CN101838700A - 一种浮游植物群落结构的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种浮游植物群落结构的检测方法，其中，包括以下步骤：a、浮游植物水样采集，b、DNA的提取，c、PCR及琼脂糖电泳检测，d、使用变性梯度凝胶电泳技术进行浮游植物群落结构分析，e、图形处理，f、数据分析。本发明中PCR产物分析采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从35％到50％(100％的变性剂为7M的尿素和40％的去离子甲酰胺的混合物)，150V，1×TAE缓冲液中电泳6h；或者，PCR产物分析采用10％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从30％到55％，150V，1×TAE缓冲液中电泳8h。本发明可精确检测浮游植物群落的结构组成，有利于浮游植物赤潮的爆发预警。
Description
技术领域：
本发明涉及海洋浮游植物种类和/或数量检测的技术领域，特别涉及一种浮游植物群落结构的检测方法。
背景技术：
浮游生物是一个在水体中营随波逐流生活方式的独特类群，易于在风和水流的作用下做被动运动，没有或仅有微弱的游动能力；浮游生物包括浮游植物和浮游动物两大类。浮游生物个体小，生活周期短，繁殖速度快，对环境的变化十分敏感，对水体的营养状态的变化能够迅速地做出反应。在水质好的水域，浮游生物的多样性指数及均度指数均较大；反之，浮游生物的种类多样性下降，分布呈现不均匀的情况。因此浮游生物群落结构特征的变化可作为指示生态环境变化的重要生物学参数。
赤潮浮游植物，是海水中某些微小的微型藻、原生动物或细菌在一定的环境条件下爆发性增殖或聚集在一起而引起水体变色的一种生态异常现象。在我国海域中，赤潮发生的区域分布很不均匀，浙江沿海及长江口临近海域的赤潮灾害最为严重，此外发生赤潮比较集中的海区还有渤海、福建沿海、珠江口海域等地。1998年春季，珠江口海域发生一次特大面积米氏凯伦藻赤潮，所影响到的海区养殖鱼类几乎全部死亡，造成了珠江口海域三地(深圳、珠海和香港)水产养殖业损失逾4亿元之多；2000年长江口海域发生大面积具齿原甲藻赤潮，危害面积达7000平方千米，2004年5月东海长江口海域发生大规模东海原甲藻赤潮，面积达10000平方千米，世界罕见。近年来，近海海域赤潮更加肆虐，赤潮的爆发越来越频繁，且涉及的范围也越发广泛。赤潮严重破坏了海洋生态平衡，给渔业及旅游业等造成了巨大的损失。除此之外，有些赤潮生物体内或代谢产物中含有生物毒素，通过食物链富集，会严重危害人类的健康。
因此，研究浮游植物赤潮的爆发机制，探索预警、预报乃至防治赤潮的方法已成为一个极具挑战性的课题，其中浮游植物群落结构的检测显得尤为重要。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于，将变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术运用到微藻的鉴定中，并运用该技术对浮游植物多样性进行研究，分析多样性组成与环境因子的关系。
为了实现上述目的，本发明提供了一种浮游植物群落结构的检测方法，其中，包括以下步骤：
a、浮游植物水样采集
b、DNA的提取
c、PCR及琼脂糖电泳检测
d、使用变性梯度凝胶电泳技术进行浮游植物群落结构分析
e、图形处理
f、数据分析。
所述步骤a为：浮游植物水样首先用200目的筛绢过滤，然后将过滤后的海水用0.45μm孔径的硝酸纤维素膜过滤，将滤膜转移至2ml Eppendorf管中，置于-20℃，用于浮游植物群落多样性的分析。
所述步骤b为：
(1)收集和洗涤藻细胞：在收集的藻细胞中中加入750μl TE缓冲液洗涤藻细胞，10000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；加入250μl TE缓冲液悬浮藻细胞；
(2)裂解藻细胞：加入500μl预热55℃的抽提缓冲液，混和均匀，放入55℃水浴中一小时，直到藻液呈透明状；放进4℃冰箱冷却3分钟；
(3)抽提：加入1ml氯仿∶异戊醇(24∶1)，轻柔颠倒，使之呈乳浊液；14000rpm 4℃离心10分钟，小心用微量吸头取出上清液(约600μl)至eppendorf管中，重复抽提一次；
(4)沉淀：加二倍体积的冰冷的无水乙醇和1/10体积的NaAc，混匀，放入-80℃冰箱30分钟；14000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；
(5)洗涤：DNA沉淀用预冷的70％酒精洗两次；
(6)溶解：自然风干，溶于20-40μl TE缓冲液中，置于-20℃待用
所述步骤c中PCR进行扩增所使用的引物为：
FP-5’CGCGCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCGCAGGTCTGTGATGCCC3’，RP-5’ACGGGCGGTGTGTRC3’，
所述PCR扩增所用引物或者为：
F 1427-5’CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGG3’，
R1616-5’GCGGTGTGTACAAAGGGCAGGG3’，
所述PCR反应体系(50ul)包括：
模板DNA，
200μM dNTP，
1.5mM MgCl2，
0.3μM引物，
2.5U Ex Taq DNA polymerase，
1×Ex Taq Buffer；
所述PCR的反应程序为：
94℃，变性2min；
72℃，延伸7min；
PCR反应程序或者为：
94℃，变性5min；
72℃延伸10min。
所述步骤c中琼脂糖电泳检测为：将5μl扩增的产物与1ul上样缓冲液混合后上样，1％琼脂糖凝胶电泳，100V恒压电泳30min，在含0.5μg/ml EB的1×TAE缓冲液中染色10～30min，用凝胶成像系统进行拍照。
所述步骤d为：采用Bio-Rad公司DcodeTM的基因突变检测系统对PCR反应产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析，所述电泳条件为：PCR产物分析采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从35％到50％(100％的变性剂为7M的尿素和40％的去离子甲酰胺的混合物)，150V，1×TAE缓冲液中电泳6h；或者，PCR产物分析采用10％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从30％到55％，150V，1×TAE缓冲液中电泳8h；电泳完毕后，将凝胶置于0.5μg/ml EB溶液中震荡染色20min，凝胶成像系统拍照。
所述步骤e为：使用Quantity One软件对图像进行处理，基于DGGE图谱，采用非加权配对算数平均法聚类分析对相似性进行分析，根据各条带的亮度，计算多样性指数(H)，进而对物种结构多样性进行分析；所述多样性指数的计算公式为H＝∑(ni/N)ln(ni/N)，其中ni为每条带的亮度峰值，N为每个泳道中所有条带亮度峰值的和。
所述步骤f为：利用软件Canoco(version 4.51)进行典范对应分析(Canonical correspondence analysis，CCA分析)，分析DGGE所揭示的物种多样性和环境因子的关系(Ter Braak，1986)，用automated forward selectionmethod去除variance inflation factor(VIF)大于20的环境因子，利用MonteCarlo permutation test(499permutations)用来选择与物种组成显著相关的环境变量。
PCR扩增产物的琼脂糖电泳，各个样品的扩增均得到大小为260bp左右的单一特异性扩增片段，同时阴性对照没有DNA条带出现，正向引物的5’端增加了一个40bp的GC夹，用于保证DNA分子始终保持双链结构，使扩增片段大小介于200-700bp之间。
浮游植物群落结构的检测方法在检测浮游生物群落结构中的应用。
本发明的优点如下：
本发明将变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术运用到微藻的鉴定中，并运用该技术对浮游植物多样性进行了研究，分析了多样性组成与环境因子的关系。主要如下：
(1)本发明分别针对核糖体基因的18S rDNA、28S rDNA及ITS区序列设计引物，经过PCR退火温度的优化，选择了特异性较好的三对引物(分别针对18S rDNA和28S rDNA序列)，对微藻进行了DGGE分析，获得了每种藻每对引物的扩增片段在变性梯度凝胶上的迁移率。
(2)本发明在变性梯度凝胶上的迁移率，可以较好地将其区分鉴定；而将其中的两对或三对引物相结合，可以得到更为满意的区分效果。
(3)基于DGGE图谱的聚类分析结果与环境特征较为一致；证明温度是影响研究海域浮游植物分布的主要因子，其次是溶解无机氮和硅酸盐。
(4)运用DGGE技术浮游植物多样性研究，了解营养盐、温度等环境因子对浮游植物群落组成的影响。基于DGGE图谱的相似性进行聚类分析。
附图说明：
图1为PCR扩增产物的琼脂糖电泳图。
图2为各样品的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱。
具体实施方式：
本发明提供了一种浮游植物群落结构的检测方法，其中，包括以下步骤：
a、浮游植物水样采集
b、DNA的提取
c、PCR及琼脂糖电泳检测
d、使用变性梯度凝胶电泳技术进行浮游植物群落结构分析
e、图形处理
f、数据分析。
步骤a为：浮游植物水样首先用200目的筛绢过滤，然后将过滤后的海水用0.45μm孔径的硝酸纤维素膜过滤，将滤膜转移至2ml Eppendorf管中，置于-20℃，用于浮游植物群落多样性的分析。
步骤b为：
(1)收集和洗涤藻细胞：在收集的藻细胞中中加入750μl TE缓冲液洗涤藻细胞，10000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；加入250μl TE缓冲液悬浮藻细胞；
(2)裂解藻细胞：加入500μl预热55℃的抽提缓冲液，混和均匀，放入55℃水浴中一小时，直到藻液呈透明状；放进4℃冰箱冷却3分钟；
(3)抽提：加入1ml氯仿∶异戊醇(24∶1)，轻柔颠倒，使之呈乳浊液；14000rpm 4℃离心10分钟，小心用微量吸头取出上清液(约600μl)至eppendorf管中，重复抽提一次；
(4)沉淀：加二倍体积的冰冷的无水乙醇和1/10体积的NaAc，混匀，放入-80℃冰箱30分钟；14000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；
(5)洗涤：DNA沉淀用预冷的70％酒精洗两次；
(6)溶解：自然风干，溶于20-40μl TE缓冲液中，置于-20℃待用
步骤c中PCR进行扩增所使用的引物为：
FP-5’CGCGCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCGCAGGTCTGTGATGCCC3’，RP-5’ACGGGCGGTGTGTRC3’，
PCR扩增所用引物或者为：
F 1427-5’CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGG3’，
R1616-5’GCGGTGTGTACAAAGGGCAGGG3’，
PCR反应体系(50ul)包括：
模板DNA，
200μM dNTP，
1.5mM MgCl2，
0.3μM引物，
2.5U Ex Taq DNA polymerase，
1×Ex Taq Buffer；
PCR的反应程序为：
94℃，变性2min；
72℃，延伸7min；
PCR反应程序或者为：
94℃，变性5min；
72℃延伸10min。
步骤c中琼脂糖电泳检测为：将5μl扩增的产物与1ul上样缓冲液混合后上样，1％琼脂糖凝胶电泳，100V恒压电泳30min，在含0.5μg/ml EB的1×TAE缓冲液中染色10～30min，用凝胶成像系统进行拍照。
步骤d为：采用Bio-Rad公司DcodeTM的基因突变检测系统对PCR反应产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析，所述电泳条件为：PCR产物分析采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从35％到50％(100％的变性剂为7M的尿素和40％的去离子甲酰胺的混合物)，150V，1×TAE缓冲液中电泳6h；或者，PCR产物分析采用10％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从30％到55％，150V，1×TAE缓冲液中电泳8h；电泳完毕后，将凝胶置于0.5μg/ml EB溶液中震荡染色20min，凝胶成像系统拍照。
步骤e为：使用Quantity One软件对图像进行处理，基于DGGE图谱，采用非加权配对算数平均法聚类分析对相似性进行分析，根据各条带的亮度，计算多样性指数(H)，进而对物种结构多样性进行分析；所述多样性指数的计算公式为H＝∑(ni/N)ln(ni/N)，其中ni为每条带的亮度峰值，N为每个泳道中所有条带亮度峰值的和。
步骤f为：利用软件Canoco(version 4.51)进行典范对应分析(Canonicalcorrespondence analysis，CCA分析)，分析DGGE所揭示的物种多样性和环境因子的关系(Ter Braak，1986)，用automated forward selection method去除variance inflation factor(VIF)大于20的环境因子，利用Monte Carlopermutation test(499permutations)用来选择与物种组成显著相关的环境变量。
PCR扩增产物的琼脂糖电泳，各个样品的扩增均得到大小为260bp左右的单一特异性扩增片段，同时阴性对照没有DNA条带出现，正向引物的5’端增加了一个40bp的GC夹，用于保证DNA分子始终保持双链结构，使扩增片段大小介于200-700bp之间。
例子：
以所提取的各个站位样品的基因组DNA为模板，对18S rDNA的部分片段进行扩增，PCR扩增产物的琼脂糖电泳图如图1所示。各个样品的扩增都具有很好的特异性，均得到大小为260bp左右的单一特异性扩增片段，同时阴性对照没有DNA条带出现。由于在正向引物的5’端增加了一个40bp的GC夹，既可以保证DNA分子始终保持双链结构，又提高了扩增片段用于DGGE分析的分离效果，并且扩增片段大小介于200-700bp之间，适合用于DGGE分析。
图1中的各数据如下：F0301，2.F0303，3.F0305，4.F0307，5.F0308，6.F0309，7.F0311，8.F0401，9.F0402，10.F0404，11.F0406，12.F0501，13.F0502，14.F0503，15.F0504，M，DL2000.
图2为各样品的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱，其中各数据如下：16.F0506，17.F0508，18.F0510，19.F0512，20.F0701，21.F0702，22.F0704，23.F0706，24.F0708，25.阴性对照，M，DL2000.
DGGE指纹图谱中，每个独立分离的条带称为一个可操作分类单元，可能包括一种或一种以上的浮游植物。DGGE指纹图谱呈现的条带越丰富说明群落多样性越大，条带越亮，表示该OTU的数量越多，因此可以根据指纹信息确定不同样品中所含有的浮游植物OUT的数量关系，得出浮游植物多样性的信息。从各站位的条带数在采样站位图上的分布(如下表)可以看出，条带数在各站位间的变化趋势并不明显。
本例子中所用引物为真核生物通用引物，因此，在PCR扩增产物中基本上不包含浮游细菌。采集样品时，首先采用200目的筛绢进行过滤，主要浮游动物得到了很好的去除；即使有少量体积较小的浮游动物能通过筛绢，但在进行PCR的过程中，由于存在模板的竞争，在群落组成中占绝对优势的浮游植物会被优先扩增。因此，本发明的主要研究对象为浮游植物。
一般说来，DGGE图谱中主要条带相对含量和群落中主要类群之间呈现出一定的正相关关系，通过DGGE技术获取的群落主要类群组成信息可以较为真实地反映群落的遗传组成。DGGE指纹图谱呈现的条带越丰富说明群落多样性越大，因此可以根据指纹信息得出浮游植物多样性的信息。从本发明所揭示的各站位的条带数及香农指数来看，大部分站位具有较高的浮游植物组成，且多样性指数比较均匀。具有相似浮游植物组成的站位将会呈现相似的DGGE图谱，聚类分析时首先会聚在一起成为一支。本发明用非加权配对算数平均法UPGMA聚类方法比较了各样品中浮游植物群落的相似性。
Claims (10)
1.一种浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、浮游植物水样采集
b、DNA的提取
c、PCR及琼脂糖电泳检测
d、使用变性梯度凝胶电泳技术进行浮游植物群落结构分析
e、图形处理
f、数据分析。
2.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤a为：浮游植物水样首先用200目的筛绢过滤，然后将过滤后的海水用0.45μm孔径的硝酸纤维素膜过滤，将滤膜转移至2ml Eppendorf管中，置于-20℃，用于浮游植物群落多样性的分析。
3.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤b为：
(1)收集和洗涤藻细胞：在收集的藻细胞中中加入750μl TE缓冲液洗涤藻细胞，10000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；加入250μl TE缓冲液悬浮藻细胞；
(2)裂解藻细胞：加入500μl预热55℃的抽提缓冲液，混和均匀，放入55℃水浴中一小时，直到藻液呈透明状；放进4℃冰箱冷却3分钟；
(3)抽提：加入1ml氯仿∶异戊醇(24∶1)，轻柔颠倒，使之呈乳浊液；14000rpm 4℃离心10分钟，小心用微量吸头取出上清液(约600μl)至eppendorf管中，重复抽提一次；
(4)沉淀：加二倍体积的冰冷的无水乙醇和1/10体积的NaAc，混匀，放入-80℃冰箱30分钟；14000rpm 4℃离心10分钟，小心弃上清；
(5)洗涤：DNA沉淀用预冷的70％酒精洗两次；
(6)溶解：自然风干，溶于20-40μl TE缓冲液中，置于-20℃待用。
4.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤c中PCR进行扩增所使用的引物为：
FP-5’CGCGCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCGCAGGTCTGTGATGCCC3’，RP-5’ACGGGCGGTGTGTRC3’，
所述PCR扩增所用引物或者为：
F1427-5’CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCTCTGTGATGCCCTTAGATGTTCTGGG3’，
R1616-5’GCGGTGTGTACAAAGGGCAGGG3’，
所述PCR反应体系(50ul)包括：
模板DNA，
200μM dNTP，
1.5mM MgCl2，
0.3μM引物，
2.5U Ex Taq DNA polymerase，
1×Ex Taq Buffer；
所述PCR的反应程序为：
94℃，变性2min；
72℃，延伸7min；
PCR反应程序或者为：
94℃，变性5min；
72℃延伸10min。
5.根据权利要求4所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤c中琼脂糖电泳检测为：将5μl扩增的产物与1ul上样缓冲液混合后上样，1％琼脂糖凝胶电泳，100V恒压电泳30min，在含0.5μg/ml EB的1×TAE缓冲液中染色10～30min，用凝胶成像系统进行拍照。
6.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤d为：采用Bio-Rad公司DcodeTM的基因突变检测系统对PCR反应产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析，所述电泳条件为：PCR产物分析采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从35％到50％(100％的变性剂为7M的尿素和40％的去离子甲酰胺的混合物)，150V，1×TAE缓冲液中电泳6h；或者，PCR产物分析采用10％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从30％到55％，150V，1×TAE缓冲液中电泳8h；电泳完毕后，将凝胶置于0.5μg/ml EB溶液中震荡染色20min，凝胶成像系统拍照。
7.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，所述步骤e为：使用Quantity One软件对图像进行处理，基于DGGE图谱，采用非加权配对算数平均法聚类分析对相似性进行分析，根据各条带的亮度，计算多样性指数(H)，进而对物种结构多样性进行分析；所述多样性指数的计算公式为H＝∑(ni/N)ln(ni/N)，其中ni为每条带的亮度峰值，N为每个泳道中所有条带亮度峰值的和。
8.根据权利要求1所述浮游植物群落结构的检测方法，其特这个在于，所述步骤f为：利用软件Canoco(version 4.51)进行典范对应分析(Canonicalcorrespondence analysis，CCA分析)，分析DGGE所揭示的物种多样性和环境因子的关系(Ter Braak，1986)，用automated forward selection method去除variance inflation factor(VIF)大于20的环境因子，利用Monte Carlopermutation test(499 permutations)用来选择与物种组成显著相关的环境变量。
9.根据权利要求4或5所述浮游植物群落结构的检测方法，其特征在于，PCR扩增产物的琼脂糖电泳，各个样品的扩增均得到大小为260bp左右的单一特异性扩增片段，同时阴性对照没有DNA条带出现，正向引物的5’端增加了一个40bp的GC夹，用于保证DNA分子始终保持双链结构，使扩增片段大小介于200-700bp之间。
10.一种如权利要求1-9任一所述浮游植物群落结构的检测方法在检测浮游生物群落结构中的应用。
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| CN (1) | CN101838700A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102567621A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-07-11 | 北京师范大学 | 一种构建历史时期湖泊浮游植物群落的方法 |
| CN103320521A (zh) * | 2013-07-16 | 2013-09-25 | 中国海洋大学 | 一种真核浮游植物多样性的快速高通量检测方法 |
| CN104950033A (zh) * | 2015-06-08 | 2015-09-30 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种用于藻细胞的单细胞凝胶电泳的方法 |
| CN104946740A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-09-30 | 辽宁省海洋水产科学研究院 | 一种海洋褐潮生物群落结构的检测方法 |
| CN113077845A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-07-06 | 中国科学院大气物理研究所 | 一种大气气溶胶微生物群落组成的分析方法 |
-
2010
- 2010-05-28 CN CN201010184785A patent/CN101838700A/zh active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102567621A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-07-11 | 北京师范大学 | 一种构建历史时期湖泊浮游植物群落的方法 |
| CN103320521A (zh) * | 2013-07-16 | 2013-09-25 | 中国海洋大学 | 一种真核浮游植物多样性的快速高通量检测方法 |
| CN103320521B (zh) * | 2013-07-16 | 2014-08-13 | 中国海洋大学 | 一种真核浮游植物多样性的快速高通量检测方法 |
| CN104946740A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-09-30 | 辽宁省海洋水产科学研究院 | 一种海洋褐潮生物群落结构的检测方法 |
| CN104950033A (zh) * | 2015-06-08 | 2015-09-30 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种用于藻细胞的单细胞凝胶电泳的方法 |
| CN104950033B (zh) * | 2015-06-08 | 2017-04-19 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种用于藻细胞的单细胞凝胶电泳的方法 |
| CN113077845A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-07-06 | 中国科学院大气物理研究所 | 一种大气气溶胶微生物群落组成的分析方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20100922 |