CN101883586A - 使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病 - Google Patents

使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病 Download PDF

Info

Publication number
CN101883586A
CN101883586A CN2008801175400A CN200880117540A CN101883586A CN 101883586 A CN101883586 A CN 101883586A CN 2008801175400 A CN2008801175400 A CN 2008801175400A CN 200880117540 A CN200880117540 A CN 200880117540A CN 101883586 A CN101883586 A CN 101883586A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cyclophosphamide
individuality
certain embodiments
cell
individual
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2008801175400A
Other languages
English (en)
Inventor
A·I·卡普林
D·A·克尔
P·A·卡拉比勒斯
S·R·奥利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Johns Hopkins University
Original Assignee
Johns Hopkins University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Johns Hopkins University filed Critical Johns Hopkins University
Publication of CN101883586A publication Critical patent/CN101883586A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/90203—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2510/00—Detection of programmed cell death, i.e. apoptosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)

Abstract

本发明描述了一种治疗神经性自身免疫疾病的方法，该治疗方法包括施用免疫清除剂以清除染病个体中大部分或基本上全部未成熟的和成熟的免疫系统成分。这个步骤之后，对个体施用药剂以重建被清除的免疫系统。

Description

使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病
交叉引用
本申请要求2008年7月25日提交的美国临时申请第61/083,607号、2008年3月17日提交的美国临时申请第61/037,059号以及2007年10月1日提交的美国临时申请第60/997,074号的权益，通过引用将这些申请分别整体并入本文。
背景技术
自身免疫疾病是一种以免疫系统无法识别自身为特征的疾病。神经性自身免疫疾病的例子包括，但不限于，多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直和精神分裂症。多发性硬化症是一种以神经元脱髓鞘和轴突的损伤以及神经胶质增生为特征的自身免疫疾病。多发性硬化症影响约2到150人/100,000人。
发明内容
在某些实施方案中，治疗方法包括对患有神经性自身免疫疾病的个体施用起免疫清除剂(immunoablative agent)作用的药剂。在某些实施方案中，免疫清除剂是化疗剂、生物制剂或放射性制剂。在某些实施方案中，化疗剂是细胞生长抑制剂、烷化剂、抗代谢药和细胞毒性抗生素。在某些实施方案中，烷化剂是
Figure BPA00001204767900011
唑碱(oxazophorine)。在某些实施方案中，唑碱是环磷酰胺。在某些实施方案中，生物制剂是消耗T细胞的抗体。在某些实施方案中，消耗T细胞的抗体是抗淋巴细胞球蛋白、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗IL-2受体抗体、抗CD-3受体抗体(如OKT3)或其组合。
在进一步的实施方案中，在个体接受了治疗有效量的免疫清除剂后，对个体施用治疗有效量的至少一种免疫系统重建剂(reconstituting agent)以重建个体被清除的免疫系统。在某些实施方案中，这种免疫系统重建剂是集落刺激因子、造血干细胞或其组合。在某些实施方案中，集落刺激因子是粒细胞-巨噬细胞CSF(GM-CSF)、粒细胞CSF(G-CSF)和巨噬细胞CSF(M-CSF)或其组合。
在某些实施方案中，在个体接受了(a)治疗有效量的免疫清除剂；和(b)治疗有效量的至少一种免疫系统重建剂之后，对个体施用治疗有效量的至少一种免疫调节剂。在某些实施方案中，免疫调节剂是醋酸格拉默、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷(AICAR)、干扰素(如IFNβ-1a和IFNβ-1b)或其组合。
本文在某些实施方案中公开了一种治疗神经性自身免疫疾病的方法，所述方法包括向CD4+T细胞中醛脱氢酶水平低于预设的临界值的有此需要的个体施用：(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；(b)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子；以及(c)约10mg/日到约80mg/日的醋酸格拉默。在某些实施方案中，该方法进一步包括确定个体CD4+T细胞中的醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，该方法进一步包括监测个体CD4+T细胞中的醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，向个体施用至少约50mg/kg/日的环磷酰胺。在某些实施方案中，向个体施用至少约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，向个体施用至少约40mg/日的醋酸格拉默。在某些实施方案中，该方法进一步包括使用包括第一筛查、第二筛查和环磷酰胺限制分配的方法来控制该疗法的使用。在某些实施方案中，第一筛查包括：(a)确定个体是否符合治疗标准；(b)如果个体是女性，检测个体怀孕情况并为个体提供怀孕咨询；(c)确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平；和(d)为个体匹配红细胞和血小板供应源。在某些实施方案中，第二筛查包括在个体是女性的情况下，监测其怀孕情况；和/或监测不良事件。在某些实施方案中，不良事件是中毒(toxicity)。在某些实施方案中，如果个体怀孕，和/或经历不良事件，则停止对其的治疗。在某些实施方案中，环磷酰胺的限制分配包括：(a)为每个个体分配一个识别号码；(b)使每个识别号码关联一个环磷酰胺容器；和(c)对个体施用来自环磷酰胺容器的环磷酰胺，该个体的识别号码对应于与所述容器关联的识别号码。在某些实施方案中，环磷酰胺至少连续施用约4天。在某些实施方案中，在施用环磷酰胺完成后5到7天内开始施用粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过约1.0×109个细胞/L。在某些实施方案中，在施用环磷酰胺完成后28到35天内开始施用醋酸格拉默。在某些实施方案中，醋酸格拉默的剂量至少约40mg/日。在某些实施方案中，在开始施用醋酸格拉默2.5到4个月内，醋酸格拉默的剂量被减至约20mg/日。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。在某些实施方案中，多发性硬化症已复发。在某些实施方案中，多发性硬化症在缓解。在某些实施方案中，环磷酰胺从重构的冻干环磷酰胺制得。在某些实施方案中，环磷酰胺通过静脉内施用。在某些实施方案中，该方法进一步包括对个体施用多至约5mg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白。
本发明某些实施方案公开了一种治疗神经性自身免疫疾病的方法，所述方法包括向CD4+T细胞中醛脱氢酶水平低于预设临界值的有此需要的个体施用：(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；(b)多至约5mg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白；(c)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，该方法进一步包括确定个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，该方法进一步包括监测个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，向个体施用至少约50mg/kg/日的环磷酰胺。在某些实施方案中，向个体施用至少约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，向个体施用至少约2.5μg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白。在某些实施方案中，该方法进一步包括使用包括第一筛查、第二筛查和环磷酰胺限制分配的方法来控制该疗法的使用。在某些实施方案中，第一筛查包括：(a)确定个体是否符合治疗标准；(b)如果个体是女性，检测个体怀孕情况并为个体提供怀孕咨询；(c)确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平；和(d)为个体匹配红细胞和血小板供应源。在某些实施方案中，第二筛查包括在个体是女性的情况下，监测其怀孕情况；和/或监测不良事件。在某些实施方案中，不良事件是中毒。在某些实施方案中，如果个体怀孕，和/或经历不良事件，则停止对其的治疗。在某些实施方案中，环磷酰胺的限制分配包括：(a)为每个个体分配一个识别号码；(b)每个识别号码关联一个环磷酰胺容器；和(c)对个体施用来自环磷酰胺容器的环磷酰胺，该个体的识别号码对应于与所述容器关联的识别号码。在某些实施方案中，环磷酰胺至少连续施用约4天。在某些实施方案中，抗胸腺细胞球蛋白在环磷酰胺之前、之后或与环磷酰胺同时施用。在某些实施方案中，在施用环磷酰胺完成后5到7天内开始施用粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过约1.0×109个细胞/L。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。在某些实施方案中，多发性硬化症已复发。在某些实施方案中，多发性硬化症在缓解。在某些实施方案中，环磷酰胺从重构的冻干环磷酰胺制得。在某些实施方案中，环磷酰胺通过静脉内施用。在某些实施方案中，该方法进一步包括对个体施用约10mg/日到约80mg/日的醋酸格拉默。
本发明某些实施方案公开了一种选择使用环磷酰胺治疗的个体的方法，该方法包括，如果个体生物样品的醛脱氢酶水平超过预设的临界值则为该个体选择治疗；或在所述生物样品的醛脱氢酶水平低于预设的临界值的情况下选择替代的治疗。在某些实施方案中，生物样品是血液和/或白细胞。在某些实施方案中，白细胞是T细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。在某些实施方案中，通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR
Figure BPA00001204767900041
。在某些实施方案中，通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，对选定的个体施用环磷酰胺。在某些实施方案中，个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
本发明某些实施方案公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，包括测定至少第一生物样品和第二生物样品中的醛脱氢酶的水平，其中第一生物样品和第二生物样品是在不同时间从个体取得的。在某些实施方案中，如果在生物样品中观察到的醛脱氢酶水平超过预设的临界值，则该方法进一步包括中断治疗。在某些实施方案中，基于在第一生物样品、第二生物样品或其组合中观察到的醛脱氢酶水平，该方法进一步包括修改治疗。在某些实施方案中，如果在第一生物样品、第二生物样品或其组合中观察到的醛脱氢酶水平超过预设临界值，该方法进一步包括选择替代的治疗。在某些实施方案中，生物样品是血液和/或白细胞。在某些实施方案中，白细胞是T细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。在某些实施方案中，通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR
Figure BPA00001204767900051
。在某些实施方案中，通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
本发明某些实施方案公开了一种选择使用环磷酰胺治疗的个体的方法，该方法包括使个体的生物样品与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，该方法进一步包括在个体的生物样品与环磷酰胺接触后测定样本中细胞死亡水平。在某些实施方案中，生物样品是血液和/或白细胞。在某些实施方案中，白细胞是T细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。在某些实施方案中，通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR
Figure BPA00001204767900052
。在某些实施方案中，通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
本发明某些实施方案公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括使个体的生物样品与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，该方法进一步包括在个体的生物样品与环磷酰胺接触后测定样本中细胞死亡水平。在某些实施方案中，如果生物样品中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值，该方法进一步包括中断治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括基于生物样品中观察到的细胞死亡水平来调整治疗方法。在某些实施方案中，如果生物样品中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值，该方法进一步包括选择替代的治疗。在某些实施方案中，生物样品是血液和/或白细胞。在某些实施方案中，白细胞是T细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。在某些实施方案中，通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR
Figure BPA00001204767900061
。在某些实施方案中，通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
本发明某些实施方案公开了一种组合物，该组合物包括溶液中的环磷酰胺，其中溶液中的环磷酰胺是从冻干的环磷酰胺重构的。在某些实施方案中，环磷酰胺在磷酸缓冲盐水中重构。在某些实施方案中，溶液中环磷酰胺的浓度至少约20mg/ml。在某些实施方案中，组合物在患有神经性自身免疫疾病的个体中被用作免疫清除剂。在某些实施方案中，个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
附图简述
本发明的新特征在附带的权利要求中详细地列出。参考下面提供了本发明原理的说明性实施例的详细描述以及其附图，可以更好理解本发明的特征和优势：
图1是一个说明性图示，显示了使用HiGa治疗的个体在其接受随访的时间中，均没有经历MS的复发。
发明详述
在某些实施方案中，治疗方法包括对患有神经性自身免疫疾病的个体施用起免疫清除剂作用的药剂。在某些实施方案中，免疫清除剂是化疗剂、生物制剂或放射性制剂。在某些实施方案中，化疗剂是细胞生长抑制剂、烷化剂、抗代谢药和细胞毒性抗生素。在某些实施方案中，烷化剂是
Figure BPA00001204767900071
唑碱。在某些实施方案中，
Figure BPA00001204767900072
唑碱是环磷酰胺。在某些实施方案中，生物制剂是消耗T细胞的抗体。在某些实施方案中，消耗T细胞的抗体是抗淋巴细胞球蛋白、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗IL-2受体抗体、抗CD-3受体抗体(如OKT3)或其组合。
在进一步的实施方案中，在个体接受了治疗有效量的免疫清除剂后，对个体施用治疗有效量的至少一种免疫系统重建剂以重建个体被清除的免疫系统。在某些实施方案中，这种免疫系统重建剂是集落刺激因子、造血干细胞或其组合。在某些实施方案中，集落刺激因子是粒细胞-巨噬细胞CSF(GM-CSF)、粒细胞CSF(G-CSF)和巨噬细胞CSF(M-CSF)或其组合。
在某些实施方案中，在个体接受了(a)接受了治疗有效量的免疫清除剂；和(b)至少一种治疗有效量的免疫系统重建剂之后，对个体施用至少一种治疗有效量的免疫调节剂。在某些实施方案中，免疫调节剂是醋酸格拉默，5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷(AICAR)、干扰素(如IFNβ-1a、IFNβ-1b)或其组合。
术语定义
除非另有所指，下面的术语在本申请和附带的权利要求中使用时具有如下含义。
术语“淋巴细胞”包括，非限制性举例，B细胞、T细胞、NKT细胞、和NK细胞。在某些实施方案中，淋巴细胞是指未成熟的、成熟的、未分化的、分化的白淋巴细胞群体，包括组织特异的和专门的种类。在某些实施例中，淋巴细胞包括B淋巴细胞谱系，B淋巴细胞谱系包括前B细胞、祖B细胞、早期祖B细胞、晚期祖B细胞、大前B细胞、小前B细胞、未成熟的B细胞、成熟的B细胞、血浆B细胞、记忆B细胞、B-1细胞、B-2细胞和无能AN1/T3细胞群体。
术语B细胞是指，非限制性举例，前B细胞、祖B细胞、早期祖B细胞、晚期祖B细胞、大前B细胞、小前B细胞、未成熟的B细胞、成熟的B细胞、血浆B细胞、记忆B细胞、B-1细胞、B-2细胞和无能AN1/T3细胞群体。在某些实施例中，术语B细胞包括在其细胞表面表达免疫球蛋白重链和/或轻链的B细胞。在某些实施例中，术语B细胞包括表达和分泌免疫球蛋白重链和/或轻链的B细胞。在某些实施例中，术语B细胞包括与抗原在其细胞表面结合的细胞。在本文公开的在某些实施方案中，在所描述的过程中使用B细胞或ANT1/T3细胞。在某些实施方案中，这样的细胞任选地被适合表达、能够表达(如，可诱导的表达)或能够分化成适合表达抗体的细胞的任意动物细胞替代，包括，例如造血干细胞、B细胞、前B细胞、祖B细胞、早期祖B细胞、晚期祖B细胞、大前B细胞、小前B细胞、未成熟的B细胞、成熟的B细胞、血浆B细胞、记忆B细胞、B-1细胞、B-2细胞、无能B细胞或无能AN1/T3细胞。
术语“抗原”是指能够诱导抗体产生的物质。在某些实施例中，抗原是结合抗体可变区的物质。
术语“表达”是指一个或多个下列事件：(1)在细胞内从DNA序列生产RNA模板(如，通过转录)；(2)在细胞内加工RNA转录物(如，通过剪接、编辑、5’端帽形成和/或3’末端形成)；(3)在细胞内，将RNA序列翻译成多肽或蛋白；(4)细胞内多肽或蛋白翻译后的修饰；(5)多肽或蛋白在细胞表面的呈递；(6)从细胞中分泌或释放蛋白或多肽。
术语“抗体”是指单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、移植抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、骆驼化的抗体、单链Fvs(scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab’)片段、二硫键连接Fvs(sdFv)、胞内抗体和抗独特型(抗-Id)抗体以及上述任意抗体的抗原结合片段。特别是，包括免疫球蛋白分子或免疫球蛋白分子免疫活性片段的抗体，即，包含抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以是任何类型(如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)，任何种类(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚种类。术语“抗体”和免疫球蛋白在最广泛的意义上可以交换使用。不同种类免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是本领域熟知的。在某些实施方案中抗体是更大的分子的一部分，由抗体与一个或多个其他蛋白或肽共价或非共价连接组成。
本文中的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体、移植抗体、人抗体，以及其片段，包括以任何方式改造以减少在人中的免疫原性的抗体。因此，例如，单克隆抗体和片段等，在本文包括“嵌合”抗体和“人源化”抗体。通常，嵌合抗体包括与特定种类衍生出的或属于特定抗体种类或亚种类的抗体中的对应序列相同或同源的重链和/或轻链部分，而链的剩余部分与另一个特定种类衍生出的抗体中的或属于另一个特定抗体种类或亚种类的对应序列相同或同源，只要它们能表现出需要的生物活性(U.S.Pat.No.4,816,567)；Morrison等人，Proc.Natl Acad.Sci.81：6851-6855(1984)。例如在某些实施方案中嵌合抗体包含源自鼠的可变区和源自人的恒定区，其中恒定区包括与人IgG2和IgG4同源的序列。本领域中已知多种制备“嵌合”抗体等的。非人(如鼠)抗体或片段的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或抗体的其它抗原结合序列)，其包含源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化的抗体包括移植抗体或CDR移植抗体，其中一个或多个源自非人抗体的互补决定区(CDRs)的部分或全部氨基酸序列被移植到人抗体的适当位置，并保持需要的原始非人抗体的结合特异性和/或亲和力。在某些实施方案中，对应的非人残基取代了人免疫球蛋白的Fv框架残基。在某些实施方案中人源化的抗体包括在受体抗体中以及植入的CDR或框架序列中均找不到的残基。进行这些修饰以进一步完善抗体和优化抗体性能。在某些实施方案中，人源化抗体包括基本上全部，至少一个，通常两个的可变区，其中全部或基本上全部的CDR区与非人免疫球蛋白的CDR区对应，而全部或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的FR区。更多的细节，参见，如：Jones等人，Nature 321：522-525(1986)；Reichmann等人，Nature 332：323-329(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596(1992)。本领域中已知多种制备“人源化”抗体的方法。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可以互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于天然存在的氨基酸聚合物以及其中一个或多个氨基酸残基是非天然存在的氨基酸(如氨基酸类似物)的氨基酸聚合物。该术语涵盖任意长度的氨基酸链，包括全长蛋白质，其中氨基酸残基通过共价肽键相连。
术语“氨基酸”是指天然存在的或非天然存在的氨基酸，以及以与天然氨基酸类似的方式作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然编码氨基酸是20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸)、吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构，即α碳与一个氢、一个羧基、一个氨基和一个R基相连的物质，如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。这样的类似物具有经过修饰的R基(如正亮氨酸)或经过修饰的肽框架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。
本文的氨基酸使用其被通常知晓的三字母符号或IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission推荐的单字母符号表示。同样，核苷酸使用其被通常接受的单字母代码表示。
术语“核酸”是指脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸以及其单链或双链形式的聚合物。除非特别限定，该术语涵盖的核酸包括已知的，具有与提及到的核酸类似的结合特性，并以与天然存在的核苷酸类似方式代谢的天然核苷酸类似物。除非另有特别限定，该术语也指包括PNA(肽核酸)的寡核苷酸类似物，用于反义技术的DNA类似物(硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等)。除非另外说明，一个特定的核酸序列也暗含其保守修饰的变体(包括但不限于，简并密码子替换)和互补序列以及明确表示出的序列。特别是，简并密码子替换是通过使用混合碱基和/或脱氧肌苷残基替换一个或多个选定的(或全部)密码子的第三位得到的序列(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19：5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.260：2605-2608(1985)；和Cassol et al.(1992)；Rossolini等人M01.Cell.Probes 8：91-98(1994))。
术语“治疗”、“疗法”和“医治”是指包括：减轻、缓解或改善疾病或病症(如MS、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力或横贯性脊髓炎)以及所述疾病或病症的症状；防止另外的症状；缓解或防止症状潜在的代谢起因；抑制所述疾病或病症，如阻止所述疾病或病症的发展；减轻所述疾病或病症；引起所述疾病或病症的退行；减轻所述疾病或病症导致的状况；或预防性和/或治疗性地终止所述疾病或病症的症状。
术语“前药”是指在体内转化为活性形式的化合物或药剂。在某些实施方案中，前药通过一个或多个步骤或过程在酶作用下代谢成为化合物生物上、医药上或治疗上有活性的形式。为生产前药，将有药学活性的化合物进行修饰，以使在体内施用后，活性化合物再次生成。在一个实施方案中，设计前药以改变药物的代谢稳定性或传输特性来掩蔽副作用或毒性，或改变药物的其他性质或特性。
术语“个体”是用来指动物，优选哺乳动物，包括人或非人的动物。术语个体、对象和患者可以互换使用。这些术语均不要求个体正处于在专业医疗人员的护理下(如医生、护士、济贫医院护理工人、护理员或医师助手)。
术语“有效量”或“治疗有效量”指所施用的本发明中所公开的药剂的量是足够的量，可以预期所述量在一定程度上减轻一个或多个所治疗疾病或病症的症状。例如，施用环磷酰胺的结果是减少和/或完全消除成熟的和/或未成熟的细胞(如淋巴细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞)。术语“治疗有效量”包括，例如，预防有效量。本文公开的药剂的“有效量”是可以在没有过多的不良副作用的情况下有效获得理想的药理作用或治疗改善的量。应当理解，在某些实施方案中，由于施用的化合物代谢，个体的年龄、体重、常规情况，所治疗的疾病，所治疗的疾病的严重程度以及处方医师的判断不同，“有效量”或“治疗有效量”会随个体不同而变化。也应当理解，缓释剂型中的“有效量”可以不同于基于药物动力学和药效学的考虑的速释剂型中的“有效量”。
神经性自身免疫疾病
在某些实施方案中，因为自身免疫疾病治疗个体(如个体已经被诊断有自身免疫疾病，个体被怀疑有自身免疫疾病，或个体有发展为自身免疫疾病的倾向)。在某些例子中，自身免疫疾病以免疫系统攻击自身(如，自身细胞)为特征。在某些实施方案中，自身免疫疾病是神经性自身免疫疾病(如，免疫系统攻击大部分、基本上所有或部分的周围神经系统，大部分、基本上所有或部分的中枢神经系统，神经，神经元和髓鞘)。在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合。
多发性硬化
在某些实施方案中，神经性自身免疫疾病是多发性硬化(也被称为MS、播散性硬化、播散性脑脊髓炎)。MS是一种自身免疫疾病，在某些情况下，以中枢神经系统内的脱髓鞘和炎症的反复发作为特征。在某些情况下，神经元的脱髓鞘导致其传导电信号能力的损害。
MS的症状包括，但不限于，感觉的变化(如，感觉减退和感觉异常)、肌无力、肌肉痉挛、行动困难、协调和/或平衡困难(如，共济失调)、说话困难(如，构音障碍)、下咽困难(如吞咽困难)、控制眼运动困难(如，眼球震颤)、视力障碍(如，复视)、疲劳、疼痛(如，急性或慢性疼痛)、膀胱功能控制困难、肠功能控制困难和抑郁。
MS通常表现为复发-缓解(RRMS)。复发-缓解MS由复发/加重期(如，无故和意外的发生新症状，或旧症状复发，持续时间超过24小时)和随后的缓解期(如，有有限的MS症状或无MS症状的时期)组成。在约50％的诊断为RRMS的个体中，该病进展为继发进展MS。继发进展MS(SPMS)的特点在于在复发-缓解MS的初始时期之后，在复发之间，神经系统的衰退仍然进展而没有任何明确缓解期。在某些实施方案中，多发性硬化已经复发。在某些实施方案中，多发性硬化正在缓解。在某些实施方案中，多发性硬化处于进展期。
MS通常使用McDonald标准诊断。表1中列出了基于个体的临床表现诊断MS所需的附加数据。
Figure BPA00001204767900131
表1
残疾进展和症状严重程度的主要临床衡量标准是扩展残疾状态量表(Expanded Disability Status Scale)或EDSS。基于八个功能系统(视觉、脑干、感觉、小脑、括约肌、大脑等)的神经学检查，作为被广泛使用的临床等级化标度的EDSS的范围是从0(正常)到10(死于MS)。这是一种通过疾病严重程度分类MS个体的有用工具。它基于观察者或神经学家通过结构化的访谈得出的评分来衡量缺陷和残疾程度。
此外残疾进展和症状严重程度的其它衡量标准是多发性硬化症功能复合量表(Multiple Sclerosis Functional Composite)(MSFC)。该表基于设计为测试步态、上肢灵活度和认知的三项个体测试的综合评分。三项分测试为：a)25英尺限时步行(25TW)；b)9洞桩测试(9-HPT)；c)同步听觉系列加算测试(PASAT-3)。PASAT测验要求个体将出现在听力磁带中的连续数字相加并口头反应出其准确的和。当每个数字被放出时，个体必须将该数字与其前面放出的数字相加而不是与个体前一个反应相加。
非限制性举例，可以采用皮质甾类(例如，静脉注射500到1000mg甲泼尼龙，随后是递减剂量的口服泼尼松，持续数周)，干扰素(如，IFNβ-1a和IFNβ-1b)，醋酸格拉默，米托蒽醌和那他珠单抗治疗MS症状。
环磷酰胺
本申请某些实施方案公开了通过使用环磷酰胺治疗有此需要的个体的神经性自身免疫疾病的方法。本申请某些实施方案进一步公开了一种包含溶液中的环磷酰胺的组合物，其中溶液中的环磷酰胺是由冻干的环磷酰胺重构而得。
环磷酰胺(N，N-双(2-氯乙基)-1，3，2-氧氮磷杂环己烷-2-氨基2-氧化物)是一种氮芥烷化剂。在某些情况下，其以前药的形式(即，通过代谢转化为活性形式的药物的无活性或低活性形式)施用给个体。在某些情况下，环磷酰胺在肝中被代谢成活性形式(4-羟基环磷酰胺)以及活性形式的互变异构体(醛磷酰胺)。在某些情况下，醛磷酰胺被转化成(a)羧基磷酰胺(一种无毒的代谢物)(通过醛脱氢酶(ALDH))；和(b)磷酰胺芥(一种有毒的代谢物)。在某些情况下，ALDH在造血干细胞中高表达。在某些情况下，成熟和未成熟的细胞(如，淋巴样细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞)表达低水平的ALDH。在某些情况下，磷酰胺芥只在具有低水平ALDH的细胞中发现。在某些情况下，具有高水平ALDH的细胞主要将醛磷酰胺代谢为羧基磷酰胺。
在某些情况下，磷酰胺芥催化DNA交联的形成。在某些情况下，在dG和另一dG之间，在5’-d(GAC)-3’交联。在某些情况下，在DNA第一条链的dG和第一条链的另一个dG之间交联(链内交联)。在某些情况下，在DNA第一条链的dG和第二条链的dG之间交联(链间交联)。在某些情况下，链内交联和链间交联的形成引起细胞死亡(如，凋亡)。
在某些实施方案中，施用给有此需要的个体的环磷酰胺是脉冲式(或低剂量)的环磷酰胺(如，最初400-1000mg/m2，逐渐增加至B和CD4细胞减少到低于对照群体第五百分位数)。
在某些实施方案中，施用给需要其的个体的环磷酰胺是高剂量的环磷酰胺。在某些实施方案中，高剂量的环磷酰胺是“前期”高剂量用药法(每天50mg/kgIV，连续4天)的环磷酰胺，4天内给药总量为200mg/kg每人。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了大部分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系统成分。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了无毒性量的造血干细胞。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺没有清除造血干细胞。
在某些实施方案中，环磷酰胺被制成溶液。在某些实施方案中，环磷酰胺溶液包含从冻干的环磷酰胺重构的环磷酰胺。在某些实施方案中，冻干的环磷酰胺在磷酸盐缓冲液(PBS)、盐溶液、水或其组合中被重构。在某些实施方案中，高剂量环磷酰胺溶液的浓度为20mg/ml。在某些情况下，环磷酰胺在高浓度下(如，在超过15mg/ml的浓度下)缓慢重构。在某些情况下，冻干的环磷酰胺在高浓度下(如，在超过15mg/ml的浓度下)快速重构。在某些实施方案中，环磷酰胺通过静脉内施用给有此需要的个体。
HiGa治疗
本发明一些实施方案公开了一种治疗有此需要的个体的神经性自身免疫疾病的方法，包括对个体施用：(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；(b)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子；和(c)约10mg/日到约80mg/日的醋酸格拉默；如果与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平超过预设的临界值则停止对其治疗。在某些实施方案中，对个体施用约50mg/kg/日的环磷酰胺。在某些实施方案中，对个体施用约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，对个体施用约40mg/日的醋酸格拉默。
在某些实施方案中，环磷酰胺是高剂量(每天50mg/kg IV，连续4天)的环磷酰胺。在某些实施方案中，连续约4天每日施用环磷酰胺。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了大部分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系统成分。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了无毒性量的造血干细胞。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺没有清除造血干细胞。
在某些实施方案中，环磷酰胺被制成溶液。在某些实施方案中，环磷酰胺溶液包含从冻干环磷酰胺重构的环磷酰胺。在某些实施方案中，冻干的环磷酰胺在磷酸盐缓冲液(PBS)、盐溶液、水或其组合中被重构。在某些实施方案中，环磷酰胺溶液浓度为20mg/ml。在某些实施方案中，环磷酰胺通过静脉内施用给有此需要的个体。
在某些情况下，使用环磷酰胺免疫清除之后重建免疫系统。在某些情况下，使用初始的，抗环磷酰胺的干细胞来重建免疫系统。在某些情况下，使用环磷酰胺治疗的个体的MS疾病活动完全终止。在某些情况下，某些个体的MS再次激活并开始显示疾病进展。在某些情况下，重建后的MS进程比治疗前的慢。
在某些实施方案中，在施用环磷酰胺完成后约6天开始施用粒细胞集落刺激因子(GCSF或CSF3)。在某些实施方案中，对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过约1.0×109个细胞/L。
在某些情况下，在施用环磷酰胺引起的可预见的短暂的减少后，GCSF帮助恢复嗜中性粒细胞数量。GCSF是一种集落刺激因子激素。在某些情况下，可以在骨髓中的造血干细胞上发现GCSF受体。在某些情况下，GCSF与其受体的结合刺激骨髓产生和释放粒细胞和干细胞。它也刺激嗜中性粒细胞前体和成熟的嗜中性粒细胞的存活、增殖、分化和功能。
在某些实施方案中，在施用环磷酰胺完成后约30天开始施用醋酸格拉默。在某些实施方案中，每天施用双倍剂量的GA。在某些实施方案中，皮下施用双倍剂量的GA。
醋酸格拉默(GA)是一种合成的氨基酸聚合物(4.7-11kDa)，由摩尔比为4.2∶3.4∶1.4∶1的L-丙氨酸，L-赖氨酸，L-谷氨酸和L-酪氨酸组成。它被用于治疗RRMS。在某些情况下，相比施用安慰剂的对照组，减少患RRMS的个体的病损和复发数目大约需要3个月20mg的GA治疗。在某些情况下，施用40mg每日剂量的GA，相比对照组，减少患RRMS的个体的病损和复发数目需要的时间少于3个月。
在某些情况下，GA与多种II类MHC分子以高亲和性结合。在某些情况下，GA与II类MHC分子的结合引起已与MHC沟结合的抗原的替换，导致T阻抑细胞的活化。在某些情况下，GA导致Th2调节T细胞的产生。进一步地，在某些情况下，GA是自身免疫疾病的一种普遍抑制物(如，其可以抑制实验性视网膜炎、移植物对宿主和宿主对移植物的免疫排斥疾病，以及实验性炎性肠病的发生)。
本申请公开的方法中GA的使用时间和剂量平衡了两种相竞争的考虑：为了在神经性自身免疫疾病活动的任何可能的再次激活之前开始治疗，要避免GA对免疫清除(immunoablation)后的重建免疫系统的任何未知但可能的负面作用。在某些情况下，在免疫清除后达到大于500个每ml嗜中性粒细胞计数的中位时间约为2周。在某些实施方案中，在免疫清除后1个月开始施用双倍剂量的GA。在某些实施方案中，在免疫清除后1个月开始施用GA以使免疫系统的重建避免受到GA的影响；但是，它为针对神经性自身免疫疾病的复发接种GA提供了足够的时间。
在某些实施方案中，3个月后醋酸格拉默剂量减少到约20mg/日。
在某些实施方案中，对个体施用醋酸格拉默的时间不确定。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默直至个体不再有神经性自身免疫疾病复发的危险。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默约6个月。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默约1年。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默约2年。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默约5年。在某些实施方案中，施用醋酸格拉默约10年。
在某些情况下，在使用高剂量环磷酰胺治疗后加以醋酸格拉默治疗显示出协同作用，即，仅使用高剂量环磷酰胺治疗的个体的MS在约3个月到约1年后复发，而结合使用醋酸格拉默的治疗，MS至少1年没有复发，在某些实施例中，超过1年没有复发，参见，例如图1。
HiCAT治疗
本发明一些实施方案公开了一种治疗有此需要的个体的多发性硬化症的方法，该方法包括对个体施用(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；(b)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子；和(c)多至约5μg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白，其中如果个体：不符合治疗标准；怀孕或将要怀孕；如果与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平超过某些对一般人群CD4+T细胞ALDH平均活力预设的临界值；没有或不能提供治疗的知情同意书；或不能被匹配浓集红细胞和血小板供应源，则将其排除出治疗。在某些实施方案中，向个体施用约50mg/kg/日的环磷酰胺。在某些实施方案中，向个体施用约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。在某些实施方案中，向个体施用约2.5μg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白。
在某些实施方案中，环磷酰胺是高剂量的环磷酰胺(例如，每天50mg/kg IV，连续4天)。在某些实施方案中，环磷酰胺连续约4天每日施用。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了大部分或基本上全部的未成熟的和成熟的免疫系统成分。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺清除了无毒性量的造血干细胞。在某些情况下，高剂量的环磷酰胺没有清除造血干细胞。
在某些实施方案中，环磷酰胺被制成溶液。在某些实施方案中，环磷酰胺溶液包含从冻干的环磷酰胺重构的环磷酰胺。在某些实施方案中，冻干的环磷酰胺在磷酸盐缓冲液(PBS)、盐溶液、水或其组合中被重构。在某些实施方案中，环磷酰胺溶液浓度为20mg/ml。在某些实施方案中，环磷酰胺通过静脉内施用给有此需要的个体。
在某些情况下，使用环磷酰胺免疫清除之后重建免疫系统。在某些情况下，使用初始的，抗环磷酰胺的干细胞来重建免疫系统。在某些情况下，使用环磷酰胺治疗的个体的MS疾病活动完全终止。
在某些情况下，某些个体的MS再次激活并开始显示疾病进程。在某些情况下，MS在施用环磷酰胺后再次激活是部分或完全由于环磷酰胺全部破坏自反应T细胞的失败。在某些情况下，抗胸腺细胞球蛋白(ATG)清除血管内存留的抗环磷酰胺性T细胞。在某些情况下，在施用环磷酰胺治疗之前、与其重叠、同时、或在其之后施用ATG，引起比单独使用环磷酰胺治疗可得到的更高的免疫系统耐受性。
在某些实施方案中，抗胸腺细胞球蛋白与环磷酰胺共同施用。在某些实施方案中，抗胸腺细胞球蛋白在施用环磷酰胺之前、之后或与其同时施用。在某些实施方案中，施用粒细胞集落刺激因子是在施用环磷酰胺完成后约6天开始。
在某些实施方案中，施用粒细胞集落刺激因子(GCSF或CSF3)是在施用环磷酰胺完成后约6天开始。在某些实施方案中，对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过1.0×109个细胞/L。
在某些情况下，在施用环磷酰胺引起的可预见的短暂的减少后，GCSF帮助嗜中性粒细胞恢复数量。GCSF是一种集落刺激因子激素。在某些情况下，可以在骨髓中的造血干细胞上发现GCSF受体。在某些情况下，GCSF与其受体的结合刺激了通过骨髓的粒细胞和干细胞的产生和释放。它也刺激嗜中性粒细胞前体和成熟的嗜中性粒细胞的存活、增殖、分化和功能。
在某些实施方案中，对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过1.0×109个细胞/L。
在某些实施方案中，该方法进一步包含在施用环磷酰胺完成后约30天施用双倍剂量的醋酸格拉默。在某些实施方案中，双倍剂量的醋酸格拉默每日施用。在某些实施方案中，双倍剂量的醋酸格拉默皮下施用。
在某些实施方案中，该方法进一步包含施用(a)CPA之外的其他磷酸
Figure BPA00001204767900181
唑；(b)不同类型的抗胸腺细胞抗体，例如全部淋巴细胞和各种T细胞种类抗原的单克隆和多克隆抗体；以及(c)在HiCy治疗之前、与其同时或在其之后使用一系列抗胸腺细胞治疗。
个体控制和药物分配方案
在某些实施方案中，上述的方法进一步包括控制疗法的使用，其中的控制包括第一筛查、第二筛查和环磷酰胺限制分配。
在某些实施方案中，第一筛查包括：(a)确定个体是否符合治疗标准；(b)如果个体是女性，检测个体怀孕情况并为个体提供怀孕咨询；(c)确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平；和(d)为个体匹配浓集红细胞和血小板供应源。
在某些实施方案中，治疗标准包括纳入标准和排除标准。在某些实施方案中，纳入标准包括：
a.个体年龄必须在18到70岁之间；
b.个体必须有临床上明确的神经性自身免疫疾病的诊断(如根据McDonald标准的复发-缓解型MS的明确诊断)；
c.对于MS，在筛查时，个体脑部和/或脊髓MRI必须有两个或更多的钆增强病损；
d.对于MS，个体在过去一年中必须有至少一次临床复发。
e.对于MS，对于MS，纳入的个体EDSS必须介于0-6之间；
f.在本方案的任何实验之前，个体必须给出(并有权给出)书面知情同意书，包括不被视为个体常规治疗部分的筛选测试和评价；以及
g.对于女性，加入研究之前怀孕测试结果为阴性；
对于接受治疗的个体，必须按顺序符合所有的纳入标准。
在某些实施方案中，排除标准包括：
a.任何有怀孕风险的个体；
b.任何心脏射血分数＜45％的个体；
c.任何血清肌酐水平＞2.0的个体；
d.任何临终或垂死的个体；
e.任何胆红素水平＞2.0，和/或转氨酶水平＞2x正常的个体；
f.任何带有起搏器或植入物而不能接受系列MRIs的个体；
g.任何活动性感染的个体，直至感染消退；或
h.任何WBC计数＜3000细胞/μL的个体；血小板＜100,000细胞/μL的个体；和未输血血红蛋白＜10g/dl的个体。
如果符合任何排除标准，个体则被排除出治疗。
在某些实施方案中，如果个体是女性，必须对个体进行怀孕测试并为其提供怀孕咨询。在某些实施方案中，怀孕咨询包括建议个体不要怀孕。在某些实施方案中，怀孕咨询包括建议个体使用有效的节育手段(如禁欲；使用避孕套、避孕海绵、宫颈帽、杀精子剂、激素避孕和宫内避孕装置；子宫切除术和输卵管手术)。
在某些实施方案中，第一筛查包括确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，第一筛查包括确定与个体PBMC相关的细胞死亡水平。
在某些实施方案中，第一筛查进一步包括对个体的基因分型，并从本申请描述的基于环磷酰胺的治疗中排除具有醛脱氢酶基因多态性的那些个体。在某些情况下，醛脱氢酶基因这样的多态性(如，ALDH1A1*2和ALDH1A1*3)会部分或全部导致醛脱氢酶基因表达高于平均水平。在某些情况下，高于平均水平的基因表达部分或全部导致细胞(如，T细胞)具有超过平均水平的醛脱氢酶。在某些实施方案中，超过平均水平的醛脱氢酶部分或全部导致了抗环磷酰胺治疗的细胞。在某些情况下，这些个体对环磷酰胺治疗不反应或反应不佳。在某些情况下，非洲裔美国人具有醛脱氢酶基因多态性(如，ALDH1A1*2和ALDH1A1*3)，其部分或全部导致醛脱氢酶基因表达高于平均水平。在某些情况下，非洲裔美国人对环磷酰胺治疗不反应或反应不佳。参见Scott，等人，Health-Related Effects of Genetic Variations of Alcohol-Metabolizing Enzymes in African Americans，Alcohol Research & Health，Vol.30，No.1，at 18(2007)，为了这类公开内容，通过引用将该文献并入本文。
在某些实施方案中，第一筛查包括为个体匹配浓集红细胞(RBC)供应源。在某些情况下，浓集RBC是从血浆中分离出的红细胞、白细胞或其组合的制成品。在某些实施方案中，对浓集RBC进行了辐照。在某些情况下，如果个体患有贫血症则对其施用浓集RBC。在某些情况下，免疫清除部分或全部导致贫血症。在某些实施方案中，如果个体在接受本申请描述的任何疗法时发生了贫血症则对其施用浓集RBC。
在某些实施方案中，第一筛查包括为个体匹配血小板供应源。在某些情况下，如果个体患有血小板减少症(血小板减少)和血小板增多症则对其施用血小板。在某些情况下，免疫清除部分或全部导致血小板减少症(血小板减少)和血小板增多症。在某些实施方案中，如果个体在接受本申请描述的任何疗法时发生了血小板减少症或血小板增多症则对其施用血小板。
在某些实施方案中，第二筛查包括持续监测个体的怀孕情况，和/或不良事件。对经历不良事件的个体进行恰当的治疗，并以适当的间隔进行观察直至不良事件消退或稳定。不良事件要被报告。下面的信息涉及必须报告的每种不良事件。
a.开始和消退(持续)的日期和时间；
b.严重程度(轻度、中度、重度)；
i.轻度-个体症状仅仅是个体能觉察到或没有使个体不适；没有影响行为或功能；通常不需要处方药缓解症状，但也可能由于个体的特性而给予处方药。
ii.中度-症状严重到足以引起个体不适；影响日常活动表现；个体可以继续进行研究；可能需要对症状进行治疗。
iii.重度-症状引起严重不适；症状引起个体日常生活能力丧失或显著影响日常生活；严重程度可以使得被研究药物的治疗停止；可以对症状给予治疗和/或让个体住院。
c.需要的治疗或采取的措施；
d.结果；以及
e.与被研究的药物的关系(无关、不太可能相关、可能相关、确定相关)
i.无关-反应不符合被研究药物施用的合理时间顺序，而且这些反应可能是个体的临床状态或者对个体施用的其他治疗模式产生的。
ii.不太可能相关-反应不符合被研究药物施用的合理时间顺序，或者这些反应可能是个体的临床状态或者对个体施用的其他治疗模式产生的。
iii.可能相关-反应符合被研究药物施用的合理时间顺序，或该反应符合被怀疑的药物已知的反应方式，以及该反应不能由个体的临床状态或对个体施用的其他治疗模式的已知特点合理解释。
iv.确定-反应符合被研究药物施用的合理时间顺序，而且该反应符合被怀疑的药物已知的反应方式，以及该反应在再次施用药物时复发，和/或随停用药物或减少剂量而得到改善。
严重不良事件(SAEs)按照WHO的指导被分类为IV和V级不良事件。这包括在接受本发明公开的疗法治疗时严重性增加的迹象和症状。仔细监测预期的不良事件如嗜中性粒细胞减少和其他相关的毒性，但不将其定义为SAEs，除非尽管经过适当处理其仍威胁生命。
在某些实施方案中，如果个体怀孕，和/或经历足够严重的不良事件则被排除出治疗。
在某些实施方案中，环磷酰胺的限制分配包括：(a)为每个个体分配一个识别号码；(b)每个识别号码关联一个环磷酰胺容器；和(c)对个体施用来自环磷酰胺容器的环磷酰胺，该个体的识别号码对应于与所述容器关联的识别号码。在某些实施方案中，如果个体通过了第一和第二筛查，则为其分配一个唯一的ID。在某些实施方案中，唯一的ID是数字的ID。在某些实施方案中，唯一的ID是字母的ID。在某些实施方案中，唯一的ID是字母数字的ID。在某些实施方案中，唯一的ID是计算机生成的ID。在某些实施方案中，为唯一的ID生成条码。在某些实施方案中，防串改医疗腕带贴有唯一的ID和/或条码。在某些实施方案中，医疗腕带被置于个体上。
在某些实施方案中，唯一的ID被传送到制备待分配的环磷酰胺的场所。在某些实施方案中，用于分配的制备包括制造环磷酰胺、冻干环磷酰胺、重构环磷酰胺或其组合。在某些实施方案中，唯一的ID被贴到环磷酰胺(如，冻干的或重构的)的容器上。
在某些实施方案中，环磷酰胺被送至施用场所，在此环磷酰胺被施用(输液场所)给其唯一的ID匹配容器上粘贴的唯一的ID和/或条码的个体。在某些实施方案中，如果环磷酰胺以冻干的形式被送至输液场所，在输液场所从冻干环磷酰胺重构环磷酰胺。在某些实施方案中，唯一的ID被粘贴在包含在输液场所重构的环磷酰胺的容器(如，IV包)上。
在某些实施方案中，环磷酰胺被施用给其唯一的ID匹配容器上粘贴的唯一的ID的个体。在某些实施方案中，粘贴至环磷酰胺上唯一的ID和/或条码与个体医疗腕带上的唯一的ID和/或条码相匹配。
醛脱氢酶(ALDH)测定
本发明某些实施方案公开了测量个体生物样品的醛脱氢酶水平的方法。在某些实施方案中，如果多个成熟的和/或未成熟的细胞中的醛脱氢酶水平低于预设的临界值，则选择该个体进行环磷酰胺治疗。在某些实施方案中，如果多个造血干细胞中的醛脱氢酶水平高于预设的临界值，则选择该个体进行环磷酰胺治疗。
在某些实施方案中，如果多个成熟的和/或未成熟的细胞中的醛脱氢酶水平低于预设的临界值，则选择个体参加用于评价环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病(如，多发性硬化、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、红斑狼疮或其组合)有效性的临床试验。在某些实施方案中，如果多个造血干细胞中的醛脱氢酶水平高于预设的临界值，则选择该个体。
在大多数或基本全部的情况下，如果个体没有被选择治疗，则为个体选择替代治疗。在某些实施方案中，替代治疗是使用糖皮质激素(如，静脉注射500到1000mg甲泼尼龙，随后是递减剂量的口服泼尼松，持续数周)、干扰素(如，IFNβ-1a和IFNβ-1b)、醋酸格拉默、米托蒽醌、那他珠单抗、阿伦单抗、BG00012(活菌制剂)、克拉屈滨、dirucotide(MBP8298)、芬戈莫德、拉喹莫德、美罗华、特立氟胺、ATL1102(Teva and Antisense Therapeutics)、CDP323(活菌制剂)、达克珠单抗，雌二醇，肌苷、neurovax、tovaxin或其组合的治疗。
在某些实施方案中，使用大于一般人群中平均CD4+T细胞ALDH活力的75百分位数的临界值来将个体排除出高剂量环磷酰胺的治疗。在某些实施方案中，这些个体被使用高剂量的环磷酰胺和相对更高水平的抗胸腺细胞球蛋白治疗。
治疗前成熟和/或未成熟细胞中的醛脱氢酶(ALDH)测定
在某些实施方案中，生物样品是成熟和/或未成熟细胞。在某些实施方案中，成熟和/或未成熟细胞是白细胞。在某些实施方案中，白细胞是T细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。
荧光测定
在某些实施方案中，多个成熟和/或未成熟细胞中的醛脱氢酶水平通过荧光醛脱氢酶底物实验测定。在某些实施方案中，使用覆盖有磁珠的抗CD3和抗CD28活化多个成熟和/或未成熟细胞中的多个T细胞24到48小时。在某些实施方案中，成熟和/或未成熟细胞以亚致死剂量的环磷酰胺处理以诱导ALDH的表达。在某些实施方案中，所述多个成熟和/或未成熟细胞使用荧光醛脱氢酶底物(如，ALDEFLUOR)和荧光抗CD4细胞表面标记物染色。在某些实施方案中，荧光水平可以使用任何适合的方法检测和/或测量(如，通过使用四色FACS流式细胞仪)。在某些实施方案中，通过任何适合的方法(如，使用CellQuest软件)从荧光水平推测醛脱氢酶底物水平。在某些实施方案中，测定所述多个成熟和/或未成熟细胞中的CD4细胞的荧光醛脱氢酶底物的几何平均荧光强度(MFI)。
在某些实施方案中，在收集所述多个成熟和/或未成熟细胞后多于12小时测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，所述多个成熟和/或未成熟细胞是冷冻保存的。在某些实施方案中，所述多个成熟和/或未成熟细胞是在，非限制性举例，含5％人血清的Iscove′s Modified Dulbecco′s Medium(IMDM)中解冻的。
在某些实施方案中，使用任何合适的方法(如，Ficoll梯度密度离心)从所述多个成熟和/或未成熟细胞中提取外周血单核细胞(PBMC)。在某些实施方案中，使用覆盖有磁珠的抗CD3和抗CD28活化所述多个PBMC中的多个T细胞24到48小时。在某些实施方案中，PBMC以亚致死剂量的环磷酰胺处理以诱导ALDH的表达。在某些实施方案中，使用荧光醛脱氢酶底物(如，ALDEFLUOR
Figure BPA00001204767900241
)和荧光抗CD4细胞表面标记物染色PBMC样品。在某些实施方案中，可以使用任何适合的方法(如，通过使用四色FACS流式细胞仪)检测和/或测量荧光水平。在某些实施方案中，通过任何适合的方法(如，使用CellQuest软件)从荧光水平推测醛脱氢酶底物水平。在某些实施方案中，测定PBMC中的CD4细胞的荧光醛脱氢酶底物的几何平均荧光强度(MFI)。
在某些实施方案中，在收集所述多个PBMC后多于12小时测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，所述多个PBMC是冷冻保存的。在某些实施方案中，所述多个PBMC是在，非限制性举例，含5％人血清的Iscove′s Modified Dulbecco′s Medium(IMDM)中解冻的。
RNA测定
在某些实施方案中，通过测量编码醛脱氢酶的RNA序列的水平来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶的水平包括(a)使从所述多个成熟和/或未成熟细胞中提取的RNA与探针接触；(b)与探针接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗提取的RNA(如，冲洗)；和(c)检测和/或测量RNA/探针复合物的量。
在某些实施方案中，使用任何适合的方式(如，溶解细胞随后酚-氯仿提取)从成熟和/或未成熟细胞中提取RNA。在某些实施方案中，提取的RNA与探针杂交。在某些实施方案中，探针是与大部分、几乎全部或部分编码醛脱氢酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些实施方案中，探针是同位素标记的、放射性标记的或荧光标记的。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量RNA/探针复合物。在某些实施方案中，探针从商业供应商处购买。在某些实施方案中，探针是自己合成的。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法(如，Ficoll梯度密度离心)从所述多个成熟的和/或未成熟的细胞中提取多个外周血单核细胞(PBMC)。在某些实施方案中，使用覆盖有磁珠的抗CD3和抗CD28活化所述多个PBMC中的多个T细胞24到48小时。在某些实施方案中，PBMC以亚致死剂量的环磷酰胺处理以诱导ALDH的表达。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶的水平包括(a)使从所述多个PBMC中提取的RNA与探针接触；(b)与探针接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗提取的RNA(如，冲洗)；(c)检测和/或测量RNA/探针复合物的量。在某些实施方案中，探针从商业供应商处购买。在某些实施方案中，探针是自己合成的。
在某些实施方案中，使用任何适合的方式(如，溶解细胞随后酚-氯仿提取)从所述多个PBMC提取RNA。在某些实施方案中，提取的RNA与探针杂交。在某些实施方案中，探针是与大部分、几乎全部或部分编码醛脱氢酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些实施方案中，探针是同位素标记的、放射性标记的或荧光标记的。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量RNA/探针复合物。在某些实施方案中，探针从商业供应商处购买。在某些实施方案中，探针是自己合成的。
抗体检测
在某些实施方案中，通过使多个成熟和/或未成熟细胞与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶水平包括(a)溶解多个成熟和/或未成熟细胞；(b)使多个成熟和/或未成熟细胞的溶解产物与醛脱氢酶抗体接触；(c)与抗体接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗抗体-溶解产物混合物(如，冲洗)；以及(d)检测和/或测量抗体/醛脱氢酶复合物的量。在某些实施方案中，抗体从商业供应商处购买。在某些实施方案中，抗体是自己制备的。制备抗体的方法，参见Kohler等人，Nature，256：495(1975)；U.S.Pat.No.4,816,567；或Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(Academic Press，1986)；Ward等人，Nature 341：544-546 (1989)；Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Clackson等人，Nature，352：624-628(1991)Marks 等人，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)，为了这类公开内容，通过引用将所有文献并入本文。在某些实施方案中，溶解产物与抗体接触时在冰上温育。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，荧光团是荧光素。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量细胞表面标记物/抗体复合物。
在某些实施方案中，通过使所述多个PBMC与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶水平包括(a)溶解多个PBMC；(b)使溶解产物与醛脱氢酶抗体接触；(c)与抗体接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗抗体-溶解产物混合物(如，冲洗)；以及(d)检测和/或测量抗体/醛脱氢酶复合物的量。在某些实施方案中，抗体从商业供应商处购买。在某些实施方案中，抗体是自己制备的。制备抗体的方法，参见Kohler等人，Nature，256：495(1975)；U.S.Pat.No.4,816,567；或Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(Academic Press，1986)；Ward等人，Nature 341：544-546(1989)；Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Clackson等人，Nature，352：624-628(1991)Marks等人，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)，为了这类公开内容，通过引用将所有文献并入本文。在某些实施方案中，所述多个PBMC与抗体接触时在冰上温育。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，荧光团是荧光素。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量细胞表面标记物/抗体复合物。
采用针对成熟和/未未成熟细胞的醛脱氢酶(ALDH)测定监测接受环磷酰胺治疗的个体
本申请在某些实施方案中进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一批多个成熟和/或未成熟细胞中以及第二批多个成熟和/或未成熟细胞中的醛脱氢酶的水平，其中所述第一批多个成熟的和/或未成熟的细胞以及所述第二批多个成熟的和/或未成熟的细胞是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果成熟和/或未成熟细胞中观察到的醛脱氢酶值超过预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果成熟和/或未成熟细胞中观察到的醛脱氢酶值超过预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据生物样品中观察到的醛脱氢酶水平调整治疗。在某些实施方案中，如果ALDH水平升高，则增加环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则减少环磷酰胺剂量。
本申请某些实施例进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一批多个PBMC中以及第二批多个PBMC中的醛脱氢酶的水平，其中所述第一批多个PBMC以及所述第二批多个PBMC是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个PBMC中观察到的醛脱氢酶值超过预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个PBMC中观察到的醛脱氢酶值超过预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据在多个PBMC中观察到的醛脱氢酶水平调整治疗。在某些实施方案中，如果ALDH水平升高，则增加环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则减少环磷酰胺剂量。
治疗前骨髓中的醛脱氢酶(ALDH)测定
在某些实施方案中，生物样品是骨髓(如，红骨髓、黄骨髓、造血干细胞或其组合)。在某些情况下，使用任何适合的方法(如骨髓活检、骨髓抽吸)获取骨髓。
荧光检测
在某些实施方案中，骨髓中的醛脱氢酶水平通过荧光醛脱氢酶底物实验测定。在某些实施方案中，骨髓以亚致死剂量的环磷酰胺处理以诱导ALDH的表达。在某些实施方案中，骨髓使用荧光醛脱氢酶底物(如，ALDEFLUOR)染色。在某些实施方案中，可以使用任何适合的方法(如，通过使用四色FACS流式细胞仪)检测和/或测量荧光水平。在某些实施方案中，通过任何适合的方法(如，使用CellQuest软件)从荧光水平推测醛脱氢酶底物水平。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法从剩余骨髓分离造血干细胞。在某些实施方案中，造血干细胞以亚致死剂量的环磷酰胺处理以诱导ALDH的表达。在某些实施方案中，造血干细胞使用荧光醛脱氢酶底物(如，ALDEFLUOR)染色。在某些实施方案中，可以使用任何适合的方法(如，通过使用四色FACS流式细胞仪)检测和/或测量荧光水平。在某些实施方案中，通过任何适合的方法(如，使用CellQuest软件)测定的荧光水平推测醛脱氢酶底物水平。
RNA检测
在某些实施方案中，通过测量编码醛脱氢酶的RNA序列的水平来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶的水平包括(a)使从骨髓中RNA与探针接触；(b)与探针接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗RNA(如，冲洗)；和(c)检测和/或测量RNA/探针复合物的量。在某些实施方案中，探针从商业供应商处购买。在某些实施方案中，探针是自己制备的。
在某些实施方案中，使用任何适合的方式(如，溶解细胞，随后酚-氯仿提取)从骨髓中提取RNA。在某些实施方案中，提取的RNA与探针杂交。在某些实施方案中，探针是与大部分、几乎全部或部分编码醛脱氢酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些实施方案中，探针是同位素标记的、放射性标记的或荧光团标记的。在某些情况下，使用任何适合的方式(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量RNA/探针复合物。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法从剩余的骨髓中分离多个造血干细胞。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶的水平包括(a)使从多个造血干细胞中提取的RNA与探针接触；(b)与探针接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗RNA(如，冲洗)；和(c)检测和/或测量RNA/探针复合物的量。在某些实施方案中，探针从商业供应商处购买。在某些实施方案中，探针是自己合成的。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法从剩余的骨髓中分离造血干细胞。使用任何适合的方式(如，溶解细胞，随后酚-氯仿提取)从造血干细胞中提取RNA。在某些实施方案中，提取的RNA与探针杂交。在某些实施方案中，探针是与大部分、几乎全部或部分编码醛脱氢酶的RNA序列同源的寡核苷酸序列。在某些实施方案中，探针是同位素标记的、放射性标记的或荧光团标记的。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量RNA/探针复合物。
抗体检测
在某些实施方案中，通过使骨髓与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶水平包括(a)溶解骨髓样品；(b)使骨髓的溶解产物与醛脱氢酶抗体接触；(c)与抗体接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗抗体-溶解产物混合物(如，冲洗)；以及(d)检测和/或测量抗体/醛脱氢酶复合物的量。在某些实施方案中，抗体从商业供应商处购买。在某些实施方案中，抗体是自己制备的。制备抗体的方法，参见Kohler等人，Nature，256：495(1975)；U.S.Pat.No.4,816,567；or Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(Academic Press，1986)；Ward等人，Nature 341：544-546(1989)；Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Clackson等人，Nature，352：624-628(1991)Marks等人，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)，为了这类公开内容将所有文献通过引用并入本文。在某些实施方案中，骨髓与抗体接触时在冰上温育。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，荧光团是荧光素。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量醛脱氢酶/抗体复合物。
在某些实施方案中，通过使多个造血干细胞与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。在某些实施方案中，测量醛脱氢酶水平包括(a)溶解多个造血干细胞；(b)使造血干细胞的溶解产物与醛脱氢酶抗体接触；(c)与抗体接触后，使用缓冲液(如FACS缓冲液)洗抗体-溶解产物混合物(如，冲洗)；以及(d)检测和/或测量抗体/醛脱氢酶复合物的量。在某些实施方案中，抗体从商业供应商处购买。在某些实施方案中，抗体是自己制备的。制备抗体的方法，见Kohler等人，Nature，256：495(1975)；U.S.Pat.No.4,816,567；or Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(Academic Press，1986)；Ward等人，Nature 341：544-546(1989)；Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Clackson等人，Nature，352：624-628(1991)Marks等人，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)，为了上述公开内容将所有文献通过引用并入本文。在某些实施方案中，溶解产物与抗体接触时在冰上温育。在某些实施方案中，抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。在某些实施方案中，荧光团标记是荧光素。在某些情况下，使用任何适合的方法(如，HPLC、荧光显微术、共焦显微术、微阵列扫描仪、表面细胞质基因组反响、红外光谱法或放射自显影)检测和/或测量醛脱氢酶/抗体复合物。
采用针对骨髓的醛脱氢酶(ALDH)测定监测接受环磷酰胺治疗的个体
本申请在某些实施方案中进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一骨髓样品中以及第二骨髓样品中的醛脱氢酶的水平，其中第一骨髓样品以及第二骨髓样品是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果骨髓样品中观察到的醛脱氢酶水平低于预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果骨髓样品中观察到的醛脱氢酶水平低于预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据骨髓样品中观察到的醛脱氢酶水平调整治疗。在某些实施方案中，如果ALDH水平升高，则增加环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则减少环磷酰胺剂量。
本申请在某些实施方案中进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一批多个造血干细胞中以及第二批多个造血干细胞中的醛脱氢酶的水平，其中所述第一批多个造血干细胞以及所述第二批多个造血干细胞是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个造血干细胞中观察到的醛脱氢酶水平低于预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个造血干细胞中观察到的醛脱氢酶水平低于预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据造血干细胞中观察到的醛脱氢酶水平调整治疗方法。在某些实施方案中，如果ALDH水平升高，则增加环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则减少环磷酰胺剂量。
环磷酰胺导致的细胞死亡测定
成熟和/或未成熟治疗前细胞死亡的测定
本发明某些实施方案公开了测量多个来自个体的成熟和/或未成熟细胞的由环磷酰胺导致的细胞死亡(如，程序性死亡或坏死)水平的方法。在某些实施方案中，如果多个来自个体的成熟和/或未成熟细胞的死亡水平超过了预设的临界值，则选择该个体进行环磷酰胺治疗。在某些实施方案中，如果个体中多个成熟和/或未成熟细胞的由环磷酰胺导致的细胞死亡水平超过了预设的临界值，则选择个体参加用于评价环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病(如，多发性硬化、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、红斑狼疮或其组合)有效性的临床试验。
在某些实施方案中，通过任何适合的方法从个体中采集多个成熟和/或未成熟细胞。在某些实施方案中，所述多个成熟和/或未成熟细胞与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，所述多个成熟和/或未成熟细胞与环磷酰胺接触约24小时。在某些实施方案中，将细胞死亡水平与对照组相比较。在某些实施方案中，对照组是在接触环磷酰胺后显示出已知的细胞死亡水平的多个成熟和/或未成熟细胞。在某些实施方案中，对照组是在接触环磷酰胺后多个成熟和/或未成熟细胞中的平均细胞死亡水平。在某些实施方案中，如果个体生物样品中的细胞死亡水平低于对照，则为该个体选择替代治疗。
本发明某些实施方案公开了测量个体中多个PBMC的由环磷酰胺导致的细胞死亡(如，程序性死亡或坏死)水平的方法。在某些实施方案中，如果个体PBMC的细胞死亡水平超过了预设的临界值，则选择该个体进行环磷酰胺治疗。在某些实施方案中，如果个体PBMC由环磷酰胺导致的细胞死亡水平超过了预设的临界值，则选择个体参加用于评价环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病(如，多发性硬化、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、红斑狼疮或其组合)有效性的临床试验。
在某些实施方案中，通过任何适合的方法(如，Ficoll密度梯度离心)从多个成熟和/或未成熟细胞中分离外周血单核细胞(PBMC)。在某些实施方案中，所述PBMC与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，PBMC与环磷酰胺接触约24小时。在某些实施方案中，将细胞死亡水平与对照组相比较。在某些实施方案中，对照组是在接触环磷酰胺后显示出已知的细胞死亡水平的多个PBMC。在某些实施方案中，对照组是在接触环磷酰胺后多个PBMC中的平均细胞死亡水平。在某些实施方案中，如果个体中多个PBMC细胞死亡水平低于对照，则为该个体选择替代治疗。
采用针对成熟和/或未成熟细胞的细胞死亡测定监测接受环磷酰胺治疗的个体
本发明某些实施方案进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一批多个成熟和/或未成熟细胞样品中以及第二批多个成熟和/或未成熟细胞的细胞死亡水平，其中所述第一批多个成熟和/或未成熟细胞以及所述第二批多个成熟和/或未成熟细胞是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个成熟和/或未成熟细胞中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个成熟和/或未成熟细胞中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据多个成熟和/或未成熟细胞中观察到的细胞死亡水平调整治疗方法。在某些实施方案中，如果细胞死亡水平升高，则减少环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则增加环磷酰胺剂量。
本发明某些实施方案进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一批多个PBMC以及第二批多个PBMC的细胞死亡水平，其中所述第一批多个PBMC以及所述第二批多个PBMC是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个PBMC中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果多个PBMC中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则选择替代的治疗。在某些实施方案中，对照是在接触环磷酰胺后显示出已知的细胞死亡水平的多个PBMC。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据多个PBMC中观察到的细胞死亡水平调整治疗。在某些实施方案中，如果细胞死亡水平升高，则减少环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则增加环磷酰胺剂量。
针对骨髓的治疗前细胞死亡测定
本发明某些实施方案公开了测量个体骨髓中由环磷酰胺导致的细胞死亡(如，程序性死亡)水平的方法。在某些实施方案中，如果个体骨髓中的细胞死亡水平低于预设的临界值，则选择该个体进行环磷酰胺治疗。在某些实施方案中，如果个体中骨髓中由环磷酰胺导致的细胞死亡水平低于预设的临界值，则选择个体参加用于评价环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病(如，多发性硬化、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、红斑狼疮，或其组合)有效性的临床试验。
在某些实施方案中，骨髓与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，骨髓与环磷酰胺接触约24小时。在某些实施方案中，对照是在接触环磷酰胺后显示出已知的细胞死亡水平的骨髓。在某些实施方案中，对照是在接触环磷酰胺后骨髓中的平均细胞死亡水平。在某些实施方案中，如果个体骨髓中的细胞死亡水平高于对照，则为该个体选择替代治疗。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法从骨髓中分离多个造血干细胞。在某些实施方案中，所述多个造血干细胞与环磷酰胺接触。在某些实施方案中，所述多个造血干细胞与环磷酰胺接触约24小时。在某些实施方案中，将细胞死亡水平与对照的细胞死亡水平相比较。在某些实施方案中，对照是在接触环磷酰胺后显示出已知的细胞死亡水平的多个造血干细胞。在某些实施方案中，对照是在接触环磷酰胺后造血干细胞的平均细胞死亡水平。在某些实施方案中，如果个体中多个造血干细胞中的细胞死亡水平高于对照，则为该个体选择替代治疗。
采用针对骨髓的细胞死亡测定监测接受环磷酰胺治疗的个体
本发明某些实施方案进一步公开了一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，该方法包括测定至少第一骨髓样品以及第二骨髓样品的细胞死亡水平，其中第一骨髓样品以及第二骨髓样品是在不同时间从个体中取得(如，在施用环磷酰胺之前取样品1，在施用环磷酰胺完成之后96小时取样品2)。
在某些实施方案中，第一骨髓样品以及第二骨髓样品与环磷酰胺相接触(如，接触约24小时)。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果骨髓样品中观察到的细胞死亡水平超过预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果骨髓样品中观察到的细胞死亡水平超过预设的临界值则选择替代的治疗。
在某些实施方案中，该方法进一步包括依据骨髓样品中观察到的细胞死亡水平调整治疗。在某些实施方案中，如果细胞死亡水平升高，则减少环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则增加环磷酰胺剂量。
在某些实施方案中，使用任何适合的方法从第一骨髓样品以及第二骨髓样品中分离多个造血干细胞。在某些实施方案中，来自第一骨髓样品的所述多个造血干细胞以及来自第二骨髓样品的所述多个造血干细胞与环磷酰胺接触(如，接触约24小时)。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果所述第一批多个细胞或第二批多个细胞中观察到的细胞死亡水平超过预设的临界值则停止治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括如果第一批多个细胞或第二批多个细胞中观察到的细胞死亡水平超过预设的临界值则选择替代治疗。在某些实施方案中，该方法进一步包括依据第二批多个造血干细胞中观察到的细胞死亡水平调整治疗。在某些实施方案中，如果细胞死亡水平升高，则减少环磷酰胺剂量。在某些实施方案中，如果ALDH水平降低，则增加环磷酰胺剂量。
药物组合物制剂
在某些实施方案中，药物组合物使用一种或多种生理上可接受的载体，按照惯用的方法配制，所述载体包括，如，帮助将活性化合物制备成适合医药用途的制品的赋形剂和助剂。在某些实施方案中，适合的制剂依选择的施用途径而定。本申请描述的药物组合物的概述在，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Nineteenth Ed(Easton，Pa.：Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania 1975；Liberman，H.A.and Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Seventh Ed.(Lippincott Williams & Wilkins1999)中可见。
本文中使用的药物组合物，是指本申请描述的化合物(如，环磷酰胺、醋酸格拉默、粒细胞集落刺激因子和抗胸腺细胞球蛋白)与其他化学成分，如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。在某些情况下，药物组合物辅助将化合物施用至个体或细胞。在某些使用本申请提供的治疗方法或用途的实施方案中，药物组合物中的治疗有效量的本申请描述的化合物被施用给患有疾病、障碍、病症的个体。在具体的实施方案中，个体是人。如本文讨论的，本申请描述的有治疗作用的化合物单独使用或与一种或多种附加的治疗剂联合使用。
在某些实施方案中，本申请描述的药物制剂以任何方式施用给个体，所述方式包括一种或多种复合给药途径，如，非限制性举例，口服、肠胃外(如，静脉内、皮下、肌肉内)、鼻内、颊黏膜、局部、直肠或透皮给药途径。本申请描述的药物制剂包括，但不限于水分散液、自乳化分散体、固溶体、脂质体分散体、气雾剂、固体剂型、粉剂、速释制剂、控释制剂、速熔(fast melt)制剂、片剂、胶囊剂、丸剂、延迟释放制剂、缓释制剂、脉冲式释放制剂、多颗粒制剂(multiparticulate formulation)、速释和控释混合制剂。
本申请描述的化合物(如，环磷酰胺、醋酸格拉默、粒细胞集落刺激因子抗胸腺细胞球蛋白)的药物组合物任选地使用传统方法制造，如，仅为举例，通过传统的混合、溶解、重构、制粒、包衣(dragee-making)、粉碎、乳化、封装、包埋或压片过程制备。
在某些实施方案中，本申请描述的药物组合物包括一种或多种本申请描述的药剂(如，环磷酰胺、醋酸格拉默、粒细胞集落刺激因子和抗胸腺细胞球蛋白)作为活性成分，所述药剂呈游离酸或游离碱形式、或药学上可接受的盐形式。在某些实施方案中，本申请描述的化合物以N-氧化物或结晶或无定型形式(如，多晶型物)使用。在某些实施方案中，使用本申请描述的化合物的活性代谢物或前药。在某些情况下，本申请描述的化合物以互变异构体的形式存在。所有的互变异构体都包括在本发明展示的化合物范围内。在某些实施方案中，本申请描述的化合物以非溶剂化或溶剂化的形式存在，其中溶剂化形式包括任何药学上可接受的溶剂，如，水、乙醇等。本发明展示的化合物的溶剂化形式也被视为本发明所公开。
在某些实施方案中，“载体”包括药学上可接受的赋形剂，并且基于与本发明公开的化合物的兼容性选择载体，如，任何式I-V的化合物，以及理想剂型的释放曲线特性。作为示范的载体材料包括，如，粘合剂、悬浮剂、崩解剂、充填剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等等。见，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Nineteenth Ed(Easton，Pa.：Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania 1975；Liberman，H.A.以及Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Seventh Ed.(Lippincott Williams & Wilkins1999)。
此外，在某些实施方案中，本申请描述的药物组合物被制成剂型。如上，在某些实施方案中，本发明提供的剂型包括本申请描述的，适于施用给个体的化合物(如，环磷酰胺、醋酸格拉默、粒细胞集落刺激因子和抗胸腺细胞球蛋白)。在某些实施方案中，适合的剂型包括，非限制性举例，口服水分散体、液体、凝胶剂、糖浆剂、酏剂、浆液、混悬剂、口服固体剂型、气溶胶、控释制剂，速熔制剂、泡腾剂、冻干制剂、片剂、粉剂、丸剂、糖衣药丸、胶囊、延迟释放制剂、缓释制剂、脉冲释放制剂、多颗粒制剂、速释和控释混合制剂。
本申请描述的药物固体剂型任选地包括本申请描述的有额外治疗作用的化合物以及一种或多种药学上可接受的添加剂，如兼容的载体、粘合剂、充填剂、悬浮剂、矫味剂、甜味剂、崩解剂、分散剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、稀释剂、增溶剂、润湿剂、增塑剂、稳定剂、促渗剂、湿润剂、消泡剂、抗氧化剂、防腐剂，或其中一种或多种的组合。在某些方面，使用标准的包衣工序，如Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th Edition(2000)描述的工序，提供包裹式I-V的任何化合物制剂的薄膜包衣。在一个实施方案中，本申请描述的化合物是颗粒的形式，部分或全部化合物颗粒被包衣。在某些实施方案中，部分或全部的本申请描述的化合物颗粒被包入微胶囊。在某些实施方案中，本申请描述的化合物颗粒未被包入微胶囊并且未被包衣。
在某些实施方案中，本申请描述的药物组合物是适合单独施用精确剂量的单位剂型。在单位剂型中，制剂被分为包含适合量的一种或多种化合物的单位剂量。在某些实施方案中，单位剂量是包含特定量的制剂的包装形式。非限制性实例为包装的片剂或胶囊，和小瓶或安瓿中的粉末。水悬浮液组合物任选地被包装入单剂量的不能重新关闭的容器。在某些实施方案中，使用多剂量的能重新关闭的容器。在某些情况下，多剂量的容器包含组合物中的防腐剂。仅为举例，肠胃外注射制剂存在于单位剂型(其包括，但不限于安瓿)中，或存在于添加有防腐剂的多剂量容器中。
组合
在某些实施方案中，可以将至少一种本发明公开的治疗剂与另一种治疗剂联合施用。或，仅为举例，通过将一种本发明公开的治疗剂与另一种也有治疗效果的治疗剂(其也包括治疗方案)联合施用，增加个体的受益。在各种情况下，不考虑所治疗的疾病、障碍或病症，个体的总受益在某些实施方案中为两种治疗剂之和，或在其他的实施方案中，个体能体验到协同效应的受益。
在某些实施方案中，化合物的特定选择依赖于主治医生的诊断和他们对于个体状况以及适合的治疗方案的判断。依据疾病、障碍或病症的性质，个体的状况，以及所使用的化合物的实际选择，任选地共同(如，同时、基本同时或在同一个治疗方案中)或顺序施用化合物。在某些情况下，一个治疗方案中每种治疗剂施用顺序以及重复施用的次数依据对所治疗的疾病和个体状况的评价而定。
在某些实施方案中，治疗有效的剂量随药物在联合治疗中的使用而变化。实验测定药物和在联合治疗方案中使用的其他药剂的治疗有效剂量的方法在文献中描述。例如，已经在文献中广泛描述了节律给药的使用，即更频繁、低剂量给药以最小化毒副作用。联合治疗进一步包括在不同时间开始和停止以辅助个体临床处置的周期治疗。
在本申请描述的某些联合疗法的实施方案中，共同施用的化合物的剂量依据联合使用的药物类型、使用的特定药物、治疗的疾病或病症等而变化。此外，当与一种或多种生物活性制剂共同施用时，本发明提供的化合物任选地与这些生物活性剂同时，或顺序施用。在某些情况下，如果顺序施用，主治医生可决定与其他治疗剂组合的本申请描述的有治疗作用的化合物的合适使用顺序。
多种治疗剂(其中至少一种治疗是本申请描述的有治疗作用的化合物)任选地以任意顺序或同时施用。如果同时施用，多种治疗剂任选地以单独、统一的形式、或多个形式(仅为举例，单独的药丸或两种独立的药丸)提供。在某些情况下，治疗剂中的一种任选地以多剂量给予。在其他的情况下，全部任选地以多剂量给予。如果不是同时施用，多剂量之间的时间可以是任意适合的时间，如，从大于0周到小于4周。在某些实施方案中，使用额外的治疗剂以实现神经性自身免疫疾病的缓解(部分或全部)，而后顺序施用本申请描述的治疗剂(如，环磷酰胺、醋酸格拉默、粒细胞集落刺激因子和抗胸腺细胞球蛋白)。此外，联合疗法、组合物和制剂不局限于仅使用两种制剂；也构思了使用多种治疗组合(包括两种或更多种本申请描述的有治疗作用的化合物)。
在某些实施方案中，依照多种因素来改进为寻求缓解而治疗、预防或减轻病症的给药方案。这些因素包括个体所患的疾病，和个体的年龄、体重、性别、饮食以及医学状况。因此，在各种实施方案中，实际使用的给药方案会相对于本发明列出的给药方案发生变化或偏离。
在某些实施方案中，为了基本上同时给予，以组合剂型或分离的剂型的形式提供组成本申请描述的联合疗法的药物制剂。在某些实施方案中，组成本申请描述的联合疗法的药物制剂按顺序施用，通过需要两步施用的给药方案施用任一有治疗作用的化合物。在某些实施方案中，两步施用方案要求活性药剂的顺序施用或分离的活性药剂的间隔施用。在某些实施方案中，多个施用步骤间的时间间隔依据每种药剂的特性，如效力、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和药剂的动力学曲线，非限制性举例，从几分钟到数小时之间变化。
在某些实施方案中，本申请描述的化合物和组合治疗在疾病或病症发生之前，之中或之后施用。任选地改变施用含化合物的组合物的时间以适应治疗个体的需要。因此，在某些实施方案中，化合物作为预防剂使用，连续施用给有发展病症或疾病的倾向的个体以防止疾病或病症的发生。在某些实施方案中，化合物和组合物在发生症状时或在症状发生后尽快施用给个体。化合物的施用任选地在症状发生后第一个48小时内开始，或症状发生后第一个6小时内开始，或症状发生后3小时内开始。可以通过任何适用的途径进行最初的施用，例如，静脉内注射、推注注射、超过5分钟到约5小时的输液、药丸、胶囊、透皮贴、颊黏膜给药等，或其组合。在某些实施方案中，检测到或怀疑疾病或病症发生后，只要可行即应当立即施用化合物，并持续治疗疾病所需的时间长度，例如，从大于1个月到约3个月。治疗时间长度任选地依据已知的标准针对每个个体做改变。在示范性的实施方案中，施用化合物或含有化合物的制剂至少2周，从大于1个月到约5年，或从大于1个月到约3年。
在某些实施方案中，治疗剂与一种或多种下列治疗剂以任何搭配来组合或联合使用：皮质类固醇(如，静脉内给予500到1000mg甲泼尼龙，随后给予递减剂量的口服泼尼松，持续数周)、干扰素(如，IFNβ-1a和IFNβ-1b)、醋酸格拉默、米托蒽醌、那他珠单抗、阿伦单抗、BG00012(活菌制剂)、克拉屈滨、dirucotide(MBP8298)、芬戈莫德、拉喹莫德、利妥昔单抗、特立氟胺、ATL1102(Teva and Antisense Therapeutics)、CDP323(活菌制剂)、达克珠单抗，雌二醇，肌苷、neurovax、tovaxin、麦考酚酸酯、抗代谢药(如甲氨蝶呤)、大环内酯物/IL-2抑制剂(如FK-506)、沙利度胺、米托蒽醌，5-羟色胺选择性再摄取抑制剂，神经保护剂(如锂)，或其组合。
具体实施方式
实施例1：使用HiCy和醋酸格拉默(HiGA)治疗的小鼠模型
本研究的目的在于联合使用免疫清除剂量环磷酰胺(CPA)和通过施用醋酸格拉默的抗MS复发免疫法，来改善作为复发/缓解型多发性硬化症(RRMS)模型的SJL/J小鼠中的慢性复发实验性自身免疫脑脊髓炎(R-EAE)。
EAE是一种公认的非灵长类动物MS模型。R-EAE通过使用修饰的髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)免疫易感小鼠品系(SJL/J)引起。R-EAE进展大约需要2-3周。通过使用先前所述的近交小鼠品系，可以将实验结果中的遗传影响保持到最低。这使我们可以证明得到的实验结果归因于指定的治疗组所纳入的，观察到的个体间的不同归因于疾病和/或环境影响。
治疗组由10只小鼠组成。我们计划实验由3-5个治疗组构成，这些治疗组将涵盖不同的药物(方案中所概述的)和这些药物的组合(以及溶媒对照)，药物剂量的变化，和药物施用时间的变化。
R-EAE诱导和分析
6-12周的雌性SJL/J小鼠接受一次含有100微克乳化在含结核分枝杆菌H37Ra的弗氏不完全佐剂(CFA)中的经修饰的髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)的100微升皮下注射。CFA是由弗氏不完全佐剂混合热灭活的结核分枝杆菌组成的油状混合物；其是已知的唯一能在这种小鼠品系中引起这种疾病的佐剂。在没有麻醉剂的情况下进行这些注射。皮下注射佐剂时，抓住动物颈后部松弛的皮肤并在大腿区域使用25号针注射。
称量小鼠体重并观察临床征兆2个月。EAE的临床征兆依据以下标准评价：0＝没有临床疾病；1＝尾部力量缺失；2＝轻度后肢麻痹；3＝中度后肢体麻痹；4＝完全麻痹；和5＝四肢瘫痪，垂死状态或死亡。监控其他的行为结果，包括：动物在行走或被触摸时竖起尾巴的能力，其移动所有四肢和沿笼盖协调行走的能力，和整体活动水平和试探的倾向。
预期SJL/J小鼠品系中的EAE是一种麻痹逐渐加重的类型，其中到第10日，症状之前有明显的体重减轻和轻度尾部麻痹。在后面的时间点，疾病进展包括后肢麻痹，其构成效应期，R-EAE疾病表型的第一次发作。到第20日，多数鼠进入缓解期，体重恢复并瘫痪减轻。在PLP免疫后约3周，小鼠发展EAE第二轮(复发)，小鼠持续经历另外的复发和恢复阶段。
在某些实验中也使用热感觉实验测试感觉功能。这包括通过将小鼠置于加热的平台上来测定肢端是否有感觉；尽管热没有高至有伤害的程度，预期的反应是小鼠应抬起并舔其爪子。
组合治疗的施用
环磷酰胺(CPA)在磷酸盐缓冲液(PBS)(20mg/ml)中通过腹腔内注射施用，剂量为100-300mg/kg。CPA在R-EAE效应期前或后的特定时间点注射给每只实验动物一次。
醋酸格拉默由一定比例的L-丙氨酸、L-赖氨酸、L-谷氨酸和L-酪氨酸组成，从而模拟包括在诱导EAE中的主要髓鞘自身抗原之一。从第11日，(+/-2，由EAE进展决定)，醋酸格拉默在PBS/甘露醇中以50-500微克/每只小鼠的剂量皮下连续施用长达5天。
为了静脉注射，在笼中使用加热灯(离笼底约18-25英寸)温暖小鼠3-5分钟以扩张其血管；它们被分别固定到锥形体或Broome型固定设备(VWR目录号10718-030)中以使用28-30号针静脉内注射给药入尾部侧静脉中。如果动物表现痛苦则使用轻度异氟醚麻醉。
将食物置于笼底以帮助受伤的动物易于得到食物。自动饮水系统比水瓶离笼底部更低；尽管如此，如果生病的动物显出没有力量操作送水开关，水瓶(并且可以在每日称重每只动物时直接给动物喂水)和/或“水凝胶”将被置于那些相应笼中以使动物可以得到。
预计结果
1.在使用PLP 139-151(S)主动免疫过的或进行了PLP 139-151(S)特异性T细胞的过继转移的SJL/J小鼠中诱导出复发-缓解型EAE(RR-EAE)。
2.使用200mg/kg的CPA治疗RR-EAE将使95％动物中的EAE活动停止。
3.我们预计CPA治疗后RR-EAE有30％的自发复发率，如果使用PLP再次免疫诱导复发，复发率为70％。
4.从CPA治疗后30日开始，使用醋酸格拉默(高至2mg/小鼠/日)治疗经CPA治疗过RR-EAE的动物不会对CPA导致的EAE活动停止率(95％)有不利影响。
5.从CPA治疗后30日开始，使用醋酸格拉默(高至2mg/小鼠/日)治疗经CPA治疗过RR-EAE的动物将分别减少自发和诱导的复发率至2％和10％。
实施例2：使用HiCy和ATG(HiCAT)治疗的小鼠模型
本研究的目的在于联合使用免疫清除剂量的环磷酰胺(CPA)和T细胞消耗治疗，来缓解作为复发-缓解型多发性硬化症(RRMS)模型的SJL/J小鼠中的慢性复发实验性自身免疫脑脊髓炎(R-EAE)。
EAE是一种公认的非灵长类动物MS模型。R-EAE通过使用修饰的髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)免疫易感小鼠品系(SJL/J)引起。R-EAE进展大约需要2-3周。通过使用先前所述的近交鼠品系，可以将实验结果中的遗传影响保持到最低。这使我们可以证明得到的实验结果归因于指定的治疗组所纳入的，观察到的个体间的不同归因于疾病和/或环境影响。
治疗组由10只小鼠组成。我们计划实验由3-5个治疗组构成，这些治疗组将涉及不同的药物(方案中概述的)和这些药物的组合(以及溶媒对照)，药物剂量的变化，和药物施用时间的变化。
R-EAE诱导和分析
6-12周的雌性SJL/J小鼠接受一次含有100微克乳化在含结核分枝杆菌H37Ra的弗氏不完全佐剂(CFA)中的，修饰的髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151肽(HSLGKWLGHPDKF)的100微升皮下注射。CFA是由弗氏不完全佐剂混合热灭活的结核分枝杆菌组成的油状混合物；其是已知的唯一能在这种小鼠品系中引起这种疾病的佐剂。在没有麻醉的情况下进行这些注射。为了皮下注射佐剂，抓住动物颈后部松弛的皮肤并在其大腿区域使用25号针注射。
称量小鼠体重并观察临床征兆2个月。EAE的临床征兆依据以下标准评价：0＝没有临床疾病；1＝尾部力量缺失；2＝轻度后肢麻痹；3＝中度后腿麻痹；4＝完全麻痹；和5＝四肢瘫痪，垂死或死亡。监控其他的行为结果，包括：动物在行走或被触摸时竖起尾巴的能力，其移动四肢和沿笼盖横杆协调行走的能力，和整体活动水平和试探的倾向。
预期SJL/J小鼠中的EAE是一种麻痹逐渐加重的类型，其中第10日症状前有明显的体重减轻和轻度尾部麻痹。在后面的时间点，疾病进展包括后肢麻痹，其构成效应期，R-EAE疾病表型的第一次发作。第20日，多数鼠进入缓解期，体重恢复并且瘫痪减轻。在PLP免疫后约3周，小鼠发展第二轮EAE(复发)，小鼠将继续经历另外的复发和恢复阶段。
在某些实验中也使用热感觉实验测试感觉功能。这涉及通过将小鼠置于加热的平台上来测定肢端是否有感觉；尽管热没有高至有伤害的程度，预期的反应是小鼠应抬起并舔其爪子。
组合治疗的施用
以200mg/kg的剂量静脉内施用在磷酸盐缓冲液(PBS)中的环磷酰胺(CPA)(20mg/ml)。CPA在R-EAE效应期前或后的特定时间点施用给每只实验动物一次。针对全部T淋巴细胞提供的抗胸腺细胞抗体与CPA共同静脉施用，剂量为每只动物12.5-25毫克。
预期结果
1.在使用PLP 139-151(S)主动免疫过的或进行了PLP 139-151(S)特异性T细胞的过继转移的SJL/J小鼠中诱导出复发-缓解型EAE(RR-EAE)。
2.使用200mg/kg的CPA加抗胸腺细胞抗体治疗RR-EAE将使95％动物中的EAE活动停止。
3.随时间推移，不到10％动物的免疫系统介导的CNS炎症和损伤会重新激活。
实施例3：在被诊断患有多发性硬化的人中进行的HiGa临床试验
首要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺(每日50mg/kg IV，连续四天)或高剂量的环磷酰胺加双倍剂量的醋酸格拉默(40mg)治疗，相比低剂量的环磷酰胺(1000mg/m2)加双倍剂量的醋酸格拉默能否在12个月内停止或逆转MS的临床进展，停止或逆转MS被定义为EDSS减小。
次要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺或高剂量的环磷酰胺加双倍剂量的醋酸格拉默(40mg)治疗，相比低剂量的环磷酰胺加双倍剂量的醋酸格拉默能否在12个月内引起持续的MS疾病活动性的缓解(≥3个月)，持续的缓解被定义为没有新的MRI增强的病损和没有新的复发(复发被定义为新的神经系统症状出现持续至少48小时并经检查确认)。
为证明高剂量的环磷酰胺加双倍剂量的醋酸格拉默相比单独用高剂量的环磷酰胺，在MS疾病活动性缓解期持续时间上以及24个月内没有复发的个体比例上的优越性，复发被定义为在24个月研究期内有新的持续至少48小时并检查确认的神经系统症状出现或24个月内有新的MRI增强的病损。
为了评价用于治疗RRMS长达24个月的高剂量的环磷酰胺和双倍剂量的醋酸格拉默在个体中的安全性和耐受性。
研究设计
我们在约222例有活跃的复发-缓解型MS(RRMS)的个体中，提出一个12个月、随机、多中心、评估者盲法(之前和之后)并有12个月延长随访的试验。约222例个体被随机分入以下三个治疗组(74人每组)的一组：
a.低剂量环磷酰胺和双倍剂量醋酸格拉默，
b.高剂量环磷酰胺，以及
c.高剂量环磷酰胺和双倍剂量醋酸格拉默。
纳入标准：
符合以下标准的男性或女性个体可以被纳入临床试验：
a.年龄在18到50岁之间；
b.根据McDonald标准，有临床上明确的复发-缓解型MS诊断；
c.筛查时脑部和/或脊髓MRI共有两个或更多个钆增强病损；
d.过去一年至少一次临床复发；
e.纳入个体EDSS评分从1.5到6.5；EDSS≥5.5的个体持续残疾应≤3个月；
f.在前一年中，介于1.5到5.5之间的EDSS(允许历史评价)持续(≥3个月)增加＞1.0，或介于5.5到6.5之间的EDSS持续(≥3个月)增加＞0.5；
g.在本方案的任何实验之前给出的书面知情同意书，包括不被视为个体常规治疗的一部分的筛选测试和评价；以及
h.对于女性，加入研究之前怀孕测试结果为阴性。
排除标准：
下列个体将被排除出试验：
a.任何有怀孕风险的个体；
b.任何心脏射血分数＜45％的个体；
c.任何血清肌酐水平＞2.0的个体；
d.任何临终或垂死的个体；
e.任何胆红素水平＞2.0，和/或转氨酶水平＞2x正常值的个体；
f.任何带有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的个体；
g.任何活动性感染的个体，直至感染消退；或
h.任何WBC计数＜3000细胞/μL的个体；血小板＜100,000细胞/μL的个体；和未输血血红蛋白＜10g/dl的个体。
个体从研究中提出
个体可以在任何时候因各种原因退出研究。
研究者可以因下列原因停止个体的治疗：
a.在医院进行高剂量环磷酰胺治疗期间，个体经历需要终止治疗的医疗紧急情况；
b.在医院期间，个体经历严重的不良事件，该不良事件被判断为可能与高剂量环磷酰胺有关和/或严重到有必要终止治疗；和
c.研究者自行判断的各种医学原因。
高剂量环磷酰胺的施用
高剂量环磷酰胺治疗在肿瘤医生和工作人员的监督下进行。
个体在第-3天至第0天静脉内接受高剂量环磷酰胺。高剂量环磷酰胺的剂量按理想体重计算。理想体重按骨髓移植程序中使用的现有方法确定。如果个体的实际体重小于理想体重，使用实际体重计算环磷酰胺剂量。预定个体仅接受一个疗程的治疗。
在施用高剂量的环磷酰胺之前和之后应保持足够的利尿措施以防止出血性膀胱炎。环磷酰胺诱导的出血性膀胱炎的预防(通常是美司钠或强制利尿)按照SCT程序使用的已有的临床实践指导进行。
从第6日(高剂量环磷酰胺施用完成后6天)，个体接受粒细胞集落刺激因子(5μg/kg/d)直至绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过1.0×109个细胞/L。个体也被通常给予抗生素(诺氟沙星，氟康唑和伐昔洛韦)直至嗜中性粒细胞计数回归正常。
低剂量环磷酰胺的施用
1000mg/m2的低剂量环磷酰胺在100cc NSS中经两小时IV施用。预先水合(prehydration)由2L NSS经过4小时完成，后水合(post-hydration)由2L NSS经过4小时完成。剂量依照上述理想体重计算。
醋酸格拉默的施用
双倍剂量的醋酸格拉默在最后一剂高剂量环磷酰胺(第0日)或单独的较低剂量环磷酰胺注射后30天开始每日皮下施用。
治疗后出院
按照临床要求个体至少住院4天。随后允许其出院进行个人护理直至嗜中性粒细胞计数按照标准方案恢复(通常在最后一剂高剂量环磷酰胺后2-3周)。
MRI评价
在治疗后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月进行MRI评价。这便于了解治疗后疾病进展的过程。监测钆增强病损平均数目以评估疾病活动的变化。评估从基线(第-3和0月钆增强病损平均数目)到随访(第15和18月钆增强病损平均数目)的变化。进一步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活动的变化，同时也监测了高剂量环磷酰胺的安全性。在研究全过程中评估其他参数-T2病损负荷以及脑实质分数也是与残疾和病变的增长相关的疾病活动的度量。扫描在有回声速度或双速度梯度的1.5特斯拉通用电子扫描仪上(Milwaukee WI)进行。
疾病进展的MRI标准：
a.钆增强病损的数目；
b.T2病损负荷；和
c.脑实质分数。
MRI扫描分析
a.采用冠状图像检验从轴向3mm连续切片计数对比增强病损。如果病损在一个序列上可见而在其他序列上不可见，如果其在长TR脉冲序列上也可见则被计数为一个增强斑。总疾病负荷基于增强斑的数目由从颈椎交界处到顶点的扫描确定。
b.多发性硬化斑的体积由FLAIR扫描分析确定，FLAIR扫描提供在MS斑和底层脑脊髓液(CSF)之间的与噪声最大的对比，对应正常白色和灰色物质。然而，如果在FLAIR扫描中显示黑色信号的膀胱MS斑，我们使用质子密度-T2-加权脉冲序列来确认这些病损，并用这些额外的MS斑来补充FLAIR体积评估。使用电脑辅助体积分析来进行阙值和三维体积分析。
c.进行总脑实质体积分析时使用标准剥离算法以去除头骨和底层软组织体积。使用阙值和人工修正，去除CSF来进行脑实质体积分析。
d.由两名放射科医生独立判读MRI扫描结果。如果解读间有大于10％的差距，则请第三位放射科医生判读MRI扫描结果。报告的解读结果是三份判读的平均值(T2斑体积和脑实质分数)或统一反映两份判读(关于增强病损的数目)。数据被记录在CRFs上并录入数据库。
神经学/临床评价
在基线和高剂量环磷酰胺治疗后研究期间(24个月)每3个月进行神经学检查。确认疾病进展使用的临床测量方法是多发性硬化症功能组合表(MSFC)和扩展残疾状态量表(EDSS)。研究型护士/协调员可以被训练使用MSFC，研究神经学家可以检查个体以给出EDSS评分。
EDSS基于八个功能系统(视觉、脑干、感觉、小脑、括约肌、大脑等)的神经学检查，评分范围从0(正常)到10(死于MS)。
MSFC被设计用于测试步态、上肢灵活度和认知。三项分测试为：a)25英尺限时步行(25TW)；b)9洞桩测试(9-HPT)；和c)同步听觉系列加算测试(PASAT-3)。PASAT测验要求个体将出现在听力磁带中的连续数字相加并口头反应出其准确的和。当每个数字被放出时，个体必须将该数字与其前面放出的数字相加而不是与个体前一个反应相加。
实施例4：在被诊断为患有多发性硬化的人中进行的HiCAT临床试验
首要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺(每日50mg/kg IV，连续四天)加抗胸腺细胞球蛋白(2.5μg/kg/日)治疗，相比单用高剂量的环磷酰胺能否在12个月内停止或逆转MS的进展，通过EDSS减小进行衡量。
次要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺加抗胸腺细胞球蛋白治疗，相比高剂量的环磷酰胺能否在12个月内引起持续的MS疾病活动性的缓解(≥3个月)，持续的缓解定义为没有新的MRI增强病损和没有新的复发(复发被定义为新的神经系统症状表现持续至少48小时并经检查确认)。
为显示高剂量的环磷酰胺加抗胸腺细胞球蛋白相比单独用高剂量的环磷酰胺，在MS疾病活力缓解期持续时间上以及24个月内没有复发的个体比例上的优越性，复发被定义为在24个月研究期内有新的持续至少48小时并检查确认的神经系统症状表现或24个月内有新的MRI增强病损。
为了评价用于治疗RRMS长达24个月的高剂量的环磷酰胺加抗胸腺细胞球蛋白在个体中的安全性和耐受性。
研究设计
我们在约222例有侵袭性复发-缓解型MS(RRMS)的个体中，提出一个12个月、随机、多中心、评估者盲法(之前和之后)并有12个月延长随访的试验。约222例个体被随机分入以下2个治疗组(111人每组)中的一组：
a.高剂量环磷酰胺；以及
b.高剂量环磷酰胺和抗胸腺细胞球蛋白。
纳入标准：
符合以下标准的男性或女性个体可以被纳入临床试验：
a.年龄在18到50岁之间；
b.根据McDonald标准，临床上明确的复发-缓解型MS诊断；
c.筛查时脑部和/或脊髓MRI上共有两个或更多个钆增强病损；
d.过去一年至少一次临床复发；
e.纳入个体EDSS评分从1.5到6.5；EDSS≥5.5的个体持续残疾应≤3个月；
f.在前一年中，介于1.5到5.5之间的EDSS(允许历史评价)持续(≥3个月)增加＞1.0，或介于5.5到6.5之间的EDSS持续(≥3个月)增加＞0.5；
g.在本方案的任何实验之前给出的书面知情同意书，包括不被视为个体常规治疗的一部分的筛选测试和评价；以及
h.对于女性，加入研究之前怀孕测试结果为阴性。
排除标准：
下列个体将被排除出试验：
a.任何有怀孕风险的个体；
b.任何心脏射血分数＜45％的个体；
c.任何血清肌酐水平＞2.0的个体；
d.任何临终或垂死的个体；
e.任何胆红素水平＞2.0，和/或转氨酶水平＞2x正常值的个体；
f.任何带有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的个体；
g.任何活动性感染的个体，直至感染消退；或
h.任何WBC计数＜3000细胞/μL的个体；血小板＜100,000细胞/μL的个体；和未输血血红蛋白＜10g/dl的个体。
个体从研究退出
个体可以在任何时候因任何原因退出研究。
任何研究者可以因任何下列原因停止个体的治疗：
a.在医院进行高剂量环磷酰胺治疗期间，个体经历需要终止治疗的医疗紧急情况；
b.在医院期间，个体经历严重的不良事件，该不良事件被判断为可能与高剂量环磷酰胺有关和/或严重到有必要终止给予高剂量环磷酰胺；和
c.研究者自行判断的各种医学原因。
高剂量环磷酰胺的施用
高剂量环磷酰胺治疗在肿瘤医生和工作人员的监督下进行。
个体在第-3天至第0天静脉内接受50mg/kg/日高剂量的环磷酰胺。高剂量环磷酰胺的剂量按理想体重计算。理想体重按骨髓移植程序中使用的现有方法确定。如果个体的实际体重小于理想体重，使用实际体重计算环磷酰胺剂量。预定个体仅接受一个疗程的治疗。
在施用高剂量的环磷酰胺之前和之后应保持足够的利尿措施以防止出血性膀胱炎。环磷酰胺诱导的出血性膀胱炎的预防(通常是美司钠或强制利尿)按照SCT程序使用的已有的临床实践指导进行。
从第6日(高剂量环磷酰胺施用完成后6天)，个体接受粒细胞集落刺激因子(5μg/kg/d)直至绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过1.0×109个细胞/L。个体也被通常给予抗生素(诺氟沙星，氟康唑和伐昔洛韦)直至嗜中性粒细胞计数回归正常。
抗胸腺细胞球蛋白的施用
抗胸腺细胞球蛋白与高剂量环磷酰胺或单次更低剂量环磷酰胺注射同时IV施用。
治疗后出院
按照临床要求个体至少住院4天。随后允许其出院进入个人护理场所直至嗜中性粒细胞计数按照标准方案恢复(通常在最后一剂高剂量环磷酰胺后2-3周)。
MRI评价
在治疗后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月进行MRI评价。这便于了解治疗后疾病进展的过程。监测钆增强病损平均数目以评估疾病活动的变化。评估从基线(第-3和0月钆增强病损平均数目)到随访(第15和18月钆增强病损平均数目)的变化。进一步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活动的变化，同时也监测了高剂量环磷酰胺的安全性。在研究全过程中评估其他的参数-T2病损负荷以及脑实质分数也是与残疾和病变的增长相关的疾病活动的度量。扫描在有回声速度或双速度梯度的1.5特斯拉通用电子扫描仪(Milwaukee WI)上进行。
疾病进展的MRI标准：
a.钆增强病损的数目；
b.T2病损负荷；和
c.脑实质分数。
MRI扫描分析
a.使用对冠状图像的检验从轴向3mm连续切片计数对比增强病损。如果病损在一个序列上可见而在其他序列上不可见，如果其在长TR脉冲序列上也可见则被计数为一个增强斑。总疾病负荷基于增强斑的数目由从颈椎交界处到顶点的扫描确定。
b.多发性硬化斑的体积由FLAIR扫描分析确定，FLAIR扫描提供在MS斑和底层脑脊髓液(CSF)之间的与噪声最大的对比，对应正常白色和灰色物质。然而，如果在FLAIR扫描中显示黑色的信号的膀胱MS斑，我们使用质子密度-T2-加权脉冲序列来确认这些病损，并用这些额外的MS斑来补充FLAIR体积评估。使用电脑辅助体积分析来进行阙值和三维体积分析。
c.进行总脑实质体积分析时使用标准剥离算法以去除头骨和底层软组织体积。使用阙值和人工修正，去除CSF来进行脑实质体积分析。
d.由两名放射科医生独立判读MRI扫描结果。如果解读间有大于10％的差距，则请第三位放射科医生判读MRI扫描结果。报告的解读结果是三份判读的平均值(关于T2斑体积和脑实质分数)或统一反映两份判读的结果(增强病损的数目)。数据被记录在CRFs上并录入数据库。
神经学/临床评价
在基线和高剂量环磷酰胺治疗后研究期间(24个月)每3个月进行神经学检查。确认疾病进展使用的临床测量方法是多发性硬化症功能组合表(MSFC)和扩展残疾状态量表(EDSS)。研究型护士/协调员可以被训练使用MSFC，研究神经学家可以检查个体以给出EDSS评分。
EDSS基于八个功能系统(视觉、脑干、感觉、小脑、括约肌、大脑等)的神经学检查，评分范围从0(正常)到10(死于MS)。
MSFC被设计用于测试步态、上肢灵活度和认知。三项分测试为：a)25英尺限时步行(25TW)；b)9洞桩测试(9-HPT)；和c)同步听觉系列加算测试(PASAT-3)。PASAT测验要求个体将出现在听力磁带中的连续数字相加并口头反应出其准确的和。当每个数字被放出时，个体必须将该数字与其前面放出的数字相加而不是与个体前一个反应相加。
实施例5：在被诊断为患有多发性硬化的人中进行的HiCAT加醋酸格拉默临床试验
首要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺(每日50mg/kg IV，连续四天)、抗胸腺细胞球蛋白(2.5μg/kg/日)以及双倍剂量的醋酸格拉默(40mg)治疗，相比单用高剂量的环磷酰胺能否在12个月内停止或逆转MS的进展，停止或逆转MS被定义为EDSS减小。
次要目标
为确定使用高剂量的环磷酰胺、抗胸腺细胞球蛋白以及双倍剂量的醋酸格拉默治疗，相比单用高剂量的环磷酰胺能否在12个月内引起MS疾病活动的持续的缓解(≥3个月)，持续的缓解定义为没有新的MRI增强病损和没有新的复发(复发被定义为新的神经系统症状表现持续至少48小时并经检查确认)。
为证明高剂量的环磷酰胺、抗胸腺细胞球蛋白以及双倍剂量的醋酸格拉默相比单独用高剂量的环磷酰胺，在MS疾病活力缓解期持续时间上以及24个月内没有复发的个体比例上的优越性，复发被定义为在24个月研究期内有新的持续至少48小时并检查确认的神经系统症状表现或24个月内有新的MRI增强病损。
为了评价用于治疗RRMS长达24个月的高剂量的环磷酰胺、抗胸腺细胞球蛋白以及醋酸格拉默在个体中的安全性和耐受性。
研究设计
我们在约222例有积极复发-缓解型MS(RRMS)的个体中，提出一个12个月、随机、多中心、评估者盲法(之前和之后)并有12个月延长随访的试验。约222例个体被随机分入以下2个治疗组(111人每组)中的一组：
a.高剂量环磷酰胺；以及
b.高剂量环磷酰胺、抗胸腺细胞球蛋白和醋酸格拉默。
纳入标准：
符合以下标准的男性或女性个体可以被纳入临床试验：
a.年龄在18到50岁之间；
b.根据McDonald标准，临床上明确的复发-缓解型MS诊断；
c.筛查时脑部和/或脊髓MRI上共有两个或更多个钆增强病损；
d.过去一年至少一次临床复发；
e.纳入个体EDSS评分从1.5到6.5；EDSS≥5.5的个体持续残疾应≤3个月；
f.在前一年中，介于1.5到5.5之间的EDSS(允许历史评价)持续(≥3个月)增加＞1.0，或介于5.5到6.5之间的EDSS持续(≥3个月)增加＞0.5；
g.在本方案的任何实验之前给出的书面知情同意书，包括不被视为个体常规治疗的一部分的筛选测试和评价；以及
h.对于女性，加入研究之前怀孕测试结果为阴性。
排除标准：
下列个体将被排除出试验：
a.任何有怀孕风险的个体；
b.任何心脏射血分数＜45％的个体；
c.任何血清肌酐水平＞2.0的个体；
d.任何临终或垂死的个体；
e.任何胆红素水平＞2.0，和/或转氨酶水平＞2x正常值的个体；
f.任何带有起搏器或植入物而不能接受系列MRI的个体；
g.任何活动性感染的个体，直至感染消退；或
h.任何WBC计数＜3000细胞/μL的个体；血小板＜100,000细胞/μL的个体；和未输血血红蛋白＜10g/dl的个体。
个体从研究退出
个体可以在任何时候因任何原因退出研究。
任何研究者可以因任何下列原因停止个体的治疗：
a.在医院进行高剂量环磷酰胺治疗期间，个体经历需要终止治疗的医疗紧急情况；
b.在医院期间，个体经历严重的不良事件，该不良事件被判断为可能与高剂量环磷酰胺有关和/或严重到有必要终止给予高剂量环磷酰胺；和
c.研究者自行判断的任何医学原因。
高剂量环磷酰胺的施用
高剂量环磷酰胺治疗在肿瘤医生和工作人员的监督下进行。
个体在第-3天至第0天静脉内接受50mg/kg/日高剂量的环磷酰胺。高剂量环磷酰胺的剂量按理想体重计算。理想体重按骨髓移植程序中使用的现有方法确定。如果个体的实际体重小于理想体重，使用实际体重计算环磷酰胺剂量。预定个体仅接受一个疗程的治疗。
在施用高剂量的环磷酰胺之前和之后应保持足够的利尿措施以防止出血性膀胱炎。环磷酰胺诱导的出血性膀胱炎的预防(通常是美司钠或强制利尿)按照SCT程序使用的已有的临床实践指导进行。
从第6日(高剂量环磷酰胺施用完成后6天)，个体接受粒细胞集落刺激因子(5μg/kg/d)直至绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过1.0×109个细胞/L。个体也被通常给予抗生素(诺氟沙星，氟康唑和伐昔洛韦)直至嗜中性粒细胞计数回归正常。
抗胸腺细胞球蛋白的施用
抗胸腺细胞球蛋白与高剂量环磷酰胺或单次更低剂量环磷酰胺注射同时IV施用。
醋酸格拉默的施用
双倍剂量的醋酸格拉默在最后一剂高剂量环磷酰胺(第0日)或单次更低剂量环磷酰胺注射后30天开始每日皮下注射施用。
治疗后出院
按照临床要求个体至少住院4天。随后允许其出院进行个人护理直至嗜中性粒细胞计数按照标准方案恢复(通常在最后一剂高剂量环磷酰胺后2-3周)。
MRI评价
在治疗后第-3、0、3、6、9、12、15、18、21和24月进行MRI评价。这便于了解治疗后疾病进展的过程。监测钆增强病损平均数目以评估疾病活动的变化。评估从基线(第-3和0月钆增强病损平均数目)到随访(第15和18月钆增强病损平均数目)的变化。进一步，第3、6、9和12月的系列MRI便于了解2年中疾病活动的变化，同时也监测了高剂量环磷酰胺的安全性。在研究全过程中评估其他的参数-T2病损负荷以及脑实质分数也是与残疾和病变的增长相关的疾病活动的度量。扫描在有回声速度或双速度梯度的1.5特斯拉通用电子扫描仪(Milwaukee WI)上进行。
疾病进展的MRI标准：
a.钆增强病损的数目；
b.T2病损负荷；和
c.脑实质分数。
MRI扫描分析
a.使用对冠状图像的检验从轴向3mm连续切片计数对比增强病损。如果病损在一个序列上可见而在其他序列上不可见，如果其在长TR脉冲序列上也可见则被计数为一个增强斑。总疾病负荷基于增强斑的数目由从颈椎交界处到顶点的扫描确定。
b.多发性硬化斑的体积由FLAIR扫描分析确定，FLAIR扫描提供在MS斑和底层脑脊髓液(CSF)之间的与噪声最大的对比，对应正常白色和灰色物质。然而，如果在FLAIR扫描中显示黑色的信号的膀胱MS斑，我们使用质子密度-T2-加权脉冲序列来确认这些病损，并用这些额外的MS斑来补充FLAIR体积评估。使用电脑辅助体积分析来进行阙值和三维体积分析。
c.进行总脑实质体积分析时使用标准剥离算法以去除头骨和底层软组织体积。使用阙值和人工修正，去除CSF来进行脑实质体积分析。
d.由两名放射科医生独立判读MRI扫描结果。如果解读间有大于10％的差距，则请第三位放射科医生判读MRI扫描结果。报告的解读结果是三份判读的平均值(关于T2斑体积和脑实质分数)或统一反映出两份判读的结果(增强病损的数目)。数据被记录在CRFs上并录入数据库。
神经学/临床评价
在基线和高剂量环磷酰胺治疗后研究期间(24个月)每3个月进行神经学检查。确认疾病进展使用的临床测量方法是多发性硬化症功能组合表(MSFC)和扩展残疾状态量表(EDSS)。研究型护士/协调员可以被训练使用MSFC，神经学家可以检查个体以给出EDSS评分。
EDSS基于八个功能系统(视觉、脑干、感觉、小脑、括约肌、大脑等)的神经学检查，评分范围从0(正常)到10(死于MS)。
MSFC被设计用于测试步态、上肢灵活度和认知。三项分测试为：a)25英尺限时步行(25TW)；b)9洞桩测试(9-HPT)；和c)同步听觉系列加算测试(PASAT-3)。PASAT测验要求个体将出现在听力磁带中的连续数字相加并口头反应出其准确的和。当每个数字被放出时，个体必须将该数字与其前面放出的数字相加而不是与个体前一个反应相加。
尽管本发明优选的实施方案已经被展示和描述在本申请中，对于本领域技术人员来说显然这样的实施方案仅是为了举例。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员即可进行多种改变、变化和替代。应当理解在实践本发明时可使用对本申请描述的实施方案的多种修改。下列的权利要求目的在于定义本发明的范围，这些权利要求范围内的方法和结构及其等同形式都被覆盖。
通过引用将所有提及的文献整体纳入本文。

Claims (98)

1.一种治疗神经性自身免疫疾病的方法，包括向CD4+T细胞中醛脱氢酶水平低于预设的临界值的有此需要的个体施用：
(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；
(b)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子；和
(c)约10mg/日到约80mg/日的醋酸格拉默。
2.权利要求1的方法，进一步包括确定个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。
3.权利要求2的方法，进一步包括监测个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。
4.权利要求1的方法，其中向个体施用至少约50mg/kg/日的环磷酰胺。
5.权利要求1的方法，其中向个体施用至少约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。
6.权利要求1的方法，其中向个体施用至少约40mg/日的醋酸格拉默。
7.权利要求1-6任意一项的方法，进一步包括使用包括第一筛查、第二筛查和环磷酰胺限制分配的方法来控制该方法的使用。
8.权利要求7的方法，其中第一筛查包括：
(a)确定个体是否符合治疗标准；
(b)如果个体是女性，检测个体怀孕情况并为个体提供怀孕咨询；
(c)确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平；和
(d)为个体匹配红细胸和血小板供应源。
9.权利要求7的方法，其中第二筛查包括在个体是女性的情况下，监测其怀孕情况；和/或监测不良事件。
10.权利要求9的方法，其中的不良事件是中毒。
11.权利要求7-10任意一项的方法，其中如果个体怀孕，和/或经历不良事件，则停止对其的治疗。
12.权利要求7的方法，其中环磷酰胺的限制分配包括：
(a)为每个个体分配一个识别号码；
(b)每个识别号码关联一个环磷酰胺容器；和
(c)对个体施用来自环磷酰胺容器的环磷酰胺，该个体的识别号码对应于与所述容器关联的识别号码。
13.权利要求1的方法，其中环磷酰胺至少连续施用约4天。
14.权利要求1的方法，其中在施用环磷酰胺完成后5到7天内开始施用粒细胞集落刺激因子。
15.权利要求1的方法，其中对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过约1.0×109个细胞/L。
16.权利要求1的方法，其中施用环磷酰胺完成后28到35天内开始施用醋酸格拉默。
17.权利要求1的方法，醋酸格拉默的剂量至少约40mg/日。
18.权利要求17的方法，其中在开始施用醋酸格拉默2.5到4个月内，醋酸格拉默的剂量被减至约20mg/日。
19.权利要求1-18任意一项的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合。
20.权利要求19的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
21.权利要求20的方法，其中多发性硬化症已复发。
22.权利要求20的方法，其中多发性硬化症在缓解。
23.权利要求1-22任意一项的方法，其中环磷酰胺从重构的冻干环磷酰胺制得。
24.权利要求1的方法，其中环磷酰胺通过静脉内施用。
25.一种治疗神经性自身免疫疾病的方法，包括向CD4+T细胞中醛脱氢酶水平低于预设的临界值的有此需要的个体施用：
(a)约10到约70mg/kg/日的环磷酰胺；
(b)多至约5mg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白；和
(c)约1到约10μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。
26.权利要求25的方法，进一步包括确定个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。
27.权利要求26的方法，进一步包括监测个体CD4+T细胞中醛脱氢酶水平。
28.权利要求25的方法，其中向个体施用至少约50mg/kg/日的环磷酰胺。
29.权利要求25的方法，其中向个体施用至少约5μg/kg/日的粒细胞集落刺激因子。
30.权利要求25的方法，其中向个体施用至少约2.5μg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白。
31.权利要求25的方法，进一步包括使用包括第一筛查、第二筛查和环磷酰胺限制分配的方法来控制该方法的使用。
32.权利要求31的方法，其中第一筛查包括：
(a)确定个体是否符合治疗标准；
(b)如果个体是女性，检测个体怀孕情况并为个体提供怀孕咨询；
(c)确定与个体CD4+T细胞相关的醛脱氢酶水平；和
(d)为个体匹配红细胞和血小板供应源。
33.权利要求31的方法，其中第二筛查包括在个体是女性的情况下，监测其怀孕情况；和/或监测不良事件。
34.权利要求33的方法，其中的不良事件是中毒。
35.权利要求32-34任意一项的方法，其中如果个体怀孕，和/或经历不良事件，则停止对其的治疗。
36.权利要求31的方法，其中环磷酰胺的限制分配包括：
(a)为每个个体分配一个识别号码；
(b)每个识别号码关联一个环磷酰胺容器；和
(c)对个体施用来自环磷酰胺容器的环磷酰胺，该个体的识别号码对应于与所述容器关联的识别号码。
37.权利要求25的方法，其中环磷酰胺至少连续施用约4天。
38.权利要求25的方法，其中抗胸腺细胞球蛋白在环磷酰胺之前、之后或与环磷酰胺同时施用。
39.权利要求25的方法，其中在施用环磷酰胺完成后5到7天内开始施用粒细胞集落刺激因子。
40.权利要求25的方法，其中对个体施用粒细胞集落刺激因子直至个体绝对嗜中性粒细胞计数连续两天超过约1.0×109个细胞/L。
41.权利要求25-40任意一项的方法，其中环磷酰胺从重构的冻干环磷酰胺制得。
42.权利要求25的方法，其中环磷酰胺通过静脉内施用。
43.权利要求25-42任意一项的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合。
44.权利要求43的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
45.权利要求44的方法，其中多发性硬化症已复发。
46.权利要求44的方法，其中多发性硬化症在缓解。
47.权利要求1的方法，进一步包括对个体施用多至约5mg/kg/日的抗胸腺细胞球蛋白。
48.权利要求25的方法，进一步包括对个体施用约10mg/日到约80mg/日的醋酸格拉默。
49.一种选择使用环磷酰胺治疗的个体的方法，包括，如果个体生物样品的醛脱氢酶水平超过预设的临界值则选择该个体进行治疗；或在个体生物样品的醛脱氢酶水平低于预设的临界值的情况下选择替代的治疗。
50.权利要求49的方法，其中生物样品是血液和/或白细胞。
51.权利要求50的方法，其中白细胞是T细胞。
52.权利要求51的方法，其中T细胞是CD4+T细胞。
53.权利要求49的方法，其中通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。
54.权利要求53的方法，其中荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR
Figure FPA00001204767800061
。
55.权利要求49的方法，其中通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。
56.权利要求49的方法，其中通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。
57.权利要求56的方法，其中抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。
58.权利要求49-57任意一项的方法，其中对选定的个体施用环磷酰胺。
59.权利要求49的方法，其中个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。
60.权利要求59的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
61.一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，包括测定至少第一生物样品和第二生物样品中的醛脱氢酶的水平，其中第一生物样品和第二生物样品是在不同时间从个体取得。
62.权利要求61的方法，进一步包括如果生物样品中观察到的醛脱氢酶水平超过预设的临界值则中断治疗。
63.权利要求61的方法，进一步包括基于在第一生物样品、第二生物样品或其组合中观察到的醛脱氢酶水平修改治疗。
64.权利要求61的方法，进一步包括如果在第一生物样品、第二生物样品或其组合中观察到的醛脱氢酶水平超过预设临界值则选择替代的治疗。
65.权利要求61的方法，其中生物样品是血液和/或白细胞。
66.权利要求65的方法，其中白细胞是T细胞。
67.权利要求66的方法，其中T细胞是CD4+T细胞。
68.权利要求61的方法，其中通过荧光醛脱氢酶底物实验测定醛脱氢酶水平。
69.权利要求68的方法，其中荧光醛脱氢酶底物是ALDEFLUOR。
70.权利要求61的方法，其中通过测量RNA水平测定醛脱氢酶水平。
71.权利要求61的方法，其中通过使生物样品与醛脱氢酶抗体接触来测定醛脱氢酶水平。
72.权利要求71的方法，其中抗体是同位素标记的、放射性标记的、荧光团标记的或生物素化的。
73.权利要求61的方法，其中个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。
74.权利要求73的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
75.一种选择使用环磷酰胺治疗的个体的方法，包括使个体的生物样品与环磷酰胺接触。
76.权利要求75的方法，进一步包括在个体的生物样品与环磷酰胺接触后测定样本中细胞死亡水平。
77.权利要求76的方法，其中生物样品是血液和/或白细胞。
78.权利要求77的方法，其中白细胞是T细胞。
79.权利要求78的方法，其中T细胞是CD4+T细胞。
80.权利要求75的方法，其中对选定的个体施用环磷酰胺。
81.权利要求75的方法，其中个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。
82.权利要求81的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
83.一种监测被施用了环磷酰胺的个体的方法，包括使个体的生物样品与环磷酰胺接触。
84.权利要求83的方法，进一步包括在个体的生物样品与环磷酰胺接触后测定样品中细胞死亡水平。
85.权利要求84的方法，进一步包括如果生物样品中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则中断治疗。
86.权利要求84的方法，进一步包括基于生物样品中观察到的细胞死亡水平来修改治疗。
87.权利要求84的方法，进一步包括如果生物样品中观察到的细胞死亡水平低于预设的临界值则选择替代的治疗。
88.权利要求83的方法，其中生物样品是血液和/或白细胞。
89.权利要求88的方法，其中白细胞是T细胞。
90.权利要求89的方法，其中T细胞是CD4+T细胞。
91.权利要求83的方法，其中个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。
92.权利要求91的方法，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
93.一种组合物，包括溶液中的环磷酰胺，其中溶液中的环磷酰胺是从冻干的环磷酰胺中重构的。
94.权利要求93的组合物，其中环磷酰胺在磷酸盐缓冲液中重构。
95.权利要求93的组合物，其中溶液中环磷酰胺的浓度至少约20mg/ml。
96.权利要求93的组合物，在患有神经性自身免疫疾病的个体中被用作免疫清除剂。
97.权利要求93的组合物，其中个体患有选自多发性硬化症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、重症肌无力、横贯性脊髓炎、系统性红斑狼疮(SLE或狼疮)、急性播散性脑脊髓炎、自身免疫性内耳疾病、发作性睡病、神经性肌强直、精神分裂症或其组合的神经性自身免疫疾病。
98.权利要求97的组合物，其中神经性自身免疫疾病是多发性硬化症。
CN2008801175400A 2007-10-01 2008-10-01 使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病 Pending CN101883586A (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US99707407P 2007-10-01 2007-10-01
US60/997,074 2007-10-01
US3705908P 2008-03-17 2008-03-17
US61/037,059 2008-03-17
US8360708P 2008-07-25 2008-07-25
US61/083,607 2008-07-25
PCT/US2008/011402 WO2009045464A1 (en) 2007-10-01 2008-10-01 Methods of treating neurological autoimmune disorders with cyclophosphamide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101883586A true CN101883586A (zh) 2010-11-10

Family

ID=40526553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801175400A Pending CN101883586A (zh) 2007-10-01 2008-10-01 使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病

Country Status (9)

Country Link
US (2) US20110123482A1 (zh)
EP (1) EP2195027A4 (zh)
JP (1) JP2010540634A (zh)
CN (1) CN101883586A (zh)
AU (1) AU2008307565A1 (zh)
CA (1) CA2701172A1 (zh)
IL (1) IL204795A0 (zh)
MX (1) MX2010003548A (zh)
WO (1) WO2009045464A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103402521A (zh) * 2010-11-23 2013-11-20 Abbvie公司 使用选择性的bcl-2抑制剂的治疗方法

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008034076A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Cyclophosphamide in combination with immune therapeutics
WO2008034071A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Method of identifying patients suitable for high-dose cyclophosphamide treatment
WO2008034074A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Cyclosphosphamide in combination with anti-idiotypic vaccines
US9026372B2 (en) * 2007-11-21 2015-05-05 Accentia Biopharmaceuticals, Inc. Methods for providing a system of care for a high-dose oxazaphosphorine drug regimen
WO2009067690A2 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 Accentia Biopharmaceuticals, Inc. Methods for safe and effective treatment using oxazaphosphorine drugs
US20110212052A1 (en) * 2008-07-25 2011-09-01 The Johns Hopkins University Methods and compositions of treating and preventing autoimmune diseases
WO2011011706A2 (en) * 2009-07-24 2011-01-27 The Johns Hopkins University Methods and compositions for treating or preventing autoimmune diseases using immunomodulatory agents
RS52885B (en) * 2009-08-20 2014-02-28 Yeda Research And Development Co. Ltd. LOW-FREQUENCY GLATIRAMER ACETATOM THERAPY
SG10201801794WA (en) 2010-10-29 2018-04-27 Abbvie Inc Solid dispersions containing an apoptosis-inducing agent
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
LT2643322T (lt) 2010-11-23 2018-01-10 Abbvie Inc. Apoptozę skatinančio agento druskos ir kristalinės formos
WO2013028186A1 (en) * 2011-08-24 2013-02-28 Oxford Oncology Inc. Low-dose combination chemotherapy
EP2819741B1 (en) 2012-02-27 2018-03-28 O-Ray Pharma, Inc. Solid drug implants for intracochlear delivery of therapeutics for the treatment of otic disorders
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
US9763992B2 (en) 2014-02-13 2017-09-19 Father Flanagan's Boys' Home Treatment of noise induced hearing loss
WO2020216807A1 (en) * 2019-04-23 2020-10-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing or restoring immune tolerance

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4537883A (en) * 1982-11-12 1985-08-27 Mead Johnson & Company Lyophilized cyclophosphamide
US5036060A (en) * 1988-07-25 1991-07-30 Fujisawa Usa, Inc. Cyclophosphamide
US20010053362A1 (en) * 2000-03-09 2001-12-20 Lee Walters Applications of immune system tolerance to treatment of various diseases
WO2001089509A2 (en) * 2000-05-19 2001-11-29 Thomas Jefferson University Method of treating hiv-1 disease
US6936599B2 (en) * 2001-04-25 2005-08-30 The Regents Of The University Of California Estriol therapy for multiple sclerosis and other autoimmune diseases
US7968511B2 (en) * 2003-05-14 2011-06-28 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Combination therapy with glatiramer acetate and mitoxantrone for the treatment of multiple sclerosis
JP2007518401A (ja) * 2003-12-09 2007-07-12 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ−２を調節するための方法および組成物
JP5274011B2 (ja) * 2004-06-25 2013-08-28 アイディー バイオメディカル コーポレイション オブ ケベック 神経障害を治療するための組成物および方法
EP1957082B1 (en) * 2005-12-02 2012-04-11 The Johns Hopkins University Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103402521A (zh) * 2010-11-23 2013-11-20 Abbvie公司 使用选择性的bcl-2抑制剂的治疗方法
CN103402521B (zh) * 2010-11-23 2016-01-20 艾伯维巴哈马有限公司 使用选择性的bcl-2抑制剂的治疗方法
CN105664164A (zh) * 2010-11-23 2016-06-15 艾伯维巴哈马有限公司 使用选择性的bcl-2抑制剂的治疗方法
CN105664164B (zh) * 2010-11-23 2020-05-05 艾伯维巴哈马有限公司 使用选择性的bcl-2抑制剂的治疗方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20110123482A1 (en) 2011-05-26
CA2701172A1 (en) 2009-04-09
US20160101155A1 (en) 2016-04-14
MX2010003548A (es) 2010-06-02
IL204795A0 (en) 2010-11-30
JP2010540634A (ja) 2010-12-24
EP2195027A4 (en) 2011-11-16
EP2195027A1 (en) 2010-06-16
WO2009045464A1 (en) 2009-04-09
AU2008307565A1 (en) 2009-04-09
WO2009045464A8 (en) 2009-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101883586A (zh) 使用环磷酰胺治疗神经性自身免疫疾病
JP5905534B2 (ja) 多発性硬化症を治療する方法
Pathirana et al. European S3-guidelines on the systemic treatment of psoriasis vulgaris
CN101460843B (zh) 凝溶胶蛋白治疗多发性硬化和诊断神经疾病的用途
JP2010132660A5 (zh)
TR201808181T4 (tr) Bir ıl-4r antagonist uygulanarak atopik dermatitin tedavi esilmesine yönelik yöntemler.
Graves et al. Effects of rituximab on lymphocytes in multiple sclerosis and neuromyelitis optica
DK3099307T3 (en) Use of cladribine for the treatment of neuromyelitis optica
JP2022001577A (ja) セリアック病、非セリアックグルテン過敏症及び難治性セリアック病を治療するための方法及び組成物
EP2425250B1 (en) Methods for monitoring the efficacy of anti-il-2r antibodies in multiple sclerosis patients
US20120237472A1 (en) Methods and compositions for treating or preventing autoimmune diseases using immunomodulatory agents
TW202203925A (zh) 使用布魯頓氏酪胺酸激酶抑制劑來治療復發型多發性硬化症之方法
US20230091561A1 (en) Methods of treating primary progressive multiple sclerosis using an inhibitor of bruton's tyrosine kinase
KR101975952B1 (ko) 면역세포 수용체 2b4(cd244)의 염증성 장질환 진단 및 치료제로서의 용도
WO2019101960A1 (en) Cladribine regimen for use intreating progressive forms of multiple sclerosis
EP2470901A1 (en) Use of immunoregulatory nk cell populations for predicting the efficacy of anti-il-2r antibodies in multiple sclerosis patients
WO2024126431A1 (en) Anti-ilt7 binding agents for the treatment and prevention of myositis
CN117500561A (zh) 治疗或诊断情绪障碍或应激障碍的新靶点和其应用
Praba et al. International Journal of Modern Pharmaceutical Research
CN102266317A (zh) 丙戊酸及其衍生物的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20101110