CN101874507A - 蓝莓培育及种植用微生态制剂、制备方法和使用方法 - Google Patents
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Abstract
蓝莓培育及种植用微生态制剂、制备方法和使用方法。是用有机磷细菌、胶冻样芽孢杆菌、乳酸杆菌、蜡状芽孢杆菌、光合菌、固氮根瘤菌、假丝酵母和丝状真菌分别纯化培养后将各菌液混合配制而成。产品外观为乳黄或淡黄色液体,活菌数≥2×108个/ml,pH值4.0~8.0,有效期为12个月。以800~1500倍稀释的微生态制剂用于蓝莓种苗培育和移栽处理,植株生长活性提高,株高、基生枝、根系生长状况比对照有显著提高;在蓝莓组织快速繁殖及工厂化育苗中的应用中:蓝莓诱导分化、增殖、壮苗培养等培养基配方的初步诱导分化率达90%为上、继代增殖达5~8倍,达到快速繁殖。继代苗直接下地移栽,移栽成活率也达到了75~90%。
Description
技术领域
本发明属于植物生长调节剂技术领域。涉及用微生物混合制成的微生态制剂;具体涉及使用细菌、真菌进行混合和微生态制剂的制备和在蓝莓培养及种植上的使用方法。
背景技术
在蓝莓引种栽培技术中,有一个公识:蓝莓植株生长的最适pH值为4.0-4.8,在中性和碱性土壤中很难成活;蓝莓菌根的生成不仅强化和提高了蓝莓在酸性环境中对土壤有害成分的抵抗力,而且扩大了对土壤pH的适应范围,促进植株生长,增加蓝莓果实的产量。然而,在自然条件下,蓝莓菌根真菌的菌丝体生长缓慢,对蓝莓植株的侵染率低;在人工种植条件下,蓝莓缺乏菌根真菌的共生,菌根真菌很难生成孢子,菌丝体生成缓慢。无论在自然和人工种植条件下,适应蓝莓菌根真菌生长的微生态环境都不理想,存在见果晚、产量低、果质差等问题。中国专利CN200710157194.6、CN200710157193.1报道了一种适宜蓝莓试管苗生根的培养基组合物(以白糖、珍珠岩和生根培养基)及其方法;中国专利CN200810156643.X公开了蓝莓栽培专用基质及其制备方法,是将农家肥、木屑、饼肥及其它酸性腐殖质按一定配制比例(3∶6∶1)混合发酵;再经过高温腐熟,杀毒、杀菌、干燥,进行复配;中国专利CN200810013243.3报道的蓝莓专用培养土由草炭土、腐叶土、蛭石、浮石、硫磺粉、硫酸钾和熏炭组成。
目前尚未见有关用固氮根瘤菌、有机磷细菌、乳酸杆菌、蜡状芽孢杆菌、光合菌、假丝酵母和丝状真菌等环境微生物组合制备微生态制剂用于蓝莓组培苗和种植研究的报道。
发明内容
针对现有技术存在的技术缺陷,本发明的目的在于提供一种微生态制剂能有效促进蓝莓根系菌根生长,对蓝莓的培育和种植取得更为理想的效果。
本发明所需微生物为:有机磷细菌(Organic phosphate bacteria)、胶冻样芽孢杆菌(Gelatum bacillus SP.)、乳酸杆菌(Acidfast bacilli)、蜡状芽孢杆菌(Carea bacillus)、光合菌(Photosynthetic bacteria)、固氮根瘤菌(亦称田菁根瘤菌,R.sesbania SP.)、假丝酵母(Candida SP.)和丝状真菌(Filamentous fungus)。并以这些微生物菌种进行培养后混合配制而成。产品中微生物菌液的体积百分组成为:
有机磷细菌 50.00~68.00
胶冻样芽孢杆菌 5.00~7.00
乳酸杆菌 6.00~10.00
蜡状芽孢杆菌 3.00~5.00
光合菌 5.00~8.00
固氮根瘤菌 4.00~7.00
假丝酵母 4.00~7.00
丝状真菌 5.00~8.00
本发明微生态制剂的制备流程为:菌种纯化→种子扩培→菌液混合→微生物菌剂。具体步骤为:
1.菌种分离培养和纯化:分别配制适合每种菌生长的培养基,加热煮沸20min,分装于干净试管中,装量1/5~1/4高度,塞好棉塞,于103.4kPa高压灭菌20min,趁热放成斜面(斜面长度约管上的1/2-3/5),放斜面对应将培养基稍摇晃,待凝固后放入37℃温箱中培养24h,进行杂菌检查。如无杂菌,即可进行接菌。不同菌在斜面上的培养温度、时间及pH见表1。
表1不同细菌的培养温度、时间及pH
2.种子培养:接种斜面培养物于种子瓶,37℃,200r/min培养24h得到种子液,种子的扩培还需继续摇瓶,直至将各种菌培养至对数生长期。培养好的菌种,放在4℃左右低温条件下保存,不超过3个月传代一次。
3.无菌检查:在种子扩培过程中应仔细操作。将培养好的种子无菌操作接种无菌的肉汤培养基中,置37℃温箱培养24小时后,取出(勿振动)立刻观察,如发现培养液混浊、变黄和发臭,即证明已染菌,培养物应全弃,如果清彻说明未染菌,可做下一步菌液混合。
4.菌液混合:将培养好的各种菌液按比例混合,即可配制成该微生态菌剂。各菌液间的体积配比为:
有机磷细菌 50.00~68.00
胶冻样芽孢杆菌 5.00~7.00
乳酸杆菌 6.00~10.00
蜡状芽孢杆菌 3.00~5.00
光合菌 5.00~8.00
固氮根瘤菌 4.00~7.00
假丝酵母 4.00~7.00
丝状真菌 5.00~8.00
5.微生态制剂质量标准:微生态制剂包括固氮根瘤菌、有机磷细菌、胶冻样芽孢杆菌、乳酸杆菌、蜡样芽孢杆菌、光合菌、假丝酵母和丝状真菌等,生产用的微生物菌种应安全、有效;其形态、生理生化特性及功能稳定。微生态制剂产品技术指标见表2,微生态制剂产品中无害化指标见表3。
表2微生态制剂的产品技术指标
注:每一种有效菌的数量6个月不得少于1×107个/g(ml)
微生态制剂制备完成后,无需灭菌。本产品须密封保存于避光、凉爽、通风、干燥处,尽量避免与抗生素类药物同时使用。
本发明微生态制剂在蓝莓培育使用中:①在组苗培育中,组培苗长势明显较快、茎粗壮,叶色转绿,试管苗的质量增高;将组培苗转入生根培养基中,25天生根,较不经微生态制剂处理的种苗生根缩短一周左右。②在穴盘苗育苗阶段处理中:用800~1500倍稀释效果良好,尤其是用800~1000倍稀释的菌液处理,植株生长活性提高,长势增强,株高、基生枝、根系生长状况好。③在穴盘苗水培试验中:用1000倍稀释菌液加营养液处理株高和根系生长的密和长度状况好于对照,说明菌剂能促进根系生长,进而促进植株生长。④在营养钵阶育苗浇施试验中:用800倍稀释菌液处理组的根系生长量大,叶片面积大,基生枝数多,株高、茎粗好于对照,说明复合生物菌剂对蓝莓根系活性具有促进作用。通过复合微生态制剂对组培试管苗接种侵染、穴盘苗浇施、穴盘苗水培和营养钵育苗阶段浇施试验等,结果与对照组相比差异显著,说明人工侵染菌根菌,能够提高蓝莓根系活力,促进养分吸收,进而促进地上植株生长。⑤在蓝莓组织快速繁殖及工厂化育苗中的应用中:蓝莓诱导分化、增殖、壮苗培养等培养基配方的初步诱导分化率达90%为上、继代增殖达5~8倍,能够达到快速繁殖的目的。继代苗直接下地移栽,移栽成活率也达到了75~90%。
本发明与现有技术相比较突出的特点是:本发明的微生态制剂经过数年,在蓝莓组织培养和工厂化育苗技术试验中均已证实:该微生态制剂能够明显改善蓝莓根系的微生态环境,降低土壤的pH值和增加土壤肥力,增强植株的生长活性和侵染力,增加蓝莓果实的产量。为工厂化蓝莓育苗和栽培提供了有效、可靠的技术。
附图说明
图1:微生态菌剂浸沾接种蓝莓种苗,处理10瓶30天后观察结果。1-1为对照组,1-2为微生态菌剂浸沾接种处理组。
图2:为穴盘苗(驯化2个月)植株生长状况。2-1为对照,单用营养液,2-2为营养液加微生态菌剂。
图3:为微生态制剂对根系生长具有促进作用。3-1为对照,仅用营养液;3-2为营养液加微生态菌剂。
图4:为微生态制剂试验组与对照组的叶片面积,基生枝数,株高和茎粗比较图。4-1为对照,4-2为营养液加微生态菌剂。
图5:为微生态制剂试验组与对照组的叶片面积,基生枝数,株高和茎粗比较图。5-1为对照,5-2为营养液加微生态菌剂。
具体实施方式
实施例一微生态制剂的制备
1.制备工艺步骤为:
(1)菌种培养和纯化:分别配制适合每种菌生长的培养基,加热煮沸
20min,分装于干净试管中,装量1/5~1/4高度,塞好棉塞,于103.4kPa高压灭菌20min,趁热放成斜面(斜面长度约管上的1/2-3/5),放斜面对应将培养基稍摇晃,待凝固后放入37℃温箱中培养24h,进行杂菌检查。如无杂菌,即可进行接菌。不同菌在斜面上的培养温度、时间及pH如下表:
表4不同细菌的培养温度、时间及pH
菌种 | 培养时间(h) | 培养温度(℃) | pH |
有机磷细菌 | 8~10 | 36~37 | 7.0~7.5 |
乳酸菌 | 48 | 36~37 | 4~6 |
光合菌 | 72~120 | 18~45 | 6~10 |
蜡状芽孢杆菌 | 24 | 28~35 | 4.3~9.0 |
胶冻芽孢杆菌 | 24~36 | 28~35 | 4.0~9.0 |
固氮根瘤菌 | 48~72 | 28 | 6~7 |
假丝酵母 | 48 | 36~37 | 4~6 |
丝状真菌 | 48 | 36~37 | 4~6 |
(2)种子培养:接种斜面培养物于种子瓶,37℃,200r/min培养24h得到种子液,种子的扩培还需继续摇瓶,直至将各种菌培养至对数生长期。培养好的菌种,放在4℃左右低温条件下保存,不超过3个月传代一次。
(3)无菌检查:在种子扩培过程中应仔细操作。将培养好的种子无菌操作接种无菌的肉汤培养基中,置37℃温箱培养24小时后,取出(勿振动)立刻观察,如发现培养液混浊、变黄和发臭,即证明已染菌,培养物应全弃,如果清彻说明未染菌,可做下一步菌液混合。
(4)菌液混合:将培养好的各种菌液按如下比例混合即可配制成该微生态菌剂:
有机磷细菌发酵液 59.01%
胶冻样芽孢杆菌发酵液 5.59%
乳酸杆菌发酵液 8.07%
蜡状芽孢杆菌发酵液 4.04%
光合菌发酵液 5.90%
固氮根瘤菌发酵液 5.59%
假丝酵母发酵液 4.97%
丝状真菌发酵液 6.83%,
微生态制剂产品质量及有害物指标:完全符合质量指标和无害化指标。
实施例二微生态制剂的制备
制备的工艺步骤中的菌种分离培养和纯化、种子培养基和无菌检查同实施例一,菌液混合按如下比例进行:
有机磷细菌发酵液 54.90%
胶冻样芽孢杆菌发酵液 6.01%
乳酸杆菌发酵液 8.95%
蜡状芽孢杆菌发酵液 4.50%
光合菌发酵液 7.01%
固氮根瘤菌发酵液 6.52%
假丝酵母发酵液 5.98%
丝状真菌发酵液 6.13%,
微生态制剂产品质量及有害物指标:完全符合质量指标和无害化指标。
实施例三微生态制剂的制备
制备的工艺步骤中的菌种分离培养和纯化、种子培养基和无菌检查同实施例一,菌液混合按如下比例进行:
有机磷细菌发酵液 65.15%
胶冻样芽孢杆菌发酵液 5.01%
乳酸杆菌发酵液 6.95%
蜡状芽孢杆菌发酵液 3.52%
光合菌发酵液 5.00%
固氮根瘤菌发酵液 5.21%
假丝酵母发酵液 4.14%
丝状真菌发酵液 5.02%
微生态制剂产品质量及有害物指标:完全符合质量指标和无害化指标。
实施例四微生态制剂在蓝莓育苗、培育中的应用
1.在穴盘苗浇施试验:
试材为穴盘苗即具有2~4条新生根系,将不同浓度菌剂添加蓝莓营养液中浇施,每周一次,连续4次;对照只浇施营养液。每处理3盘(100株苗),调查植株生长状况,结果见表5。
表5不同浓度菌剂在穴盘苗浇施后植株生长状况(2008.5.10~7.20)
通过2008年、2009年2年穴盘苗育苗阶段可得:经过菌剂处理,植株生长活性提高,长势增强,株高、基生枝、根系生长状况好于对照;800~1000倍菌剂加营养液处理,植株生长状况最佳,与对照差异显著;500倍浓度稍大,有烧苗现象,1500倍浓度较低,效果较差,但好于对照(见表5)。
2.在穴盘苗水培试验:
试材为穴盘苗(驯化2个月),处理为营养液加菌剂对照为营养液。按水培管理方式进行,调查植株生长状况。结果见表6和图2
表6微生态制剂在水培穴盘蓝莓苗生长状况
通过2008年、2009年2年水培试验,测其剩余液体,微生态制剂处理者pH值由初始6.6左右降到4.4左右,较对照显著,说明菌剂具有降低pH值作用;株高和根系生长状况好于对照,说明菌剂能促进根系生长,进而促进植株生长。
3.营养钵阶育苗浇施试验:
试材为已装营养钵组培苗。将菌剂(800倍稀释)添加蓝莓营养液中浇施钵苗,对照只浇施营养液。10~15d一次,时间为75d。调查植株生长状况,结果见表7
表7微生态制剂在营养钵浇施后植株生长状况
从上表可看到:2个不同品种蓝莓苗,都表现为:浇施营养液+菌剂(800倍稀释)处理,植株生长状况与对照差异显著。菌剂处理组的根系生长量大,叶片面积大,基生枝数多,株高、茎粗好于对照,说明复合生物菌剂对蓝莓根系活性具有促进作用。综合可得:微生态制剂对根系生长具有促进作用,见图3。微生态制剂试验组与对照组的叶片面积,基生枝数,株高和茎粗比较。见图4、图5。
通过复合微生态制剂对组培试管苗接种侵染、穴盘苗浇施、穴盘苗水培和营养钵育苗阶段浇施试验等,结果与对照组相比差异显著,说明人工侵染菌根菌,能够提高蓝莓根系活力,促进养分吸收,进而促进地上植株生长。
4.在蓝莓组织快速繁殖及工厂化育苗中的应用
将微生态制剂用饮用水(加漂白粉的水静置24后再用)稀释800倍,用于浇灌蓝莓营养苗。采用大棚环境种植技术,每个大棚面积900m2,共种植8万棵蓝莓育苗,每1000棵育苗浇60ml(50ml~80ml均可)微生态菌剂稀释液,共试验2个大棚。通过实验证实,该微生态菌剂对蓝莓的初步诱导分化率达90%为上、继代增殖达5~8倍,能够使蓝莓达到快速繁殖的目的。实践中可见明显减少在室内培养的时间,使继代苗直接下地移栽,即使在炎热的夏季移栽成活率也达到了75%以上,适宜季节达90%以上。
5.微生态制剂在蓝莓组织培养中的应用
将微生态菌剂用饮用水(加漂白粉的水静置24后再用)稀释800倍,浸沾蓝莓种苗。每处理10瓶30天后观察结果,见图1。
微生态制剂在组培培育的摸索试验中,组合菌液侵染后的组培苗长势明显较快、茎粗壮,试管苗的质量增高,原来略显玻璃化的种苗茎变粗壮,叶色转绿。将组培苗转入生根培养基中,25天生根,较不经微生态制剂处理的种苗生根缩短一周左右。
Claims (3)
1.蓝莓培育及种植用微生态制剂,是由有机磷细菌(Organicphosphate bacteria)、胶冻样芽孢杆菌(Gelatum bacillus SP.)、乳酸杆菌(Acidfast bacilli)、蜡状芽孢杆菌(Carea bacillus)、光合菌(Photosynthetic bacteria)、固氮根瘤菌(R.sesbania SP.)、假丝酵母(Candida SP.)和丝状真菌(Filamentous fungus)菌液混合配制而成的制剂;由如下微生物菌液的体积百分比组成:
有机磷细菌 50.00~68.00
胶冻样芽孢杆菌 5.00~7.00
乳酸杆菌 6.00~10.00
蜡状芽孢杆菌 3.00~5.00
光合菌 5.00~8.00
固氮根瘤菌 4.00~7.00
假丝酵母 4.00~7.00
丝状真菌 5.00~8.00
产品外观为乳黄或淡黄色液体,活菌数≥2×108个/ml,霉菌、杂菌数≤3.0×105个/ml,杂菌率≤5.0%,pH值4.0~8.0,颗粒状≥0.18mm筛余物≤5%,每一种有效菌的数量6个月不得少于1×107个/g;有效期为12个月。
2.如权利要求1所述的蓝莓培育及种植用微生态制剂的制备方法,其特征在于工艺步骤为:
(1)菌种分离培养和纯化:分别配制适合每种菌生长的培养基,加热煮沸20min,分装于干净试管中,装量1/5~1/4高度,塞好棉塞,于103.4kPa高压灭菌20min,趁热放成斜面,放斜面对应将培养基稍摇晃,待凝固后放入37℃温箱中培养24h,进行杂菌检查,如无杂菌,即可进行接菌;
(2)种子培养:接种斜面培养物于种子瓶,37℃,200r/min培养24h得到种子液,种子的扩培还需继续摇瓶,直至将各种菌培养至对数生长期;培养好的菌种,放在4℃左右低温条件下保存,不超过3个月传代一次;
(3)无菌检查:将培养好的种子无菌操作接种无菌的肉汤培养基中,置37℃温箱培养24小时后,取出观察,清彻说明未染杂菌,可进行下一步菌液混合;
(4)菌液混合:将培养好的各种菌液按如下体积比例混合均匀即成:
有机磷细菌 50.00~68.00
胶冻样芽孢杆菌 5.00~7.00
乳酸杆菌 6.00~10.00
蜡状芽孢杆菌 3.00~5.00
光合菌 5.00~8.00
固氮根瘤菌 4.00~7.00
假丝酵母 4.00~7.00
和丝状真菌 5.00~8.00
3.如权利要求1所述的蓝莓培育及种植用微生态制剂的使用方法,其特征在于以800~1500倍稀释的微生态制剂用于蓝莓种苗培育和移栽处理。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20101103 |