CN101886056A - 一种厌氧氨氧化菌的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种厌氧氨氧化菌的分离方法，该方法包括：采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；复筛鉴定培养：对所述初筛富集培养得到的培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌。该分离方法不但具有简单、快速分离厌氧氨氧化菌的优点，且可以获得厌氧氨氧化菌的纯培养物，为微生物学理论研究和工业化应用提供帮助。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有厌氧氨氧化活性菌的分离方法。
背景技术
厌氧氨氧化(Anaerobic ammonia oxidation，ANAMMOX)技术由于具有高效、低耗和环境友好等特性已在废水处理方面受到研究者们的广泛关注。与传统硝化-反硝化生物脱氮方法相比，厌氧氨氧化工艺具有以下优点：厌氧氨氧化菌为自养菌，无需外加有机物作为电子供体，既可节省费用，又可以防止二次污染：在厌氧氨氧化反应中，只需要将氨厌氧氨氧化成亚硝酸盐，相比较传统硝化-反硝化过程中需要投加酸碱药剂，而厌氧氨氧化反应为近中性反应，生物产酸量很低，因此可以节省中和药剂费用；由于厌氧氨氧化菌生长缓慢，所以污泥产量极少，可以大大节约污泥处理处置费用。厌氧氨氧化技术能有效克服传统生物脱氮工艺的缺点，因此在废水生物脱氮领域具有良好的开发前景。
厌氧氨氧化这种生物脱氮技术的研究历程虽已有十余年的历史，但至今仍未广泛应用于工程实践。目前已经分离到的厌氧氨氧化菌均是采用密度梯度离心法得到的。密度梯度离心法是纯化病毒常用的方法，并不是菌株常用的分离方法。使用密度梯度离心法分离菌株，对实验室的等级要求较高，不宜普及。本发明涉及一种典型的微生物分离方法，比现有的密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌简单、快速。
发明内容
为了解决上述现有技术存在的不足之处，本发明的目的在于利用一种典型的微生物分离方法，比现有的密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌相比具有简单、快速的特点。
为了达到上述目的，本发明通过以下方案来实现：
本发明实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，包括：
采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；
初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；
复筛鉴定培养：对所述初筛富集培养得到的初筛培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌。
通过本发明实施例提供的技术方案可以看出，本发明实施例中以采集的颗粒污泥为原料，制成菌悬液后，依次经初筛富集培养和复筛鉴定培养后，即可分离得到厌氧氨氧化菌。该方法步骤简单，可实现从颗粒污泥快速分离厌氧氨氧化菌，具有简单、快速的优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步具体的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
本实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，相比现有通过密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌具有简单、快速的优点，该方法具体如下：
采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；可采用取自上流式厌氧污泥床中的颗粒污泥溶液为原料，用超声波将颗粒污泥溶液中的颗粒污泥破碎后，制成菌悬液。
初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；具体是将所述菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基中，采用焦性没食子酸法，该焦性没食子酸法具体是：在干燥无菌的玻璃板或培养皿盖上，铺设一层灭菌脱脂棉或纱布，将焦性没食子酸设置在所述脱脂棉或纱布上；向所述焦性没食子酸上滴加氢氧化钠溶液后，将所述玻璃板或培养皿盖覆盖于装有已接种所述菌悬液的初筛厌氧氨氧化富集培养基的培养皿的皿底上，使设有焦性没食子酸和氢氧化钠溶液的所述脱脂棉或纱布全部罩住培养皿的皿口，以溶化的石蜡或凡士林液密封培养皿的皿底与玻璃或皿盖的接触处，使所述菌悬液在密闭的由焦性没食子酸与氢氧化钠溶液反应形成的厌氧环境下在初筛厌氧氨氧化富集培养基中进行培养。在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到初筛培养物。
上述初筛富集培养中，所用的初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、碳酸氢钾400～600份、磷酸氢二钠25～30份、七水硫酸镁200～400份、氯化钙120～140份、亚硝酸钠130～150份、硫酸铵130～150份、微量元素I 0.5～2份、微量元素II 0.5～2份和酵母膏或葡萄糖贮备液0.5～2份。
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、乙二胺四乙酸4000～6000份和硫酸亚铁4000～6000份。
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素II由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、乙二胺四乙酸14000～16000份、七水硫酸锌200～400份、六水氯化钴200～300份、四水氯化锰900～1050份、五水硫酸铜200～300份、二水钼酸钠200～250份、六水氯化镍180～200份、十水硒酸钠200～220份和硼酸13～15份。
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的酵母膏或葡萄糖贮备液由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、酵母膏或葡萄糖100～250份。
复筛鉴定培养：对所述初筛富集培养得到的初筛培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌。
上述复筛鉴定培养具体过程为：
将初筛富集培养后得到的初筛培养物接入复筛鉴定培养基中，采用厌氧滚管培养法，在30～40℃温度下厌氧培养3～5天，得到复筛培养物；
检测复筛培养物中菌株在厌氧条件下同时转化氨和亚硝酸盐的能力，若达到相应标准，则确认复筛培养物中的菌株即为厌氧氨氧化菌。
上述复筛鉴定培养中所用的复筛鉴定培养基由下述原料按重量份组成：蒸馏水1000份、硫酸铵1～3份、亚硝酸钠1～3份、牛肉膏2～5份、蛋白胨5～20份和氯化钠3～10份；该复筛鉴定培养基的pH值为6.7～8.3。
上述复筛鉴定培养中采用的厌氧滚管培养法具体为：
将装有融化的复筛鉴定培养基的试管放置于40～60℃的恒温水浴中，用无菌注射器吸取初筛培养物于所述试管内融化的复筛鉴定培养基中，而后将试管平放于装有冰块的盘中或滚管机上进行滚动，使带菌的融化的复筛鉴定培养基在试管内壁凝固形成薄层，处理后将试管置于30～40℃的恒温培养箱中进行培养。
本发明实施例中通过，在初筛富集培养中，采用焦性没食子酸法，通过焦性没食子酸和氢氧化钠溶液反应，可提高良好的厌氧环境，使装有已接种菌悬液的初筛初筛厌氧氨氧化富集培养基在密封的厌氧化环境中进行培养；而微量元素I和微量元素II的可提供厌氧氨氧化菌必需的微量元素，利于厌氧氨氧化菌的生长，并且能抑制其他厌氧菌的生长。酵母膏或葡萄糖贮备液提供厌氧氨氧化菌生长所必需的碳源。该方法操作简单，成本低，对厌氧氨氧化菌分离效果好。
实施例2
本实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，相比现有通过密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌具有简单、快速的优点，该方法具体如下：
步骤1，采集颗粒污泥为原料：选取上流式厌氧污泥床(UASB)中的颗粒污泥溶液作为分离源；
步骤2，对采集的颗粒污泥原料进行处理，用超声波破碎颗粒污泥溶液，制成菌悬液；
步骤3，初筛富集培养：将步骤2中制成的菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基，可用涂布方式涂布在初筛厌氧氨氧化富集培养基上，酵母膏或葡萄糖贮备液0.5mg/L中，采用焦性没食子酸法，在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到初筛培养物；
上述步骤3中的初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述原料组成：蒸馏水，其它各原料按每升蒸馏水的量进行加入，包括：KHCO3(碳酸氢钾)400mg/L、KH2PO4(磷酸氢二钠)25mg/L、MgSO4·7H2O(七水硫酸镁)200mg/L、CaCl2(氯化钙)120mg/L、NaNO2(亚硝酸钠)130mg/L、(NH4)2SO4(硫酸铵)130mg/L、微量元素I 0.5mg/L和微量元素II 0.5mg/L；
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由蒸馏水、EDTA(乙二胺四乙酸)和FeSO4(硫酸亚铁)组成，其中，EDTA的用量为对应每升蒸馏水加入4000mg、FeSO4的用量为对应每升蒸馏水加入4000mg；微量元素II由蒸馏水、EDTA 14000mg/L、ZnSO4·7H2O 200mg/L、CoCl2·6H2O 200mg/L、MnCl2·4H2O 900mg/L、CuSO4·5H2O 200mg/L、Na2MoO4·2H2O 200mg/L、NiCl2·6H2O 180mg/L、Na2SeO4·10H2O 200mg/L和H3BO413mg/L组成，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量。
上述步骤3的初筛富集培养中，采用的焦性没食子酸法具体如下：
取一块玻璃板或培养皿盖，洗净，干燥后灭菌，铺上一薄层灭菌脱脂棉或纱布，将1g的焦性没食子酸放在脱脂棉或纱布上；焦性没食子酸(Pyrogallic Acid)，购买自国药集团化学试剂有限公司；
滴加浓度为10％的NaOH溶液1.5～2.5ml于脱脂棉或纱布上的焦性没食子酸上，将溶液控制在脱脂棉或纱布内，将玻璃板或培养皿盖覆盖于装有已接种菌悬液的初筛厌氧氨氧化富集培养基的玻璃平板或培养皿皿底覆盖于上，并将脱脂棉或纱布全部罩住玻璃平板或培养皿的皿口，并保证焦性没食子酸反应物不能与培养基表面接触，用溶化的石蜡凡士林液密封皿底与玻璃或皿盖的接触处，使已接种菌悬液的初筛厌氧氨氧化富集培养基在密封的由焦性没食子酸与NaOH溶液反应形成的厌氧环境下进行培养。
步骤4，复筛鉴定培养：将上述步骤3的初筛富集培养后得到的初筛培养物，接入复筛鉴定培养基，采用厌氧滚管培养法，在30～40℃温度下厌氧培养3～5天；利用国标方法检测培养物中氨和亚硝酸盐的消失情况，检测结果为氨消失了90.6％，亚硝酸盐消失了89.7％，因此认为该菌株为合格的厌氧氨氧化菌。
上述步骤4中，所用的复筛鉴定培养基由下述原料组成：(NH4)2SO4 1.4g、NaNO2 1.4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g和蒸馏水1000ml，该复筛鉴定培养基的pH值为6.7～8.3。
上述步骤4中，采用的厌氧滚管培养法具体如下：
将装有融化的复筛鉴定培养基的试管放置于40～60℃的恒温水浴中，用1ml无菌注射器吸取初筛培养物(菌悬液)0.1ml于融化的复筛鉴定培养基试管中，而后将试管平放于装有冰块的盘中或滚管机上迅速滚动，使带菌的融化培养基在试管内壁立即凝固成一薄层，处理后将试管置于30～40℃的恒温培养箱中进行培养。为保证复筛效果，可在处理重复上述处理进行3次或5次，制成多个内壁凝固成一薄层试管同时进行培养。
本实施例的分离方法中以采集的颗粒污泥为原料，制成菌悬液后，依次经初筛富集培养和复筛鉴定培养后，即可分离得到厌氧氨氧化菌。该方法步骤简单，可实现从颗粒污泥快速分离厌氧氨氧化菌，具有简单、快速的优点。
实施例3
本实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，相比现有通过密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌具有简单、快速的优点，该方法具体如下：
步骤1，采集颗粒污泥为原料：选取上流式厌氧污泥床(UASB)中的颗粒污泥溶液作为分离源；
步骤2，对采集的原料进行处理，用超声波破碎颗粒污泥溶液，制成菌悬液；
步骤3，初筛富集培养：将步骤2中制成的菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基、酵母膏或葡萄糖贮备液(酵母膏或葡萄糖200mg/L)1mg/L中，采用焦性没食子酸法，在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到培养物；
上述步骤3中的初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述原料组成：蒸馏水、KHCO3 500mg/L、KH2PO4 27mg/L、MgSO4·7H2O 300mg/L、CaCl2 130mg/L、NaNO2 140mg/L、(NH4)2SO4 140mg/L、微量元素I 1mg/L、微量元素II 1mg/L，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量；
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由蒸馏水、EDTA 5000mg/L和FeSO4 5000mg/L组成；微量元素II由蒸馏水、EDTA 15000mg/L、ZnSO4·7H2O300mg/L、CoCl2·6H2O 250mg/L、MnCl2·4H2O 1000mg/L、CuSO4·5H2O250mg/L、Na2MoO4·2H2O 220mg/L、NiCl2·6H2O 190mg/L、Na2SeO4·10H2O210mg/L和H3BO4 14mg/L组成，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量。
上述步骤3中采用的焦性没食子酸法与实施例1或2的步骤3中采用的焦性没食子酸法基本相同在此不再重复说明。
步骤4、将上述步骤3的初筛富集培养后得到的培养物接入复筛鉴定培养基，采用厌氧滚管培养法，在30～40℃温度下厌氧培养3～5在，利用国标方法检测培养后得到培养物中氨和亚硝酸盐的消失情况，结果为氨消失了91.7％，亚硝酸盐消失了90.4％，因此认为该培养物的菌株为厌氧氨氧化菌。
上述步骤4中的复筛鉴定培养基由下述原料组成：(NH4)2SO4 1.4g、NaNO2 1.4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g和水1000ml，该复筛鉴定培养基的pH值为6.7～8.3。
上述步骤4中采用的厌氧滚管培养法与实施例1或2的步骤4中采用的厌氧滚管培养法基本相同在此不再重复说明。
实施例4
本实施例提供一种厌氧氨氧化菌的分离方法，相比现有通过密度梯度离心法分离厌氧氨氧化菌具有简单、快速的优点，该方法具体如下：
步骤1，采集颗粒污泥为原料：选取上流式厌氧污泥床(UASB)中的颗粒污泥溶液作为分离源；
步骤2，对采集的原料进行处理，用超声波破碎颗粒污泥溶液，制成菌悬液；
步骤3，初筛富集培养：将步骤2中制成的菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基、酵母膏或葡萄糖贮备液(酵母膏或葡萄糖250mg/L)2mg/L)中，采用焦性没食子酸法，在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到培养物；
上述步骤3中的初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述原料组成：蒸馏水、KHCO3 600mg/L、KH2PO4 30mg/L、MgSO4·7H2O 400mg/L、CaCl2 140mg/L、NaNO2 150mg/L、(NH4)2SO4 150mg/L、微量元素I 2mg/L、微量元素II 2mg/L，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量；
上述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由蒸馏水、EDTA 6000mg/L和FeSO4 6000mg/L组成，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量；微量元素II由蒸馏水、EDTA 16000mg/L、ZnSO4·7H2O 400mg/L、CoCl2·6H2O300mg/L、MnCl2·4H2O 1050mg/L、CuSO4·5H2O 300mg/L、Na2MoO4·2H2O250mg/L、NiCl2·6H2O 200mg/L、Na2SeO4·10H2O 220mg/L、H3BO415mg/L组成，其中各原料的单位mg/L表示每升蒸馏水中加入该原料的量。
上述步骤3中采用的焦性没食子酸法与实施例1或2的步骤3中采用的焦性没食子酸法基本相同在此不再重复说明。
步骤4，复筛鉴定培养：将上述步骤3的初筛富集培养后得到的培养物接入复筛鉴定培养基，采用厌氧滚管培养法，在30～40℃温度下厌氧培养3～5天，培养后利用国标方法检测得到的培养物中氨和亚硝酸盐的消失情况，结果为氨消失了92.5％，亚硝酸盐消失了91.7％，因此认为该培养物的菌株为厌氧氨氧化菌。
上述步骤4中的复筛鉴定培养基由下述原料组成：(NH4)2SO4 1.4g、NaNO2 1.4g、牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g和水1000ml，该复筛鉴定培养基的pH值为6.7～8.3。
上述步骤4中采用的厌氧滚管培养法与实施例1或2的步骤4中采用的厌氧滚管培养法基本相同在此不再重复说明。
对比实施例5
本实施例为对比实施例，是通过现有技术的密度梯度离心的方法分离得到厌氧氨氧化菌，密度梯度离心分离法分离得到厌氧氨氧化菌的步骤如下：
(1)选取生物脱氮流化床反应器中的活性污泥作为厌氧氨氧化菌的分离源；
(2)以基本无机盐培养基作为富集基质，采用分批培养的方式，培育厌氧氨氧化絮体；
(3)取厌氧氨氧化絮体，用超声波破碎，离心去除细胞碎片，制成细胞悬液；
(4)将细胞悬液与Percoll液混合，进行密度梯度离心；离心后，出现红色细胞带并处于离心管的特定位置。该红色细胞带即为厌氧氨氧化菌；
(5)用无菌吸管小心吸出离心管内的红色细胞带，所分离的菌株纯度可达每200～800个细胞中只含一个污染细胞；
(6)将分离菌株制成高细胞密度(高于1010个/mL)的悬液，添加到厌氧氨氧化鉴定培养基中，30～40℃厌氧培养3～5d；利用国标方法检测氨和亚硝酸盐的消失情况，结果为氨消失了92.7％，亚硝酸盐消失了91.6％，因此认为该菌株为厌氧氨氧化菌。
通过将上述实施例1、2、3与实施例4对照相比可知，所得到的厌氧氨氧化菌株的氨和亚硝酸盐的消失情况相差不大，即认为所得到的菌都是厌氧氨氧化菌。利用本发明实施例分离厌氧氨氧化菌的优点是：(1)可以获得厌氧氨氧化菌的纯培养物，为微生物学理论研究和工业化应用提供帮助；(2)所得到的菌株便于保藏和运输。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。
Claims (11)
1.一种厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，包括：
采集原料：采集颗粒污泥为原料，将所述颗粒污泥制成菌悬液；
初筛富集培养：对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物；
复筛鉴定培养：对所述初筛富集培养得到的初筛培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌。
2.如权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述采集原料步骤中采集颗粒污泥为原料中的颗粒污泥取自上流式厌氧污泥床中的颗粒污泥溶液；所述将所述颗粒污泥制成菌悬液为用超声波将颗粒污泥溶液中的颗粒污泥破碎后，制成菌悬液。
3.如权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛富集培养步骤中对制成的所述菌悬液进行初筛富集培养得到初筛培养物包括：
将所述菌悬液转入初筛厌氧氨氧化富集培养基中，采用焦性没食子酸法，在25～35℃温度下厌氧培养10～15天，培养后得到初筛培养物。
4.如权利要求3所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛厌氧氨氧化富集培养基由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、碳酸氢钾400～600份、磷酸氢二钠25～30份、七水硫酸镁200～400份、氯化钙120～140份、亚硝酸钠130～150份、硫酸铵130～150份、微量元素I 0.5～2份、微量元素II 0.5～2份和酵母膏或葡萄糖贮备液0.5～2份。
5.如权利要求4所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素I由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、乙二胺四乙酸4000～6000份和硫酸亚铁4000～6000份。
6.如权利要求4所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的微量元素II由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、乙二胺四乙酸14000～16000份、七水硫酸锌200～400份、六水氯化钴200～300份、四水氯化锰900～1050份、五水硫酸铜200～300份、二水钼酸钠200～250份、六水氯化镍180～200份、十水硒酸钠200～220份和硼酸13～15份。
7.如权利要求3所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛厌氧氨氧化富集培养基中的酵母膏或葡萄糖贮备液由下述各原料按重量份组成：蒸馏水1000000份、酵母膏或葡萄糖100～250份。
8.如权利要求3所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述初筛富集培养步骤中采用的焦性没食子酸法为：
在干燥无菌的玻璃板或培养皿盖上，铺设一层灭菌脱脂棉或纱布，将焦性没食子酸设置在所述脱脂棉或纱布上；
向所述焦性没食子酸上滴加氢氧化钠溶液后，将所述玻璃板或培养皿盖覆盖于装有已接种所述菌悬液的初筛厌氧氨氧化富集培养基的培养皿的皿底上，使设有焦性没食子酸和氢氧化钠溶液的所述脱脂棉或纱布全部罩住培养皿的皿口，以溶化的石蜡或凡士林液密封培养皿的皿底与玻璃或皿盖的接触处，使所述菌悬液在密闭的由焦性没食子酸与氢氧化钠溶液反应形成的厌氧环境下在初筛厌氧氨氧化富集培养基中进行培养。
9.如权利要求1所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述复筛鉴定培养步骤中对所述初筛富集培养得到的培养物进行复筛鉴定培养，对复筛鉴定培养后得到的培养物进行检测，若检测合格则培养物的菌株即为厌氧氨氧化菌包括：
将初筛富集培养后得到的初筛培养物接入复筛鉴定培养基中，采用厌氧滚管培养法，在30～40℃温度下厌氧培养3～5天，得到复筛培养物；
检测复筛培养物中菌株在厌氧条件下同时转化氨和亚硝酸盐的能力，若达到相应标准，则确认复筛培养物中的菌株即为厌氧氨氧化菌。
10.如权利要求9所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述复筛鉴定培养步骤中的复筛鉴定培养基由下述原料按重量份组成：蒸馏水1000份、硫酸铵1～3份、亚硝酸钠1～3份、牛肉膏2～5份、蛋白胨5～20份和氯化钠3～10份；该复筛鉴定培养基的pH值为6.7～8.3。
11.如权利要求9所述的厌氧氨氧化菌的分离方法，其特征在于，所述复筛鉴定培养步骤中采用的厌氧滚管培养法为：
将装有融化的复筛鉴定培养基的试管放置于40～60℃的恒温水浴中，用无菌注射器吸取初筛培养物于所述试管内融化的复筛鉴定培养基中，而后将试管平放于装有冰块的盘中或滚管机上进行滚动，使带菌的融化的复筛鉴定培养基在试管内壁凝固形成薄层，处理后将试管置于30～40℃的恒温培养箱中进行培养。
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