CN101864390A - 杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基 - Google Patents

Abstract

一种杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，由葡萄糖、干酪素、硫酸铝、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙和水组成。本发明综合利用碳源、氮源和金属离子配制成杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，能满足杀蚊苏云金芽孢杆菌生长增殖的营养需要，促进杀蚊苏云金芽孢杆菌对致倦库蚊幼虫达到高毒力，培养72h的培养液，对致倦库蚊Ⅳ龄幼虫的致死率可达到83％。

Description

杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基

所属技术领域  本发明涉及一种微生物培养基，具体涉及一种杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基。

背景技术  蚊虫是“四害”之首，不仅刺叮骚扰，而且能传播多种疾病，严重危害人体健康。因此，将伊蚊、库蚊、按蚊等主要媒介蚊虫控制在不足为害的水平，是预防和控制蚊媒传染病暴发流行和/或减少刺叮骚扰的主要途径。近年来由于存在抗药性、环境污染以及破坏生态平衡等问题，化学杀虫剂的应用受到环境保护组织和社会的巨大压力。生物防治由于不污染环境、特异性较高、对非靶标生物影响小以及不容易产生抗性等优点，被认为是较为理想的防治手段之一。当今，卫生害虫的生物防治日渐受到医学昆虫界和世界卫生组织等有关机构的重视，其中令人瞩目的是利用昆虫病原细菌防治蚊虫方面的研究应用。目前发现和筛选用于生物防治蚊虫的昆虫病原细菌大多集中于苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌。

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种革兰氏染色阳性反应(G⁺)细菌，主要特性在于形成芽孢的同时在菌体内形成具有蛋白质性质的一个或多个伴胞晶体。由于这类蛋白对鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、同翅目昆虫及动植物寄生线虫等有较强的毒杀作用，而对人和家畜无毒、不污染环境、不产生抗药性等优点，在全球农、林、卫生害虫防治中得到广泛应用。Bt以色列亚种(B.thuringiensis subsp.israelensis，简称Bti)对多种蚊虫有高效活性，已成功开发为生物杀虫剂用于蚊虫和蚋等多种双翅目昆虫的防治，在疟疾、登革热、黄热病等蚊媒疾病的控制上发挥了重要的作用。然而目前生产应用的Bti菌仍存在杀虫范围窄、有效成分易降解、易受环境因素影响等缺点，还陆续有Bt在实验室条件下形成一定抗药性的相关报道。

发明内容  本发明的目的是提供一种综合利用碳源、氮源和金属离子配制成的杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，该培养基能促进杀蚊苏云金芽孢杆菌对致倦库蚊幼虫达到高毒力。所述杀蚊苏云金芽孢杆菌为Bt以色列亚种。

本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，由葡萄糖、干酪素、硫酸铝、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙和蒸馏水组成；所述葡萄糖、干酪素、硫酸铝、硫酸镁、磷酸氢二钾和碳酸钙为固体分析纯；各种原料所占的重量百分率如下：

原料              重量百分率(％)

葡萄糖            1.31～2.74

干酪素            1.77～3.65

硫酸铝            0.12～0.18

硫酸镁            0.10～0.16

磷酸氢二钾        0.20～0.25

碳酸钙            0.04～0.05

蒸馏水            83.69～95.23。

生防制剂在商业化之前，培养基的选择尤为重要，一个有效的发酵培养基能充分发挥杀虫活性菌株的毒力和致病率。本发明各物质性能稳定，分别以葡萄糖为碳源，以干酪素为氮源，提供了该菌生长和代谢所需的碳元素和氮元素；加入的金属离子无机盐是微生物细胞内分子的结构成分，并具有生理调节和酶激活剂的功能；还使用磷酸氢盐调节培养基的酸碱度，维持该菌生长所需的最适的pH；加入的碳酸钙对pH值也有一定的调节作用并对芽孢的形成有重要作用；满足了该菌生长增殖的营养需要。为了避免菌株长期使用带来菌株毒力下降等情况发生，研究开发具有有自主知识产权的广谱高效的Bt新菌株制剂对有效控制蚊媒病的传播，发展微生物杀虫剂具有重要意义。杀蚊苏云金芽孢杆菌培养基配方与其发酵水平密切相关，决定着菌株或者其产品的实际杀蚊效果和经济效益。最佳培养基配方的获得，为杀蚊苏云金芽孢杆菌生物制剂的开发与应用提供了方便。本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，发酵培养72h对致倦库蚊Ⅳ龄幼虫的致死率可达到83％。

具体实施例  为了更充分公开本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，以下结合实施例加以说明。

实施例：一种杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，由葡萄糖、干酪素、硫酸铝、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙和蒸馏水组成，各种原料所占的重量百分率如下：

原料              重量百分率(％)

葡萄糖            1.98

干酪素            2.84

硫酸铝            0.12

硫酸镁            0.20

磷酸氢二钾        0.30

碳酸钙            0.05

蒸馏水            94.51。

按上述培养基配方混合溶解后在压力为0.101兆帕的条件下灭菌20分钟，即可使用。

具体培养使用方法如下：按以上配方每250ml三角瓶40ml装量，用氢氧化钠调培养基pH值为7.0，每摇瓶接种活化过夜的杀蚊苏云金芽孢杆菌H14菌株的甘油菌3.5％，所述甘油菌为含10％甘油-20℃保存的苏云金芽孢杆菌H14菌株；设摇床发酵温度为31℃，培养72h，从培养基提取100μl发酵液用无菌水稀释到1ml，往50ml蒸馏水中加入10μl稀释菌液，每处理放入30只致倦库蚊Ⅳ龄幼虫，测定结果，发酵液24h(25℃)后对致倦库蚊Ⅳ龄幼虫的致死率为83％。

Claims (2)

1.一种杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，其特征在于由葡萄糖、干酪素、硫酸铝、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙和蒸馏水组成，各种原料所占的重量百分率如下：

原料          重量百分率(％)

葡萄糖        1.31～2.74

干酪素        1.77～3.65

硫酸铝        0.12～0.18

硫酸镁        0.10～0.16

磷酸氢二钾    0.20～0.25

碳酸钙        0.04～0.05

蒸馏水        83.69～95.23。

2.根据权利要求1所述的一种杀蚊苏云金芽孢杆菌液体培养基，其特征在于各种原料所占的重量百分率如下：

原料          重量百分率(％)

葡萄糖        1.98

干酪素        2.84

硫酸铝        0.12

硫酸镁        0.20

磷酸氢二钾    0.30

碳酸钙        0.05

蒸馏水        94.51。