CN101880656B

CN101880656B - 一种蝮蛇毒凝血酶及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN101880656B
Application number: CN 200910083520
Authority: CN
Inventors: 马骉; 孔双泉; 王靖; 宋梦薇; 孙爽
Original assignee: BEIJING SCIENCE SUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: BEIJING SCIENCE SUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2009-05-08
Filing date: 2009-05-08
Publication date: 2013-03-27
Anticipated expiration: 2029-05-08
Also published as: CN101880656A

Abstract

本发明提供一种单一组分的蝮蛇毒凝血酶及其制备方法和应用。该酶为如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质，(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有蝮蛇毒凝血酶活性的由(a)衍生的蛋白质。在临床上可用于预防出血和止血。本发明经离子交换柱层析、亲和层析和凝胶层析，从蝮蛇毒中提取得到所述蝮蛇毒凝血酶。本发明还提供了包含所述蝮蛇毒凝血酶的药物组合物。

Description

一种蝮蛇毒凝血酶及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种蛇毒凝血酶及其制备方法，特别涉及一种蝮蛇毒凝血酶及其制备方法。

本发明还涉及所述蛇毒凝血酶的应用。

背景技术

血液凝固是血液由液态转变为凝胶态的过程，它是哺乳类动物止血功能的重要组成部分。Macfarlane等于1964年提出了凝血过程的级联式反应学说(cascade reaction hypothesis)，认为凝血是一系列凝血因子被其前因子激活最终生成凝血酶，凝血酶则使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块的一系列酶促反应过程。这一过程包括纤维蛋白单体的形成、聚合及纤维蛋白的交联。纤维蛋白原是由肝合成，具有两条α链(Aa)：、两条β链(Bβ)、和两条γ链(γ2)即三对不同的多肽链组成的糖蛋白，可用(Aa、Bβ、γ)2表示。在凝血酶的作用下纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体，释放血纤维蛋白多肽a链、β链。可溶性纤维蛋白单体间通过氢键等次级键相连而成的多聚体凝块，虽可形成血凝块，但较松软且不稳定，需在Ca²⁺参与下.由XIIIa作用才能进一步转变为稳定的纤维蛋白多聚体。因子XIII是由两对不同的多肽链组成的四聚体，在Ca²⁺参与下由凝血酶、Xa作用于转变为XIIIa，XIIIa使可溶性纤维蛋白多聚体中一分子纤维蛋白单体的Gln残基与另一分子单体的Lys残基间形成分于间共价键，从而形成稳定的纤维蛋白多聚体，并在血小板的作用下，使网罗血细胞的血块进一步收缩，形成更坚固的血凝块，完成凝血过程。

从蛇毒中也可提取具有凝血功能的酶，例如，Holleman等(Holleman，W.H等，1976J.Biol.Chem.，251：1663.)从巴西矛头蝮(Bothrope jararaca)蛇毒中分离纯化得到一种蛇毒凝血酶。中国科学院昆明动物所从我国尖吻蝮(Agkistrodonacutus)蛇毒中分离出尖吻蝮蛇毒凝血酶I和尖吻蝮蛇毒凝血酶II(中国专利ZL01115570.1和01115567.1)，这些酶可作用于血纤维蛋白原，释放血纤维蛋白多肽a链和/或β链，参与凝血过程。

目前，国外具有止血功能的蛇毒酶类产品主要有Hemocoagulase、Bothropase和Reptilase，其中Reptilase(立止血)是瑞士Basle Pentapharm公司从Bothrops atrox蛇毒中提取，在我国有销售，并于1996年进入中国国家基本药物目录。Reptilase为单链，由230个氨基酸组成。在国内，仿制立止血成功上市的产品有巴曲停和邦停。

发明内容

一方面，本发明提供一种单一组分的蝮蛇毒凝血酶，该酶在临床上可用于各种出血类疾病的预防和治疗。

另一方面，本发明提供所述蝮蛇毒凝血酶的制备方法。

还一方面，本发明提供包含所述蝮蛇毒凝血酶的药物组合物。

再一方面，本发明提供所述蝮蛇毒凝血酶在制备用于止血或预防出血的药物中的应用。

还一方面，本发明提供编码所述蝮蛇毒凝血酶的基因。

根据本发明的一方面，本发明的白眉蝮蛇(Agkistrodon blomhoffiibrevicaudus)蛇毒凝血酶系从我国蝮蛇毒中分离纯化得到的单一组分的糖蛋白，能作用于血纤维蛋白原，释放血纤维蛋白多肽a和β。

所述蝮蛇毒凝血酶为如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质，

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有蝮蛇毒凝血酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

优选地，经理化测定，该酶分子量为32.3Kda，经氨基酸序列分析，该酶由236个氨基酸组成，在所述蝮蛇毒凝血酶的氨基酸序列中，N末端20个氨基酸序列为VIGGDECNINEHRFLVALYH；C末端氨基酸序列为DHLDWIQSIIAGNKTVTCPP。

最优选地，所述蝮蛇毒凝血酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示(见图1)。

尽管在本发明中，对于所提取的蝮蛇毒凝血酶的氨基酸测序力求精确，但实际上测序结果还是可能存在误差，并且蝮蛇毒凝血酶自身也存在个体突变的可能。序列数据的偏差或人为假象(artifacts)主要来自实验过程，这与其它科学数据的情况相同。这些人为假象主要来自以下几个方面：(1)载体序列污染：在测序列等实验过程中，载体序列可能造成污染，致使序列记录数据中包含了载体序列；(2)异源(heterologous)序列污染：有研究表明一些人类cDNA测序结果在实验过程中被酵母和细菌序列污染；(3)序列的重排和缺失；(4)重复因子污染：cDNA克隆方法有时会受到逆转录因子(如Alus)的影响。(5)测序误差和自然多态性：测序过程存在一定的误差概率。因此，本发明的保护范围不应仅限于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列(a)组成的蛋白质，还应当包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有蝮蛇毒凝血酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

本发明还提供了编码所述蝮蛇毒凝血酶的基因。

根据本发明的另一方面，本发明的蝮蛇毒凝血酶的制备方法可包括如下步骤：

1)用缓冲液溶解蝮蛇毒，离心沉淀，得上清液，利用DEAE-Sepharose FastFlow层析分离，收集具有凝血酶活性的组分；

2)将具有凝血酶活性的组分，用亲和层析进行分离纯化，收集纯化后的活性组分；

3)将所述纯化后的活性组分，再用凝胶层析进行分离纯化，得到精制的蝮蛇毒凝血酶溶液；

4)将所述精制的蝮蛇毒凝血酶溶液脱盐，冻干，获得蝮蛇凝血酶冻干粉。

具体地，本发明的蝮蛇毒凝血酶可通过如下方法制备：

(1)DEAE-Sepharose Fast Flow层析

称取蝮蛇毒，用0.05mol/L pH8.0 Tris-HCl缓冲液溶解，以6000rpm/min离心15分钟，得上清液。将上清液上于平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，先用0.05mol/L Tris-HCl缓冲液洗脱未吸附杂质，再用含有0～0.6mol/L NaCl的缓冲溶液进行梯度洗脱，收集凝血酶活性峰。

(2)亲和层析

将上述活性组分收集液上于平衡好的亲和层析柱，先用含0.5mol/L NaCl0.05mol/L Tris-HCl pH8.0缓冲液洗脱未吸附杂质；然后用含0.15mol/L洗脱剂0.5mol/L NaCl 0.05mol/L Tris-HCl pH8.0缓冲液洗脱活性组分，收集活性组分。

(3)凝胶过滤层析

取活性组分收集液，用截留分子量10,000D的透析袋透析并浓缩。取浓缩液上于用0.15mol/L NH₄Ac缓冲液平衡好的凝胶G-75过滤柱上，然后用0.15mol/L NH₄Ac缓冲液洗脱，收集活性蛋白峰，得到活性组分。

(4)冷冻干燥

用截留分子量为10,000D的透析袋透析含活性成分的收集液，并浓缩。将浓缩液用0.22μm滤器过滤除菌，分装冻干得冻干粉。

本发明的蝮蛇毒凝血酶的特征如下：

1)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见单一条带，分子量为32.3Kda。

2)经氨基酸序列测定，该酶有236个氨基酸组成，N末端20个氨基酸序列为VIGGDECNINEHRFLVALYH；C末端氨基酸序列为DHLDWIQSIIAGNKTVTCPP，更具体地，其序列如SEQ ID NO：1所示。

3)经高效液相色谱检测，该酶的纯度能达到96％以上。

根据本发明的还一方面，本发明提供了包含所述蝮蛇毒凝血酶的药物组合物，其包含本发明的蝮蛇毒凝血酶以及适量的药用辅料。该药物组合物可以制成适于临床应用的各种剂型。

当所述药物组合物是注射剂时，所述蛇毒凝血酶制剂的制备方法可包括下述步骤：

取纯化的凝血酶，将其加入到适量的缓冲溶液中溶解，得溶解液，在溶解液中加入适量的保护剂和/或赋形剂，除菌过滤，滤液分装，得注射液，或者冷冻干燥，即得凝血酶冻干粉针制剂。

其中，保护剂优选精氨酸。精氨酸与蝮蛇凝血酶的质量比大于10。根据蝮蛇毒凝血酶注射液稳定性实验，当精氨酸与蝮蛇凝血酶的质量比大于10时，制剂稳定性好。

根据本发明的再一方面，本发明提供了所述蝮蛇毒凝血酶在制备用于止血或预防出血的药物中的应用。

本发明的凝血酶能使人血浆和牛纤维蛋白原在体外凝固。凝固块在5M尿素溶液中分散，说明蝮蛇毒凝血酶没有激活凝血因子XIII，产生交联纤维蛋白，可被纤溶酶迅速降解清除。在体内，蝮蛇毒凝血酶对小鼠剪尾出血时间的影响实验显示蝮蛇毒凝血酶能明显缩短小鼠剪尾出血的时间。

蝮蛇毒凝血酶过敏性试验、溶血性试验、血管和肌肉局部刺激试验均呈阴性。

本发明提供了一种蝮蛇毒凝血酶，其是从蝮蛇毒中分离纯化得到，为单一组分，其注射剂具有高度稳定性和安全性，临床上可以应用的止血功能，具有止血性能好和安全性高的特点，可替代同类药物的效果。

附图说明

图1：本发明实施例1制得的蝮蛇毒凝血酶的氨基酸序列SEQ ID NO：1。

图2：本发明实施例1中由DEAE-Sepharose Fast Flow层析所得到的色谱图。

图3：本发明实施例1中由亲和层析所得的活性组分的色谱图。

图4：本发明实施例1中由凝胶过滤层析所得的活性组分的色谱图。

图5：本发明实施例1所制得的蝮蛇毒凝血酶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图。

图6：本发明实施例1所制得的蝮蛇毒凝血酶的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了阐释本发明，下面给出实施例，实施例完全是例证性的，他们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

蝮蛇毒凝血酶的制备

实施例1

(1)DEAE-Sepharose Fast Flow层析

称取购自辽宁白眉蝮蛇(Agkistrodon blomhoffii brevicaudus)蛇毒20克，用0.05mol/L pH8.0 Tris-HCl缓冲液溶解，以6000rpm/min离心15分钟，得上清液。将上清液上于平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，先用0.05mol/L Tris-HCl缓冲液洗脱未吸附杂质，再用含有0～0.6mol/L NaCl的缓冲溶液进行梯度洗脱，收集各峰溶液，取溶液各0.1ml加用生理盐水稀释一倍的牛血浆，若血浆凝固，则为凝血酶活性峰。见图2。

(2)亲和层析

将上述凝血酶活性峰的活性组分收集液上于平衡好的亲和层析柱，先用含0.5mol/L NaCl 0.05mol/L Tris-HCl pH8.0缓冲液洗脱未吸附杂质；然后用含0.15mol/L洗脱剂0.5mol/L NaCl 0.05mol/L Tris-HCl pH8.0缓冲液洗脱活性组分，收集活性组分。见图3。

(3)凝胶过滤层析

取活性组分收集液，用截留分子量10,000D的透析袋透析并浓缩至30ml左右。取浓缩液B上于用0.15mol/L NH₄Ac缓冲液平衡好的凝胶G-75过滤柱上，然后用0.15mol/L NH₄Ac缓冲液洗脱，收集活性蛋白峰，得到活性组分。见图4。

(4)冷冻干燥

用截留分子量为10,000D的透析袋透析含活性成分的收集液，并浓缩至20ml。将浓缩液用0.22μm滤器过滤除菌，分装冻干得150mg冻干粉。

蝮蛇毒凝血酶的测定

实施例2

由实施例1所制得的蝮蛇毒凝血酶的测定结果如下：

1)利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定，电泳图可见单一条带，分子量为32.3Kda。见图5。

2)利用高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验：凝胶色谱柱：TSK GEL2000SWxl7.8mmX300mm，5μm；流动相：0.2mol/L磷酸钠缓冲液(pH6.8)；检测波长：280nm；；进样量20μL；柱温：室温；流速1.0ml/min。测定结果纯度为98.56％。见图6。

3)利用美国ABI公司Procise 491测序仪测定，该酶有236个氨基酸组成，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示(见图1)。

4)活性测定：根据在室温下能使1.0ml草酸化牛全血在5分钟内凝固的酶量为一个单位测定，结果为640单位/mg。

注射用蝮蛇毒凝血酶的药理试验结果

实施例3

本发明的凝血酶能使人血浆和牛纤维蛋白原在体外凝固，血浆凝结比活大于600单位/mg。凝固块在5M尿素溶液中分散，说明蝮蛇毒凝血酶没有激活凝血因子XIII，产生交联纤维蛋白，可被纤溶酶迅速降解清除。

蝮蛇毒凝血酶腹腔注射对小鼠出血时间的影响：小白鼠腹腔注射生理盐水、蝮蛇毒凝血酶、和立止血。给药后30分钟，在鼠尾尖向上0.5cm处快速剪断小鼠尾部，定时用滤纸吸取流出的血液，出血时间为从剪尾开始至无血止。结果见表2。

表2蝮蛇毒凝血酶腹腔注射对小鼠出血时间的影响

^*与对照组比较P＜0.01 X±s n＝10

在体内，蝮蛇毒凝血酶对小鼠剪尾出血时间的影响实验显示蝮蛇毒凝血酶能明显缩短小鼠剪尾出血的时间。

全血凝固时间试验

取家兔，固定后，股静脉插管。经兔耳缘静脉注射蝮蛇毒凝血酶，定时取静脉血1ml，并立即计时，记录全血凝固时间。结果见表3。

表3：蝮蛇毒凝血酶对家兔全血凝固时间的影响

^*与空白组比较P＜0.05

结果可见，给药后三个剂量组全血凝固时间与空白对照组比较均显著缩短。小剂量组全血凝固时间与立止血相当。

过敏性试验：豚鼠18只，体重260～280g，雌雄各半，按体重和性别随机分为6组，每组3只。1、2组为阴性对照组(生理盐水)；3、4组为受试药；5、6为阳性对照(5％卵清蛋白)组每组3只。致敏阶段：各组先隔日腹腔注射，0.5ml/只，共注射3次。攻击阶段：将1、3、5组豚鼠在第一次腹腔注射药液后14天，2、4、6组于第一次腹腔注射药液后第21天从股静脉注射1ml/只。观察静脉注射后30分钟内的豚鼠过敏反应症状。结果阳性对照组豚鼠注射后1分钟内出现颤抖、竖毛、痉挛之后出现呼吸困难，抽搐倒下死亡，属4级过敏反应。而注射药液组于第一次腹腔注射后14天、21天攻击均未出现任何过敏反应。阴性对照组6只豚鼠均未发生过敏反应。

溶血性实验：取试管21支，分3排，每排7只，各排1-5号管分别加入0.2单位、0.4单位、0.8单位、1.2单位和1.6单位的药液，并用0.9％氯化钠注射液至2.5ml，6、7号管分别加入0.9％氯化钠注射液2.5ml、蒸馏水2.5ml。最后每管均加入2％兔红细胞悬液2.5ml，轻轻摇匀，置37℃水浴中，通过“肉眼观察法”分别记录不同时间各管的溶血和凝集情况。结果1-5管在3小时内均未引起溶血和凝集反应。

肌肉刺激性实验：取家兔3只，在无菌条件下于兔右侧股四头肌注射蝮蛇毒凝血酶药液2ml/只，每日1次，连续用药3日，左侧股四头肌注射同体积的生理盐水。每次注射后观察注射部位有无刺激反应。末次给药后24h，解剖取出股四头肌，观察注射部位肌肉的刺激反应，并做病理检查。结果肉眼观察给药组和对照组兔注射部位骨骼肌组织，均无明显充血、变性和坏死现象。病理组织学检查结果兔注射部位骨骼肌组织未见出血，未见明显炎性细胞浸润。

皮下刺激性实验：取家兔3只，在无菌条件下于兔右侧耳根部皮下注射蝮蛇毒凝血酶药液2ml/只，每日1次，连续用药3日，左侧耳根部皮下注射同体积的生理盐水。每次注射后观察注射部位有无刺激反应。末次给药后24h，解剖取出皮下组织，观察注射部位皮下的刺激反应，并作病理检查。结果肉眼观察给药组和对照组兔注射部位皮下组织，均无明显充血、变性和坏死现象。病理组织学检查结果兔注射部位皮下组织未见出血，渗出水肿。

蝮蛇毒凝血酶注射剂的制备

实施例4

(1)称取15g糖苷置于配液罐中，加入处方量50％体积的无菌注射用水，搅拌溶解，加入处方量0.1％的活性炭，在室温下搅拌30分钟，然后用钛滤棒过滤脱炭。

(2)加入10000单位蝮蛇毒凝血酶，搅拌溶解，用1mol/L的HCl溶液或1mol/L的NaOH溶液调pH值为6.5～7.5。继续添加无菌注射用水至处方量，搅拌均匀；

(3)以0.22μm微孔滤膜精滤。

(4)冻中间品检测合格后，计算实际装量分别灌装于管制抗生素瓶中，压半塞(规格装量：1ml)；放入冷冻干燥箱中，降温至-45℃后，冷冻3小时；打开真空泵，抽至真空度在15Pa左右，隔板温缓慢升至-35℃，并控温约8小时；隔板温继续升至-25℃，并控温6小时；控制隔板温缓慢升至-15℃；控制隔板温升至30℃，并保持6小时。

(5)轧盖，全检，包装、入库。

实施例5

蝮蛇毒凝血酶注射液的制备

(1)称取0.5g精氨酸置于配液罐中，加入处方量50％体积的无菌注射用水，搅拌溶解，加入处方量0.1％的活性炭，在室温下搅拌30分钟，然后用钛滤棒过滤脱炭。

(3)以0.22μm微孔滤膜精滤。

(4)滤液分装10000支2ml安瓿中封口。

精氨酸与蝮蛇凝血酶的配比实验

实施例6

蝮蛇毒凝血酶注射液稳定性实验的结果见表4。根据蝮蛇毒凝血酶注射液稳定性实验，当精氨酸与蝮蛇凝血酶的质量比大于10时，制剂稳定性好。

表4

注：室温避光保存，活性与0月比较。

SEQUENCE LISTING

<110>北京赛生药业

<120>一种蝮蛇毒凝血酶及其制备方法和应用

<130>BJ53-08P106141

<160>1

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>236

<212>PRT

<213>蝮蛇

<400>1

Val Ile Gly Gly Asp Glu Cys Asn Ile Asn Glu His Arg Phe Leu Val

1 5 10 15

Ala Leu Tyr His Ser Arg Ser Arg Thr Phe Leu Cys Gly Gly Thr Leu

20 25 30

Ile Asn Gln Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Asp Arg Phe Phe

35 40 45

Met Tyr Ile Arg Leu Gly Met His Asn Lys Asn Val Asn Phe Asp Asp

50 55 60

Glu Gln Arg Arg Ser Pro Lys Glu Lys Tyr Phe Phe Arg Cys Ser Asn

65 70 75 80

Asn Phe Thr Lys Trp Asp Lys Asp Ile Met Leu Ile Arg Leu Asp Ser

85 90 95

Pro Val Asn Asn Ser Ala His Ile Ala Pro Leu Ser Leu Pro Ser Asn

100 105 110

Ala Pro Ser Val Gly Ser Val Cys Arg Val Met Gly Trp Gly Gln Thr

115 120 125

Thr Ser Pro Gln Glu Asp Leu Ser Asp Val Pro Arg Cys Ala Asn Ile

130 135 140

Asn Leu Phe Asn Phe Thr Val Cys Arg Ala Ala Tyr Pro Trp Leu Pro

145 150 155 160

Ala Thr Ser Arg Val Leu Cys Ala Gly Asp Leu Glu Gly Gly Ile Asp

165 170 175

Thr Cys Asn Arg Asp Ser Gly Gly Pro Leu Ile Cys Asn Gly Gln Phe

180 185 190

Gln Gly Ile Val Ser Lys Gly Gln Asn Leu Cys Ala Gln Pro Arg Lys

195 200 205

Pro Ala Leu Tyr Thr Lys Val Phe Asp His Leu Asp Trp Ile Gln Ser

210 215 220

Ile Ile Ala Gly Asn Lys Thr Val Thr Cys Pro Pro

225 230 235

Claims

1.一种蝮蛇毒凝血酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）用0.05mol／L pH8.0 Tris-HCl缓冲液溶解白眉蝮蛇蛇毒，离心沉淀，得上清液，利用DEAE-Sepharose Fast Flow层析分离，收集具有凝血酶活性的组分：将上清液上于平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，先用0.05mol／L Tris-HCl缓冲液洗脱未吸附杂质，再用含有0～0.6mol／L NaCl的缓冲溶液进行梯度洗脱，收集凝血酶活性峰；

2）将具有凝血酶活性的组分，用亲和层析进行分离纯化：将上述活性组分收集液上于平衡好的亲和层析柱，先用含0.5mol／L NaCl 0.05mol／L Tris-HCl pH8.0缓冲液洗脱未吸附杂质，然后采用含0.15mol／L洗脱剂0.5mol／L NaCl 0.05mol／L pH8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱活性组分，收集纯化后的活性组分；

3）将所述纯化后的活性组分，再用凝胶层析进行分离纯化：取活性组分收集液，用截留分子量10000D的透析袋透析并浓缩，取浓缩液上于用0.15mol／L NH₄Ac缓冲液平衡好的凝胶G-75过滤柱上，然后用0.15mol／L NH₄Ac缓冲液洗脱，收集活性蛋白峰，得到活性组分；

4）用截留分子量为10000D的透析袋透析含活性成分的收集液，并浓缩，将浓缩液用0.22μm滤器过滤除菌，并脱盐冻干，获得蝮蛇凝血酶冻干粉，所制备的蝮蛇毒凝血酶，为由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.一种具有止血功能的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1所制备的蝮蛇毒凝血酶和适量的药用辅料，所述药用辅料包括精氨酸，所述精氨酸的使用量为精氨酸与蝮蛇凝血酶的质量比大于10，

其中，所述蝮蛇毒凝血酶，为由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为注射剂。