药物，无纳米载体，相当于可达到100％的载药率，避免了载药率低需要大量注射的问题。本发明提供的制备方法简单易行，并且产率高易放大。
在本发明中，步骤(1)所述溶液A中雷公藤红素的摩尔浓度为1-100mM/L，例如1mM/L、10mM/L、20mM/L、30mM/L、50mM/L、70mM/L、100mM/L等。
优选地，步骤(1)所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮、甲醇、二甲基亚砜或乙醇中的任意一种。
优选地，步骤(2)所述溶液B中盐酸阿霉素的摩尔浓度为1-100mM/L，例如1mM/L、10mM/L、20mM/L、30mM/L、50mM/L、70mM/L、100mM/L等。
优选地，步骤(3)所述搅拌为磁力搅拌。
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的转速为50-2000rpm，例如50rpm、100rpm、200rpm、500rpm、700rpm、1000rpm、1400rpm、1800rpm、2000rpm等。
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的温度为20℃-80℃，例如20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、70℃、75℃、80℃等。
优选地，步骤(3)所述溶液C中雷公藤红素的摩尔浓度为0.8-8mM/L，例如0.8mM/L、1mM/L、2mM/L、5mM/L、6mM/L、7mM/L、8mM/L等。
优选地，步骤(4)中所述溶液D中雷公藤红素和盐酸阿霉素的摩尔浓度独立地为0.16-16mM/L，例如0.16mM/L、0.2mM/L、1mM/L、5mM/L、10mM/L、12mM/L、16mM/L等。
优选地，步骤(4)中加入的溶液B的体积为步骤(3)中溶液A体积的1-10倍，例如1倍、3倍、5倍、7倍、10倍等。
在本发明中，步骤(4)所述搅拌为磁力搅拌。
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的转速为50-2000rpm，例如50rpm、100rpm、200rpm、500rpm、700rpm、1000rpm、1400rpm、1800rpm、2000rpm等。
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的时间为1-24h，例如1h、5h、10h、15h、20h、24h等。
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的温度为20℃-80℃，例如20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、70℃、75℃、80℃等。
在制备纳米药物过程中，没有有毒的有机试剂的引入，在一定程度上避免了可能造成的生物毒性问题。
本发明提供的制备方法以疏水药物雷公藤红素和亲水性药物盐酸阿霉素在水溶液里通过自组装形成粒径均一的纳米粒子，可达到提高疏水药物的生物利用度，延长血液循环时间及具有靶向性的特点。
作为优选技术方案，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将雷公藤红素溶于有机溶剂中，得到雷公藤红素摩尔浓度为1-100mM/L的溶液A；
(2)将盐酸阿霉素溶于去离子水中，得到盐酸阿霉素摩尔浓度为1-100mM/L的溶液B；
(3)将步骤(1)得到的溶液A注入去离子水中，在20℃-80℃下以50-2000rpm的转速进行磁力搅拌，得到雷公藤红素摩尔浓度为0.8-8mM/L的溶液C；
(4)将步骤(2)得到的溶液B加入到步骤(3)得到的溶液C中混合得到溶液D，其中，步骤(4)中加入的溶液B的体积为步骤(3)中溶液A体积的1-10倍，溶液D中雷公藤红素和盐酸阿霉素的摩尔浓度独立地为0.16-16mM/L，在20℃-80℃下以50-2000rpm的转速进行磁力搅拌1-24h，得到所述纳米药物，即雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物。
第三方面，本发明提供了如上所述的纳米药物在制备治疗癌症的药物中的应用。
本发明提供的纳米药物粒径在纳米级别，具有良好的实体瘤高通透性和滞留(EPR)效应，可以特异性的靶向癌症部位，应用于制备治疗癌症的药物。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的纳米药物能够在水溶液中很好的分散，在病变部位能够更快更多的释放出有效的药物分子，实现靶向性的目的；并且细胞实验表明，相对比单独用药而言，本发明提供的纳米药物可以被癌细胞更多的摄入来达到高效作用的目的；本发明提供的纳米药物能够降低雷公藤红素和阿霉素分别的用量，达到降低药物对正常组织的毒性的目的，同时达到高效抗瘤的治疗目的。
本发明提供的如上所述的纳米药物的制备方法简单易行，无纳米载体的引入，相当于可达到100％的载药率，避免了载药率低需要大量注射的问题。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的纳米药物的透射电子显微镜图。
图2是本发明实施例2提供的盐酸阿霉素以及纳米药物的荧光吸收光谱图。
图3是本发明实施例3提供的纳米药物的水合粒径分布图。
图4是本发明实施例4提供的纳米药物的水合粒径稳定性结果图。
图5是本发明实施例4提供的纳米药物的zeta电位稳定性结果图。
图6是本发明实施例5提供的纳米药物对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞活力影响的结果图。
图7是人源乳腺癌细胞MCF-7细胞对本发明实施例6提供的纳米药物的摄入能力图。
图8A是空白对照组对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞的杀伤作用结果图。
图8B是雷公藤红素组对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞的杀伤作用结果图。
图8C是盐酸阿霉素组对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞的杀伤作用结果图。
图8D是雷公藤红素/盐酸阿霉素混合物组对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞的杀伤作用结果图。
图8E是本发明实施例7提供的纳米药物对人源乳腺癌细胞MCF-7细胞的杀伤作用结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为90nm、水合粒径为200nm。
制备方法如下：
(1)将4.5mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到雷公藤红素摩尔浓度为10mM/L的溶液A；
(2)将5.8mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到盐酸阿霉素摩尔浓度为10mM/L的溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取100μL注入到800μL三次水中，注入去离子水中，在20℃下以50rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取100μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在20℃下以50rpm的转速进行磁力搅拌24h，得到纳米药物。
对本实施例提供的纳米药物进行透射电子显微镜观察，结果如图1所示，从图1中可以看出，本实施例提供的纳米药物粒径小，在纳米级别且粒径均匀。
实施例2
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为50nm、水合粒径为100nm。
制备方法如下：
(1)将45mg雷公藤红素溶于1mL甲醇中，得到溶液A；
(2)将29mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取10μL注入到890μL三次水中，注入去离子水中，在40℃下以2000rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取100μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在40℃下以2000rpm的转速进行磁力搅拌12h，得到纳米药物。
通过荧光吸收光谱检测合成的纳米药物，如图2所示，盐酸阿霉素荧光减弱说明盐酸阿霉素与雷公藤红素发生反应，形成了纳米颗粒导致盐酸阿霉素荧光淬灭。
实施例3
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为80nm、水合粒径为105nm。
制备方法如下：
(1)将22.5mg雷公藤红素溶于1mL二氯甲烷中，得到溶液A；
(2)将0.58mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取32μL注入到808μL三次水中，注入去离子水中，在80℃下以500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取160μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在80℃下以500rpm的转速进行磁力搅拌1h，得到纳米药物。
对本实施例提供的纳米药物进行动态光散射测试(DLS)，测得的是纳米药物的水合粒径，结果如图3所示，结果显示本发明的纳米粒子粒径为105nm，并且图中峰值十分突出，说明本发明的纳米粒子粒径分布均一。
实施例4
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为100nm、水合粒径为125nm。
制备方法如下：
(1)将1.53mg雷公藤红素溶于1mL三氯甲烷中，得到溶液A；
(2)将0.58mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取160μL注入到520μL三次水中，注入去离子水中，在50℃下以100rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取320μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在50℃下以100rpm的转速进行磁力搅拌20h，得到纳米药物。
对本实施例提供的纳米药物进行稳定性测试，测试在放置过程中本实施例提供的纳米药物的水合粒径和zeta电位，结果如图4和图5所示，经过7天放置的纳米药物依然保持稳定的水合粒径和zeta电位，说明通过该方法合成的纳米药物具有很好的稳定性。
实施例5
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为250nm、水合粒径为400nm。
(1)将18mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到溶液A；
(2)将5.8mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取100μL注入到800μL三次水中，注入去离子水中，在60℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取100μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在30℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌6h，得到纳米药物。
实施例6
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为320nm、水合粒径为500nm。
(1)将45mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到溶液A；
(2)将58mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取40μL注入到460μL三次水中，注入去离子水中，在60℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取40μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在30℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌6h，得到纳米药物。
实施例7
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为450nm、水合粒径为500nm。
(1)将45mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到溶液A；
(2)将58mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取5μL注入到100μL三次水中，注入去离子水中，在40℃下以2500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取25μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在30℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌6h，得到纳米药物。
实施例8
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为250nm、水合粒径为400nm。
(1)将0.45mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到溶液A；
(2)将5.8mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取100μL注入到100μL三次水中，注入去离子水中，在60℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取800μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在30℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌6h，得到纳米药物。
实施例9
本实施例提供的纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素，纳米药物的粒径为90nm、水合粒径为120nm。
(1)将45mg雷公藤红素溶于1mL二甲基亚砜中，得到溶液A；
(2)将58mg盐酸阿霉素溶于1mL去离子水中，得到溶液B；
(3)步骤(1)得到的溶液A取160μL注入到680μL三次水中，注入去离子水中，在60℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌，得到溶液C；
(4)步骤(2)得到的溶液B取160μL注入到加入到步骤(3)得到的溶液C中混合，得到溶液D，在30℃下以1500rpm的转速进行磁力搅拌6h，得到纳米药物。
实验例10
在本实验例中，通过对MCF-7细胞进行CCK-8比色法实验来考察实施例5提供的纳米药物对细胞活力的影响，其方法如下：
(1)细胞培养
将人源乳腺癌细胞MCF-7细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM或1640液体培养基中，置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中培养。
(2)细胞活力测定
以6000细胞/孔密度，将细胞接种于96孔板中，贴壁24h后，细胞分为5组，分别是空白对照组、盐酸阿霉素组、雷公藤红素组、实施例5提供的纳米药物组和雷公藤红素/盐酸阿霉素药物混合组(只是单纯的混合在一起)。空白对照组不做任何处理，盐酸阿霉素组加入盐酸阿霉素的量分别为0μM、1μM、4μM、5μM，雷公藤红素组加入雷公藤红素的量分别为0μM、4μM、16μM、20μM，实施例5提供的纳米药物组加入量为0μL、1μL、4μL、5μL，雷公藤红素/盐酸阿霉素药物混合组中，盐酸阿霉素和雷公藤红素混合后加入孔板中，其中，加入盐酸阿霉素的量为0μM时，加入雷公藤红素的量为0μM；加入盐酸阿霉素的量为1μM时，加入雷公藤红素的量为4μM，以此类推，最后加入盐酸阿霉素的量为5μM时，加入雷公藤红素的量为20μM。药物处理24h后，撤掉培养基；每孔加入110μL，含10％(体积比)CCK-8的细胞培养液，在培养箱中孵育2h后，在酶标仪上测定450nm处吸光度值，600nm作为参比波长。每组吸光度值扣除空白溶液吸光度值后，每孔对应值除以对照组的吸光度值作为细胞活力。每组设置6个平行孔。
细胞活力测定结果如图6所示，与对照组相比，实施例5制备的纳米药物对MCF-7细胞的活力有显著性影响，且与单独盐酸阿霉素处理、单独雷公藤红素处理和雷公藤红素/盐酸阿霉素混合药物组相比，本发明提供的纳米药物对MCF-7细胞的抑制率最高，说明通过该方法合成的雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物能够以更低的药物浓度到达一样甚至更好的肿瘤抑制效果。
实验例2
在本实验例中，通过流式细胞仪观察MCF-7细胞对实施例6提供的纳米药物的内吞作用进行观察，其方法如下：
(1)细胞培养
将人源乳腺癌细胞MCF-7培养于含有10％胎牛血清的DMEM或1640液体培养基中，置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中培养。
(2)细胞摄入
将步骤1中培养的细胞接种于6孔板，10万细胞每孔，加入2mL DMEM或1640液体培养基(含10％胎牛血清)，置于37℃、5％二氧化碳培养箱中培养24h。MCF-7细胞分别用盐酸阿霉素和实施例6提供的纳米药物处理1、2、4h，其中盐酸阿霉素的药物浓度均为5μM/L。4h后，用PBS缓冲液洗三次，之后用胰蛋白酶消化细胞，800g离心去上层清液，PBS缓冲液重悬细胞。悬液用流式细胞仪检测。采集一万个细胞进行荧光强度检测，Origin软件作图，分析细胞荧光强度。
如图7所示，用实施例6提供的纳米药物处理的MCF-7细胞的荧光强度会比只用盐酸阿霉素处理的细胞荧光强度高。说明与同样浓度的盐酸阿霉素相比，本发明提供的纳米药物能被MCF-7细胞更多摄入，摄入的药量越多，起药效的药物越多，更利于杀死肿瘤细胞达到抗肿瘤的目的。
实验例3
在本实验例中，通过对盐酸阿霉素组、雷公藤红素组、实施例7提供的纳米药物组和雷公藤红素/阿霉素药物混合组对MCF-7细胞的杀伤作用来测试本发明提供的纳米药物，其方法如下：
(1)细胞培养
将人源乳腺癌细胞MCF-7培养于含有10％胎牛血清的DMEM或1640液体培养基中，置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中培养。
(2)细胞活性观察
将步骤1中培养的细胞接种于6孔板，10万细胞每孔，加入2mL DMEM或1640液体培养基(含10％胎牛血清)，置于37℃、5％二氧化碳培养箱中培养24h，分为5组，分别为空白对照组，盐酸阿霉素组、雷公藤红素组、实施例7提供的纳米药物组和雷公藤红素/盐酸阿霉素药物混合组。然后在新配置的含有10％胎牛血清的DMEM或1640培养基中分别加入盐酸阿霉素5μM和雷公藤红素20μM，各组加入的药物浓度一致，加入6孔板中，37℃、5％二氧化碳的培养箱中培养24h，空白对照组不做任何处理。撤去培养基，用胰蛋白酶消化细胞，800g离心去上层清液，PBS缓冲液重悬细胞，重复洗三次。AnnexinV-PI试剂盒染色(AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnnexinV与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来)，然后用流式细胞仪检测。采集一万个细胞进行分区，统计每一个区域细胞百分比，Origin软件作图，分析细胞死亡的方式。
结果如图8A到图8E所示，本发明所述的纳米药物可以造成细胞凋亡和坏死，且与单独盐酸阿霉素处理、单独雷公藤红素处理和雷公藤红素/盐酸阿霉素混合药物组相比，本发明提供的纳米药物对MCF-7细胞的造成的凋亡率最高，说明通过本发明提供的方法合成的纳米药物能够以更低的药物浓度达到一样甚至更好的肿瘤抑制效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的雷公藤红素/盐酸阿霉素自组装纳米药物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种纳米药物，其特征在于，所述纳米药物包括雷公藤红素和盐酸阿霉素。
2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物的粒径为5-500nm，优选90-250nm。
3.根据权利要求1或2所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物的水合粒径为100-500nm。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的纳米药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将雷公藤红素溶于有机溶剂中，得到溶液A；
(2)将盐酸阿霉素溶于去离子水中，得到溶液B；
(3)将步骤(1)得到的溶液A注入去离子水中，搅拌得到溶液C；
(4)将步骤(2)得到的溶液B加入到步骤(3)得到的溶液C中混合得到溶液D，搅拌，得到所述纳米药物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述溶液A中雷公藤红素的摩尔浓度为1-100mM/L；
优选地，步骤(1)所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮、甲醇、二甲基亚砜或乙醇中的任意一种。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述溶液B中盐酸阿霉素的摩尔浓度为1-100mM/L；
优选地，步骤(3)所述搅拌为磁力搅拌；
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的转速为50-2000rpm；
优选地，步骤(3)所述磁力搅拌的温度为20℃-80℃；
优选地，步骤(3)所述溶液C中雷公藤红素的摩尔浓度为0.8-8mM/L。
7.根据权利要求4-6中的任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述溶液D中雷公藤红素和盐酸阿霉素的摩尔浓度独立地为0.16-16mM/L；
优选地，步骤(4)中加入的溶液B的体积为步骤(3)中溶液A体积的1-10倍。
8.根据权利要求4-7中的任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述搅拌为磁力搅拌；
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的转速为50-2000rpm；
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的时间为1-24h；
优选地，步骤(4)所述磁力搅拌的温度为20℃-80℃。
9.根据权利要求4-8中的任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将雷公藤红素溶于有机溶剂中，得到雷公藤红素摩尔浓度为1-100mM/L的溶液A；
(2)将盐酸阿霉素溶于去离子水中，得到盐酸阿霉素摩尔浓度为1-100mM/L的溶液B；
(3)将步骤(1)得到的溶液A注入去离子水中，在20℃-80℃下以50-2000rpm的转速进行磁力搅拌，得到雷公藤红素摩尔浓度为0.8-8mM/L的溶液C；
(4)将步骤(2)得到的溶液B加入到步骤(3)得到的溶液C中混合得到溶液D，其中，步骤(4)中加入的溶液B的体积为步骤(3)中溶液A体积的1-10倍，溶液D中雷公藤红素和盐酸阿霉素的摩尔浓度独立地为0.16-16mM/L，在20℃-80℃下以50-2000rpm的转速进行磁力搅拌1-24h，得到所述纳米药物。
10.根据权利要求1-3中的任一项所述的纳米药物在制备治疗癌症的药物中的应用。
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